出口水果中赤霉素残留量检验方法(20210201080823)

出口水果中赤霉素残留量检验方法

1. 适用范围本方法适用于出口柑桔中赤霉素残留量的检验。

2. 原理概要以丙酮提取样品中赤霉素，然后用乙酸乙酯提取，再用缓冲溶液反提取后，在薄层层析板上除去干扰物质，最后用荧光分光光度法测定。

3. 主要试剂和仪器

3.1. 主要试剂丙酮：分析纯；乙酸乙酯：分析纯；硫酸：优级纯；硫酸溶液：50%

（V/ V）；乙醇：分析纯；甲醇：分析纯；缓冲溶液（pH7）：溶解6.7g 分析纯磷酸二氢钾和 1.2g 分析纯氢氧化钠在1

OOOmL蒸馏水中；

展开剂：氯仿-乙酸乙酯-冰乙酸（10＋4＋1.6）；乙醇-硫酸溶液：（9＋

1）；

硫酸溶液：85%VV），将85mL硫酸缓慢加入15mL蒸馏水中；硅胶G:薄层层析用；赤霉素标准品：纯度》95%

赤霉素标准溶液：准确称取适量的赤霉素标准品，用甲醇配成浓度1.00mg/mL 的标准储备溶液，根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液。

3.2. 仪器

荧光分光光度计：备有10mm石英池；

锥形瓶：具磨口塞，500mL；组织捣碎机；

布氏漏斗；

振荡机；

圆底烧瓶：1000mL；

酸度计；

旋转蒸发器；分液漏斗：250mL；涡旋混合器；

离心管：具磨口塞，5mL、10mL；紫外灯：发射波长365nm；硅胶薄层板的涂布：在20cm X 20cm玻璃层析板上将硅胶G（硅胶-水=1 + 3）涂布成0.3mm 的薄层板，自然干燥30min。于110°C烘箱中活化1h,冷却后放置干燥器中备用；

微量注射器：25卩L。

4. 试样的抽取与制备

4.1. 检验批以不超过1500 件为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同的特征， 如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2. 抽样数量

1〜25

26 〜100

101 〜 250

251〜1500 4.3. 抽样方法

按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取500g 。作为原始样品， 原始样品总量不得少于2kg 。加封后，标明标记，及时送实验室。

4.4. 试样制备

将所取混合原始样品缩分出1kg ，取可食部分，经组织捣碎机捣碎，均分成 两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。

4.5. 试样保存

将试样于—18C 以下冷冻保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5. 过程简述

5.1. 提取

称取试样100g （精确到0.1g ）于锥形瓶内，加20mL 蒸馏水和125mL 丙酮，振 荡30min 。混合物经布氏漏斗抽滤；试样和残渣放回锥形瓶中，再用 125mL 丙酮 重复振荡15mi n ，再以铺有新滤纸的布氏漏斗抽滤。用 50mL 丙酮洗涤锥形瓶并 倒在滤渣上，抽滤，再用100mL 丙酮洗涤残渣并过滤。

5.2. 净化

将丙酮-水提取液收集于1 OOOmL 圆底烧瓶中，在30C 水浴上，用旋转蒸发 器减压蒸发至丙酮完全除去。剩下的试样水溶液用折叠滤纸过滤，用 50mL 蒸馏 水洗涤烧瓶并通过同一滤器过滤，再用2X 10mL 蒸馏水洗涤滤纸。将滤液转入烧 杯中，滴加50%勺硫酸溶液，调至pH 为2.5 ± 0.2。将样液定量转入250mL 分液 漏斗中，以少量蒸馏水洗涤烧杯。然后用3X 50mL 乙酸乙酯提取，收集乙酸乙酯 提取液于第二个分液漏斗中。再用 3X 50mLpH7的缓冲溶液提取。弃去乙酸乙酯 相。收集缓冲溶液提取液于 250mL 烧杯中，用50%勺硫酸溶液调至pH2.5 ± 0.2， 再将溶液转入第三个250mL 分液漏斗中，用3X 50mL 乙酸乙酯提取。收集乙酸乙 酯相，并通过折叠滤纸滤入 250mL 圆底烧瓶中，于30 E 水浴中旋转蒸发至干。 准确加入1.0mL 乙酸乙酯以溶解残留物。立即转入5mL 离心管，冰浴冷却5min ， 以 2500r/min 离心 5min 。

5.3. 薄层分离

在制备好的硅胶薄层板上，离底部2cm 的线上分别点加25卩L 样液和10卩L 赤霉素标准溶液（10卩L/mL ）。自然干燥后放入装有新配制的氯仿-乙酸乙酯-冰乙 酸（10 + 4+ 1.6）展开剂的密闭槽内，让展开剂上行展开 15cm ，取出。自然干燥 后，用玻璃板遮住薄层展开后的样品部分，用乙醇 -硫酸（9＋1）溶液喷撒薄层展 开后的标准样品部位，于100C 烘箱中加热10min 。冷却后，在暗室的紫外灯（发 射波长365nm ）下观察，以此来对照标出样品部分相应的赤霉素组分区。将样品 的赤霉素组分区域刮下，转入 10mL 离心管中，加1mL 蒸馏水，混合、溶解，置 冰浴中冷却5min 。同时吸取2.0mL 标准溶液（含赤霉素2卩g ）到第二个试管中， 冰浴冷

却5min ，在每个试管中加入 5mL 已冷却的85%^酸，继续在冰浴中冷却 批量，件 最低抽样数，件

10 15

10mi n 。取出试管，室温静置1h 。供荧光分光光度法测定。 54测定

541.荧光条件

激发波长：416 nm

发射波长：462nm

5.4.2. 荧光测定

分别将新制备的样品溶液和标准溶液装入清洁的石英池中, 测定每个溶液的荧光强度。

5.5. 空白试验

除不加样品外，按上述测定步骤进行。

6. 结果计算

按下式计算：

式中：X ----- 试样中赤霉素残留量，mg/kg ； E ――样液中赤霉素的荧光强度；

E s ――标准工作溶液中赤霉素的荧光强度；

c ----- 标准工作溶液中赤霉素的浓度，卩g/mL ；

V ---- 样液最终定容体积；

m 最终样液中所代表的试样量，g 注：计算结果需扣除空白值。

7. 低限、回收率的测定

7.1. 测定低限：

本方法测定低限为0.03mg/kg 。

7.2. 回收率

回收率的实验数据：赤霉素添加浓度在

87.7% 〜94.3%. x = E • c • V

E s •

m 依次放入仪器内, 0.03〜0.2mg/kg 范围内，回收率为