酶的竞争性抑制作用 共21页
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丙 二 酸 （ -）
琥 珀 酸
亚 甲 蓝 （ 蓝 色 ）
COOH
CH
+
CH
COOH
MB2H
延 胡 索 酸 还 原 性 亚 甲 蓝 （ 无 色 ）
丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争 性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由不 同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体 系中使等量亚甲蓝退色的程度，从而鉴 定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用和 抑制程度。
五、实验方法
1、匀浆液的制备 新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。
按20%的浓度加入pH 7.4的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液， 放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。 2、按表操作 配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反 应体系
试剂（滴）
1.5%ห้องสมุดไป่ตู้
1%
蒸馏水 肝匀浆液 0.02%
管号
琥珀酸钠 丙二酸钠
亚甲蓝
1
10
—
20
10
10
2
10
10
10
10
10
3
10
10
20
—
10
4
20
10
—
10
10
将各管混匀，加少量液体石蜡封盖液面，隔绝空气。然后把 各管置于37℃水浴箱中保温10-15分钟，随时观察各管的颜 色变化并记录结果。
管号
1234
七、注意事项
1、加试剂前一定要将试管清洗干净 2、加入液体石蜡后就不要再摇动试管。避免 空气中的氧接触反应溶液，使得还原型的甲 烯白重新氧化成蓝色 3、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各 试管的褪色情况
六、实验结果
管号
1234
六、思考题
1、解释各管颜色变化的原因 2、本实验中液体石蜡起什么作用？ 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸
馏水，为什么？ 5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的
临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。
谢谢！
xiexie!
当抑制剂浓度较低时
随着抑制剂浓度的增高
当抑制剂浓度高达一定程度
三、实验器材
1、组织捣碎机 2、试管 3、试管架 4、滴管 5、恒温水浴箱
四、实验试剂: 1、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2、1.5% 琥珀酸钠溶液 3、1% 丙二酸钠溶液 4、0.02% 亚甲蓝溶液 5、液状石蜡
实验 琥珀酸脱氢酶 与丙二酸的竞争性抑制作用
一、实验目的
1、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶 2. 验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
* 竞争性抑制的特点
(1) I 与 S结构类似，竞争酶的活性中心
(2) E 既可以结合 S 也可以结合 I, 但是不能同时结 合两者
(3) I 与 E的活性中心结合后, E 分子失去催化活性
(4) 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及 底物浓度
二、实验原理 竞争性抑制作用
琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延 胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验 用亚甲蓝（MB）作为受氢体，蓝色亚甲蓝 接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的 甲烯白（MBH2）。
COOH
CH2
+
CH2
COOH
MB 琥 珀 酸 脱 氢 酶
琥 珀 酸
亚 甲 蓝 （ 蓝 色 ）
COOH
CH
+
CH
COOH
MB2H
延 胡 索 酸 还 原 性 亚 甲 蓝 （ 无 色 ）
丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争 性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由不 同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体 系中使等量亚甲蓝退色的程度，从而鉴 定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用和 抑制程度。
五、实验方法
1、匀浆液的制备 新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。
按20%的浓度加入pH 7.4的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液， 放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。 2、按表操作 配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反 应体系
试剂（滴）
1.5%ห้องสมุดไป่ตู้
1%
蒸馏水 肝匀浆液 0.02%
管号
琥珀酸钠 丙二酸钠
亚甲蓝
1
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—
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将各管混匀，加少量液体石蜡封盖液面，隔绝空气。然后把 各管置于37℃水浴箱中保温10-15分钟，随时观察各管的颜 色变化并记录结果。
管号
1234
七、注意事项
1、加试剂前一定要将试管清洗干净 2、加入液体石蜡后就不要再摇动试管。避免 空气中的氧接触反应溶液，使得还原型的甲 烯白重新氧化成蓝色 3、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各 试管的褪色情况
六、实验结果
管号
1234
六、思考题
1、解释各管颜色变化的原因 2、本实验中液体石蜡起什么作用？ 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸
馏水，为什么？ 5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的
临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。
谢谢！
xiexie!
当抑制剂浓度较低时
随着抑制剂浓度的增高
当抑制剂浓度高达一定程度
三、实验器材
1、组织捣碎机 2、试管 3、试管架 4、滴管 5、恒温水浴箱
四、实验试剂: 1、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2、1.5% 琥珀酸钠溶液 3、1% 丙二酸钠溶液 4、0.02% 亚甲蓝溶液 5、液状石蜡
实验 琥珀酸脱氢酶 与丙二酸的竞争性抑制作用
一、实验目的
1、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶 2. 验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
* 竞争性抑制的特点
(1) I 与 S结构类似，竞争酶的活性中心
(2) E 既可以结合 S 也可以结合 I, 但是不能同时结 合两者
(3) I 与 E的活性中心结合后, E 分子失去催化活性
(4) 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及 底物浓度
二、实验原理 竞争性抑制作用
琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延 胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验 用亚甲蓝（MB）作为受氢体，蓝色亚甲蓝 接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的 甲烯白（MBH2）。
COOH
CH2
+
CH2
COOH
MB 琥 珀 酸 脱 氢 酶