CD34绝对计数解析

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白细胞浓度和抗体用量
通过计数板计数或使用血细胞分析 仪预先计算标本中的白细胞浓度，并 严格按照操作说明书调整标本和抗体 的最佳比例。
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白细胞浓度和抗体用量
白细胞过少的标本应减少单抗用量； 白细胞过多的标本应使用含1%白蛋白 或其他蛋白的PBS稀释到适当浓度。
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抗凝剂的选择
不同的抗凝剂抗凝、标本的稳定性不同。 EDTA抗凝的标本，常温下可保存12-24h， 肝素钠或枸橼酸钠抗凝的标本可保存48h。 如果标本需用血细胞分析仪同时进行白细 胞计数和分类，则应选择EDTA抗凝。
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抗凝剂的选择
1、外周血标本常选用EDTA盐抗凝， 2、采集物常用枸橼酸钠凝， 3、骨髓和脐血标本可选用EDTA、 肝素或ACD 抗凝。
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概论
但至今为止，尚无一个与体内重建造血 全吻合的造血干细胞体外检测法。
早期通过有核细胞计数、集落形成单位 来计算移植物中造血干/祖细胞数量，但前 者与造血干细胞数量一致性差，后者实验 变异性大、耗时长，其临床使用价值低。
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概论
20世纪80年代，发现CD34分子在造 血干/祖细胞上表达，为临床 HSCT提供 了可评价造血干/祖细胞植入最低阈值 的强有力的依据。
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集落培养法： 优点：干细胞计数结果与移植结果相吻合 缺点：很难标准化，只代表晚期干/祖细
胞，培养时间长，不能当即判断采 集物的造血干细胞数量。
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流式细胞术CD34+细胞计数法： 优点：干细胞计数结果与移植结果相吻合
快速，简单，方便。 目前已取代了集落培养法
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造血干细胞的数量是造血干细胞移植 成功的关键因素
成功的关键
造血干细胞移植
造血干细胞的数量
恶性血液病
某些实体瘤
免疫性疾病 免疫缺陷病
心肌 血管 胰岛细胞
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造血干细胞的检测方法
如何准确地计数造血干细胞的数量，什 么是有效的质量控制成了各大实验室探讨 的焦点。 常用的方法： 集落培养法 流式细胞术CD34+细胞计数法
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移液量
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CD34+细胞绝对计数方法
CD34+细胞绝对计数分为单平台方 法和双平台方法。单平台方法是首选 方法，它避免了室间变异和多台仪器 间的系统误差。
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单平台计数
• 单平台：在抗体染色的细胞中,等容量 加入确定浓度的荧光微球，直接用FCM 检测出采集物中的CD34+浓度，然后计 算出采集物中的CD34+细胞总数
流式细胞术 CD34+细胞计数
河南省人民医院血液病研究所 翟亚萍
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概论
造血干细胞移植（HSCT）是治疗血 液系统疾病、自身免疫性疾病、某些 实体瘤和基因缺陷等疾病的重要手段 之一。在造血干细胞移植过程中采集 足够数量的造血干细胞是造血干细胞 移植成功的关键。
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内部送检可用具有防漏密封的塑 料袋和带盖的塑料容器等运送标本。
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标本运送
外部运送标本，包装要求含有三 层体系：防水内容器；防水并含有吸 附材料的第二层内容器；坚固的外包 装。致病原血液标本应严格按照有关 规定运送。
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CD34+细胞绝对计数方法
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概论
近年来尽管体外研究表明，人类CD34脐血干细胞也有造血活性，但大量的临床 研究证实用富含CD34+细胞移植可安全、 持久地重建多系造血。因此，目前临床及 实验室仍然是应用CD34+细胞进行造血干 细胞移植、基因转染等。
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概论
而流式细胞仪具有CD34+细胞计数准 确、方便、快捷等优势，已广泛地应 用于造血干/祖细胞数量的检测及采集 时机的确定。
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标本标识
造血干细胞采集完成后立即抽样， 抽样前要将采集袋中的细胞与小辫中 的采集物混合5次以上，再封闭小辫， 剪取小辫中的采集物，在小辫上标记 供者编号、姓名及标本名称，送实验 室检测。
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标本标识
所有检测标本应及时贴上标签，注明 患者姓名，标本类型，采集时间，申请 单和标本粘贴在一起送检，申请单要详 细填写患者的信息、标本类型及检测项 目，进行双平台检测时还需提供白细胞 计数和分类。
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标本质量
标本处理的步骤越多，细胞丢失就越 多。对于全血标本，溶血后不洗涤，可 以使标本处理的步骤减到最少，细胞丢 失少。
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标本质量 （标本目测）
标本常见问题有两种类型： 1 、变性或损坏的标本，需立即弃之； 2、标本在处理过程中出现错误操作，则 需进一步评价。错误操作问题需要记录下 来，这对标本的处理、分析以及结果地解 释将很有帮助。
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标本质量 （溶血、凝血）
1、严重溶血的标本应该放弃检测。所 有可能破坏标本完整性的异常情况均应 密切观察，并记录下来。 2、即使很小的凝块也会引起血液中某 些成分的选择性丢失或改变，凝血的标 本应尽可能弃用。
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标本质量（温度极限）
经过长距离或长时间运送的标本， 应确认标本是否过热或过冷，即使其 他所有的鉴定标准都正常，也应该记 录下来以利于后续的处理、分析和结 果解释。
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标本质量（错误标本）
如果标本没有标签或标签与病 人信息不符，应拒绝接收标本，并 及时与相关医护人员沟通
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标本质量（标本保存时间及条件）
可接受的标本最长保存时间取决于 抗凝剂的种类、溶血剂、储存条件及 细胞浓度。实验室应该根据使用的抗 凝剂和溶血剂确定可接受的标本最长 保存时间。
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标本质量（标本保存时间及条件）
原则上标本采集后应立即检测，但 是实际操作中往往无法做到。不能立即 检测的标本应该保存于2-6℃冰箱中。标 本的处理和免疫染色应严格按照试剂说 明书进行。
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标本运送
采集标本应该在2-6℃环境下尽快 送检，注意避免标本冻结和过热。