第6章 体细胞胚胎发生和人工种子

胚状体和2％藻酸钠混合，吸管吸入，滴 到2.5%氯化钙水溶液中，两种离子交换，在 胚状体外面产生褐藻酸钙的胶囊，形成人工 种皮。 胶囊大小，人工种皮厚度都可以控制。 人工胚乳：营养物质、植物激素和抗菌物质。
影响胚状体发生和发育的因素 1
1、供体植物的基因型 2、外植体的来源和培养物的生理状况 双子叶植物的下胚轴和子叶、禾谷类幼 胚的盾片和幼穗都是容易诱导胚状体的外植体
随着胚性愈伤组织继代培养次数的增加， 胚状体发生能力逐渐降低。而有些植物的愈伤 要经长期培养才产生胚状体。
影响胚状体发生和发育的因素 2
第二节 人工种子
人工种子（artificial seeds）：将植物组培产生的 胚状体包裹上用有机化合物和营养物质制作的 人工种皮。 人工种子制作要求：要求能够同步地、大规模地 产生成熟的体细胞胚状体；给胚状体包裹上高 质量的人工种皮；最后解步发育的方法： 1、用 DNA抑制剂处理细胞培养物 5-氨基尿嘧啶；低温处理抑制细胞分裂，再把温度提 高到正常的培养温度，也可达到部分同步化。 2、分离过筛 可获得大小均一的胚性细胞团，再转移到无激素培养基 上培养，可得到大小基本一致的胚状体。 3、利用气体调控胚状体的同步发生 间歇性地向悬浮培养物中通氮气或乙烯可达到胚状体发 生的同步化。 4、利用渗透压调控胚状体的同步生长 胚状体由小到大，其渗透压由高到低。可用高浓度的蔗 糖培养基来控制胚的发育，使其停留于某一阶段，然 后降低蔗糖浓度，使胚状体进入同步发育的状态。
影响胚状体发生和发育的因素 3
☆一般，赤霉素对胚状体的形成没有好处。 ☆脱落酸（ABA）对胚状体的后期发育有促进作用。 ☆腺嘌呤有利于胚状体的诱导。
5、培养基的氮源 还原性氮（铵态氮）高低直接影响胚状体的诱导效果 MS培养基有利于胚状体形成 有机氮源有利于胚状体发生。 脯氨酸对禾谷类胚状体发生有重要作用。 6、天然提取物与活性炭对胚状体形成作用 椰乳对胚胎发生最有效物质；活性炭吸附有毒有害物质。
3、培养基中的外源激素 ①诱导胚状体的全过程不需要激素。 ②诱导胚状体的全过程需要外源激素。 ③诱导胚状体的前期培养需要激素，后期不需要激素或 需要极低浓度的激素。 比较常见。 一般先在有激素的培养基上诱导外植体产生愈伤， 然后转入无激素培养基诱导胚状体。 在含2,4-D培养基上诱导的愈伤更易分化胚状体。 单子 叶植物外植体产生愈伤，其浓度1～5mg/L。双子 叶需要的浓度低，0.1~1.0mg/L。
第一节 体细胞胚胎发生
※普遍发生 胚状体的发生过程： 1、直接从器官上发生 子叶和下胚轴最容易诱导体细胞胚胎发生 2、从愈伤组织上发生 离体培养的外植体先增生愈伤组织，再从 愈伤分化胚状体这是体细胞胚胎发生最为常见的 方式。 胚性愈伤组织（embryogenic callus）：能够产生胚状 体的愈伤组织。 3、从游离的单细胞发生
胚状体的包埋与人工种子的制作
人工种皮要满足的要求：①包埋剂应当对胚状体 无害，成本低廉；②要有一定硬度，能保护胚 状体不受损害；③应当含有生长激素和防腐剂， 有利于胚状体的萌发。 好的包埋剂：既能包住体细胞胚，又能保证胚的 存活和正常萌发 褐藻酸盐、琼脂、白明胶、角叉菜胶和槐豆胶 最好是褐藻酸盐
包埋过程
第六章 体细胞胚胎发生和人工种子
体细胞胚胎发生（somatic embryogenesis）： 从体细胞产生胚状体的过程 体细胞胚（somatic embryo）或不定胚 （adventitious embryo）：体细胞离体培养诱导 产生的胚或胚状体 体细胞胚胎发生有两种用途：1、通过胚状 体再生植株，进行快繁、体细胞无性系变异和转 基因研究 2、利用体细胞胚制作杂交种的人工种 子