生物技术实验2
动物实验技术2常用实验动物兔、犬、猴
体
爱美尔球虫 Eimaria spp.
动
卡氏肺孢子虫 Pneumocystis carinii
物
全部蠕虫 All Helminths
动物种类 豚鼠 地鼠 兔
● ●● ● ●●
○
○
○○
●
● ●●
鞭毛虫 Flagellates 纤毛虫 Ciliates
●●● ●
无任何可检测到的寄生虫
注：●必须检测项目，要求阴性；○必要时检测项目，要求阴性。
家兔颈部有减压神经独立分支。颈部神经血管束中 有三根粗细不同的神经，最粗白色为迷走神经，较 细灰白色为交感神经，最细为减压神经。
正常体温39,5℃，体温变化灵敏。
5、感觉器官
耳廓大，表皮很薄，血管清晰，便于血管注射和 采血。
家兔眼球巨大，是眼科研究中最常用的动物。虹 膜内色素细胞决定眼睛的颜色，白色兔眼睛的虹 膜缺乏色素，眼内由于血管内血色透露，所以看 起来是红色。
种公兔编号等）。
注意事项 1、有疾病种兔如阴部炎、脚癣、乳房炎不得交
配。 2、交配前提前2小时喂食，不要过饱，交配时要
将笼中食具拿走，将母兔轻轻放入公兔笼中。 3、配种季节和时间:冬春两季在中午前后，夏秋
物
Disease Virus (RHDV)
●● ●
仙台病毒 Sendai Virus (SV)
小鼠肺炎病毒 Pneumonia Virus of Mice
●
(PVM)
●
呼肠孤病毒Ⅲ型 Reovirus type Ⅲ (Reo-3)
轮状病毒Rotavirus （RRV）
● ● ●
●
无任何可查到的病毒
● ●●
原
物 小肠结肠炎耶尔森菌 Yesinia enterocolitica
生物技术的实验报告总结
一、实验背景随着科技的不断发展，生物技术已成为当今世界重要的研究领域之一。
生物技术涉及基因工程、细胞工程、酶工程等多个方面，旨在利用生物体或其组成部分进行技术创新和产品开发。
本实验旨在通过学习生物技术的基本原理和实验操作，掌握相关技术，提高学生的实验技能和创新能力。
二、实验目的1. 了解生物技术的基本原理和实验操作。
2. 掌握分子克隆、蛋白质纯化等生物技术实验方法。
3. 提高学生的实验技能和创新能力。
三、实验内容1. 分子克隆实验（1）目的：学习DNA的提取、连接、转化等分子克隆技术。
（2）原理：利用DNA连接酶将目的基因与载体连接，并通过转化将重组质粒导入宿主细胞。
（3）操作步骤：①DNA提取：取适量细胞，加入裂解缓冲液，进行细胞裂解。
②DNA纯化：利用离心柱纯化DNA。
③连接：将纯化后的目的基因与载体连接。
④转化：将连接产物转化至宿主细胞。
⑤筛选：通过PCR、酶切等手段筛选阳性克隆。
2. 蛋白质纯化实验（1）目的：学习蛋白质纯化的原理和实验操作。
（2）原理：利用蛋白质的物理化学性质，如分子量、电荷、亲和力等，通过层析、离心等方法进行纯化。
（3）操作步骤：①样品制备：取适量蛋白质样品，加入适当缓冲液。
②离心：通过离心去除细胞碎片和杂质。
③层析：利用层析柱进行蛋白质分离纯化。
④收集：收集纯化后的蛋白质样品。
四、实验结果与分析1. 分子克隆实验结果：通过PCR、酶切等手段筛选出阳性克隆，证实了目的基因已成功克隆。
2. 蛋白质纯化实验结果：通过层析、离心等方法，成功分离纯化了目标蛋白质。
五、实验讨论1. 分子克隆实验中，DNA提取和纯化是关键步骤。
实验过程中，应严格控制操作条件，确保DNA质量。
2. 在蛋白质纯化实验中，层析柱的选择和操作对实验结果有很大影响。
应选择合适的层析柱，并严格按照操作规程进行实验。
3. 实验过程中，要注意实验操作的安全性，如使用生物安全柜、穿戴防护用品等。
六、实验总结通过本次生物技术实验，我们掌握了分子克隆、蛋白质纯化等基本实验操作，提高了实验技能和创新能力。
分子生物学实验技术全攻略
分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 2实验二质粒DNA的提取 3实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 5实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 7实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 8实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 9实验八 RNA提取与纯化 11实验九 RT-PCR扩增目的基因cDNA 13实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 15实验十一感受态细胞的制备及转化 16实验十二克隆的筛选和快速鉴定 18实验十三 DNA分析——Southern杂交 19一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验二培养基制备和灭菌技术一、实验目的1．学习一般培养基的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。
二、实验原理（一）培养基培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。
它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。
微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。
不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。
它适用于生产上大规模培养微生物。
2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。
一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。
3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。
大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。
4．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基，常用凝固剂有洋菜、明胶、硅胶，硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，洋菜最为合适，一般加入1.5～2.5%即可凝固成固体，如牛肉膏蛋白胨培养基等。
生物技术实验
实验一酵母细胞的固定化1.实验目的掌握酵母细胞的固定化方法。
2.原理利用固定包埋法将酵母物细胞用物理的方法包埋在载体之中。
这种方法既操作简单，又不会明显影响生物活性，是比较理想的方法，目前应用最多。
其理想的固定化载体应是应对微生物无毒性，传质性能好，性质稳定，不易被生物分解，强度高、寿命长，价格低廉等。
通常选用海藻酸钙、角叉藻聚糖、聚丙烯酰胺凝胶、光硬化性树脂、聚乙烯醇等。
3.试剂和仪器设备鲜酵母、海藻酸钠、无水氯化钙，烧杯、尼龙布、注射器带7号平针头、搅棒、恒温水浴、试管、分光光度计4.实验步骤（1）称取海藻酸钠0.75g于100mL烧杯中，加25mL蒸馏水搅匀，在沸水浴中溶胀15min，得A液。
（2）取一个50mL烧杯，加入鲜酵母5g和25 mL馏水，搅匀，得B液。
（3）待A液冷却后，将B液与A液混合，用尼龙布过滤，得C液。
（4）称取2.2g无水CaCl2，溶解于200 mL蒸馏水中。
（5）用注射器带7号平针头将C液垂直注入CaCl2溶液中制备固定化细胞，固化30min，过滤、洗涤，称重。
5.实验数据及其处理记录固定化酵母细胞的质量。
固定化酵母细胞的质量为：0.75g6.问题讨论如何验证固定化酵母细胞的催化能力？(1)观察制作的凝胶珠的颜色和形状如果制作的凝胶珠颜色过浅，呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定化的酵母细胞数目较少。
如果形成的凝胶珠不是圆形或者椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败。
（2）观察发酵的葡萄糖溶液利用固定酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生很多气泡，同时会闻到酒味。
（3）检查凝胶的黏性和弹性。
思想感悟经过这次酵母细胞的固定化实验，我不仅掌握了酵母细胞的固定化方法，同时也通过对注射器的使用，明白了固定化细胞时，针头应垂直于液面且保持较近的距离，同时注射时速度应相应提高，以保证自液面下落的固定化酵母直径较小，因为缓慢低价会导致在流出针头时，由于黏弹力会使液体聚集形成较大的液滴，而快速注射形成水流则会避免该现象。
生物技能实验习题与答案
生物技能实验习题与答案生物技能实验习题与答案生物技能实验是生物学学科中非常重要的一部分，通过实验可以帮助我们更好地理解和掌握生物学的基本概念和原理。
下面，我将为大家提供一些生物技能实验习题和答案，希望能够帮助大家更好地学习和应用生物学知识。
1. 实验题：观察和描述细胞的结构答案：细胞是生物体的基本单位，它具有复杂的结构。
为了观察和描述细胞的结构，我们可以采用显微镜技术。
首先，将待观察的细胞样本放置在显微镜玻片上，并加入适量的染色剂。
然后，将玻片放置在显微镜下，通过调节镜头和光源，可以清晰地观察到细胞的结构。
细胞通常由细胞膜、细胞质和细胞核组成，其中细胞核内含有遗传物质DNA。
通过观察细胞的形状、大小和内部结构，我们可以更好地理解细胞的功能和生物学过程。
2. 实验题：观察和测量植物光合作用的速率答案：植物的光合作用是将光能转化为化学能的重要过程。
为了观察和测量植物的光合作用速率，我们可以进行以下实验。
首先，准备一些水生植物，如水葱或水藻，并将其放置在含有适量碳酸氢钠的水中。
然后，将植物置于光照条件下，并使用光密度计测量水中二氧化碳浓度的变化。
随着植物进行光合作用，二氧化碳浓度会逐渐降低。
通过记录一定时间内二氧化碳浓度的变化，我们可以计算出植物光合作用的速率。
3. 实验题：观察和研究果蝇的遗传特征答案：果蝇是遗传学研究中常用的模式生物。
为了观察和研究果蝇的遗传特征，我们可以进行交配实验。
首先，选择具有不同遗传特征的果蝇进行交配，如红眼果蝇和白眼果蝇。
然后，观察和记录后代果蝇的遗传特征。
根据孟德尔遗传学原理，我们可以预测后代果蝇的遗传比例，并验证遗传规律的正确性。
通过这种实验方法，我们可以更好地理解遗传学的基本原理和遗传特征的传递方式。
4. 实验题：观察和研究细菌的生长规律答案：细菌是微生物中最常见的一类生物，它们具有快速繁殖和适应性强的特点。
为了观察和研究细菌的生长规律，我们可以进行培养实验。
首先，准备一定量的细菌培养液，并将其放置在适宜的温度和营养条件下。
第05章 微生物的纯培养技术(2)——划线分离
五、实验报告
• 结果报告：分别记录平板划线、斜面接种 的结果，并自我评价。
• 思考题 1. 为得到理想的实验结果，在你所采用的 划线分离操作过程中应注意哪些问题？ 2. 培养皿为什么要倒置培养？
第05次实验
微生物的纯培养技术(二)
生物工程系 龙中儿
二、 实验原理 微生物在自然界中呈混杂状态存在，当希望 获得某一种微生物时，就必须从混杂的群体中把 它分离出来。微生物的分离纯化方法很多，但原 理却相似，即将待分离样品进行一定的稀释，并 使微生物细胞（孢子）尽量以分散状态存在，然 后使其生长成单菌落。
一、实验目的
• 学习划线分离纯化微生物的基本操作技术 • 学习斜面接种操作技术
三、实验方法
培养基制备与灭菌 单菌落 倒平板（15ml/板）
划线 不 纯 培养 挑单菌落镜检 纯
置备容 • 每位同学倒两个平板 • 每位同学划两块平板 • 在上次培养好的平板上挑单菌落并转接到斜 面培养基上。（每位同学两支斜面）
海洋生物技术试验
细胞一次（ 1000×g,5min ）。在相同的 MBM 液中 加入1% 纤维素酶和 0.5% 的离析酶。将洗好沉淀 的细胞在 10ml上述加酶的培养液中悬浮。 （3）在振荡器上缓慢振荡（ 20-30次/min ）细胞悬 浮液，30℃保温，1000-2000lx 光照。
海洋微藻因其细胞壁组成的明显差异，原生 质体的分离方法很多，例如蓝绿藻的细胞壁含有 粘肽，因而可以用溶菌酶处理获得蓝绿藻细胞的 原生质体。绿藻的细胞壁主要成分是纤维素，所 以可以用纤维素酶处理而获得原生质体或原生质 球。硅藻和甲藻因其特殊的细胞壁组成和结构， 可用去污剂或富含有机物但缺乏二价阳离子的溶 液处理而达到分离原生质体的目的。红藻和褐藻 则可用多糖酶消化细胞壁成分来制备原生质体。 尽管有这样多的方法，但目前普遍采用的方法是 酶解的方法。
实验步骤
1、分离制备的C.ellipsoidea C-87原生质体（Ficoll中），用两 倍体积的液体再生培养基稀释；
2、离心沉淀原生质体（1000×g,5min ），弃去上清液，用液 体再生培养基再洗涤一次；
3、用相同的培养基将原生质体重新悬浮。用血球计数板计数， 使细胞密度达到5×107个/ml ；
仪器与试剂
1、仪器
采用的仪器与原生质体培养相同。
2、藻株
C.ellipsoidea C-87 细胞（5×107个/ml细胞）经 紫外线或 X射线处理（ 99% 死亡）后，接种于含 葡萄糖的 MBM 平板培养基上，置暗处培养 4-7d 后， 分离色素变异株（黄色 Yel和白色Whi ）。检测稳 定性以及培养条件对色素变化的影响，分为不同 的类型。
生物显微技术2
几种常用固定剂的特殊洗涤法
1．重铬酸钾
用重铬酸钾固定的组织可用流水冲洗12~24h，或用亚 硫酸或1%含氯水溶液进行洗涤。
2．锇酸
流水洗涤12~24h，组织必须洗干净，否则影响染色。
3．苦味酸 用50%或70%乙醇浸洗。一般不水洗。苦味酸所留的 黄色，在70%乙醇中可自行脱去。即使不能完全脱去，在 以后制片脱水中经各级乙醇也会渐渐消失，即使组织中留 有少许黄色也无妨碍，并不影响染色。洗涤时也可在乙醇 中滴入少量碳酸锂饱和水溶液，直至乙醇不变颜色为止。
染色缸 （立式、卧式）
脱水机
常规组织学制片步骤
取材
固定
洗涤
脱水
透明
贴片
切片
修块
包埋
浸蜡
烤片
染色
封片
观察结果
透明的目的
两次透明： 脱水以后组织块的透明； 染色以后切片的透明。
主要目的在于使组织中的脱水剂（酒精或丙酮）被透明剂 所替代，使石蜡能顺利地进入组织，或增强组织的折光系 数有利于光线的透过，并能与封藏剂混合进行封藏，便于 显微镜的观察。
甲苯 性质同二甲苯，但透明较慢，时间比二甲苯长一 倍多，也易变脆。有时用以代替二甲苯。 苯 苯的用途与二甲苯相似，对组织的收缩较小，是较 好的透明剂。但也易挥发，易燃。吸入苯能引起中毒， 所以较少使用。 氯仿 即三氯甲烷。其透明能力比二甲苯及苯差，透明 时间有时长达24h。不易使组织变脆。能溶于醇、醚、 苯等，微溶于水、极易挥发。多用于大块组织的透明。 香柏油 是一种柏树树脂，为无色或绿黄色的芳香挥发 油，极毒，用时须小心。能溶于醇，故为切片经酒精脱 水后极好的透明剂。对组织的收缩和硬化程度比上述任 何透明剂都小。但透明时间长达24h，即使透明很小的 组织块也需12h以上，且不易为石蜡所代替。经香柏油 透明的组织，尚需再用二甲苯洗几次换去香柏油，以便 加速石蜡的浸透。因此不适于透明组织。
药品生物技术《2半保留复制》
b单向复制〔unidirectional〕,向起点的一侧进行复制，形 成一个复制叉或两个生长点。
第三页，四页。
内容总结
1958年用Meselson –Stahl用实验的方法首次证明了DNA的半保存复制方式。1958年用Meselson –Stahl用实验的方法 首次证明了DNA的半保存复制方式。别离DNA，密度离心法测定DNA的密度。图9-4 Meselson –Stahl实验结果及解释。半 保存复制的生物学意义：由于在新合成的双链DNA中总有一条链来自于亲代，有利于维持遗传物质的相对稳定。〔1〕单 向、双向复制
• 1958年用Meselson –Stahl用实验的方法首次证明了DNA的半 保存复制方式。
15NH4CI培养多代
14NH4CI培养
别离DNA，密度离心法测定DNA的密度。
图9-3 密度梯度离心法示意图。
第一页，共四页。
15N
14N
14N-15N
14N 14N-15N
14N 14N-15N
图9-4 Meselson –Stahl实验结果及解释
第二页，共四页。
半保存复制的生物学意义：由于在新合成的双链DNA中总有一 条链来自于亲代，有利于维持遗传物质的相对稳定。
〔二〕DNA复制的起点和方式 DNA分子中能够进行独立复制的单位称为复制子〔reinus〕 ,DNA复制的控制是在起始阶段进行的，一旦复制开始，它将一直 进行到底。 〔1〕单向、双向复制 a双向复制〔bidirectional〕，向起点的两侧进行复制，形成两个 复制叉或两个生长点。
生物实验2：双毁髓技术剑突取材、染色、观察及蟾蜍泌尿和生殖系统的观察
双毁髓技术，剑突、取材、染色、观察及蟾蜍泌尿和生殖系统的观察朱琪璋 121140083一实验目的1理解双毁髓技术的意义2观察软骨组织的形态3观察蟾蜍的泌尿及生殖系统二实验原理1正确拿住蟾蜍，正确使用探针2双毁髓法麻醉蟾蜍：用金属毁髓针破坏蟾蜍的脑和脊髓，使蟾蜍处于一种麻醉状态，四肢瘫软，从而对蟾蜍进行解剖，取出泌尿及生殖系统，观察各个组成部分。
3剪刀（及镊子）的正确使用方法：右手握剪刀，拇指与无名指握住剪刀，食指抵住剪刀中部。
4用亚甲基蓝将剑突软骨细胞染色，便于观察。
5软骨陷窝内的软骨细胞是同源细胞。
6细胞的有丝分裂、减数分裂。
三实验动物与器材1实验动物:活的蟾蜍一只／每人2实验试剂:亚甲基蓝试剂3实验器械:显微镜、解剖盘、毁髓针、剪刀、镊子、吸水纸、大头针。
四方法与步骤1双毁髓麻醉蟾蜍：左手食指与中指、无名指与小指分别夹着前肢、后肢，握住蛙体，拇指按住吻端使头部上下活动，两耳后腺间出现一道褶线，此线中点或用金属毁髓针沿头背中线向后移动触到一凹陷处，即枕骨大孔。
拇指下压使头前俯与脊柱相连处凸起，同时将毁髓针由凹陷处垂直刺入1mm，再将针从枕骨大孔向前平行刺入颅腔并在颅腔内搅动，彻底捣毁脑组织使之成为“脊蛙”。
2将蛙置于解剖盘上，腹部朝上，四肢伸展后用大头针固定。
用镊子提起腹面皮肤，用剪刀剪开一小口，并从小口处向前将腹面皮肤剪开，至下颌前端。
向后剪至两后肢基部之间，泄殖孔稍前方。
然后将皮肤向两侧拉开，可见皮肤与皮下肌肉连接松散，两者之间较大间隙为皮下淋巴腔，翻看皮肤内测可见分布有丰富的血管。
3用镊子提起腹部肌肉，用剪刀沿腹中线略偏左侧，剪开腹壁至肩带之剑突，然后向左，向右剪开，用剪刀剪取薄的剑突软骨组织，制成装片(用亚甲基蓝试剂染色效果更好），在显微镜下观察软骨组织细胞的形态并绘成图。
4小心剥离腹壁上的腹大静脉，再将腹壁向两侧分开，暴露心脏和其他器官，小心分开其他器官和系统，找到蟾蜍的泌尿和生殖系统，并用剪刀，镊子等将其完整的分离出来，放到解剖盘上，观察系统中各个器官的形态及位置，作好记录，并绘制好模拟图。
生物技术遗传学实验指导
目录验一人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验二小鼠骨髓细胞染色体标本的制备实验三人类染色体G显带技术实验四人类染色体C显带技术实验五核仁形成区银染技术实验六人类染色体G显带核型分析实验七X染色质标本的制备实验八姐妹染色单体交换实验九微核检测技术实验十ABO血型的测定及其基因频率的计算实验十一苯硫脲尝味试验及其基因频率的计算实验十二人类皮纹分析实验十三遗传咨询实验十四人类基因组DNA的提取实验十五聚合酶链式反应（PCR）实验十六DNA的琼脂糖凝胶电泳实验十七PCR-RFLP技术《遗传学》实验须知一、医学遗传学实验目的和要求医学遗传学实验课是医学遗传学课程的重要内容。
实验课有助于加深和巩固基础理论知识，并进一步了解和掌握本学科的基本实验内容和操作技能。
在培养学生分析问题、综合问题和解决问题能力方面具有重要作用。
为此，要求学生做到以下几点：1、实验课前做好预习，明确实验目的、实验原理。
2、复习有关理论内容。
3、熟悉实验的主要步骤。
4、初步估计和判定实验的可能结果。
二、实验操作过程中的注意事项1、认真操作，仔细观察和综合分析实验所出现的现象与结果并及时记录。
2、如果实验结果与理论结果不一致，须及时进行科学分析，判断结果的可靠性，寻找出现误差的原因。
3、各种实验试剂用后放回原处，瓶盖封严，轻拿轻放。
4、使用微量加样器时，一定调整好取用量，按使用要求操作。
5、实验室应保持肃静，注意清洁卫生，实验中用过的废弃物品要及时清理，避免堵塞下水管道。
三、实验后的注意事项1、实验后，整理清洁所用仪器、设备，注意放回原位，以备下次使用。
2、如有仪器损坏，要及时填写破损报告，并报告老师。
3、离开实验室前，检查并关闭门、窗、水、电。
四、实验室的意外处理实验室如遇着火、烫伤等意外事件发生，必须镇静做紧急处理，并立即报告老师。
1、着火：如遇酒精灯推倒或其它原因着火，首先将一切易燃品移至远处，然后用水扑灭或者切断电源。
2、火伤：皮肤被火灼伤，用烫伤软膏涂抹，如伤势较重，立即送医院治疗。
生物化学实验技术(2)常用分离技术
二．硫酸铵的使用
硫酸铵中常含有少量的重金属离子， 硫酸铵中常含有少量的重金属离子，对蛋白质巯基 有敏感作用，使用前必须用H 处理： 有敏感作用，使用前必须用H2S处理：将硫酸铵配成浓 溶液，通入H 饱和，放置过夜， 溶液，通入H2S饱和，放置过夜，用滤纸除去重金属离 浓缩结晶，100℃烘干后使用 烘干后使用。 子，浓缩结晶，100℃烘干后使用。 另外，高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性（PH=5.0左 另外，高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性（PH=5.0左 ），使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。 使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH 右），使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。
第三节 其他沉淀法一．Fra bibliotek电点沉淀法 二．生成盐复合物沉淀法 三． 选择性变性沉淀 四．非离子多聚物沉淀法
一．等电点沉淀法
两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低， 两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低，不同的 两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。 两性电解质具有不同的等电点，以此为基础可进行分离。 利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性， 利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性， 不然盲目使用十分危险。 不少蛋白质与金属离子结合后， 不然盲目使用十分危险。 不少蛋白质与金属离子结合后，等 电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整PH 电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整PH 值。 等电点法常与盐析法、 等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联 合使用，以提高其沉淀能力。 合使用，以提高其沉淀能力。
使用硫酸铵时： 使用硫酸铵时：
1）必须注意饱和度表中规定的温度，一般有0℃或室温两种， ）必须注意饱和度表中规定的温度，一般有 ℃或室温两种， 加入固体盐后体积的变化已考虑在表中； 加入固体盐后体积的变化已考虑在表中； 2）分段盐析中，应考虑每次分段后蛋白质浓度的变化。一种 ）分段盐析中，应考虑每次分段后蛋白质浓度的变化。 蛋白质如经二次透析，一般来说，第一次盐析分离范围（ 蛋白质如经二次透析，一般来说，第一次盐析分离范围（饱 和度范围）比较宽，第二次分离范围较窄。 和度范围）比较宽，第二次分离范围较窄。 3）盐析后一般放置半小时至一小时，待沉淀完全后才过滤或 ）盐析后一般放置半小时至一小时， 离心。过滤多用于高浓度硫酸铵溶液，因为此种情况下， 离心。过滤多用于高浓度硫酸铵溶液，因为此种情况下，硫 酸铵密度较大， 酸铵密度较大，若用离心法需要较高离心速度和长时间的离 心操作，耗时耗能。离心多用于低浓度硫酸铵溶液。 心操作，耗时耗能。离心多用于低浓度硫酸铵溶液。
初中生物第二课堂实验教案
初中生物第二课堂实验教案
实验目的：通过观察植物细胞的结构，了解植物细胞的特点和功能。
实验器材：显微镜、镜片、盐水溶液、红洋葱片、刀片、玻璃片、尺子、刷子
实验步骤：
1. 将红洋葱切成薄片，并将其中的一块洋葱片放置在盐水溶液中浸泡5分钟，使细胞膨胀。
2. 取出浸泡过的洋葱片，用刷子轻轻擦去葱皮上的水分。
3. 将浸泡过的洋葱片取出放在玻璃片上，加入一滴盐水后，用刀片轻轻切碎。
4. 在玻璃片上加入一滴盐水，覆盖一块镜片，用尺子顺着镜片边缘将红洋葱片碎屑压平。
5. 将制作好的玻璃片放置在显微镜上，调整镜头到合适的放大倍数，观察红洋葱细胞的结构。
实验结果：
通过显微镜观察，可以看到红洋葱片中的植物细胞具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核
等结构。
植物细胞的形态各异，其中细胞核为圆形或椭圆形，细胞质呈颗粒状，而细胞壁
呈现清晰的网状结构。
实验总结：
通过本实验，我们了解了植物细胞的基本结构和功能，加深了对植物细胞的认识。
同时，
也培养了学生的观察、实验操作和分析能力。
希望同学们能够认真学习实验内容，并探索
更多关于生物的奥秘。
高考生物考前梳理选择性必修3生物技术与工程实验2制作果酒和果醋(含答案)
高考生物考前梳理：2.制作果酒和果醋酵母菌和醋酸菌项目酵母菌醋酸菌生物学分类单细胞，真核生物单细胞，原核生物代谢方式异养兼性厌氧型异养需氧型生长繁殖的最适温度范围18～30℃30～35℃主要繁殖方式出芽生殖二分裂生殖生产、生活应用酿酒、发面等制醋原理和条件制作果酒和果醋的过程果酒发酵与果醋发酵的装置结果分析与评价（1）在制作果酒和果醋的过程中，发酵液分别有哪些变化？其中最明显的变化发生在发酵后多少天？引起变化的原因是什么？提示：在葡萄酒的制作过程中，发酵液会产生气泡，这是因为酵母菌发酵产生CO2；开始发酵后，CO2产生越来越多，会使发酵液出现“沸腾”现象，在发酵的10天后，这种现象最明显。
如果使用紫色葡萄制作葡萄酒，随着发酵时间的延长，由果皮进入发酵液的花青素会越来越多，因而发酵液的颜色会逐渐加深变成深红色。
果醋发酵过程中一般不会出现气泡，发酵完成时，在发酵液的液面上会出现一层菌膜，这是醋酸菌膜。
（2）在制作果酒的过程中，除了酵母菌，是否还有其他微生物生长？它们会对果酒发酵产生影响吗？如果有，如何避免这种影响？提示：果酒中除了酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等微生物。
乳酸菌可能分解果酒中的糖、甘油、酒石酸等，从而使果酒变质。
可以通过调节发酵的温度、果酒的pH等来控制乳酸菌的含量。
果汁中的糖也是醋酸菌重要的碳源和能源。
在有氧的情况下，醋酸菌能把糖分解成醋酸；在缺少糖源的情况下，乙醇便是醋酸菌的碳源和能源，它将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
由于醋酸菌在有氧的条件下才能进行旺盛的代谢活动，因此在制作果酒的过程中尽量减少O2含量，可以抑制醋酸菌的生长繁殖。
此外，通过调节发酵的温度、果酒的pH等同样可以控制醋酸菌的含量。
（3）在制作果醋的过程中，酵母菌是否还会继续发酵？醋酸菌从何而来？采用什么措施可以加快果醋的制作？提示：随着醋酸发酵的进行，发酵液的pH、发酵温度等均不利于酵母菌的生长繁殖，因此酵母菌活性很低。
生物安全二级实验室进入注意事项-空间生物实验模拟技术重点b...b
生物安全二级(BSL—2)BSL—2与BSL—1类似，适合于对人和环境有中度潜在危险的病源，与BSL—1的区别在于：(1)实验人员均接受过病源处理方面的特殊培训，并由有资格的科学工作者指导；(2)进行实验时，限制进入实验室；(3)对于污染的锐器，要特别注意；(4)某些可能产生传染性气溶胶或飞溅物的过程。
应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。
以下的标准及特殊操作、安全设备及设施和BSL—2病源有关：一、标准微生物操作：1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、进行活体处理后，实验人员要洗手；离开实验空前脱手套。
3、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。
食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生溅出和气溶胶。
7、实验完毕、下班前、活体溅出或溢出时，都应使用对病源有效的消毒剂进行台面消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。
转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。
离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装。
二、特殊操作：1、在开展有关传染病源工作时，管理人员应禁止或限制人员进入实验室。
一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。
管理人员对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。
2、管理人员应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)的人，才能进入实验室。
3、存在外源性病源时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：有关病源、生物安全级别、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所要求的程序。
4、实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生物技术实验1、层析：一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速率不同而进行分离和分析的方法。
2、双向电泳：将样品进行一次电泳后，再沿它的直角方向进行一次电泳，此方式称为双向电泳。
一次电泳是定点聚焦电泳，二次电泳是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳或SDS-聚丙烯酰胺梯度胶电泳。
3、亲和层析：利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术（固定相只能与一种待分离组专一结合，而和无亲和力的其他组分分离4、吸附层析：是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离的目的的一种层析技术5、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，一句流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法6、凝胶层析：又称为凝胶排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析。
指混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各种物质因分子大小不同而被分离的技术。
它是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。
7、分子筛原理：依据分子大小这一物理性质分离纯化的，它的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴，当含有不同分子大小的组分样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。
比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部，完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，它们经历的流程短，流动速度快，故先流出；而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部，经历的流程长，流动速度慢，故后流出。
分子大小介于二者之间的分子在流动中部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，故它们流出的时间介于二者之间。
分子越大的组分越先流出，分子越小的组分越后流出，这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到了分离的目的。
应用：（1）生物大分子的纯化。
（2）分子量测定。
（3）脱盐及去除小分子杂质。
（4）去热源物质。
（5）溶液的浓缩。
8、凝胶的种类：（1）葡聚糖凝胶：指由天然高分子葡聚糖与其他交联剂交联而成的凝胶，主要有两类：Sephadex（由葡聚糖与甲叉双丙烯酰胺交联而成）和Sephacryl。
（2）聚丙烯酰胺凝胶：是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺交联而成。
（3）琼脂糖凝胶：多糖链以氢键方式相互连接形成双链单环的琼脂糖，经凝聚即成为束状的琼脂糖凝胶。
（4）聚丙烯酰胺和琼脂糖交联凝胶：由交联的聚丙烯酰胺和嵌入凝胶内部的琼脂糖组成。
（5）多孔硅胶、多孔玻璃珠：将硅胶或玻璃制成具有一定直径的网孔状结构的球形颗粒。
9、层析法的分类：（1）根据固定相基质的形式分类：纸层析、薄层层析、柱层析纸层析：指以滤纸作为基质的层析，适用于小分子物质快速检测分析和少量分离制备薄层层析：将基质在玻璃或塑料等光滑表面铺成一薄层，在薄层上层析。
柱层析：将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行层析——适用于样品分析、分离凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、高效液相色谱——采用柱层析形式（2）根据流动相的形成分类：液相层析和气相层析气相层析：指流动相为气体的层析——用于氨基酸、核酸、糖类、脂肪酸等小分子分析鉴定。
液相层析：指流动相为液体的层析——适用于生物样品的分析、分离。
（3）根据分离的原理不同分类：吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析（分离生物大分子）吸附层析：是以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离的目的的一种层析技术分配层析：根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术——（液—液层析，分配层析法）凝胶层析：又称为凝胶排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析。
指混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，混合物中各种物质因分子大小不同而被分离的技术。
它是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小顺序分离样品中各个组分的液相色谱方法。
离子交换层析：以离子交换剂为固定相，一句流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法亲和层析：利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术（固定相只能与一种待分离组专一结合，而和无亲和力的其他组分分离10、分离胶的形成：凝胶储液（6.66）、水（8.54）、分离胶缓冲液（2.50）、10%SDS（0.30）、10%过硫酸铵（0.30）、TEMED→四甲基乙二胺（加塑剂）11、不连续电泳系统的四个不连续性：（1）凝胶浓度的不连续性。
（2）缓冲液离子成分的不连续性。
（3）缓冲液PH 的不连续性。
（4）电位梯度的不连续性。
存在三种物理效应：电荷效应、凝胶的分子筛效应、样品的浓缩效应。
12、(NH4)2SO4硫酸铵——盐析中常用的盐（粗提）13、琼脂糖电泳先配分离胶后配浓缩胶14、蛋白质分离提纯的方法——亲和层析法（纯化）15、亲和层析原理：利用某些蛋白质与层析柱上配体发生特异性的非共价结合，将此蛋白与其他杂蛋白从层析柱上分别洗脱下来，这样就可达到分离提纯的目的。
仪器（功能）：1、稳/直流稳压电源/电泳仪（提供稳压电源）。
2、微量注射器/移液器/Tip类（加样）。
3、254nm波长紫外分析仪（观察电泳谱带）。
4、搪瓷盘（装凝胶）。
5、具有刻度试管20ml（反应管）。
6、离心机（制备样品、离心）。
7、分光光度计（比色）。
8、组织捣碎机（细胞破碎）。
9、层析柱（装层析介质）。
10、层析装置（层析）。
11、Sephadex凝胶层析柱（装层析介质）。
12、可转离心机（精提样品、样品制备）。
13、层析仪两套（纯化装置）。
14、纱布（过滤）。
15、大培养皿（染色）。
16、烧杯和移液管（制胶）。
17、恒温培养箱/摇床（细菌培养）。
18、高压灭菌锅（灭菌）。
19、DNA扩增仪（基因扩增）。
20、紫外检测仪（观察电泳谱带）。
21、Eppendorf管（反应管）1、层析法基本原理：（1）利用混合物中各组分物理、化学性质的差异（2）与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同（3）各组分在两相（固定相、流动相）中的分配程度（含量）不同（4）使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的2、生物制备：破碎细胞、粗提（有机溶剂沉淀法、盐析法、等电点沉淀法）、纯化、柱层析、电泳（最纯）3、电泳：水平板：连续凝胶电泳。
垂直板：不连续凝胶电泳4、SDS：一种蛋白质变性剂，与Pro形成带负电的SDS—Pro复合物，消除不同Pro之间电荷差异，消除Pro带静电荷对迁移率的影响，SDS—Pro复合物为棒状结构，消除Pro天然形状不同对迁移率的影响，使迁移率仅决定于分子量的大小。
5、DNA琼脂糖凝胶电泳原理：核酸具有较强的酸性和较低的等电点，DNA处在高于其等电点的PH溶液中带负电，在外加电场向正移动。
DNA分子受到分子筛作用，受到凝胶介质网孔状结构的阻碍作用，产生不同迁移位置，得到分离，在已知分子量的DNA存在的条件下，可推算出未知DNA的分子量。
6、Tris—HCl缓冲液：（1）PCR（2）聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶测蛋白质分子量（3）SDS（4)凝胶层析法，分离提取1,5—二磷核酮糖羧化酶7、硫酸铵（2个）（1）Pro分离提纯——亲和层析（2）凝胶层析法提取1,5—二磷酸核酮糖羧化酶8、PCR基因扩增（DNA扩增仪、电泳仪、水平电泳槽、紫外检测仪、移液器、Tip头—加液、Eppendorf管——反应管）热变性——使双链DNA变成单链。
引物——根据目的基因DNA片段合成dNTP——四种Taq聚合酶——只能催化延伸，不能起始合成。
模板DNA——模板9、为什么用引物？因为聚合酶不能从头复制，根据已知基因DNA设计10、变性：94℃、复性:：57℃、延伸：72℃11、PCR缓冲液：Tris——HCl缓冲液、MgCl2——提供Mg2+、无菌液体石蜡——封液面、琼脂糖——凝胶电泳中使用、EB——荧光染色剂12、聚丙烯实验中：TEMED、AP——聚合凝胶；抗坏血酸、联苯胺溶液——染色聚丙烯酰胺凝胶的概念：是由单体丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N’-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂和加速剂作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。
13、生物大分子的分离纯化方法和技术：（1）沉淀法：1）中性盐沉淀2）有机溶剂沉淀3）选择性沉淀4）等电点沉淀5）有机聚合物沉淀。
（2）离心。
（3）吸附层析。
（4）凝胶过滤层析。
（5）亲和层析。
（6）离子交换层析。
（7）快速制备型液相色谱。
（8）等电聚焦制备电泳等。
14、溴乙啶——DNA的诱变剂。
EDTA-Na——防止DNA，RNA被酶水解10%SDS——阴离子表面活性剂。
10%过硫酸铵——催化剂TEMED——加速剂15、均一胶和梯度胶：均一胶：在整块凝胶或分离胶中浓度和孔径分布是均一的，低分辨率，适合简单组分分离。
梯度胶：凝胶浓度沿蛋白质的迁移方向逐渐增加，电泳时蛋白质分子在凝胶中从大孔径迁移到小孔径，分辨率提高，适合复杂样品的分离。
16、吸附层析原理：当混合物随流动相流经由吸附剂组成的固定相时，由于吸附剂对不同的物质具有不同的吸附力，从而使不同组分的移动速度也不同，最终达到分离的目的。
离子交换层析原理：离子交换层析的固定相是带有大量电荷的离子交换剂，流动相是具有一定PH值和一定离子强度的电解质溶液，当混合物溶液中带有与离子交换剂相反电荷的溶质流经离子交换时，后者即对不同溶质进行选择性吸附，随后，用带有与溶质相同电荷的洗脱液进行洗脱，被吸附的溶质可被置换而洗脱下来，从而达到分离混合物中各种带电荷溶质的目的。
亲和层析原理：将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基，与不溶性载体结合使其固定化，然后装入层析柱，以含有欲分离物质的混合液为流动相，在有利于固定相配基和欲分离物质之间形成络合物的条件下进入亲和层析柱，这时，混合物中只有能与配基形成络合物的物质被层析柱吸附，不能形成络合物的杂质从柱中直接流出，然后改变流过层析柱的溶液，促使配基与亲和物质解离，从而释放出亲和物质。
一、从动物肝脏中提取DNA稀释NaCl中，脱氧核糖Pr的溶解度小，核糖的Pr的溶解度大。
1、0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液。
洗去动物肝脏的血液，洗涤作用，将脱氧核糖核蛋白从样品中分别抽提出来，防止DNA/RNA酶解，抑制DNase和RNase。
2、25%SDS溶液。
分离DNA/RNA与蛋白质3、氯仿-异戊醇混合液。
除去蛋白质沉淀，使DNA溶于溶液中。
4、5molNaCl 从样品中抽提脱氧核糖核蛋白5、乙醇。
使DNA析出。
仪器：匀浆器——粉碎样品恒温水浴箱——控制水浴温度离心机——分离二、DNA的琼脂糖凝胶电泳1、PH8.3Tris-硼酸-EDTA缓冲液：使DNA带负点，接负极向正极移动，溶琼脂糖。