非发酵革兰阴性菌

+ + + + +
—
蔗糖氧化
木糖氧化 赖氨酸脱羧酶
—
+
—
+ + + /— + + + + +
—
+ +/ — +/ — + +
—
+
— —
+/— — —
+
— —
+ +
—
—
—
+
—
+
— —
+ + + + + +
—
+ + +
— —
+ + + + +
—
精氨酸脱羧酶 硝酸盐还原
明胶液化 42℃ 生长
+ +/— /+ +
大肠菌样型菌落
典型菌落
粗糙型菌落
粘 液 型 菌 落
侏 儒 型 菌 落
Department of Microbiology, Hebei North University
3、生化反应：
• • • • • •
氧化酶阳性； 在O/F培养基上，氧化分解葡萄糖； 精氨酸双水解酶阳性； 利用枸橼酸盐； 液化明胶； 还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
第二十四章 非发酵革兰阴性杆菌
nonfermentative Gram-negative bacilli
教学目的 掌握非发酵菌的鉴定要点及铜绿假单 胞菌的鉴定特征，熟悉不动杆菌属、产 碱杆菌属的主要鉴定特征。
Department of Microbiology, Hebei North University
②有正常菌群的部位标本，有临床特征，检出有意义。 ③有正常菌群的部位标本，无临床特征，检出无意义
病房物体表面不得检出铜绿假单胞菌
外科、妇科空气培养不得检出铜绿假单胞菌 Department of Microbiology, Hebei North University
2.检验程序
血液
营养肉汤
脑脊液、胸腹水、脓液、痰、尿液
二、致病性：
菌 体 结 构
致 病 物 质
毒 素ຫໍສະໝຸດ Baidu
酶
Department of Microbiology, Hebei North University
2、所致疾病：
条件致病菌：免疫力低下者易感。
医院内感染：医院环境监测（水、物体表面、 空气）；药物敏感性变迁—指导临床用药。 临床表现多样：化脓性细菌 烧伤感染：绿色、恶臭脓液—渗透过多层纱布。 呼吸道感染：常见于免疫力低下者，肺感染者痰中 带血。 中耳炎：常见于慢性感染者。 眼角膜炎：穿孔后失明。 如果合并败血症者死亡率高
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
试验 葡糖氧化 醋酸钙 不动杆菌 鲍曼 不动杆菌 溶血 不动杆菌 琼氏 不动杆菌 — 约翰逊 不动杆菌 — 洛菲 不动杆菌 —
+
—
木糖氧化
乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 柠檬酸盐利用
明胶液化
生长温度37 ℃ 41 ℃
44℃
+ + + + + + + +
结 果
总 值 鉴定值 鉴定结果 鉴定者
Department of Microbiology, Hebei North University
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试验 氧化酶 荧光素 青脓素 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 铜绿假 单胞菌 荧光假 单胞菌 恶臭假 单胞菌 斯氏假 单胞菌 嗜麦芽假 单胞菌 — — — 鼻疽假 单胞菌 类鼻疽假 单胞菌
5、抵抗力强：
对干燥、紫外线有抵抗力； 在蒸馏水中长期存活 对多种抗生素耐药---先形成生物膜，产 生耐药性（通透性差） 对热抵抗力弱，56℃ 30min可被杀死； 对消毒剂敏感，1%石炭酸5min即被杀死；
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
第一节
假单胞菌属（
Pseudomonas ）
------铜绿假单胞菌P.aeruginosa
广泛存在于自然环境，是引起医院内感染的常见病原菌，属 于重点监测菌株。
为人体正常菌群的一部分，多数为条件致病菌。
非发酵菌 Nonfermenters
概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利 用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴 性杆菌。
Department of Microbiology, Hebei North University
主要菌属： • 假单胞菌属(Pseudomonas) • 产碱杆菌属(Alcaligenes) • 不动杆菌属(Acinetobacter) • 莫拉菌属(Moraxella) • 黄杆菌属(Flavobacterium) • 丛毛单胞菌属(Comamonas) • 无色杆菌属（Achromobacter） • 艾肯菌属(Elikenella) • 土壤杆菌属(Agrobacterium)
三、微生物检验
1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁 等。医院环境监控：可采集空气、水、物体表面等。 2、直接镜检：涂片、革兰染色 3、分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和MAC
4、鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别。
5、结果报告：①无正常菌群部位的标本，有临床意义。
生物学性状
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
血平板和MAC
Department of Microbiology, Hebei North University
(3)初步鉴定
染色为革兰阴性球杆状菌，成对排列，氧化酶（-）， O/F 试验为氧化型，动力（-），硝酸盐还原（-）。 符合上述结果即可判定为不动杆菌属的细菌。 与属内其他菌的鉴别：
Department of Microbiology, Hebei North University
不动杆菌属检验程序
血液、脑脊液 增菌培养
血平板和MAC
Department of Microbiology, Hebei North University
第三节 产碱杆菌属 Alcaligenes
Department of Microbiology, Hebei North University
+ + — /+
—
+ — — — + + — — — + + Department of Microbiology, Hebei North University — — + +/ — + /—
+
+
铜绿假单胞菌的鉴定依据
Department of Microbiology, Hebei North University
PA 对亚胺培南的耐药性
铜绿假单胞菌对β 内酰胺酶类抗生素的耐药性 明显增加 ,尤其是耐碳青霉烯类 PA 所致感染 已成为临床抗感染治疗的棘手问题。 耐碳青霉烯类抗生素 PA 的耐药机制较复杂： ①产生β --内酰胺酶，如：金属β -内酰胺酶 ②特异性的孔蛋白OprD2缺失 ③细菌主动外排系统。
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
院内感染的重要地位
1、在院内感染比率仅次于大肠杆菌10% 2、院内感染常见类型： 下呼吸道或肺部感染 伤口感染 尿路感染 免疫功能低下者—败血症 心脏术后
Department of Microbiology, Hebei North University


2、培养特性：营养要求不高： 专性需氧，4℃不生长，42℃可 生长； 液体——混浊，形成菌膜； 血平板——金属光泽、特殊气味、 透明溶血环； 普通平板——多种色素（绿脓素 和荧光素） MAC---半透明，48h后中心棕绿 色 Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
4、抗原构造与分型：
外膜蛋白：具有属的特异性
菌体(O)抗原
脂多糖：具有型特异性 鞭毛（H）抗原
Department of Microbiology, Hebei North University
• 见下表
二、致病性
1、腐生菌、水中100%有、自来水清洗器械。 2、产生青霉素酶。 3、其感染多见于严重基础疾病、大量使用抗生素、激素、呼 吸机使用者、透析患者： ※菌血症：静脉导管导致 ※伤口感染：蜂窝组织炎 ※胸外科术后易感
Department of Microbiology, Hebei North University
第二节不动杆菌属 Acinetobacter
• 不动杆菌(Acinetobacter)为一群氧化酶阴性，不发酵糖 类、无动力的革兰阴性菌。主要包括：
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
窄食单胞菌
Department of Microbiology, Hebei North University
四、防治原则
铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要
是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员 引起医源性感染。 结合临床感染症状，如果无感染症状则作 为正常菌群（住院患者带菌率20%）。 临床治疗必须密切遵循药敏实验结果。
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
Department of Microbiology, Hebei North University
分离培养 （血琼脂，麦康凯)
粪便
分离培养 (SS，麦康凯)
涂片染色
初步鉴定 菌落；形态；色素；氧化酶
最后鉴定 生化反应 分型
血 清 型
噬 菌 体
绿 脓 素
基 因 型
Department of Microbiology, Hebei North University
非发酵菌生化编码鉴定结果记录表
试 验 项 目 1 O/F 发 酵 管 4 氧 化 酶 2 枸 橼 酸 盐 1 麦 芽 糖 4 精 氨 酸 双 水 解 2 甘 露 醇 1 木 糖 4 硝 酸 盐 还 原 2 D N A 1 乙 酰 胺
具有天然抗药性，常呈多重耐药,且耐药率逐年增加。 常见菌有：
铜绿假单胞菌P.aeruginosa
荧光假单胞菌P.fluorecence 恶臭假单胞菌P.Putide
\
Department of Microbiology, Hebei North University
一、生物学性状：
1、形态染色：G-直或微弯细长 杆菌，有荚膜，端生单鞭毛，运 动活泼 。
— —
+ + + + + + + + + + + +
+/ — +/ —
—
—
—
—
+
— —
+ +
— — —
+ — /+
— — —
+
— — — — —
+ + + +
— —
+/ —
—
/+ +
—
— — —
—
+ +
—
+
— —
Department of Microbiology, Hebei North University