ELISA检测盐酸克伦特罗残留时的问题及控制对策
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1 盐酸克伦特罗基本生物学特性及残留分析
克伦特罗是儿茶酚胺类化学合成衍生物, 属于 苯乙胺类( PEAs) 药物, 是 肾上腺受体的激动剂, 在临床上以盐酸盐剂型曾用于 治疗牲畜支气 管哮 喘、难产等病症。通常每日用药量小于 1 g / kg, 连 续用药时间少 于 10 d。动物试验表 明, 一些 P EAs 药物超过用量 5~ 10 倍后, 可以增加受试动物胴体 的瘦肉率, 显著提高体重和饲料的转化率。当人体 摄入剂量超过 0. 1 g / g 残留的畜禽内脏组织时, 便 会出现一些明显的中毒症 状, 如肌肉 震颤、行 走不 稳、手握无力、心动过速、心律失常、腹痛、恶心、眩晕 等[ 1] 。20 世纪 80 年 代, 盐酸克伦特罗在国 外作为 饲料添加剂应用, 后来引入国内, 商品名为瘦肉精, 应用于畜牧生产后, 造成了极大的安全隐患。盐酸 克伦特罗化学性质稳定, 易在动物肝、肾、肺、肌肉、
[ 3] 焦奎, 张书圣. 酶联免疫分析技术及应用 [ M ] . 北京: 化 学工业出版社, 2004: 121- 137.
[ 4] 聂芳红, 徐晓彬, 陈进 军. 食品动 物兽药 残留研 究进 展 [ J] . 中国农学通报, 2006, 22( 9) : 71- 75.
[ 5] 符建伟, 李鹏坤 , 孟 中生, 等. 农 畜产 品中 农、兽 药残 留 检测工作质量保证办法[ J] . 河南科技, 2006( 8) : 5- 6.
2 ELISA 反应原理及检测中易出现的失误
2. 1 EL ISA 检测盐酸克伦特罗的反应原理 EL ISA 检测盐酸克伦特罗的反应原理是: 酶标
微孔板上包埋有针对盐酸克伦特罗抗体( IgG) 的双 抗体, 加入 Ig G 经过孵育及洗涤后, 再加入受检抗 原和酶标抗原, 竞争性地与酶标微孔板上已连接在 双抗体上的抗体相结合。如受检样品中无抗原盐酸 克伦特罗, 则酶标抗原便与该抗体全部结合, 如果受 检样品中含有该物质, 则可和酶标抗原竞争该抗体, 二者占领的机会是均等的。如果检测样品中含有盐 酸克伦克罗, 便会占领酶标板上连接的双抗体, 而酶 标抗原便无法和孔板上双抗体结合, 就会被水冲掉, 孔板上不会显色[ 3] 。加入脲酶底物显色后, 含结合 酶标量大的颜色最深, 含单一抗原量大的样品颜色 最浅。其颜色的深浅和盐酸克伦特罗的含量呈负相
4 小结
ELISA 检测, 每操作一步, 都要求 准确、快速、
标准、规范。在实际操作中, 除了选择优良试剂外, 必须严格按照步骤进行操作, 同时做好室内质控、室 间质评; 以严谨的工作作风检测每一份样本, 才能保 证检测质量[ 8] 。在盐酸克伦特罗残留检测时, 了解 和熟悉 EL ISA 试验原理, 熟练掌握其检测技术, 才 能采取有效控制对策, 彻底杜绝误检和漏检的问题 发生, 为食品安全作出贡献。
( 1) 在试验设计方面: 一般情况下应设计试剂空 白, 样品空白, 标准对照( 质控样品) , 待测样品等试 验项目, 重复 2 次( 平行) 以上; 易出现的失误是不设 质控样品, 空白对照不全, 不设重复。
( 2) 在购买和储存酶标板时易出现的失误: 没有 控制好环境的温度、湿度, 没即刻在冰箱 2~ 8 环 境中密封干燥保存或错过了质保期。
参考文献:
[ 1] 王选年, 杨艳艳, 邢广旭, 等. 盐酸克伦 特罗单抗快 速检 测试剂盒的 研制[ J] . 中国兽 医学报, 2004, 24( 1) : 757 8.
[ 2] 李巧枝, 卫丽, 李华 玮, 等. 生物化 学实 验技 术[ M ] . 北 京: 中国轻工业出版社, 2007: 62- 135.
收稿日期: 2008 12 19 作者简介: 李华玮( 1981 ) , 女 , 河南郑州人, 助教, 硕士, 主要从事细胞生物学教学工作。 通讯作者: 李鹏坤( 1952 ) , 男 , 河南灵宝人, 高级实验师, 本科, 主要从事仪器分析工作。
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河南农业科学
关。参比孔( 空白) 和待测样品孔颜色之差, 就代表 了受检样本所含抗原( 盐酸克伦特罗) 的量。和标准 样板孔的颜色比较, 进行定性, 用浓度吸光度值进行 定量。整个试验结果, 同处理( 平行) 板孔之间显色 应该一样, 空白样上应该颜色最深, 标准对照( 质控 样) 上应该颜色最淡。 2. 2 EL ISA 检测过程中易出现的失误
( 2) 选择优质试剂。EL ISA 试验所需的试剂和 物料分 为 主 体试 剂 和 辅助 性 试剂。通 常 采用 的 EL ISA 商品试剂盒中已包括了足够进行 96 个测量 的主体试剂和材料, 如已包被 抗体的微孔板、标准 液、酶标记物浓缩液、抗体浓缩液、酶基质、发色剂、 停止液等。
对于未使用完的试剂和微孔板等生物材料, 必 须于 2~ 8 密封保存。微孔板 不能重复使用。对 于缓冲液、洗涤剂、样本 稀释液等辅助 性试剂的配 制, 应随用随配。蒸馏水的质量至关重要, 不合格的 蒸馏水能使空白值升高, 必须使用新鲜的双蒸水或 超纯水制备试剂[ 3] 。
( 8) 准确读板。显色反应完成后, 加入酸终止反 应, 振荡混匀后即可在酶标仪上进行读板, 测量其吸 光度值。一般情况下, 相同处理板孔之间, 目测显色 颜色不应有明显差异, 酶标仪检测其吸光度值的误 差不应超过 15% , 否 则易造成误检。比色测定时, 一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适位置或所 用滤光片是否正确。中档以上的酶标仪基本上都同 时具有单波长和双波长比色功能。由于 EL ISA 测 定中单个空白孔的非特异吸收具有一定程度的不确 定性, 每次测定或同次测定会因空白孔位置的不同, 可能得到不同吸光度测定值, 故而在 ELISA 测定比 色时, 应适当多设空白孔对照。如有条件, 最好使用 双波长比色计, 可消除读板时板底不清洁等所带来 的误差[ 7] 。
毛发等组织和器官中蓄积; 主要发生各种氧化代谢 和轭合反应, 在代谢过程中受转移酶、芳基硫酸化酶 的作用, 生成葡萄糖醛酸轭合物失活, 故残留监测只 检盐酸克伦特罗原型。
目前, 国内外检测畜产品中盐酸克伦特罗残留常 用的检测方法有: H PLC( 高效液相色谱) 法、GC Ms ( 气相- 质普联用仪) 法、LC - M S( 液相- 质普联 用仪) 法、EL ISA ( 酶联免疫吸附试验法) 法等。通 常检测限要求低于 0. 5 g/ kg。国内相关标准的规 定是, 用 EL ISA 法进行筛查, GC- M s 等方法加以 确证[ 4] 。
食品安全问题是目前全球范围内的焦点和热点 之一, 猪肉中盐酸克伦特罗残留危害事件曾触目惊 心[ 1] 。筛查兽药盐酸克伦特罗残留, 是畜禽产品质 量安 全 检测 时 的 必检 项 目。酶 联 免 疫吸 附 试 验 ( EL ISA) 是快速筛查盐酸克伦特罗残留的标准方法 之一[ 2] 。但是该方法技术性强, 操作过程复杂, 对试 验环境要求特殊, 检验时稍有不慎, 就会产生许多失 误, 导致误检或漏检[ 3] 。为了提高工作效率, 确保检 测质量, 根据盐酸克伦特罗的生物学特性, 针对应用 ELISA 检测畜禽产品残留时易产生的失误, 提出了 相应的控制对策, 以减少检测工作的失误。
( 3) 适时复活酶标板和生物试剂。包被有抗体 的微孔板条, 必须在低温 2~ 8 密封干燥保存, 开 始试验前, 必须在室温下复活。开始试验操作前应 将试剂和待 测样品 在室温 下 20 ~ 25 平衡 30~ 60 min。竞争性酶标物、盐酸克伦特罗抗体等生物 试剂, 均为浓缩液, 应低温贮存, 适温复活。每取一 种样品及试剂均要更换枪头, 以免交叉污染。样本 一定要按照要求进行前处理, 样本若在几天内检测, 可放在 2~ 8 冰箱中; 如需贮存, 则置于 20 的低 温冰箱内。
( 4) 加样准确。加样时不能出现气泡, 应力求准 确, 将样品加入孔底; 加完试剂后用吸水纸在酶标板 表面轻拭吸干; 为了提高加样速度, 提倡使用多头加 样器( 排枪) ; 如采用全自动加样器, 在加酶标试剂时 要格外细心。样本较多时, 应分批操作。
( 5) 适温孵育( 培养) 。孵育时, 由于 ELISA 试 验一般都有二次抗原抗体反应, 应注意使各 EL ISA 条板的温度迅速平衡, 其目的是恢复其生物活性, 保 证充分反应。孵育时, 要贴封片或加盖, 或放置于下 垫干净湿纱布的带盖搪瓷盘中, 使样本或稀释液不 致蒸发。
应条件为室温反应 15~ 30 min。一般情况下在最初 的 10 min 内, 绝大部分催化反应便可完成。但要使 辣根过氧化物酶( H RP) 的底物催化反应完全彻底, 20~ 25 仍需 30 min。因此, 为使弱阳性样本孔能 有充分的显色, 建议在 20~ 25 下反应 20 min 后再 终止反应, 进行比色测定。
( 5) 在加样和加酶标抗原时易出现的失误: 样本 前处理没做好便进行加样; 手工操作时, 需加样品过 多, 造成加样后放入培养箱孵化前待时过长( 特别是 室内温度较高时) ; 加样液中出现气泡; 加样液洒出 孔外。
( 6) 在加入脲酶底 物时易出现的 失误: 加 试剂 时, 药物溅出孔外。
( 7) 在加入的显色剂时易出现的失误: 使用过期 显色剂; 加显色剂时溅出孔外造成液体回流; 显色时 间过短( 少于 10 min) 或过长( 超过 30 min) 。
( 6) 细心洗涤。虽然洗涤在 EL ISA 试验中不是 一个反应步骤, 但却决定着试验的成败, 洗涤时应特 别仔细。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗 原( 体) 相结合的物质和非特异性吸附于固相载体的 干扰物质。如洗涤不彻底, 特别是最后一次如有酶
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2009 年第 6 期
Βιβλιοθήκη Baidu
结合物的非特异性吸附存在, 将使空白值升高。 ( 7) 把握显色时间。显色时, 一般试剂盒显色反
由于 EL ISA 检测范围在 ng 至 pg 水平, 属于超 微量分析技术, 因此对试剂、材料、试验过程和反应 条件都有严格的要求。
( 1) 科学合理的试验设计。试验必须设重复, 用 来消除试验误差。所有工作试剂要随配随用, 切勿 久贮, 因浓度偏低易失活易污染。每次试验, 每块酶 标板都必须要有加标对照和空白对照; 其排放位置 应尽量避开微 孔板 条的 2 个 边行, 不允 许缺 项或 少项[ 6] 。
( 3) 在加生物试剂时易出现的失误: 孵育时, 未 贴封片或加盖, 或未使用垫有干净湿纱布的搪瓷盘, 致使样本或试剂蒸发; 孵育时间人为延长, 导致非特 异性结合物质吸附于孔壁, 难于清洗彻底。
( 4) 在洗板和摔板 时易出现的失 误: 手工 洗板 时, 孔与孔之间液体交 叉污染, 半自动洗板机 洗板 时, 洗液量不足, 导致洗板不彻底; 洗板针堵塞, 抽吸 不完全; 洗板不畅, 导致洗板效果差; 应用的酶标板 过多, 造成洗板待时太长。
2009 年第 6 期
ELISA 检测盐酸克伦特罗残留时的 问题及控制对策
李华玮1 , 李巧枝1 , 卫 丽2 , 李鹏坤2*
( 1. 郑州牧业工程高等专科 学校, 河南 郑州 450011; 2. 河南农业大学, 河南 郑州 450002)
摘要: 酶联免疫吸附试验( EL ISA) 是一项筛查兽药盐酸克伦特罗残留的新技术。系统介绍了盐酸 克伦特罗残留的检测原理、试验操作时容易出现的失误, 针对性地提出了规范操作、适时孵育、准确 读板等 8 项控制对策。 关键词: 酶联免疫吸附试验; 盐酸克伦特罗; 残留; 检测; 问题; 对策 中图分类号: S851. 34+ 7 文献标识码: A 文章编号: 1004 3268( 2009) 06 0144 03
( 8) 终止反应过程中易出现的失误: 加终止液时 产生较多气泡, 导致假阳性增加。
( 9) 在读板时易出现的失误: 设定的标样浓度不 在线性范围; 读板时酶标板板底不清洁或有划痕等; 同一板块或不同板块相同处理( 平行) 板孔之间显色 不一样; 标准对照( 质控样) 上显色和空白样一样。
3 针对 ELISA 失误的对策
克伦特罗是儿茶酚胺类化学合成衍生物, 属于 苯乙胺类( PEAs) 药物, 是 肾上腺受体的激动剂, 在临床上以盐酸盐剂型曾用于 治疗牲畜支气 管哮 喘、难产等病症。通常每日用药量小于 1 g / kg, 连 续用药时间少 于 10 d。动物试验表 明, 一些 P EAs 药物超过用量 5~ 10 倍后, 可以增加受试动物胴体 的瘦肉率, 显著提高体重和饲料的转化率。当人体 摄入剂量超过 0. 1 g / g 残留的畜禽内脏组织时, 便 会出现一些明显的中毒症 状, 如肌肉 震颤、行 走不 稳、手握无力、心动过速、心律失常、腹痛、恶心、眩晕 等[ 1] 。20 世纪 80 年 代, 盐酸克伦特罗在国 外作为 饲料添加剂应用, 后来引入国内, 商品名为瘦肉精, 应用于畜牧生产后, 造成了极大的安全隐患。盐酸 克伦特罗化学性质稳定, 易在动物肝、肾、肺、肌肉、
[ 3] 焦奎, 张书圣. 酶联免疫分析技术及应用 [ M ] . 北京: 化 学工业出版社, 2004: 121- 137.
[ 4] 聂芳红, 徐晓彬, 陈进 军. 食品动 物兽药 残留研 究进 展 [ J] . 中国农学通报, 2006, 22( 9) : 71- 75.
[ 5] 符建伟, 李鹏坤 , 孟 中生, 等. 农 畜产 品中 农、兽 药残 留 检测工作质量保证办法[ J] . 河南科技, 2006( 8) : 5- 6.
2 ELISA 反应原理及检测中易出现的失误
2. 1 EL ISA 检测盐酸克伦特罗的反应原理 EL ISA 检测盐酸克伦特罗的反应原理是: 酶标
微孔板上包埋有针对盐酸克伦特罗抗体( IgG) 的双 抗体, 加入 Ig G 经过孵育及洗涤后, 再加入受检抗 原和酶标抗原, 竞争性地与酶标微孔板上已连接在 双抗体上的抗体相结合。如受检样品中无抗原盐酸 克伦特罗, 则酶标抗原便与该抗体全部结合, 如果受 检样品中含有该物质, 则可和酶标抗原竞争该抗体, 二者占领的机会是均等的。如果检测样品中含有盐 酸克伦克罗, 便会占领酶标板上连接的双抗体, 而酶 标抗原便无法和孔板上双抗体结合, 就会被水冲掉, 孔板上不会显色[ 3] 。加入脲酶底物显色后, 含结合 酶标量大的颜色最深, 含单一抗原量大的样品颜色 最浅。其颜色的深浅和盐酸克伦特罗的含量呈负相
4 小结
ELISA 检测, 每操作一步, 都要求 准确、快速、
标准、规范。在实际操作中, 除了选择优良试剂外, 必须严格按照步骤进行操作, 同时做好室内质控、室 间质评; 以严谨的工作作风检测每一份样本, 才能保 证检测质量[ 8] 。在盐酸克伦特罗残留检测时, 了解 和熟悉 EL ISA 试验原理, 熟练掌握其检测技术, 才 能采取有效控制对策, 彻底杜绝误检和漏检的问题 发生, 为食品安全作出贡献。
( 1) 在试验设计方面: 一般情况下应设计试剂空 白, 样品空白, 标准对照( 质控样品) , 待测样品等试 验项目, 重复 2 次( 平行) 以上; 易出现的失误是不设 质控样品, 空白对照不全, 不设重复。
( 2) 在购买和储存酶标板时易出现的失误: 没有 控制好环境的温度、湿度, 没即刻在冰箱 2~ 8 环 境中密封干燥保存或错过了质保期。
参考文献:
[ 1] 王选年, 杨艳艳, 邢广旭, 等. 盐酸克伦 特罗单抗快 速检 测试剂盒的 研制[ J] . 中国兽 医学报, 2004, 24( 1) : 757 8.
[ 2] 李巧枝, 卫丽, 李华 玮, 等. 生物化 学实 验技 术[ M ] . 北 京: 中国轻工业出版社, 2007: 62- 135.
收稿日期: 2008 12 19 作者简介: 李华玮( 1981 ) , 女 , 河南郑州人, 助教, 硕士, 主要从事细胞生物学教学工作。 通讯作者: 李鹏坤( 1952 ) , 男 , 河南灵宝人, 高级实验师, 本科, 主要从事仪器分析工作。
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河南农业科学
关。参比孔( 空白) 和待测样品孔颜色之差, 就代表 了受检样本所含抗原( 盐酸克伦特罗) 的量。和标准 样板孔的颜色比较, 进行定性, 用浓度吸光度值进行 定量。整个试验结果, 同处理( 平行) 板孔之间显色 应该一样, 空白样上应该颜色最深, 标准对照( 质控 样) 上应该颜色最淡。 2. 2 EL ISA 检测过程中易出现的失误
( 2) 选择优质试剂。EL ISA 试验所需的试剂和 物料分 为 主 体试 剂 和 辅助 性 试剂。通 常 采用 的 EL ISA 商品试剂盒中已包括了足够进行 96 个测量 的主体试剂和材料, 如已包被 抗体的微孔板、标准 液、酶标记物浓缩液、抗体浓缩液、酶基质、发色剂、 停止液等。
对于未使用完的试剂和微孔板等生物材料, 必 须于 2~ 8 密封保存。微孔板 不能重复使用。对 于缓冲液、洗涤剂、样本 稀释液等辅助 性试剂的配 制, 应随用随配。蒸馏水的质量至关重要, 不合格的 蒸馏水能使空白值升高, 必须使用新鲜的双蒸水或 超纯水制备试剂[ 3] 。
( 8) 准确读板。显色反应完成后, 加入酸终止反 应, 振荡混匀后即可在酶标仪上进行读板, 测量其吸 光度值。一般情况下, 相同处理板孔之间, 目测显色 颜色不应有明显差异, 酶标仪检测其吸光度值的误 差不应超过 15% , 否 则易造成误检。比色测定时, 一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适位置或所 用滤光片是否正确。中档以上的酶标仪基本上都同 时具有单波长和双波长比色功能。由于 EL ISA 测 定中单个空白孔的非特异吸收具有一定程度的不确 定性, 每次测定或同次测定会因空白孔位置的不同, 可能得到不同吸光度测定值, 故而在 ELISA 测定比 色时, 应适当多设空白孔对照。如有条件, 最好使用 双波长比色计, 可消除读板时板底不清洁等所带来 的误差[ 7] 。
毛发等组织和器官中蓄积; 主要发生各种氧化代谢 和轭合反应, 在代谢过程中受转移酶、芳基硫酸化酶 的作用, 生成葡萄糖醛酸轭合物失活, 故残留监测只 检盐酸克伦特罗原型。
目前, 国内外检测畜产品中盐酸克伦特罗残留常 用的检测方法有: H PLC( 高效液相色谱) 法、GC Ms ( 气相- 质普联用仪) 法、LC - M S( 液相- 质普联 用仪) 法、EL ISA ( 酶联免疫吸附试验法) 法等。通 常检测限要求低于 0. 5 g/ kg。国内相关标准的规 定是, 用 EL ISA 法进行筛查, GC- M s 等方法加以 确证[ 4] 。
食品安全问题是目前全球范围内的焦点和热点 之一, 猪肉中盐酸克伦特罗残留危害事件曾触目惊 心[ 1] 。筛查兽药盐酸克伦特罗残留, 是畜禽产品质 量安 全 检测 时 的 必检 项 目。酶 联 免 疫吸 附 试 验 ( EL ISA) 是快速筛查盐酸克伦特罗残留的标准方法 之一[ 2] 。但是该方法技术性强, 操作过程复杂, 对试 验环境要求特殊, 检验时稍有不慎, 就会产生许多失 误, 导致误检或漏检[ 3] 。为了提高工作效率, 确保检 测质量, 根据盐酸克伦特罗的生物学特性, 针对应用 ELISA 检测畜禽产品残留时易产生的失误, 提出了 相应的控制对策, 以减少检测工作的失误。
( 3) 适时复活酶标板和生物试剂。包被有抗体 的微孔板条, 必须在低温 2~ 8 密封干燥保存, 开 始试验前, 必须在室温下复活。开始试验操作前应 将试剂和待 测样品 在室温 下 20 ~ 25 平衡 30~ 60 min。竞争性酶标物、盐酸克伦特罗抗体等生物 试剂, 均为浓缩液, 应低温贮存, 适温复活。每取一 种样品及试剂均要更换枪头, 以免交叉污染。样本 一定要按照要求进行前处理, 样本若在几天内检测, 可放在 2~ 8 冰箱中; 如需贮存, 则置于 20 的低 温冰箱内。
( 4) 加样准确。加样时不能出现气泡, 应力求准 确, 将样品加入孔底; 加完试剂后用吸水纸在酶标板 表面轻拭吸干; 为了提高加样速度, 提倡使用多头加 样器( 排枪) ; 如采用全自动加样器, 在加酶标试剂时 要格外细心。样本较多时, 应分批操作。
( 5) 适温孵育( 培养) 。孵育时, 由于 ELISA 试 验一般都有二次抗原抗体反应, 应注意使各 EL ISA 条板的温度迅速平衡, 其目的是恢复其生物活性, 保 证充分反应。孵育时, 要贴封片或加盖, 或放置于下 垫干净湿纱布的带盖搪瓷盘中, 使样本或稀释液不 致蒸发。
应条件为室温反应 15~ 30 min。一般情况下在最初 的 10 min 内, 绝大部分催化反应便可完成。但要使 辣根过氧化物酶( H RP) 的底物催化反应完全彻底, 20~ 25 仍需 30 min。因此, 为使弱阳性样本孔能 有充分的显色, 建议在 20~ 25 下反应 20 min 后再 终止反应, 进行比色测定。
( 5) 在加样和加酶标抗原时易出现的失误: 样本 前处理没做好便进行加样; 手工操作时, 需加样品过 多, 造成加样后放入培养箱孵化前待时过长( 特别是 室内温度较高时) ; 加样液中出现气泡; 加样液洒出 孔外。
( 6) 在加入脲酶底 物时易出现的 失误: 加 试剂 时, 药物溅出孔外。
( 7) 在加入的显色剂时易出现的失误: 使用过期 显色剂; 加显色剂时溅出孔外造成液体回流; 显色时 间过短( 少于 10 min) 或过长( 超过 30 min) 。
( 6) 细心洗涤。虽然洗涤在 EL ISA 试验中不是 一个反应步骤, 但却决定着试验的成败, 洗涤时应特 别仔细。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗 原( 体) 相结合的物质和非特异性吸附于固相载体的 干扰物质。如洗涤不彻底, 特别是最后一次如有酶
14 5
2009 年第 6 期
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结合物的非特异性吸附存在, 将使空白值升高。 ( 7) 把握显色时间。显色时, 一般试剂盒显色反
由于 EL ISA 检测范围在 ng 至 pg 水平, 属于超 微量分析技术, 因此对试剂、材料、试验过程和反应 条件都有严格的要求。
( 1) 科学合理的试验设计。试验必须设重复, 用 来消除试验误差。所有工作试剂要随配随用, 切勿 久贮, 因浓度偏低易失活易污染。每次试验, 每块酶 标板都必须要有加标对照和空白对照; 其排放位置 应尽量避开微 孔板 条的 2 个 边行, 不允 许缺 项或 少项[ 6] 。
( 3) 在加生物试剂时易出现的失误: 孵育时, 未 贴封片或加盖, 或未使用垫有干净湿纱布的搪瓷盘, 致使样本或试剂蒸发; 孵育时间人为延长, 导致非特 异性结合物质吸附于孔壁, 难于清洗彻底。
( 4) 在洗板和摔板 时易出现的失 误: 手工 洗板 时, 孔与孔之间液体交 叉污染, 半自动洗板机 洗板 时, 洗液量不足, 导致洗板不彻底; 洗板针堵塞, 抽吸 不完全; 洗板不畅, 导致洗板效果差; 应用的酶标板 过多, 造成洗板待时太长。
2009 年第 6 期
ELISA 检测盐酸克伦特罗残留时的 问题及控制对策
李华玮1 , 李巧枝1 , 卫 丽2 , 李鹏坤2*
( 1. 郑州牧业工程高等专科 学校, 河南 郑州 450011; 2. 河南农业大学, 河南 郑州 450002)
摘要: 酶联免疫吸附试验( EL ISA) 是一项筛查兽药盐酸克伦特罗残留的新技术。系统介绍了盐酸 克伦特罗残留的检测原理、试验操作时容易出现的失误, 针对性地提出了规范操作、适时孵育、准确 读板等 8 项控制对策。 关键词: 酶联免疫吸附试验; 盐酸克伦特罗; 残留; 检测; 问题; 对策 中图分类号: S851. 34+ 7 文献标识码: A 文章编号: 1004 3268( 2009) 06 0144 03
( 8) 终止反应过程中易出现的失误: 加终止液时 产生较多气泡, 导致假阳性增加。
( 9) 在读板时易出现的失误: 设定的标样浓度不 在线性范围; 读板时酶标板板底不清洁或有划痕等; 同一板块或不同板块相同处理( 平行) 板孔之间显色 不一样; 标准对照( 质控样) 上显色和空白样一样。
3 针对 ELISA 失误的对策