叶绿素a和b含量的测定(分光光度法)

实验14 叶绿素a 和b 含量的测定（分光光度法）

一、目的

学会Chla 、b 含量的测定方法，了解叶片中Chla 、b 的含量。

二、材料用具及仪器药品

菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml ）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）

三、原理

叶绿素a 、b 在波长方面的最大吸收峰位于665nm 和649nm ，同时在该波长时叶绿素a 、b 的比吸收系数K 为已知，我们即可以根据Lambert Beer 定律，列出浓度C 与光密度D 之间的关系式：

D 665=83.31Ca+18.60C b (1)

D 649=24.54Ca+44.24 C b (2)

(1)(2)式中的D 665、D 649为叶绿素溶液在波长665nm 和649nm 时的光密度。

为叶绿素a 、b 的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a 、b 在、在波长665nm 时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a 、b 在、在波长649nm 时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得 ：

C A =13.7 D 665—5.76 D 649 (3)

C B =25.8 D 649—7.6 D 665 (4)

G=C A +C B =6.10 D 665+20.04 D 649 (5)

此时，G 为总叶绿素浓度，C A 、C B 为叶绿素a 、b 浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）

（4）（5）式，即可以计算叶绿素a 、b 及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤

1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml 共研磨成匀浆，再加5ml 乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml 。

2．取一光径为1cm 的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm 和649nm 波长测出该色素液的光密度。

计算结果：

叶绿素a 含量（mg/g. FW ）=2

.01100025⨯⨯A C 叶绿素b 含量（mg/g.FW ）=2.01100025⨯⨯

B C 叶绿素总量（mg/g.FW ）=2

.01100025⨯⨯G

五、实验报告

计算所测植物材料的叶绿素含量。

六、思考题

测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长？