组织培养育苗

组织培养育苗
植物组织培养（Plant tissue culture） 是指在无菌条件下，体的植物器官 （根、茎、叶、花等）、组织（如形 成层、花药组织、胚乳、皮层等）、 细胞（体细胞和生殖细胞），以及原 生质体，培养在人工配制的培养基上， 给予适当的培养条件，使其长成完整 的植株，统称为植物组织培养。
灭菌
• 灭菌是组织培养重要的工作之一。 • 培养基用湿热灭菌 • 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其 中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水 的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增 加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达 121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各 种细菌及其高度耐热的芽孢。
• 高压蒸汽灭菌器
(四)人工种子和种质保存
(五) 次生物质工业化生产
管理
1．保持小苗的水分供需平衡。 2．防止菌类滋生。由于试管苗原来的环境是无菌的，移出来以后难以保持完全 无菌，因此对基质进行高压灭菌。 3．一定的温、光条件。试管苗移栽以后要保持一定的温光条件，适宜的生根温 度是18～20℃
4．保持基质适当的通气性。要选择适当的颗粒状基质，保证良好的通气作用。
组织培养幼苗的优缺点
需要一定的营养物质、植物生长调节剂、光照等条件 营养物质：水、糖类、维生素类、氨基酸类、大量元素化合物、微量元 素化合物
移栽和幼苗的管理
试管苗移栽是组织培养过程的重要环节 通常采取的措施有：对外界要增加湿度、减弱光照；对试管内要通透气体、 增施二氧化碳肥料、逐步降低空气湿度等。
移植
从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基。移植时用一 个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，栽后把苗周围基质压 实。栽前基质要浇透水。栽后轻浇薄水。
培养基 配制 移栽
脱分化 诱导愈伤组织 获取 无菌接种 的形成 （脱毒） 外植体
组织培养步骤
试管苗的形成 再分化
扩大培养
• 植物组织培养的过程可概百度文库为：
脱分化
再分化
外植体
•
愈伤组织
根、茎、叶 或 胚状体
完整植物
⊙
茎尖、茎段、胚及子房等器官做外植体可不经脱分化直接形 成试管苗。
细胞全能性：（原理）指细胞经分裂和分化后仍具有形成完 整有机体的潜能或特性。 脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。 再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新 分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。
无菌操作室
培养
1．固体培养法 用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然该方法 设备简单，易行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象 发生。
2．液体培养法 用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少， 通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给。这种定期浸没的 方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。
培养基的配置
• • • • • • • • • • 1．先在烧杯中放入一些蒸馏水。 2．分别取母液10ml倒入。 3．一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。 4．加蒸馏水用量筒定溶至1L。 5．用微量可调移液器吸取各种激素，减少误差。 6．用精密试纸或酸度计调整PH至5.7～5.8。 7．称取5g左右琼脂粉,倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂 粉熔化。 8．稍微冷却后，分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口， 用橡皮筋或绳子扎紧。 9．放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。 10．灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在超净工作台上令其冷却凝固。 微量可调移液器
组织培养的应用
(一)无性系的快速繁殖：兰花、甘蔗和名贵品种的无性繁殖； (二)培育无病毒种苗：马铃薯、香蕉、苹果、甘蔗、葡萄、桉树、毛白杨、 草莓、甜瓜、花卉； (三)新品种的选育 1.花培和单倍体育种； 2.离体胚培养和杂种植株获得； 3.体细胞诱变和突变体筛选； 4.细胞融合和杂种植株的获得；
优点
1、在不受植物体其它部分干扰下研究被培养部分的生长和 分化的规律 2、利用各种培养条件影响它们的生长和分化，以解决理论 上和生产上的问题 3、有力地推动了生物科学中各学科的发展和相互渗透 4、促进了营养生理、细胞生理和代谢、生物合成、基因转 移、基因重组的研究。
缺点
1、生产成本高 2、组培苗炼苗难，移栽成活率低
7
接种
• 1．将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，用消毒剂灭菌，再用无菌水 冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。 • 2．材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适 当的切割。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。
• 3．用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。