二相性真菌的微生物学检验

二相性真菌的微生物学检验
1．组织胞浆菌属
(1)标本直接检查
1)显微镜检查：大多数真菌病通过KOH制备标本直接镜检观察。

但对于组织胞浆菌病来说，这种检查很难确定是否找到真菌细胞，应涂片染色后检查。

痰液等标本涂片后先用甲醇固定10分钟，再用吉姆萨染色镜检，如在油镜下发现典型菌体结构，通常在大单核细胞或多形核细胞，有时在组织细胞外，多聚集成群，应怀疑为荚膜组织胞浆菌。

皮损、脓液等标本用20％KOH涂片后镜检，可见12～15μm直径的厚壁酵母细胞，细胞内可见脂肪小滴，可疑为杜波组织胞浆菌。

2)抗原检测：取患者痰液作免疫荧光法染色后镜检，可快速检测其抗原，但特异性差，仅作组织胞浆菌初筛试验。

现有学者提出用一种巢氏PCR检测组织胞浆菌中特异性100-KD蛋白质以诊断组织胞浆菌病。

(2)分离培养：将临床标本接种于含抗菌药物的沙保弱培养基上，25℃培养，生长缓慢，有时需4～6周才开始生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。

当转种于血琼脂培养基上，37℃培养，很快形成酵母型菌落，形态特征与直接镜检所见相同。

(3)鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并做脲酶试验和明胶液化试验。

荚膜组织胞浆菌能分解尿素，而杜波组织胞浆菌则不分解尿素；杜波组织胞浆菌在24～96小时内可液化明胶，而荚膜组织胞浆菌则不能液化明胶=另外，可用补体结合试验、免疫扩散、乳胶凝集试验等检测血清中组织胞浆菌抗体，其中以补体结合试验的敏感性和特异性最高。

2．马尔尼菲青霉
(1)标本直接检查
1)涂片染色镜检：取骨髓涂片、皮肤印片或淋巴结活体组织瑞氏染色后镜检，可见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的孢子，常在巨噬细胞内(图23-20)。

2)抗原检测：用荧光素标记纯化的兔超免疫球蛋白G，通过ELISA定量检测患者尿中马尔尼菲青霉抗原，可为患者提供有价值的快速诊断方法，并可作为该病流行的常规诊断方法。

(2)分离培养：将标本直接接种在4％沙保弱培养基上，约3～4天开始生长。

茵落最初呈浅灰褐色膜样或淡黄色绒毛状，中央气生菌丝呈白色绒毛状，向周围扩展，逐渐形成淡灰褐色微带淡红色绒毛状。

2周后变成棕红色蜡样、皱褶，并有白色绒毛样菌丝，菌落周围培养基、背面产生红葡萄酒色并扩展到整个培养基。

(3)鉴定：马尔尼菲青霉的孢子易与荚膜组织胞浆菌孢子相混淆，但前者孢子常有横隔，从不出芽。

3.药敏试验的药物选择
组织胞浆菌对两性霉素B、酮康唑、咪康唑、伊曲康唑及泊沙康唑等敏感。

马尔尼菲青霉对米卡芬净、两性霉素B及伊曲康唑等敏感。