实验四 植物细胞骨架的观察
实验4 细胞骨架的显示及观察学习资料
实验4 细胞骨架的显示及观察姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1.掌握用考马斯亮蓝R250染色观察动物和植物细胞骨架的原理和方法。
2.了解免疫荧光法检测细胞成分的原理和方法。
二、实验原理1.细胞骨架：指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微管（microtubule，MT）、微丝（microfilament，MF）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
2.微管微管是细胞内由微管蛋白形成的直径约20~26nm的长度不一的小管。
分布在核周围，呈放射状向胞质四周扩散，主要确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导管。
微管蛋白有α和β两种。
αβ异二聚体沿纵向聚合成丝，原丝成环状排列形成微管的壁。
微管不稳定，对低温（冷冻）、高压等物理因素及秋水仙素（微管断裂剂）等化学因素敏感。
紫杉醇可以和微管蛋白多聚体结合，抑制微管解聚。
3.微丝：真核细胞内是主要由肌动蛋白（actin）组成的直径为5～7nm的骨架纤丝。
主要分布在细胞质膜的内侧，作用是确定细胞表面特征、并与细胞运动、收缩、内吞等功能有关。
脊椎动物肌动蛋白分为α、β和γ三种类型，不同种类细胞中肌动蛋白组成不同。
肌动蛋白单体为球形，依次连接成链，两串肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。
细胞松弛素B为微丝断裂剂。
4.中间纤维：直径介于微丝和微管之间（7~11nm）、由多种不同蛋白组成的细胞骨架成分。
在细胞中围绕着细胞核分布，成束成网，并扩展到细胞质膜，与质膜骨架相连结。
主要起机械支撑和加固作用。
组成中间纤维的蛋白：角蛋白，波形蛋白，结蛋白、神经纤维，神经胶质纤维和核纤层蛋白。
不同组织来源的细胞，组成其中间纤维的蛋白质种类可能不同。
5.研究细胞骨架的意义。
（1）了解细胞骨架与细胞各种功能行使之间的关系。
（2）了解理化因素是否通过影响细胞骨架对细胞功能产生影响，以便趋利避害。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
植物细胞骨架的显示及光镜观察实验原理及步骤
实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察
一、原理：
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织形成一个十分复杂的立体网络
结构。
它们对于细胞形状的保持、细胞内物质运输、细胞运动、细胞内各结构相
对位置的固定都有重要作用，故而称为细胞骨架。
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、高压、酸处理等。
当采
用适当的手段，如M-缓冲液洗涤细胞，可以提高细胞骨架的稳定性，戊二醛在
室温下固定能较好的保存细胞骨架的成分，另外，Triton X-100处理能抽取掉
一部分杂蛋白，可使骨架成分显现的更加清晰。
微丝、微管、中间纤维等都是直径很小的结构。
最大的单根微管才
25nm左右，只能在电镜下才能看见，目前研究细胞骨架的主要方法是应用高压
电镜或免疫荧光显微技术，本实验用普通光镜观察到细胞骨架，是因为骨架纤维
成束分布，结构经染色以后，有夸大作用。
由于细胞经Triton X-100提取剩下
的主要成分是细胞骨架成分，使得显现等价清晰。
二、药品及器材：
材料：洋葱鳞茎
器材：显微镜、烧杯、吸管、镊子、载片、盖片
试剂： M-缓冲液（配制方法如下）：
咪唑 2.90g
KCl 3.70g MgCl2
0.012g
EGTA 0.38g EDTA
0.042g
巯基乙醇 0.086ml 加水到 1000 ml 6mM磷酸缓冲液
KH2PO4 0.74g。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告观察细胞骨架实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而细胞骨架则是维持细胞形态和功能的重要组成部分。
通过观察细胞骨架实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进而探索细胞内部的奥秘。
实验过程中，我们选取了小鼠肺组织中的细胞进行观察。
首先，我们将细胞固定在载玻片上，并用甲醛进行固定处理。
接下来，我们使用荧光染料标记细胞骨架的主要成分，如微丝、中间丝和微管。
通过荧光显微镜观察，我们可以清晰地看到细胞骨架在细胞内的分布情况。
在实验中，我们发现细胞骨架呈现出丰富的结构。
微丝是由肌动蛋白蛋白质组成的细丝状结构，主要分布在细胞的边缘和质膜下。
中间丝是由多种细胞骨架蛋白组成的纤维状结构，主要分布在细胞核周围和细胞质中。
微管是由α-和β-微管蛋白组成的管状结构，主要分布在细胞质中，并参与细胞分裂和细胞器运输等重要生物学过程。
通过观察细胞骨架的实验，我们还发现细胞骨架在细胞内的功能十分重要。
微丝可以通过收缩和伸长调控细胞的形态变化和运动。
中间丝可以提供细胞的结构支持，维持细胞的形态稳定。
微管则可以作为细胞器运输的轨道，将细胞器从一个位置运输到另一个位置。
此外，我们还观察到细胞骨架与其他细胞结构之间的相互作用。
例如，细胞骨架与细胞质基质之间通过细胞外基质蛋白相互连接，形成细胞外基质-细胞骨架-细胞膜的结构。
这种结构可以提供细胞的支持和稳定，并参与细胞的信号传导和细胞外基质的合成。
通过观察细胞骨架的实验，我们不仅可以深入了解细胞骨架的结构和功能，还可以进一步研究细胞骨架与细胞生理过程的关系。
例如，我们可以通过干扰细胞骨架的形成和功能，来研究其对细胞分裂、细胞运动和细胞信号传导等过程的影响。
这些研究将有助于我们更好地理解细胞生物学的基本原理，为疾病的治疗和细胞工程的应用提供理论基础。
总之，通过观察细胞骨架的实验，我们可以深入了解细胞骨架的结构和功能，进一步探索细胞内部的奥秘。
细胞骨架在维持细胞形态和功能方面起着重要作用，与其他细胞结构之间存在着相互作用。
细胞骨架的观察实验报告
细胞骨架的观察实验报告细胞骨架的观察实验报告细胞是生命的基本单位，它们构成了人体和其他生物体的组织和器官。
细胞内存在着许多重要的结构，其中之一就是细胞骨架。
细胞骨架是由微观的蛋白质纤维组成的网络结构，它在细胞内起着支撑和维持细胞形态、运动和分裂等重要功能。
为了更好地理解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：荧光染色观察细胞骨架我们首先使用了一种叫做荧光染色的技术来观察细胞骨架。
在实验中，我们选取了一种叫做荧光素的染料，它能够与细胞骨架中的蛋白质结合，并发出荧光信号。
我们将这种染料加入到培养皿中的细胞培养液中，让其与细胞骨架结合。
然后，我们使用荧光显微镜观察细胞，并通过摄像机将观察到的图像记录下来。
在观察的过程中，我们发现细胞骨架呈现出一种网状结构。
这个结构覆盖了整个细胞，并且与细胞膜相连。
通过进一步的观察，我们发现细胞骨架在不同类型的细胞中有所差异。
在肌肉细胞中，细胞骨架形成了一种有序的纤维排列，这种排列有助于肌肉的收缩和运动。
而在神经细胞中，细胞骨架则呈现出一种分支状结构，这种结构有助于神经细胞的延伸和传导。
实验二：细胞骨架的动态观察为了更深入地了解细胞骨架的功能，我们进行了细胞骨架的动态观察实验。
在这个实验中，我们使用了一种叫做活细胞荧光显微镜的仪器，它能够实时观察细胞骨架的运动和变化。
通过实验，我们发现细胞骨架是一个动态的结构，它可以根据细胞的需要进行重组和重塑。
当细胞需要移动或分裂时，细胞骨架会重新组织，形成一个新的结构，以支撑和维持细胞的活动。
而当细胞需要改变形态或进行细胞内物质的运输时，细胞骨架会发生变化，以适应细胞的需求。
此外，我们还观察到细胞骨架在细胞运动中的重要作用。
通过实验，我们发现细胞骨架能够通过与细胞膜的相互作用，推动细胞的移动。
当细胞需要移动时，细胞骨架会向前伸展，并与细胞膜相连，通过收缩和伸展的运动，推动细胞的移动。
细胞骨架在细胞分裂中也起着重要的作用。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告细胞骨架观察实验报告细胞骨架是细胞内的一种重要结构，由微丝、中间丝和微管组成。
它们在维持细胞形态、细胞运动以及细胞内物质的运输等方面起着重要的作用。
为了更好地了解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：细胞骨架的染色观察我们首先使用荧光染色技术对细胞骨架进行观察。
通过使用荧光标记的抗体，我们能够将细胞骨架上的蛋白质特异性地染色，从而使其在显微镜下呈现出荧光信号。
在实验中，我们选择了小鼠肺细胞作为观察对象。
将细胞固定在载玻片上后，使用抗体与荧光标记结合，然后进行显微镜观察。
结果显示，细胞骨架呈现出网状结构，覆盖在整个细胞内。
微丝呈现为细而长的纤维，中间丝则呈现为较粗的纤维，微管则呈现为管状结构。
通过荧光染色技术，我们能够清晰地观察到细胞骨架的分布和形态。
实验二：细胞骨架的动态观察为了观察细胞骨架的动态变化，我们进行了实时显微镜观察。
在实验中，我们使用了活体细胞显微镜，能够对细胞进行连续观察并记录下来。
通过观察，我们发现细胞骨架在细胞运动过程中发挥着重要作用。
例如，在细胞的伸展和收缩过程中，微丝会发生变化，从而影响细胞的形态。
此外，细胞骨架还参与了细胞内物质的运输。
微管作为细胞内物质运输的通道，能够将物质从细胞核运输到细胞的其他部位。
实验三：细胞骨架与细胞功能的关系细胞骨架不仅仅是维持细胞形态的重要结构，还与细胞的功能密切相关。
为了探究细胞骨架与细胞功能之间的关系，我们进行了一系列的功能实验。
在实验中，我们选择了细胞的迁移能力作为研究对象。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的迁移能力明显受到抑制。
这表明细胞骨架对细胞的迁移过程起到了重要的调控作用。
此外，我们还观察到细胞骨架与细胞分裂之间的关系。
在细胞分裂过程中，细胞骨架会发生动态重组，从而参与细胞的分裂。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的分裂过程受到了明显的干扰。
综上所述，细胞骨架是细胞内的一种重要结构，对细胞的形态、运动以及功能都起着重要的作用。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告吴若自然科学大类单周四 119 XX/11/17一、实验目的:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。
二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其分界明显可见。
可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。
调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
细胞生物学实验-细胞骨架的观察
细胞生物学实验-细胞骨架的观察实验目的：观察细胞骨架的存在及结构特征。
实验原理：细胞骨架主要由微小管、微丝和中间丝三种成分组成。
微小管是细胞内最重要的结构，直径约为25nm，长度具有较大的变化范围，是由α-β二聚体组成的多肽链聚集而成。
微丝是位于微小管之外的细胞骨架成分，直径约为7nm，由肌动蛋白filament组成。
中间丝直径约为中等，是由keratin和axonin组成的。
细胞骨架的主要作用包括支持和维持细胞形态、控制细胞的生命周期、支持和维持细胞内各种分子的定位及转运、以及参与细胞的运动和分裂等。
实验材料：荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白实验方法：1. 吸附载玻片：准备好的载玻片放在乙醇中浸泡3小时，用吹气干燥后在荧光素溶液中吸附2-3小时。
2. 细胞染色：加入荧光标记的微管蛋白、肌动蛋白后，在黑暗条件下孵育1小时，然后将其冲洗干净。
3. 检测和照相：用显微镜在荧光显微镜下检测并拍照。
实验结果：1.观察荧光显微镜下的细胞：细胞显示出强光。
2.观察微管蛋白：可见微管呈无规则的网状结构，在一个点向外呈放射状散开，形成微管。
3.观察肌动蛋白：可见肌动蛋白形成菜状结构，形状呈现如波浪一样的起伏。
实验不足：此次实验只观察到细胞骨架染色后的低倍镜，需要进一步地深入探索观察细胞骨架在高倍镜下的三维结构和运动状态。
参考文献：1. 纪洪宇，卢国红. 细胞生物学[M]. 高等教育出版社, 2008.2. 段誉瑾，臧建义. 细胞生物学实验指导[M]. 科学出版社, 2009.3. Kornberg T B, Royou A. Centrosomes and microtubule organization in the Drosophila embryo[J]. Cellular and molecular life sciences, 2014, 71(23): 4301-4316.。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告实验目的：通过显微镜观察细胞骨架的结构和功能，深入了解生命科学中的重要概念。
实验材料和方法：植物细胞片、动物细胞片、荧光显微镜、细胞稀释液、甲醛、异丙醇、甲基绿、甲醛溶液、异丙醇溶液、PBS缓冲液、枪形笔、离心机、显微镜、涂片机、湿度调节器。
将前一天收集好的细胞培养物放入50mL离心管中。
将细胞培养物进行离心，速度为3000转/分钟，时间为5分钟。
将上清液弃去，留取细胞沉淀。
添加1mL PBS缓冲液并混匀。
在取出的细胞沉淀中加入3mL甲醛异丙醇溶液进行固定，固定时间为15-30分钟。
取出后在涂片机上进行铺片。
在铺好的玻璃片上滴加甲基绿溶液，静置15分钟，然后漂洗去荧光剂。
用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤1分钟以上。
将玻璃片覆盖在玻璃载玻片上，放在调节好的荧光显微镜上进行观察。
实验结果：观察到了细胞骨架的结构。
细胞骨架是细胞内的一组基质蛋白，由微丝、中间纤维和微管三个部分组成。
在荧光显微镜下，我们可以看到其中的微丝会在不同时期产生不同的表现。
当细胞钙离子的浓度较高时，会细胞骨架的所有部分都产生显著的变形。
微管是细胞内比较长的蛋白纤维，是细胞分裂过程中必不可少的分子机制之一。
中间纤维是一种静止的形态，主要作用是连接细胞内的各个细胞结构，是维持细胞形态和结构的重要因素之一。
结论：通过本次实验，我们可以清楚地了解到细胞骨架作为生命科学领域内的重要概念，在细胞分裂和细胞形态维持方面起到了非常重要的作用。
通过深入观察细胞骨架的结构和功能，我们可以更好地了解生命科学的基本理念，同时也可以推动生命科学的进一步研究和发展。
植物细胞骨架的光学显微观察
观察 • 本实验观察洋葱鳞茎细胞骨架
实验原理 观察
植物细胞骨架的
洋葱鳞茎细胞骨架
实验用品
• 器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、 片、镊子。 • 试剂： 1．M一缓冲液 2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250 5．3％戊二醛。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 • 材料：洋葱鳞茎。 盖玻
实验原理
植物细胞骨架的观察
微观 细胞骨架 微丝 中间纤维
实验原理
植物细胞骨架的观察
显示细胞骨架的非特异性方法 解抽提细胞中的蛋白质和脂质，但不破 坏细胞骨架系统。 戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色后，光学显微镜可观察 到网状结构细胞骨架，主要成分为直径40nm左右的微丝 束。
实验方法
• 取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有PH6．8 磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 • 吸去磷酸缓冲液 • 用1％Triton X-100处理20-30分钟 • 吸去Triton X-100 • 用M-缓冲液洗3次，，每次10分钟。 ． • 3％戊二醛固定0.5-1小时(对照组开始处理)。 • PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 • 用0.2％考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。 • 用蒸馏水洗1-2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。 • 如作永久制片，可使样品顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％ 乙醇，95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5-10 分钟，或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二甲苯，每次5-10分钟。 然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。
植物细胞骨架的 光学显微观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
1.了解植物细胞的组成和结构；
2.学习利用光学显微镜观察植物细胞；
3.观察和了解植物细胞骨架的结构和作用。
实验仪器：
光学显微镜、载玻片、镊子、荧光染料。
实验步骤：
1.将新鲜的姜或洋葱切成小片，用镊子将其轻轻夹在载玻片上；
2.将荧光染料滴在载玻片上，让荧光染料渗透进入细胞内；
3.用眼镜观察载玻片下的姜或洋葱片，找到一块合适的细胞及其骨架，调节显微镜的倍镜和焦距进行观察；
4.观察并记录该细胞骨架的形态、结构和分布情况，并拍摄照片。
实验结果：
经过观察和研究，我们发现植物细胞内部有一种关键的结构——细胞骨架。
植物细胞骨架主要由三个部分组成，分别是微丝、微管和中间纤维。
其中微丝是最细的部分，通过它们细胞可以保持形状和变形。
微管是较大的结构，可以支持细胞的分裂和胞吐作用。
中间纤维为肌动蛋白纤维和中间丝细胞内质网细胞丝组成的混合物，主要起到支撑和维持细胞结构稳定的作用。
实验结论：
通过本次实验，我们深入了解了植物细胞的组成和结构，并学会了如何用光学显微镜观察和研究植物细胞骨架。
植物细胞骨架的形态、结构和分布情况，对深入研究细胞生命活动的各个方面都有较大的帮助和意义。
细胞生物学实验 细胞骨架的观察【精选】
实验报告及思考题
1 画出所观察到的微丝图像。 2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？ 3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 4考马斯R250和G250的区别是什么？ 5 考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么
优缺点？ 6 简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。 7 ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？
细胞骨架的观察
实验四实验四细胞骨架的观察细胞骨架的观察细胞骨架的观察细胞骨架的观察11细胞生物学实验细胞生物学实验细细胞胞骨骨架架的的观观察察??实验目的实验目的??实验原理实验原理??实验原理实验原理??仪器材料与试剂仪器材料与试剂??实验步骤实验步骤??实验报告及思考题实验报告及思考题22实实验验目目的的33掌握用考马斯亮蓝掌握用考马斯亮蓝r250察动物和植物细胞微丝的方法
实验四 细胞骨架的观察
细胞生物学实验
细胞骨架的观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实验目 的
掌握用考马斯亮蓝R250染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。
细胞骨架的观察
实 验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外 基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament， MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
掉
一角），体外培养的贴壁生长细胞、植物、镊子
试剂：磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH 7.4），.2mol/L 磷酸
盐
缓冲液（pH 6.8），M-缓冲液，1％Triton X-100
实验四 细胞骨架观察
实验五细胞骨架观察2011.04.20一、实验目的了解用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。
二、实验原理细胞骨架（cytoskeleton）是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管（MT，20－25nm）、微丝（MF，5－7nm）和中间纤维（IF，8－11nm）。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的观察多用1% Triton X－100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂或称去污剂）处理细胞，可使细胞膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提掉，而细胞骨架系统的蛋白质不受破坏被保存，经戊二醛固定，考马斯亮兰R250（Coomassie brilliant blue R250是一种蛋白质染料）染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
微管不够稳定，其他类型纤维太细，无法分辨，只能观察到由微丝组成的微丝束（40nm）为网状结构。
M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定，在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合Ca离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：光学显微镜，镊子，剪刀，试管，载玻片，盖玻片，培养皿，烧杯。
（二）材料：新鲜洋葱鳞茎。
（三）试剂：1．2％考马斯亮蓝R250染色液：0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏水46.5mL。
2．磷酸缓冲液(pH 6.8)：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4加入100ml 蒸馏水。
3．M缓冲液(pH7.2)50mmol／L咪唑，50mmol/L)氯化钾、0.5mmol／L氯化镁、1mmol/L 乙二醇(a-氨基乙基)醚四乙酸、0.1mmol/L乙二胺四乙酸；1mmol ／L巯基乙醇，调至pH 7.2。
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎内表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
1 取材：新鲜内表皮。 2 固定：3%戊二醛固定液，15min。水洗干净，
吸干水分。 3 抽提：1%TritonX-100抽提剂，20min。水洗
干净，吸干水分。 4 染色：0.2%考马斯亮兰R250染色液，20-
60min。可以做多个制片，染色不同的时间 观察比较。 5 无需或者稍微水洗，盖片，镜检。 操作过程中注意材料需与试剂充分接触。
植物细胞骨架的显示与观察
观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
的三维的纤维状网架体系。不仅维持细胞形态，在细胞分裂、 细胞生长、细胞物质运输、细胞壁合成等许多生命活动中都 具有非常重要的作用。发现较晚，主要是因为一般电镜制样 采用低温固定，而细胞骨架会在低温下常解聚。直到20世纪 60年代后，采用戊二醛常温固定，才逐渐认识到细胞骨架的 客观存在。细胞骨架一般包括微丝、微管和中间纤维，广义 的细胞骨架还包括核骨架、核纤层和细胞外基质，形成贯穿 于细胞核、细胞质、细胞外的网络结构。
实验四 植物细胞骨架的观察
三、实验用品
（一）材料 ： 洋葱 （二）器材： 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、 PH 计 （三）试剂： 1、 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml、0.15mol/L NaCl、加双蒸馏水加至1000ml
实验四 植物细胞骨架的观察
一、实验目的
1. 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方 法。 2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨 架的制备方法与显微形态观察。
பைடு நூலகம்
二、实验原理
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主 要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和 组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架 对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转 换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去 垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的 膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却 被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微 镜下可见一种网状结构。
2、 PB
0.2mol/L Na2HPO4 0.2mol/L NaH2PO4 77ml 23ml
3、 M-缓冲液
咪唑(PH 6.7) KCl MgC12 EGTA EDTA 巯基乙醇 甘油 用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 50mmol/L 50mmol/L 0.5mmol/L 1mmol/L 0.1mmol/L 1mmol/L 4mmol/L
五、实验建议
1、 用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应 控制在30min 左右。 2、 每一次加液或染色后，应用PBS 洗2 次，并用 滤纸吸干。
植物细胞骨架的光学显微观察
三、实验用品
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、 盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1、M一缓冲液：50mmol／L眯唑，50mmol／L kCl，0.5 mmol／LMgCl2，lmmol／L EGTA(乙二醇双(a一氨基乙酸) 醚四乙酸)0．1mmoL／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或 DTT(二硫苏糖醇)。 2、6m mol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3、1％Triton X一100，用M一缓冲液配。 4、0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸 7ml，蒸馏水46.5ml。 5、3％戊二醛，用6m mol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。 6、5％、7％、95％乙醇。 7、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
四、实验步骤
(1)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有 PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 (2)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X一100处理20—30分钟。 (3)吸去Triton X—l00，用M一缓冲液洗3次，每次10分钟。 (4)3％戊二醛固定0.5—1小时，(对照组开始处理)。 (5)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 (6)用0．2％考马斯亮蓝R250染色20—30分钟。 (7)用蒸馏水洗1—2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可 镜检。 (8)如作永久制片，可使样品，顺序通过如下试剂：50％乙醇， 70％乙醇。95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)， 每次5一10分钟，或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯，每 次5—10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树 胶封固。
实验四、植物细胞骨架的光学 显微观察
讲解员：赵鹏飞
一、实验目的
• 观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解 显示植物细胞骨架的方法及其原理。
实验四：细胞骨架观察
• 2.3.7％甲醛-PEMD室温固定10min,用PBS洗去固定液 后,略干燥再放入预冷的-20℃丙酮中再固定3-5min,取出 略干燥。
• 3.用甲基罗丹明-鬼笔环肽染色:滴加20 µL染液在清洁的 载玻片上,将盖玻片上的细胞样品反扣其上,放入湿盒内, 置暗处室温下染色20-25min,然后用PBS洗涤3次,无离子 水洗涤,略干燥后用甘油-PBS封片。
实验七：细胞骨架观察
一.考马斯亮蓝R250染色法观察微丝 二.甲基罗丹明标记的鬼笔环肽染色法
观察微丝
一.考马斯亮蓝R250染色法观察微丝
实验目的
• 掌握观察动物细胞内微丝的方法:考马斯亮 蓝R250染色法
实验原理
• 真核细胞胞质中有错综复杂的纤维网,称为细胞骨架。根据 纤维的直径分为微丝,微管和中间纤维。此外,还散布着一 些比微丝还细的纤维。
• 本实验观察的是由微丝平行排列组成的纤维束,在动物细胞 里称作”应力纤维” .
• 应力纤维在体外培养的贴壁细胞中尤其发达。一般当细胞 充分铺展时,经考马斯亮蓝R250染色,可看到沿细胞长轴伸 展的粗大纤维束,此即应力纤维。
仪器、材料和试剂
• （一）仪器
光学显微镜,温箱,细胞培养设备
• （二）材料
用水冲洗,蒸馏水冲洗,空气中略干燥。 • 7.普通光学显微镜下用40×物镜或油镜观察。应
力纤维成深蓝色。
注意事项
1.洗片时要轻柔，以免把细胞从载片上洗去。 2.细胞盖片注意正反面。 3.染色后应冲洗盖片背面，避免损伤细胞。
实验报告
• 1.画出你所观察到的微丝图像。 • 2.对实验成功失败的原因进行讨论。
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五、实验建议
1、 用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应 控制在30min 左右。 2、 每一次加液或染色后，应用PBS 洗2 次，并用 滤纸吸干。
六、实验报告及作业
1、 画出实验所观察到的细胞骨架图，并注明放大 倍数。 2、为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材料？
4、1%的Triton X-100/M-缓冲液 5、 0.2%考马斯亮蓝R250 染液
甲醇 冰醋酸 蒸馏水 46.5mБайду номын сангаас 7ml 46.5ml
6、 3%戊二醛- PB 溶液（PH7.3）
四、实验操作：见下图：
取洋葱内皮1cm 左右 置于含PBS 液的载玻片上 湿润后，吸去PBS 加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min 吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min 加PBS 洗2 次，共3min 加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min 用PBS 洗2 次，共2min，吸干 镜检并绘图
三、实验用品
（一）材料 ： 洋葱 （二）器材： 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、 PH 计 （三）试剂： 1、 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml、0.15mol/L NaCl、加双蒸馏水加至1000ml
2、 PB
0.2mol/L Na2HPO4 0.2mol/L NaH2PO4 77ml 23ml
3、 M-缓冲液
咪唑(PH 6.7) KCl MgC12 EGTA EDTA 巯基乙醇 甘油 用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 50mmol/L 50mmol/L 0.5mmol/L 1mmol/L 0.1mmol/L 1mmol/L 4mmol/L
实验四 植物细胞骨架的观察
一、实验目的
1. 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方 法。 2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨 架的制备方法与显微形态观察。
二、实验原理
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主 要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和 组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架 对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转 换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去 垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的 膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却 被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微 镜下可见一种网状结构。