非发酵革兰阴性菌

二、致病性：
菌 体 结 构
致 病 物 质
毒 素
酶
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2、所致疾病：
条件致病菌：免疫力低下者易感。
医院内感染：医院环境监测（水、物体表面、 空气）；药物敏感性变迁—指导临床用药。 临床表现多样：化脓性细菌 烧伤感染：绿色、恶臭脓液—渗透过多层纱布。 呼吸道感染：常见于免疫力低下者，肺感染者痰中 带血。 中耳炎：常见于慢性感染者。 眼角膜炎：穿孔后失明。 如果合并败血症者死亡率高
— —
+ + + + + + + + + + + +
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结 果
总 值 鉴定值 鉴定结果 鉴定者
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铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试验 氧化酶 荧光素 青脓素 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 铜绿假 单胞菌 荧光假 单胞菌 恶臭假 单胞菌 斯氏假 单胞菌 嗜麦芽假 单胞菌 — — — 鼻疽假 单胞菌 类鼻疽假 单胞菌
三、微生物检验
1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁 等。医院环境监控：可采集空气、水、物体表面等。 2、直接镜检：涂片、革兰染色 3、分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和MAC
4、鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别。
5、结果报告：①无正常菌群部位的标本，有临床意义。
不动杆菌属检验程序
血液、脑脊液 增菌培养
血平板ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱMAC
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第三节 产碱杆菌属 Alcaligenes
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第二节不动杆菌属 Acinetobacter
• 不动杆菌(Acinetobacter)为一群氧化酶阴性，不发酵糖 类、无动力的革兰阴性菌。主要包括：
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院内感染的重要地位
1、在院内感染比率仅次于大肠杆菌10% 2、院内感染常见类型： 下呼吸道或肺部感染 伤口感染 尿路感染 免疫功能低下者—败血症 心脏术后
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2、培养特性：营养要求不高： 专性需氧，4℃不生长，42℃可 生长； 液体——混浊，形成菌膜； 血平板——金属光泽、特殊气味、 透明溶血环； 普通平板——多种色素（绿脓素 和荧光素） MAC---半透明，48h后中心棕绿 色 Department of Microbiology, Hebei North University
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第一节
假单胞菌属（
Pseudomonas ）
------铜绿假单胞菌P.aeruginosa
广泛存在于自然环境，是引起医院内感染的常见病原菌，属 于重点监测菌株。
为人体正常菌群的一部分，多数为条件致病菌。
大肠菌样型菌落
典型菌落
粗糙型菌落
粘 液 型 菌 落
侏 儒 型 菌 落
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3、生化反应：
• • • • • •
氧化酶阳性； 在O/F培养基上，氧化分解葡萄糖； 精氨酸双水解酶阳性； 利用枸橼酸盐； 液化明胶； 还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。
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窄食单胞菌
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+ + — /+
—
+ — — — + + — — — + + Department of Microbiology, Hebei North University — — + +/ — + /—
+
+
铜绿假单胞菌的鉴定依据
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具有天然抗药性，常呈多重耐药,且耐药率逐年增加。 常见菌有：
铜绿假单胞菌P.aeruginosa
荧光假单胞菌P.fluorecence 恶臭假单胞菌P.Putide
\
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一、生物学性状：
1、形态染色：G-直或微弯细长 杆菌，有荚膜，端生单鞭毛，运 动活泼 。
5、抵抗力强：
对干燥、紫外线有抵抗力； 在蒸馏水中长期存活 对多种抗生素耐药---先形成生物膜，产 生耐药性（通透性差） 对热抵抗力弱，56℃ 30min可被杀死； 对消毒剂敏感，1%石炭酸5min即被杀死；
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血平板和MAC
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(3)初步鉴定
染色为革兰阴性球杆状菌，成对排列，氧化酶（-）， O/F 试验为氧化型，动力（-），硝酸盐还原（-）。 符合上述结果即可判定为不动杆菌属的细菌。 与属内其他菌的鉴别：
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四、防治原则
铜绿假单胞菌可由各种途径传播，但主要
是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员 引起医源性感染。 结合临床感染症状，如果无感染症状则作 为正常菌群（住院患者带菌率20%）。 临床治疗必须密切遵循药敏实验结果。
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第二十四章 非发酵革兰阴性杆菌
nonfermentative Gram-negative bacilli
教学目的 掌握非发酵菌的鉴定要点及铜绿假单 胞菌的鉴定特征，熟悉不动杆菌属、产 碱杆菌属的主要鉴定特征。
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• 见下表
二、致病性
1、腐生菌、水中100%有、自来水清洗器械。 2、产生青霉素酶。 3、其感染多见于严重基础疾病、大量使用抗生素、激素、呼 吸机使用者、透析患者： ※菌血症：静脉导管导致 ※伤口感染：蜂窝组织炎 ※胸外科术后易感
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不动杆菌属主要菌种生化反应特征
试验 葡糖氧化 醋酸钙 不动杆菌 鲍曼 不动杆菌 溶血 不动杆菌 琼氏 不动杆菌 — 约翰逊 不动杆菌 — 洛菲 不动杆菌 —
+
—
木糖氧化
乳糖氧化 精氨酸双水解酶 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 柠檬酸盐利用
明胶液化
生长温度37 ℃ 41 ℃
44℃
+ + + + + + + +
分离培养 （血琼脂，麦康凯)
粪便
分离培养 (SS，麦康凯)
涂片染色
初步鉴定 菌落；形态；色素；氧化酶
最后鉴定 生化反应 分型
血 清 型
噬 菌 体
绿 脓 素
基 因 型
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非发酵菌生化编码鉴定结果记录表
试 验 项 目 1 O/F 发 酵 管 4 氧 化 酶 2 枸 橼 酸 盐 1 麦 芽 糖 4 精 氨 酸 双 水 解 2 甘 露 醇 1 木 糖 4 硝 酸 盐 还 原 2 D N A 1 乙 酰 胺
非发酵菌 Nonfermenters
概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利 用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴 性杆菌。
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主要菌属： • 假单胞菌属(Pseudomonas) • 产碱杆菌属(Alcaligenes) • 不动杆菌属(Acinetobacter) • 莫拉菌属(Moraxella) • 黄杆菌属(Flavobacterium) • 丛毛单胞菌属(Comamonas) • 无色杆菌属（Achromobacter） • 艾肯菌属(Elikenella) • 土壤杆菌属(Agrobacterium)
生物学性状
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4、抗原构造与分型：
外膜蛋白：具有属的特异性
菌体(O)抗原
脂多糖：具有型特异性 鞭毛（H）抗原
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+ + + + +
—
蔗糖氧化
木糖氧化 赖氨酸脱羧酶
—
+
—
+ + + /— + + + + +
—
+ +/ — +/ — + +
—
+
— —
+/— — —
+
— —
+ +
—
—
—
+
—
+
— —
+ + + + + +
—
+ + +
— —
+ + + + +
—
精氨酸脱羧酶 硝酸盐还原
明胶液化 42℃ 生长
+ +/— /+ +
②有正常菌群的部位标本，有临床特征，检出有意义。 ③有正常菌群的部位标本，无临床特征，检出无意义
病房物体表面不得检出铜绿假单胞菌
外科、妇科空气培养不得检出铜绿假单胞菌 Department of Microbiology, Hebei North University
2.检验程序
血液
营养肉汤
脑脊液、胸腹水、脓液、痰、尿液
PA 对亚胺培南的耐药性
铜绿假单胞菌对β 内酰胺酶类抗生素的耐药性 明显增加 ,尤其是耐碳青霉烯类 PA 所致感染 已成为临床抗感染治疗的棘手问题。 耐碳青霉烯类抗生素 PA 的耐药机制较复杂： ①产生β --内酰胺酶，如：金属β -内酰胺酶 ②特异性的孔蛋白OprD2缺失 ③细菌主动外排系统。
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