槐米中芦丁含量的测定

超声提取
酸沉 用盐酸将PH调至3
离心过滤 滤液静置、干燥
芦丁粗提产品
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芦丁标准曲线的绘制
精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁标准品200mg，置 100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲 醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度， 摇匀即得（每1mL中含无水芦丁0.2mg）。精密量取上述标准溶液 0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL与6.0mL分别置 25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL使混匀，放 置6分钟，加10％硝酸铝溶液1mL摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试 液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟；按照分光光度法，在 500nm的波长处比色测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为 横坐标，绘制标准曲线。
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芦丁提取技术概述 1 2 3
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醇溶剂浸提法 热水提取法 碱提酸沉降法 超声辅助提取法 微波提取法
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超声波辅助提取法
芦丁为细胞中的次生代谢产 物，存在于细胞质中；通过 粉碎，破坏细胞壁和细胞膜， 也就使芦丁易于被提取出来。 碱液对芦丁有增溶作用，用 碱液浸泡后，能使更多的芦 丁溶解出来，同样也有利于 芦丁的提取。
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提纯方法
将粗品溶于75%的75℃甲醇溶液中( m:v≈1:7)，待完全溶解趁 热过滤；滤液缓慢加入大孔树脂色谱柱中( 粗品芦丁与树脂质量比 1:10)，待滤液完全浸入大孔树脂后，分别以75%的甲醇溶液为洗脱 剂自然流速进行洗脱，待洗脱液颜色由无色变深后，开始第一次收 集，至颜色由深变浅结束，将收集的洗脱液在常温下自然静置析晶， 过滤并用少量甲醇洗涤滤饼后真空干燥，获取最终产品; 第一次收 集结束后，改用纯甲醇溶液进行洗脱，待颜色有浅变深开始第二次 收集，直颜色变无色结束，将第二次收集的洗脱液减压蒸馏获取浸 膏，干燥后获得的产品用作下次纯化工艺过程的粗品芦丁原料。
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芦丁对超氧阴离子O2÷清除作用
原理
用邻苯三酚自氧化法,利用O2÷清除剂能使邻苯三酚自氧化产物 在325 nm处的吸收峰受到抑制这一特点,用紫外分光光度计进行 检测,间接测得O2÷生成及O2÷的清除率。
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实验操作
用实验纯化所制的芦丁配置成20、40、60、80、100μmol/L的溶 液.取0. 05 mmol/L pH 8. 2的Tris-HCl缓冲液4. 5mL于试管中, 25℃ 预热20m in，加入0. 1mmol/L邻苯三酚0. 2mL，不同浓度药物0. 2mL，蒸馏水0. 1mL，25℃水浴准确反应4min时测定A325值，记 为A样品。另取试剂同上，不加药物，加0. 3mL蒸馏水补充体积， 作为对照，同样准确反应4m in测A325值，记为A损伤。计算清除 率及SC50。
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芦丁的提取率测定
取干燥芦丁粗品约1g，精密称定，加甲醇溶解后移入100mL容量 瓶，再加甲醇洗涤并入容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精取10mL置 100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀。精密量取3mL置25mL容量瓶中， 按照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6mL”起依法测定吸光度， 从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算即得槐米中芦丁的 提取得率。
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芦丁的纯化——大孔树脂
树脂的预处理
减法测定法
新鲜树脂先用乙醇浸泡2次，每次12h，滤去浮游物和破碎树脂， 再用甲醇浸泡2～3次至上清液澄清，最后用去离子水清洗1～2次.采 用湿法上柱，并用和洗脱剂同浓度的甲醇水溶液冲洗2～3柱体积， 以达到该浓度下的平衡状态。 用过的树脂，用足量甲醇浸泡使吸附物解吸达到再生的目的。 如果反复使用树脂吸附效果下降，可用3%NaOH及10%NaCl混合液浸泡 清洗12h，滤去溶剂并用去离子水充分洗涤至呈中性时即可。
1:10 1:10 1:10 1:15 1:15 1:15 1:20 1:20 1:20
7 10 13 7 10 13 7 10 13
15 25 35 25 35 15 35 15 25
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实验流程
槐米粉碎 过40筛目 按一定料 液比混合
加入亚硫氢钠、 硼砂,用氢氧化 钠调PH至9
1
2 3
1:10
1:15 1:20
7
10 13
15
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查正交实验表，根据L9（34）设计实验
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试验号
水平组合
实验条件 料液比 提取时间 温度
1 2 3 4 Байду номын сангаас 6 7 8 9
A1B1C1 A1B2C2 A1B3C3 A2B1C2 A2B2C3 A2B3C1 A3B1C3 A3B2C1 A3B3C2
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谢谢聆听！
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芦丁的药理作用
抗炎作用 抗氧化作用 抗菌作用 抗癌作用 对脑缺血损伤的保护作用 对肾脏缺血损伤的保护作用 降血压作用 胃肠粘膜保护作用
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芦丁的化学特性
芦丁分子式C27H30O16，分 子量610.51，为浅黄色针状结 晶，难溶于冷水，可溶于热水、 甲醇、乙醇、吡啶，易溶于碱 水。
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槐米
2010年《中华人民共和国药典》规定，槐树 的药用部分为干燥的花朵及花蕾。前者习称 “槐花”，后者习称“槐米”。 槐米中含有芦丁、槲皮素、皂甙、多糖黏液 质等成分，其中,芦丁是主要药用成分,因此 对其研究有非常现实的意义。
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芦丁
芦丁是一种黄酮类化合物。槐米中 的芦丁随槐花的产地及收取时间的不同其 含量在10%～28%之间，我国芦丁生产主 要以槐米为原料。
利用超声波的空化效应、湍 流效应、微扰效应、界面效 应和聚能效应等物理作用， 加速被破碎物细胞壁的破裂， 促进细胞内含物的溶出，从 而实现天然产物低温、快速 提取的目标。具有杂质含量 低、有效成分含量高、提取 时间短的优点。
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因素设计
水平 A 料液比 因素 B 提取时间 C 温度
槐米中芦丁含量的测定
金药树—槐树
槐树原产于中国。它用途广泛， 功能大，是一种集药用、食用、保 健、观赏于一身的优良树种。槐树 自古是治病的重要药源植物，被誉 为“金药树”槐树依据其花色分为 白、青、黄、金槐等4个类别.除了国 槐外，槐树还有龙爪槐、蝴蝶槐、 金叶国槐、五色槐、黄金槐、双季 米槐、香花槐和金花槐等变种。 它全身都是药，花、叶、枝、根、 果实及种子均可入药，以槐花入药 最普遍。洋槐五月开花，其花一般 食用，国槐七八月才开花，其花入 药。故我国药用槐米多出自国槐。