第章-维生素的测定PPT课件

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3．测定步骤
①样品提取 ②氧化 ③显色反应 ④85％硫酸处理 ⑤比色 ⑥标准曲线的绘制
式中： x — 样品中核黄素的含量，
mg / 100 g
U — 样品管荧光值；
U b — 样品管空白荧光值 S — 标准管荧光值
S b — 标准管空白荧光值； c — 核黄素标准使用液浓度
， g / ml
V — 用于氧化去杂质操作的 核黄素标准使用液之体
V1 — 用于氧化去杂质操作的 V 2 — 试样水解后定容之总体 m 样品质量， g
Vitamin的一般知识
一、共同特点： 大多不能在体内合成（ＶＤ可少量合成） 大多不能大量储存于组织中 不构成组织的原料 不提供能量 以辅酶或辅基形式参与酶反应
二、命名与分类
以字母、化学结构或功能命名 Vitamin A/视黄醇/干眼病维生素
分类：脂溶性、水溶性
三、维生素缺乏
⑤紫外线破坏硫色素，所以硫色素形成 后要迅速测定，并力求避光操作。
⑧氧化是操作的关键步骤，操作中应保 持加试剂的迅速一致
三、维生素C的测定
1 Vc的性质 已糖醛基酸
易溶于水、醇，不溶于 乙醚、氯仿等
干燥状态较稳定、酸性 介质中较稳定
对光、氧、铜离子敏感
2 测定方法
(一) 2，4—二硝基苯肼比色法 (二) 2，6—二氯靛酚滴定法 (三)荧光法
硫胺 核黄素 烟酸 泛酸 吡哆醇类 生物素 蝶酰谷氨酸 钴胺素
维生素G 维生素PP、烟碱酸、尼古丁 酸 遍多酸
包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺
维生素H、辅酶R
叶酸、维生素M、叶精
氰钴胺、辅酶B12
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一、维生素B2的测定
在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式。
是机体许多重要辅酶的组成成分，对机体 内糖、蛋白质、脂肪代谢起着重要作用。
临床缺乏 亚临床缺乏(marginal deficiency) 降低对疾病的抵抗力、降低工作效率和
生活质量。
脂溶性维生素主要储存在肝脏中，摄取过多， 可能会引起中毒。摄取过少，可缓慢出现缺 乏症状。 水溶性的呢？
第一节 概述
一、vຫໍສະໝຸດ Baidutamin含量和测定意义 1 含量分布： VA 0.1-300mg/100g 鱼肝 -胡萝卜素 0.1-12mg/100g 果蔬 Vc 0.1-1000mg/100g VB的含量较低
荧光计法
1．原理 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中，能被氧
化成硫色素，在紫外光照射下产生蓝色 荧光。如果不存在其它荧光物质干扰， 荧光强度与硫色素含量成正比，即与溶 液中硫胺素含量成正比。
4．操作方法
(1)样品提取 ①水解 ②酶解
(2)净化 (3)氧化 (4)荧光强度的测定
5 结果计算
x U Ub c • V V1 100 S Sb m V2 1000
维生素分析的方法有
化学法(比色法、滴定法） 仪器法（紫外法、荧光法） 微生物法(水溶性维生素、B2） 生物鉴定法 (VD )
第二节 水溶性维生素的测定
水溶性维生素的性质 样品预处理
维生素名称 一般使用的化学名 其他常用别称及说明
维生素B1 维生素B2 维生素B3 维生素B5 维生素B6 维生素B7 维生素B9 维生素B12
2 测定意义
A 利用性：人体需要、合理膳食 B 贮存 C 加工
二、维生素分析工作的特点
1 个别测定。无所谓总量 2 稳定性差，光、热、氧、酶敏感 3 干扰杂质多 4 结合态存在的问题
二、维生素分析的一般程序
1 使游离出来 2 提取（选溶剂） 3 纯化（根据待测vit与杂质的性质差异） 4 测定
式中： x — 样品中硫胺素含量， mg /100 g，1国际单位 3g维生素 B1 U — 试样荧光强度 U0 — 试样空白荧光强度 S — 标准荧光强度 Sb — 标准空白荧光强度 c — 硫胺素标准使用液浓度 ， g / ml V — 用于净化的硫氨素标准 使用液， ml V1 — 试样水解后定容之体积 ， ml V 2 — 用于净化的试样提取液 体积， ml m 试样质量， g
主要来源是各种动物性食品，其中以肝、 肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性 食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。
荧光计法
1．原理
核黄素在440～500 nm波长光照射下发出 黄绿色荧光。
在 440nm 激 发 波 长 ， 525nm 发 射 波 长 下 测 定提纯液的（黄绿色）荧光强度。之后， 试液中加入低亚硫酸钠(Na2S2O4)，将核 黄素还原为无荧光物质，再测定残余杂 质的荧光强度，荧光值之差与核黄素含 量成正比。
核黄素标准使用液之体 积； ml
积， ml 积， ml
5 说明
①核黄素对光敏感，整个操作应在暗室 中进行。
②核黄素可被低亚硫酸钠还原成无荧光 型，但摇动后很快就被空气氧化成有荧 光物质，所以要立即测定。
二、维生素B1
比色法 硫色素荧光法 液相色谱法
以游离态，或以焦磷酸酯形式存 在于自然界。在酵母、米糠、麦 胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和 牛乳、蛋黄中含量较为丰富。动 物组织不如植物含量丰富。
(一) 2,4—二硝基苯肼比色法
1．原理
用活性炭（其中吸附的氧）将还原型抗坏血 酸氧化为脱氢抗坏血酸，然后与2，4—二硝基 苯阱作用生成红色的脎。在浓硫酸的脱水作用 下，可转变为桔红色的无水化合物——双—2， 4—二硝基苯。在硫酸溶液中显色稳定，最大 吸收波长为500nm，吸光度与总抗坏血酸含量 成正比，故可进行比色。
3．测定方法
(1)样品提取 (2)氧化去杂质 (3)核黄素的吸附和洗脱 (4)荧光测定
样品经酸解、酶解处理使核黄素游离出来，用 高锰酸钾和过氧化氢氧化其它色素和杂质，再经硅 镁吸附剂进行柱层析，吸附提纯核黄素。
4 结果计算
x U U b c • V V1 100 S S b m V 2 1000
6．说明
①一般食品中的维生素B1有游离型的， 也有结合型的，即与淀粉、蛋白质等结 合在一起的，故需用酸和酶水解，使结 合型B1成为游离型，再采用此法测定。
②可在加入酸性氯化钾后停止实验，因 为硫胺素在此溶液中比较稳定。
③样品与铁氰化钾溶液混合后，所呈现 的黄色应至少保持15秒，否则应再滴加 铁氰化钾溶液1—2滴。