中药材抗氧化及自由基清除活性的研究

中 ,得到 1/ 10 匀浆 。所得匀浆以 14000 r·min - 1离心 12μmol·L - 1CytC ,以及不同浓度的待测样品 。此体
15 min ,将匀浆中的上清均分成 1 mL 加到含有待测 样品 、10 μmol·L - 1 FeSO4 和 0. 1 mmol·L - 1维生素 C
问题[1] 。最近的一些研究发现 ,在人类免疫缺陷病 1. 1. 2 动物 本研究采用 ♂ Sprague2Dawley 大鼠
毒 ( HIV) 感染人群体内 ,由于抗氧剂消耗量的上升 , (150～200 g) ,在实验室条件[ (21 ±2) ℃,12/ 12 h 昼
进而导致了体内抗氧化剂的缺乏 。因此推测提高抗 夜循环 ]下 ,用标准啮齿类食物饲养 。
的蒸馏水稀释 , 以达到红细胞完全溶血 , 并在 540 匀浆脂质过氧化作用 (表 2) 。白芍 、白菊花 、杜仲 、
nm 测定上清的吸光值 B 。维生素 C 作为阳性对照 。 千里光 、丹皮和淫羊霍均具有很高的超氧阴离子 (表
抑制溶血百分率按下式计算 :抑制率 ( %) = (1 - A/ 3) 和羟自由基 (表 4) 清除活性 。尽管七叶一枝花和
( Angelica sinensis (Oliv. ) Diels. ) 、丹皮 ( Paeonia suf2 f ruticosa Andr. ) 、淫羊霍 [ Epimedium sagittatum ( Sieb. et Zucc. ) Maxim ] 和 桃 仁 [ Prunus persica ( L . ) Batsch. ] 。鉴定由本单位植物研究室进行[10] 。干燥 的药材切成小块 ,室温下用水浸泡过夜 ,回流煮沸 2
h ,将水提取物倾出 ,5000 r·min - 1离心 10 min ,将上 测样品体系的吸光值 。 ②羟自由基清除活性的测
清液冷冻干燥 ,所得干粉用于本研究 。
定[12 ] :在维生素 C2CuSO4 体系中 , Cu2 + 还原产生羟
1. 2 方法
自由基 ,再根据羟自由基氧化细胞色素 C ( CytC) 的
37 ℃恒温水浴振荡 2 h 。然后将此体系以 8 倍体积
在研究的 10 种植物中 ,白芍 、白菊花 、杜仲 、千
的 PBS 稀释 ,2500 r·min - 1离心 10 min ,于 540 nm 测 里光 、丹皮和淫羊霍能够有效抑制大鼠红细胞溶血
定上清液的吸光值 A 。同样 ,将此体系以 8 倍体积 (表 1) 。除杜仲外 ,其余 5 种植物均能抑制大鼠脑
Studies on antioxidative and free radical scavenging activities of Chinese herbs
LIU Fang1 , WU Zi2bin2 , NIU Shu2min1 , HE Jin2shu1 , XING Lai2jun1 ( 1. College of Life Sciences , Nankai University , Tianjin
1. 1 材料
1. 1. 1 试剂 DNA ( Ⅰ型 ,小牛胸腺) 、硫酸博来霉
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (39970023)
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Chin Pharm J , 2001 July , Vol . 36 No. 7
来自百度文库
中国药学杂志 2001 年 7 月第 36 卷第 7 期
性以下式计算 :抑制率 ( %) = ( A - A1) / A ×100 % 。 其中 A 为对照的吸光度 , A1 含待测样品体系的吸光 度。
1. 2. 4 博 来 霉 素 造 成 DNA 损 伤 的 测 定 按 Aeschlach 等[13]的方法稍作改进进行 。0. 5 mL 的反 应体系包括 0. 5 mg·mL - 1 DNA ,0. 05 mg·mL - 1硫酸
原型辅酶 Ⅰ) 体系中 ,NADH 氧化产生超氧阴离子 , 自由基 (表 4) 的活性 。在 DNA 损伤实验中 ,七叶一
超氧阴离子可还原氮蓝四唑 (NBT) 为蓝色产物 。本 枝花 、白术 、当归 、丹皮和桃仁几乎无任何促氧化效
系于 25 ℃保温 90 min 后 ,在 550 nm 测定 CytC 的透 光率的变化 。硫脲作为阳性对照 ,并将其抑制率视
的试管中 ,于 37 ℃保温 1 h 。保温结束后 ,加入 1. 0 为 100 %。羟自由基清除活性以下式表示 :
mL 三氯醋酸 ( TCA ,28 %) 终止反应 ,再加入 1. 5 mL 硫化巴比妥酸 ( TBA ,1 %) ,然后将此体系于 100 ℃加 热 15 min 。离心除去蛋白质沉淀后 ,于 532 nm 测定
氧化剂的摄入量 ,可延迟 HIV 感染者爱滋病病发的 1. 1. 3 植物水提取物的制备 本研究采用的药材
时间[2] 。我国有丰富的植物资源 ,植物中酚类 、黄酮 均购自香港九龙药店 ,包括七叶一枝花 ( Paris chi2
类 、萜类和多种提取的抗氧化活性的研究越来越受 nensis Franch. ) 、白芍 ( Paeonia lactiflora Pall . ) 、白菊
抑制率 ( %) =
TT-
T2 T1
×100 % 。
其中 T 为羟自由基 (OH·) 产生体系的透光值 , T1 为
丙二醛 (MDA) 2TBA 复合物的吸光度[11] 。BHA (丁化 对照体系 (无 OH·) 的透光值 , T2 为含待测样品体系
羟基苯甲醚) 作为阳性对照 。待测样品的抗氧化活 的透光值 。
到关注[3～4] ,并且在衰老的自由基学说以及与衰老 花 ( Chrysanthemum morifolium Ramat . ) 、白术 ( Atracty2
相关的疾病研究中 ,抗氧化活性物质的研究也占有 lodes macrocephala Koidz. ) 、杜 仲 ( Eucommia ulmoides
1. 2. 1 体外大鼠脑匀浆脂质过氧化作用的测定 颜色反应进行测定 。本研究采用 3 mL 磷酸钠盐缓
取正常大鼠的脑 ,剪成小块后 ,用 Polytron 电动匀浆 冲液 (0. 15 mmol·L - 1 ,pH7. 4) 的羟自由基产生体系 ,
器 ,在冰冻 Tris2HCl 缓冲液 ( 20 mmol ·L - 1 ,pH7. 4) 其中含 100μmol·L - 1维生素 C ,100μmol·L - 1CuSO4 ,
300071 , China ;2. the Chinese University of Hong Kong , Hong Kong , China)
ABSTRACT :OBJECTIVE To investigate that whether the extracts of ten herbs tested having antioxidative and free radical scavenging activ2 ities. METHODS Biological assays were used to determine the inhibitions of erythrocytes hemolysis ,lipid peroxidation of brain hemogenates and DNA damage. Chemical assays were used to determine the inhibitions of free radical generation. RESUL TS Paeonia lactiflora Pall. Chrysanthemum morifolium Ramat. , Eucommia ulmoids Oliv. , Senecio scandens Buch2Ham , Paeonia suff ruticosa Andr. and Epimedium sagit2 tatum (Sieb. et Zucc. ) Maxim. among ten herbs had strongly antioxidative and free radical scavenging activities and low side2effects. CON2 CL USION There were antioxidative and free radical scavenging components in several herbs. Therefore ,it is worthy to research further. KEY WORDS :herb ;antioxidant ;free radical
·中药及天然药物·
中药材抗氧化及自由基清除活性的研究
刘方1 ,武子斌2 ,牛淑敏1 ,何锦姝1 ,邢来君1 (1. 南开大学生命科学学院 ,天津 300071 ;2. 香港中文大学生物化学系)
摘要 :目的 探索 10 种待测药材提取物是否具有抗氧化和自由基清除活性 。方法 分别采用红细胞溶血 、脑匀浆脂质过氧化 和 DNA 损伤抑制的生物测定法 ,以及对化学反应产生自由基抑制的化学测定法 。结果 在 10 种待测药材中 ,白芍 、白菊花 、 杜仲 、千里光 、丹皮和淫羊霍具有明显的抗氧化和自由基清除活性 ,其不良反应小 。结论 药材中含有高的抗氧化和自由基 清除成分 。因此 ,有进一步探讨的价值 。 关键词 :药材 ;抗氧化 ;自由基 中图分类号 :R284 文献标识码 :A 文章编号 :1001 - 2494 (2001) 07 - 0442 - 04
日光 、紫外线 、电离辐射 、化学反应以及机体代 素 、丁化羟基苯甲醚 (BHA) 、维生素 C 均购自 Sigma
谢过程所产生的活性氧具有广泛的病理学效应 ,例 公司 。2 ,2′2偶氮2双2(22脒基丙烷) 氯化二氢 (AAPH)
如 ,DNA 损伤 、致癌作用以及与衰老有关的一系列 购自 Wak 公司 。其它试剂为分析纯 。
很重要的地位[5～6] 。国家自然科学基金一直积极资 Oliv. ) 、千 里 光 ( Senecio scandens Buch2Ham) 、当 归
助植物中抗氧化活性成分研究的课题 ,而且 ,绿茶的 抗氧化作用已被充分肯定[7～9] 。因此 ,从药材中筛 选具有抗氧化和自由基清除活性的物质 ,既具有理 论意义 ,又具有应用价值 。 1 材料和方法
B) ×100 %。
桃仁在生物测定系统中 ,既没有抑制大鼠红细胞溶
1. 2. 3 自由基清除活性的测定 ①超氧阴离子清 血的作用 ,也没有抑制大鼠脑匀浆脂质过氧化作用
除活性的测定[12] :在吩嗪硫酸甲酯 ( PMS) 2NADH(还 (表 1 ,2) ,但它们均具有清除超氧阴离子 (表 3) 和羟
血[11] 。以 pH7. 4 的磷酸盐缓冲液 ( PBS) 制备 10 %的 心后 ,以 532 nm 测定吸光值的增加来表示 DNA 的
红细胞悬液 。在 1 mL 的红细胞悬液和待测样品中 , 损伤程度 。
加入等体积的 200 mmol ·L - 1AAPH (溶于 PBS) 。于 2 结 果
胞于 2500 r·min - 1离心 10 min ,得到完整的红细胞 。 mol·L - 1) 终止反应 。再加入 0. 5 mL TBA (1 %) 和0. 5
此分 析 体 系 采 用 过 氧 自 由 基 造 成 红 细 胞 溶 mL HCl (25 %) 进行显色反应 ,80 ℃保温 10 min 。离
1. 2. 2 红细胞溶血的测定 针刺大鼠心脏采血 ,并 博来霉素 ,5 mmol·L - 1 MgCl2 ,50 mmol ·L - 1 FeCl3 ,以
收集于含肝素的试管 。分离红细胞 ,用 10 倍体积的 及不同浓度的待测样品 。维生素 C 作为阳性对照 。
0. 15 mol·L - 1NaCl 洗涤 3 次 ,最后一次洗涤 ,将红细 将反应混合物于 37 ℃保温 1 h ,以 0. 05 mLEDTA (0. 1