实验一母种培养基的配制与菌种分离与培养

实验一母种培养基的配制与菌种分离与培养实验

1、本次实验的目的和要求

学会母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。

2、实验内容或原理

（1）母种培养基配制。

工艺流程：培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面

（2）菌种分离与培养（本实验以组织分离为例）

工艺流程：种菇的选择与消毒接种菌丝培养

3、需用的仪器或试剂等

仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯。

试剂：75%酒精、高锰酸钾、福尔马林、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。

4、实验步骤

（1）母种培养基配制

a、培养基配方以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂

20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH

2PO

4

3g、MgSO

4

.7H

2

O1.5g、

VB

1

10mg。

b、培养基配制首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。

C、分装试管培养基配制后应趁热分装，量为试管的1/5。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每5-10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。

D、灭菌灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀,排出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽,以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染.

（本次采用全自动高压灭菌锅：121℃，20min）

E、摆斜面当培养基的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。

(2)菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）

种菇的选择与消毒选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。

组织块的切取将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。

菌丝培养接种后置于25℃恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面.

观察记载

详细观察比较母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。

菌落的直径（mm）-菌种块直径(mm)

试管内菌丝生长的速度=

菌落生长的时间（d）

观察母种菌丝的表面形态特征。

通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。

作业

总结制作培养母种、原种及栽培种过程中应掌握哪些基本技能。

如何获得优良的菌种？

5．教学方式

以分组的形式进行实验、讨论

6．考核要求

掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法，要求组织分离成功率在50%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。

7．实验的报告要求

要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。

实验分组：全班分三大组，每大组分2小组。

实验准备：第二组写板书1人，准备材料2人。

实验任务：每小组按配方称料、配料，每人制作母钟两管。

材料准备：购新鲜马铃薯4斤。

准备用具：1人，试管2只/人，棉塞2个/人。

接种用具灭菌：接种盘4个、解剖刀4把、镊子4把。

消毒剂：配75%酒1000ml

本可以用那些和他们一起抱怨人生的时间，来读一篇有趣的小说，或者玩一个你喜欢的游戏。

渐渐的，你不再像以往那样开心快乐，曾经的梦想湮灭在每日回荡在耳边的抱怨中。你也会发现，尽管你很努力了，可就是无法让你的朋友或是闺蜜变得更开心一些。

这就不可避免地产生一个问题：你会怀疑自己的能力，怀疑自己一贯坚持的信念。

我们要有所警惕和分辨，不要让身边的人消耗了你，让你不能前进。

这些人正在消耗你。

01. 不守承诺的人

承诺了的事，就应该努力地去做到。

倘若做不到，就别轻易许诺。这类人的特点就是时常许诺，然而做到的事却是很少。于是，他的人生信用便会大大降低，到最后，也许还会成为一种欺诈。如果发现身边有这样的人，应该警惕，否则到最后吃苦的还是自己。

02. 不守时间的人

俗话说浪费别人的时间就等于谋财害命，所以不守时间也就意味着是浪费别人的时间。与这种人交往的话，不仅把自己的时间花掉了，还会带来意想不到的麻烦。

03. 时常抱怨的人

生活之事十有八九是不如意的，这些都是正常的。

我们应该看到生活前进的方向，努力前进。而不是在自怨自艾，同时还把消极的思想传递给别人。这样的人呢，一遇到困难便停滞不前，巴不得别人来帮他一把。本来你是积极向上的，可是如果受到这种人的影响，那么你也很有可能会变成这样的人，所以应该警惕。

04. 斤斤计较的人

凡事都斤斤计较的人，看不到远方的大前途，一味把精力放在小事上。比如两个人去吃饭，前提是AA制。然后饭吃好后他多付了5毛，最后他说我多付了5毛，你抽空给我吧。如此计较的人，失去了知己，也不会有很大的前途。

05. 不会感恩的人

你善心地帮助了他，可是他却不以为然，而且还想当然的认为这是应当的。多次地帮助，换来的没有一句感谢的话语，更有甚者，还在背后说别人的坏话，真是吃力不讨好。

06. 自私自利的人

以自我为中心，不会考虑别人的感受，想怎样就是怎样，也不会考虑大局，只为自己的感受。这种人，为了达到自己的私利会不择手段。

如果看完以上的描述，你的脑海里冒出一张张熟悉的脸，显然，你正在被人日复一日地消耗着。这种消耗绝对可以毁你于无形之中。

这些方法带来阳光

那么，如何给自己搭建一个严严实实的保护网，让自己始终正能量爆棚，每一分钟都是恣意的阳光呢？跟着我们下面这五步做吧！

他们继续往前走。走到了沃野，他们决定停下。