动物细胞工程中筛选杂交瘤细胞的小技巧

动物细胞工程中筛选杂交瘤细胞的小技巧

情境导入：已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人

淋巴细胞中有DNA合成的S途径，但一般不分裂增殖，鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加入聚乙二醇促进融合，获得杂种细胞（一般只考虑细胞两两融合）。

细胞存在情况分析：骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合形成3种杂种细胞，则试管中有5

种细胞，即B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞、杂交瘤细胞、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞；鼠骨髓瘤细胞能不断分裂增殖，因此骨髓瘤细胞自身融合的细胞、杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞能增殖。

设计方法：在培养液中添加入氨基嘌呤再收集增殖的细胞。

原理分析：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有该合成途径的骨髓瘤细胞及其彼

此融合的瘤细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。

典型试题：人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋

白，人工制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。回答下列问题：

（1）制备单克隆抗体过程中要用到和技术。制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于，使小鼠产生能分泌相应抗体的浆细胞。（2）在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷

存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。根据这样的原理，向经诱导后的浆细胞与骨髓瘤细胞混合培养液中添加氨基喋呤（“能”或“不能”）能筛选杂交瘤细胞，原因是。（3）筛选获得的杂交瘤细胞具有的特点。利用杂交瘤细胞生产的单克隆抗体可以与特异性结合，从而诊断早孕。

参考答案：

（1）动物细胞培养；动物细胞融合；抗原；

（2）能；浆细胞不能增殖，骨髄瘤细胞中的DNA合成途径被阻断不能增殖，杂交瘤细胞

可通过辅助途径合成DNA，能够增殖；

（3）能无限增殖并分泌特异性抗体；人绒毛膜促性腺激素（或HCG）。