荧光法研究曲克芦丁和
曲克芦丁的药理作用和常见临床应用概述
2021年第42卷第1期综述评论•综述.曲克芦丁的药理作用和常见临床应用概述邱月'，吴金伟2*(1.四川大学华西医院临床药学部，四川成都610041； 2.四川迪菲特药业有限公司医学部，四川成都611930)摘要：曲克芦丁是一种半合成黄酮类化合物，具有多种有效的药理活性，在慢性静脉功能不全、缺血性脑卒中(cerebral ischemic stroke,CIS)＞痔及微循环回流障碍等血管性疾病的治疗中具有较广泛的应用，并取得了良好的效果。
本文对曲克芦丁主要药理活性及其临床应用研究进行综述，旨在探讨该药物的临床应用意义和前景。
关键词：曲克芦丁；药理作用；临床应用中图分类号：R-1文献标志码：A文章编号：1672-9188(2021)01-0073-04DOI：10.13683/j.wph.2021.01.014Overview of pharmacological effects and common clinical applications of troxerutinQIU Yue1,WU Jinwei2*(/.Department of C linical Pharmacy,West China Hospital of S ichuan University,Chengdu610041,Sichuan Province,China;2.Medical Department of S ichuan Difeite Pharmaceutical L i mited Company,Chengdu611930,Sichuan Province,China)Abstract:Troxerutin is a semi-synthetic flavonoid with a variety of effective pharmacological activities.It is widely used in the treatment of vascular diseases such as chronic venous insufficiency,ischemic stroke,hemorrhoids,and microcirculatory reflux disorders.This article reviewed the main pharmacological activity and clinical research of troxerutin in order to explore the clinical significance and prospect of the drug.Key words:troxerutin;pharmacological action;clinical application 2 0 2 1V o 一.42No •一曲克芦丁（troxerutin,名3',4',7-三轻乙基芦丁）,是天然提取物芦丁经轻乙基化后形成的半合成黄酮类化合物，主要药理作用包括抑制红细胞、血小板聚集，防止血栓形成，改善微循环，保护血管内皮细胞，降低毛细血管通透性。
曲克芦丁的制备及结构鉴定
曲克芦丁的制备及结构鉴定
唐精桥;袁佩瑾;刘炜
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】1996(27)7
【摘要】用芦丁和环氧乙烷反应得到曲克芦丁，分离精制后经定性检查，熔点、紫外光谱及质谱等均与文献一致。
【总页数】2页(P291-292)
【关键词】曲克芦丁;合成;结构鉴定
【作者】唐精桥;袁佩瑾;刘炜
【作者单位】扬州制药厂
【正文语种】中文
【中图分类】R972.4;R914
【相关文献】
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3.海参二肽基肽酶Ⅳ抑制肽的酶解制备及结构鉴定 [J], 刘志彤;郑淋;王晨阳;赵谋
明
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荧光在药物中的应用
１．４荧光动力学分析
荧光动力学分析法始于２０世纪５０年代，它基于化学反应的速率与反应物的速度有关，在某些情况下还与催化剂（活化剂、阻化剂或解阻剂）的浓度有关，因而，可以通过荧光法来监测反应速率，从而对待测物进行检测，催化动力学法测量对象并非待测物本身，而是经“化学放大”了的其它物质，因而灵敏度很高，检测限可达ｎｇ或ｐｇ级。如在酸性介质中氨苄青霉素能阻抑钒（Ｖ）催化过硫酸钾氧化罗丹明Ｂ的荧光猝灭反应，借此建立了阻抑动力学荧光法测定氨苄青霉素含量的新方法。结果令人满意【３８】。很久以来动力学分析法一直受到科研工作者的青睐，已有多篇相关综述【３８删。本课题组也利用此法在环境和药物检测进行了大量的工作【４１４３１。
光化学反应荧光衍生
光化学反应荧光衍生不引入杂质，也不会稀释试样，扩展了荧光分析法的应用范围。黄朝表【２４】将光化学衍生与流动注射相结合，将叶酸在线衍生为强荧光产物进而对叶酸进行测定。酪氨酸经光照发生光化学反应，荧光强度明显增大。据此蔡维平【２５】等建立了现场光化学荧光法测定酪氨酸的新方法。
表１．１固相攀取荧光法在药物分析中的应用
第一章荧光分析在药物检测中酶疲雳
３展望
综上所述，荧光分析法是一种重要且有效的光谱手段。荧光分析法以其灵敏度高、专属性强的优点，目前已被广泛用于药物的测定，随着药物分析的进展，尤其是体内药物分析的开展以及药物代谢动力学、临床药理研究的需要，对分析方法提出了更高的要求。它不但要求分析结果准确可靠，而且要求方法篱便灵敏度高。多数情况下，观察到的药物含量或所提供的样品含量都非常少。所以这就要求荧光分析法不断朝着高效、痕量、微观和自动化的方向发展。
利用金属配合的反应进行衍生
由于大多数无机盐类的金属离子与溶剂之间相互作用很强，使得激发态的分子或离子的能量去活化，因而无机盐在紫外或可见光激发下能发荧光的很少，但有些有机配体与金属离子形成的配合物能发射荧光。这些配体绝大多数为芳香族化合物，通常含有两个或两个以上的官能团，其中一类官能团能与金属离子形成。键，例如。ＯＨ，州２，．ＳＨ，．ＣＯＯＨ；另一类官能团含有未配对电子（ｎ．电子）的原子，例如．ＯＲ，．Ｏ，－ＮＲ３等，这些官能团能与金属离子形成五元或六元环的配合物。杜黎明发现Ｚｎ２＋，ＳＤＳ与司帕沙星形成三元体系使荧光强度增强，利用同步一阶导数荧光法测定尿样中的司帕沙星【２引。
胶束体系中曲克芦丁的荧光特性及其分析应用
的表面活性 剂 Ｓ Ｂ － 后 ，由于胶束体 系的形 成 ， 系微 环 Ｄ Ｓ６ 体 境发生改变 ， 使荧光 发射波长略有紫移 （ 由 ４ １ ９ ４６ ３ ７． — ５ ．
９０型荧光分光光度计 （ 海第三分 析仪器 厂） ７ 上 ；曲克 芦
收 稿 日期 ：２ ０—３２ 。 订 日期 ：２ ０—８１ ０ ６０ —０ 修 ０ ６０ —３
中曲克芦丁 的测定 ，回收率为 ９ ． ～１ ０４ ， ８５ ０ ． 结果令人满 意。 关键词 曲克芦 丁；十二烷基苯磺酸钠一 （ＤＢ －） 胶束增敏 ；荧光光谱法 ６Ｓ Ｓ６ ；
文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１０ —５ ３ ２０ 结果 与讨 论
２ １ 荧 光 激 发 光 谱 与 发 射 光 谱 ．
曲克芦丁的荧光 激发光 谱 和发射 光谱 如 图 １和 图 ２所
１ 实验部分
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
示 ，由图可知 ，曲克芦 丁分子 具有 内源 性荧 光 ， 其荧 光发 射
波 长为 ４ １ ９ｎｎ 但其 自身发射 的荧光强度较弱 ； 入适 量 ７． ｌ ， 加
荧光性 质进 行了考察 ， 结果 发现 ，在 Ｎａ － ＡｃＨＡｃ 质中 ，十 介 二烷基 苯磺 酸钠一 （ＤＢ －） ６ Ｓ Ｓ６ 对曲克芦丁荧光强度有显著增 敏 作用 ， 据此提出 了胶束增敏荧光光谱法测定微 量曲克芦 丁的 新方法 。该 方法操 作简便 ，灵 敏度高 ，选择性好 ， 于片 剂 用 和注射液 中曲克 芦丁含量的测 定 ， 结果满意 。
谱法是一种快捷 、 灵敏 、选择性 强 的分 析方法 ，胶束 体系 的
存在对有些物质 的荧 光强 度有 显著 的增敏 作用［－］ １１ 。我们在 ｏｓ 实验 中 ， 首次发现曲克芦丁 自身具有 内源性 荧光 。 研究 曲 在
曲克芦丁脑蛋白水解物注射液 - 国家药典委员会
0.6mg 的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相稀释制成每 1ml 中含 曲克芦丁 0.12mg 的溶液，作为预试溶液。照曲克芦丁含量测定项下的方法试验，取预试溶 液 10µl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高为满量程的 40%～60%；再 取供试品溶液 10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的 2 倍。按面积归 一化法计算，其他物质峰面积之和不得大于总峰面积的 15%。 异常毒性 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版二部附录 XI C） ，按静脉注射法给 药，应符合规定。 热原 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版二部附录 XI D） ，剂量按家兔体重每 1 ㎏缓慢注射 1ml，应符合规定。 过敏反应 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版二部附录 XI K） ，应符合规定。 降压物质 取本品，依法检查（中国药典 2010 年版二部附录 XI G） ，剂量按猫体重每 1kg 注射 0.2ml，应符合规定。 无菌 取本品，经薄膜过滤法处理，不需冲洗，用金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法 检查（中国药典 2010 年版附录Ⅺ H） ，应符合规定。 其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（中国药典 2010 年版二部附录 I B） 。 【含量测定】 曲克芦丁 照高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 V D）测 定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以 0.1％枸橼酸溶液乙腈-四氢呋喃（85:9:6）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按曲克芦丁峰计算应不低 于 2000。曲克芦丁峰与其他物质峰之间的分离度应符合要求。 测定法 取本品适量，用流动相定量稀释成每 1ml 中含曲克芦丁 0.20mg 的溶液，作为 供试品溶液，取 10μl 注入液相色谱议，记录色谱图；另精密称取曲克芦丁对照品适量，同 法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 总氮 精密量取本品适量，照氮测定法（中国药典 2010 年版二部附录Ⅶ D 第二法）测 定，即得。 多肽 精密量取本品 2ml，置试管中，精密加入双缩脲试液（取硫酸铜 1.50g 和酒石酸 钾钠 6.0g，加水 500ml 使溶解，边搅边加入 10％氢氧化钠溶液 300ml，用水稀释至 1000ml， 混匀）4ml，混匀，放置 30 分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典 2010 年版二部附录 IV A） ，在 540nm 的波长处测定吸光度。另精密称取酪蛋白对照品适量，加 0.05mol/L 氢氧化 钠试液溶解并稀释制成每 1ml 中约含 7mg 的溶液，精密量取 2.0ml，自“置试管中……”起， 同法操作，测定吸光度，计算出结果 C1；精密称取曲克芦丁对照品适量，加水溶解并定量 稀释制成每 1ml 中含曲克芦丁（C33H42O19）40mg 的溶液，同法测定，计算出结果 C2；用结 果 C1 减去结果 C2，即得本品中多肽的含量。计算公式如下： A 样品× C 酪蛋白对照品 C1 = A 酪蛋白对照品 A 曲克芦丁对照品× C 酪蛋白对照品× 曲克芦丁实际含量 C2 = A 酪蛋白对照品× 曲克芦丁标示含量
曲克芦丁药典标准
曲克芦丁是一种常用的药物，其药典标准详细描述如下：曲克芦丁是一种黄酮类化合物，具有多种药理作用，如抑制血小板聚集、降低毛细血管通透性、抗氧化等。
在药典标准中，曲克芦丁的含量要求不得少于80.0%（供口服用）或88.0%（供注射用），以保证药物的有效性和安全性。
曲克芦丁的外观应为黄色或黄绿色粉末，无臭，有引湿性。
在水中易溶，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在三氯甲烷中不溶。
这些性质有助于药物的溶解和吸收，从而更好地发挥药效。
此外，曲克芦丁的鉴别方法包括红外光谱法、紫外光谱法等，可以准确地确定药物的成分和结构。
同时，曲克芦丁的杂质检查和含量测定方法也经过严格的验证和确认，以确保药物的质量和稳定性。
总之，曲克芦丁的药典标准详细描述了药物的成分、性质、鉴别方法、杂质检查和含量测定等方面的要求，为药物的研发、生产和质量控制提供了重要的依据。
曲克芦丁与牛血清蛋白的相互作用研究
(1)
式中，Kq 为双分子猝灭过程的速率常数,Ksv 为动态猝灭常数；
τ0 为猝灭剂不存在时荧光分子的平均寿命,生物大分子荧光寿命约 为 10-8s；[Q]为猝灭剂的浓度,即曲克芦丁的浓度；F0 和 F 分别为未
462 2020·4 《华东科技》
学术论坛
加入和加入曲克芦丁时 BSA 的荧光强度。pH 和温度对曲克芦丁与 BSA 相互作用的影响：
根据在不同温度下所得的荧光实验数据,作 F0/F-[Q]图,如图 3 所示。并由 Stern-Volmer 方程求得猝灭常数 Ksv 和相关系数(见表 1)。根据动态猝灭常数 Ksv 随温度的变化可以对猝灭的机理进行判 断。温度升高将有利于荧光体和荧光猝灭剂分子的有效碰撞,增大扩 散系数,使 Ksv 随温度的升高而增大。单纯的静态猝灭或动态猝灭 F0/F 与[Q]均有线性关系,而从图 3 可见,F0/F 与[Q]为一曲线且随着 温度升高, Ksv 增大,表明曲克芦丁对 BSA 的荧光猝灭机理并非单一 的静态猝灭,而可能是一种以静态猝灭为主的复合猝灭机理[3]。
关键词：曲克芦丁；牛血清蛋白；荧光光谱法；相互作用
1 研究课题意义 曲克芦丁(troxerutin)是芦丁在碱性条件下与环氧乙烷进行醚
化反应得到的羟乙基芦丁的有效成分，曲克芦丁的分子式：C33H42O19， 分子量：742.68。
血清白蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白，药物进入血 浆后，首先与血清白蛋白结合，然后再被运送到身体的各部位发挥 药效[1]，所以研究药效小分子和蛋白的相互作用具有重要意义。 2 药物与大分子作用与研究进展
Academic Forum
曲克芦丁与牛血清蛋白的相互作用研究
秦金涛，张 抗，张高鹏，徐 琳，郭辉辉
探针曲克芦丁测定蛋白质的实验研究
量 提 供 了一 种 新 的 测 试 手 段 。
关键 词 ：曲克 芦丁 ；牛血 清 白蛋 白 ；同步荧光光 谱 ；荧光猝 灭 中图分 类 号 ：０６ ７３ ５ ．９ 文献 标 志码 ：Ａ 文 章编 号 ： １ ７ — ３ ６２ １ ） ２ ０ ４ － ４ ６ ４ ３ ２ （０ ０ ０ － ０ ４ ０
ＢＳ ｈ ｓａ ｇ ｏ ｉ ｅ ｒｒ ｌｔｏ ． ｎ ｔ ｅｐ ｉ ｏ ｄ ｔｏ ， ｈ ｙ ｃ ｒ ｎ ｕ ｕ ｒ ｓ ｅ ｃ ｎ ｅ ｓｔ ｆｔ ｅ ｓ ｓｅ ｉ ｉ Ａ ａ ｏ ｄ ｌ ａ ｅ ａ ｉ ｎ Ｉ ｈ ｒｍｅ ｃ ｎ ｉｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｎ ｈ ｏ ｏ ｓｆ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ ｉ ｔ ｎ ｉ ｏ ｙ ｔ ｍ ｓ ｎ ｎ ｌ ｙ ｈ ｐ ｏ ｏ ｔｏ ｏ ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｔ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ｅ ｏ ． ０ 。 ｒ ｐ ｒｉ ｎ ｔ ｈ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆｐ ｏ ｅｎ ｉ ｈ ａ ｇ ｆ ０ ５ｘ ＿。 ． ０ ｍｏ Ｌ～ ．ｗｈ ｃ ｒ ｓ ｎ ｓ ａ ｎ ｗ ｏ １ ～７ ５ｘ １ ｌ‘ ｉｈ ｐ ｅ ｅ ｔ ｅ
Ａｐ ． ０ ０ ｒ２ １
探针 曲克芦丁测定蛋 白质 的实验研 究
王 田虎 ，赵 志敏 ，王 田龙
（． １南京航 空航天 大 学 理 学院 ，江 苏 南京 ２ ０ １ ；２重庆 师范 大学 外国语 学院 ，重 庆 ４ ０ ４ １０６ ． ０ ０ ７）
摘
要 ： 曲克芦 丁是 临床 上 治疗 闭塞性脑血 管病的 常用 药物 ， 够与 牛血清 白蛋 白（ Ｓ ￣ 互作 用生 成复合 能 Ｂ Ａ）８
不同方法测定芦丁片中芦丁含量的比较
不同方法测定芦丁片中芦丁含量的比较高召军;齐永秀【摘要】目的采用高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法(UV)分别测定芦丁片中芦丁的含量并进行比较.方法 HPLC法采用色谱柱为Venusil MPC18(5μm,4.6×250 mm),流动相为甲醇-0.2％冰醋酸(40:60),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃,进样量20μl.紫外分光光度计法以75％的乙醇为溶剂,检测波长为500 nm.结果紫外分光光度法中芦丁浓度在5～100μg/ml时,吸光度和浓度呈良好的线性关系(r=0.9990),平均回收率为99.36％,RSD为1.25％.芦丁浓度在20～100μg/ml时,高相液相色谱法测得线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为100.3％,RSD为1.58％.结论采用F检验对HPLC法和UV法的芦丁含量测定结果进行检查,结果显示两者测得结果没有显著性差异,两种方法均可用于芦丁片中芦丁的含量测定.【期刊名称】《泰山医学院学报》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】3页(P644-646)【关键词】芦丁片;紫外分光光度法;高效液相色谱法;含量测定【作者】高召军;齐永秀【作者单位】泰山医学院,山东泰安 271016;泰山医学院,山东泰安 271016【正文语种】中文【中图分类】R917芦丁(Rutin)，别名：芸香苷，是一种从植物中提取的黄酮类化合物，其具有很多方面的生理活性，具有抗紫外线、抗血栓形成、维持血管弹性、增强毛细血管抵抗力的能力，并有降低血管脆性和通透性及对癌症的辅助治疗等作用[1-2]。
正因为芦丁有如此好的医学作用，富含芦丁的植物，如槐米、苦荞麦，可作为保健品使用。
此外，芦丁还能作为抗氧化剂和天然食用色素[3]。
目前文献报道芦丁片的含量测定方法有HPLC法和UV法，本研究采用HPLC法和UV法分别测定芦丁片中的芦丁含量，并用F检验的方法对这两种方法进行比较。
荧光分析法在药物分析中的应用
常用的环糊精(cyclodextrin，CD)就是一种可以产生胶束环 境的物质，它是环状低聚葡萄糖类化合物，其结构分子内腔属于 疏水性的，结构分子外腔属于亲水性的。由于该物质结构分子主 客体的特征，以及该物质所处环境的温度、物质结构表面所带的 电荷及该物质分子周围其它分子和离子等所形成的微环境有利于 该物质形成胶束环境，胶束环境的存在，大大降低了有一定荧光 性质的物质分子的非辐射速率，因而使该荧光物质分子的荧光性 增强。利用此种方法测定土霉素、吡哌酸、醋酸甲萘氢醌、 盐酸芦氟沙星、双喀达莫、盐酸左氧氟沙星、左炔诺孕酮、曲克 芦丁等药物。
导数荧光分析法
导数荧光分析法记录的是待测物质荧光强度对波长的导数 (包括一阶或更高阶导数)，从而获得相应的导数荧光的分析方 法。利用导数荧光光谱法对物质的浓度或者含量进行分析测定 方法称为导数荧光分析法。已经利用此种分析方法同时测定了 多种氨基酸，维生素B，氧氟沙星对映体，环丙沙星等。
化学计量学方法
荧光分析法的发展方向：
荧光分析法是一种重要且有效的光谱分析手段。该方法具 有经济、简便、灵敏度高和选择性好的优点，目前己被广泛用 于药物的测定，发展的主要趋势是从复杂组成的样品(包括体液) 中简便、灵敏、快速、可靠地检测一些痕量成分。随着生活水 平的提高和科学技术的大力发展，药物对人类的作用也更加重 要，这就对药物的分析方法提出了更高的要求。要求荧光分析 法不断朝着高效、痕量、微观和自动化的方向发展。
1) 进一步系统地寻求和合成专属性强、灵敏度更高、效果更好 的荧光探针； 2) 开辟多组分药品物质同时快速、准确检测的方法以及深入研 究其反应机理； 3) 与计算机技术紧密结合，研制出自动化程度高，获得和处理 信息速度快、检测速度更快、效果更好的荧光分析仪器； 4) 逐步加强与其他各种现代化的分析仪器和方法联合使用，以 更准确、更灵敏更专一和更低检测限获得药物相关信息，迅速测 出药物的含量和检出限。
药物分析中的荧光分析结构鉴定技术研究
药物分析中的荧光分析结构鉴定技术研究荧光分析结构鉴定技术是一种在药物分析领域中被广泛应用的方法。
通过观察荧光现象，可以快速准确地确定药物的分子结构，并提供其结构的各种信息。
本文将介绍药物分析中的荧光分析结构鉴定技术的原理、方法以及应用。
一、荧光分析结构鉴定技术原理荧光分析结构鉴定技术基于物质在吸收光能量后发出的荧光现象。
当物质吸收光能量时，其电子会跃迁到激发态，随后返回基态时会释放出荧光。
不同物质的分子结构和环境会对荧光产生影响，因此可以通过观察荧光的发射光谱来推测物质的结构。
荧光分析结构鉴定技术主要基于以下原理：1) 荧光激发和发射波长：不同分子吸光峰和荧光发射峰对应的波长差异可提供结构信息；2) 荧光强度：分子结构的不同会影响荧光强度，可以用来推测取代基或某些结构特征；3) 荧光寿命：分子激发态的寿命与其电子结构相关，可用于判断分子的组成和环境。
二、荧光分析结构鉴定技术方法1. 荧光光谱分析法：该方法通过测量分子在不同波长下吸收光和发射光的强度，来研究分子结构和荧光特性。
常用的仪器包括荧光光度计和荧光显微镜。
荧光光谱分析法广泛应用于药物分析中，用于鉴别、定量和质量控制等方面。
2. 荧光探针法：该方法是利用具有特定荧光性质的化合物与待测物发生反应，通过观察荧光变化来判断药物的性质和结构。
例如，荧光pH指示剂可以根据环境的酸碱性变化发出相应的荧光信号，从而实现对溶液酸碱度的测试。
3. 荧光显微镜技术：该技术利用荧光素材料标记目标物质，通过观察荧光信号来研究样品的结构和性质。
荧光显微镜技术广泛应用于生物医学研究和药物研发，如药物在细胞内的分布和交互作用等方面。
三、荧光分析结构鉴定技术应用1. 荧光染料鉴定药物纯度：荧光分析结构鉴定技术可用于检测药物中的杂质和不纯物，通过与纯净标准品的荧光特性比对，判断药物的纯度。
这种方法无需破坏样品，且检测速度快。
2. 荧光显微镜观察细胞内的药物分布：许多药物都具有荧光特性，可以通过与细胞标记剂结合，使用荧光显微镜观察药物在细胞内的分布和转运情况。
荧光分析法在药物分析中的应用
CT利用组织密度的不同造成对x射线透过率不同，对机体一定厚度的层面进行扫描，并利用计算机重建三维图像。小动物 CT (微型cT )作为一种最新的cT成像技术，具有微米量级的空间分辨率(大于9um)，并可以提供三维图像。
小动物 C T
4、小动物 MRI
MRI 依据所释放的能量在物质内部不同结构环静中不同的衰减，绘制出物体内部的结构图像。相对于CT， MRI具有无电离辐射性 ( 放射线 ) 损害、的软组织分辨能力 ， 以及无需使用 比剂 即可显示血管结构等的独特优点。对于核素和可见光成像，小动物MRI的优势是具有微米级的高分辨率及毒性；在某些应用中，MRI能同时获得生理、分子解剖学的信息， 这些正是核医学、光学成像的弱点。对于小动物研究，小动物MRI是一个功能强大、多用途的成像系统， 但是 MRI 的敏感性较低(微克分子水平)，与核医学成像技术的纳克分子水平相比，低几个数量级，所以它不是最理想的成像系统。随着多模式平台的发展， 如MRI／PET，可以从一个仪器中得到更全面的信息。
胶束增敏荧光分析法是在胶束溶液中对药物的含量进行测定的荧光分析方法。表面活性剂的作用之一是在溶液中产生胶束环境，胶束环境对物质分子有如下作用: 胶束环境对分子极性较小的弱荧光物质具有一定程度的增溶作用，所以对于此类物质，可用表面活性剂作为增溶剂; 胶束环境对有一定荧光性质的物质分子的荧光发射具有增敏增稳作用，因此，对于此类物质，可用表面活性剂对其作用，使其起到增敏增稳的效果。 综合以上分析，对于某些几乎没有荧光性或荧光性很弱的药物用直接荧光方法无法进行分析测定时，可以通过使用表面活性剂产生胶束环境，从而使该药物的荧光强度得到一定程度的增强。
这个技术主要应用于药物研发的以下几个方面：
核素成像
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荧光光谱技术在药物分析中的应用研究
荧光光谱技术在药物分析中的应用研究荧光光谱技术是一种基于分子发射光的分析方法，广泛应用于药物分析领域。
通过测量药物分子在激发光照射下产生的荧光信号，可以实现药物的快速、灵敏和选择性分析。
本文将介绍荧光光谱技术在药物分析中的应用研究，并探讨其在药学领域的前景和挑战。
一、荧光光谱技术原理荧光光谱技术基于荧光现象，通过分析样品在光激发下发射的荧光信号，获得样品的结构和特性信息。
当荧光分子受到特定波长的光激发时，其能级会发生跃迁，从而产生特定波长的荧光信号。
根据荧光光谱的峰值位置、强度和形状，可以得到药物的质量、结构和活性等信息。
二、荧光光谱技术在药物质量控制中的应用研究1. 荧光光谱用于药物纯度检测荧光光谱技术可以通过检测药物样品中的杂质和掺假物质，实现对药物纯度的快速检测。
通过比对药物样品的荧光光谱和已知纯品的光谱，可以判断药物样品的纯度是否符合标准要求。
2. 荧光光谱用于药物含量测定荧光光谱技术还可以用于药物含量的定量分析。
通过建立药物样品的荧光强度与标准溶液浓度之间的定量关系，可以快速测定药物样品中的目标成分含量，提高药物分析的准确性和效率。
三、荧光光谱技术在药物结构研究中的应用研究1. 荧光光谱用于药物结构鉴定荧光光谱技术可以通过分析荧光峰的位置和形状，推测出药物分子的结构信息。
通过与已知标准物质的荧光光谱进行比对，可以确认药物的结构和成分，提供药物结构鉴定的依据。
2. 荧光光谱用于药物相互作用研究荧光光谱技术还可以用于研究药物与其他分子之间的相互作用机制。
例如，通过检测药物与受体分子之间的荧光共振能量转移或荧光猝灭现象，可以揭示药物的结合位点和结合强度，从而为药物设计和优化提供指导。
四、荧光光谱技术在药物新药开发中的前景与挑战荧光光谱技术具有灵敏度高、快速、非破坏性等优点，在药物分析领域得到广泛应用。
随着药物研发的不断深入，对荧光光谱技术在药物新药开发中的需求也越来越大。
然而，荧光光谱技术在样品制备、激发光源选择和多成分分析等方面仍存在一些挑战，需要进一步改进和优化。
标准曲线法测定芦丁含量
实验三十六标准曲线法测定芦丁含量一、目的要求1．掌握标准曲线制备的方法。
2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。
二、实验原理显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。
芦丁为黄酮苷，能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有最大吸收。
据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量等条件。
显色法的定量方法可采用标准曲线法。
三、仪器与试剂1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。
2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。
四、实验内容与步骤1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。
精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。
2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。
各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。
各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。
“起依法操作直至测定出样品的吸光度。
五、注意事项1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。
荧光检测方法
荧光检测方法荧光检测是一种常用的分析方法，通过检测样品发出的荧光信号来获取样品的信息。
荧光检测方法广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍荧光检测的原理、常用的荧光探针和荧光检测技术。
一、荧光检测原理。
荧光检测原理是基于样品在受激光照射后发出荧光信号的特性。
当样品受到特定波长的激发光照射后，样品中的荧光探针会吸收光能并发生激发态跃迁，随后再释放出荧光光子。
荧光光子的强度和波长可以提供样品的信息，如浓度、纯度、活性等。
荧光检测原理简单、灵敏度高，因此被广泛应用于科学研究和工业生产中。
二、常用的荧光探针。
1. 荧光染料。
荧光染料是最常用的荧光探针之一，它可以与样品中的特定分子结合并发出荧光信号。
荧光染料具有多种颜色和波长的荧光光子，适用于不同样品的检测需求。
常见的荧光染料有荧光素、罗丹明、FITC等。
2. 荧光蛋白。
荧光蛋白是一类来源于生物体的荧光探针，它可以在特定条件下发出荧光信号。
荧光蛋白具有天然的荧光特性，被广泛用于细胞标记、蛋白质定位、蛋白质相互作用等研究领域。
3. 量子点。
量子点是一种新型的荧光探针，具有窄的荧光发射峰和宽的激发光谱，可以同时发出多种颜色的荧光信号。
量子点具有优异的光学性能和化学稳定性，适用于多种样品的荧光检测。
三、常用的荧光检测技术。
1. 荧光光谱法。
荧光光谱法是最常用的荧光检测技术之一，通过记录样品在不同激发波长下的荧光发射光谱，可以获取样品的荧光特性和信息。
荧光光谱法具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的优点，被广泛应用于生物医学、环境监测等领域。
2. 荧光显微镜。
荧光显微镜是一种利用荧光探针标记样品后进行观察和分析的技术。
荧光显微镜可以实现对生物细胞、组织的高分辨率成像，被广泛用于生物医学研究和临床诊断。
3. 荧光免疫分析法。
荧光免疫分析法是一种利用荧光标记的抗体或抗原对特定分子进行检测的技术。
荧光免疫分析法具有高灵敏度、高特异性和高通量的优点，被广泛应用于临床诊断和生物医学研究中。
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目的：研究曲克芦丁(Troxerutin)与人血清白蛋白 (HSA)的相互结合作用。 方法：以HSA为荧光剂,Trox-erutin为荧光猝灭剂,在 激发波长为220 nm,发射波长为345 nm下测定两者结 合后的荧光强度,推测其猝灭机理;分别测定相同浓度的 HSA的荧光发射光谱图和紫外可见吸收光谱图,来推断 两者结合的作用力类型。 结果：Troxerutin与HSA的相互作用为静态猝灭过程, 平衡常数K0(25℃)=6· 18×105L/mol、K0(37℃)= 3· 76×105L/mol,供体(HSA)与受体(Troxerutin)间的 作用距离r=4· 66 nm。Troxerutin和HSA的作用力类 型为疏水作用力。 结论：通过两种分析方法清楚的研究了曲克芦丁与血 清白蛋白的相互作用。
曲克芦丁(Troxerutin)是一种重要的黄酮类化合 物,它是羟基芦丁中最重要的有效成分,医药上用 于治疗静脉障碍血栓症及脑血管疾病。最近几 年国外把曲克芦丁应用于防治长途飞行引起的 微血管病，使曲克芦丁临床研究拓展到新的领 域。药物进入体内一般都需要通过血浆的储存 和运输来到达受体部位,发生药理作用。血清白 蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白,可与许多 内源及外源性化合物结合。因此,研究药物与白 蛋白的相互作用,具有重要的理论和现实意义。
讨论
随着我国社会经济的发展,人们的生活水平和营养知识 水平逐步提高,天然食品、绿色食品、无公害食品、营 养饮食等已成为人们日益关心的问题。但是,目前大学 生的营养知识还是相当贫乏,营养知识的宣传工作开展 得较少,有待加强。本次调查结果,某医学院学生营养知 识较缺乏,营养调查总分女生高于男生;营养知识评分不 及格率临床医学专业学生高于护理专业学生,护理和临 床医学专业学生的营养态度得分和饮食行为得分基本相 同;营养知识来源主要是报刊和书籍,这与有关报道相似。 护理专业学生的营养调查总评分与营养知识得分高于临 床医学专业学生,可能是护理专业学生毕业后主要从事 护理工作,接触和护理病人时将向病人宣传营养知识及 营养与疾病、营养与治疗疗效等,因此特别注意学习营 养知识。医学院校应加强营养教育,开设营养学或临床 营养学课程,为医学生毕业后在工作中向病人宣传、指 导营养知识及对病人进行营养治疗打下基础。
结果：
曲克芦丁与人血清白蛋白的相互结合反应
蛋白质中由于色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的 存在使其具有内源荧光(λex/λem=225 nm /345 nm),随着曲克芦丁浓度的增加,HSA的 内源荧光强度有规律地降低,且激发峰与发射 峰的峰位与峰形均不变,如图1,说明曲克芦丁 对HSA的荧光有猝灭作用。
求算曲克芦丁与HSA的结合数n、平衡常数K0
对于静态猝灭过程,荧光强度与猝灭剂的关系可 由荧光 分子与猝灭剂分子之间的平衡常数表达 式推导求出lg((F0-F)/F)=lgK0+nlg[Q] (2)式中F0 为猝灭剂不存在时的荧光强度,F为加入猝灭剂 后的荧光强度, K0为结合平衡常数,[Q]为猝灭剂 浓度。由图1统一读取225 nm/345 nm处的荧 光强度,按(2)式进行数据处理。得到拟合的曲线 方程,平衡常数及结合数,曲克芦丁与人血清白蛋 白结合数n约等于1,说明每一个HSA分子与一个 药物分子结合形成配合物。结果见表2。
曲克芦丁和HSA作用距离计算
药物分子与血清白蛋白结合形成配合物, 根据偶极-偶极非辐射能量转移理论即 F0rster理论，可以求出结合位置与蛋白 质分子中发荧光基团之间的距离r,距离越 小,药物分子越有利于被蛋白质存储与转 运,越能发挥其药理作用。
将曲克芦丁的吸收光谱和人血清白 蛋白的荧光光谱重叠部分见图2,参 照文献[2]方法求得光谱的重叠积 分J,进一步求得能量转移效率E,药 物距色氨酸残基最短距离r,r均小于 7 nm,说明药物容易被蛋白质携带, 发挥其药力作用,药物与HSA作用 过程发生了非辐射能量转移,两者 形成了复合物。也进一步证明了药 物对HSA的荧光猝灭属静态猝灭。 见表3
HSA与曲克芦丁作用力的推测
药物与生物大分子之间的作用力包括氢键、Van der Waal力、 静电引力、疏水作用力等,药物不同,与蛋白质作用力类型也不同。 根据热力学公式可以得到结合反应的△G、△H、△S等热力学 函数的变化值,Ross等根据大量的实验结果,总结了判断生物大分 子与小分子结合作用力类型及生物大分子自身作用力类型的热力 学规律。由此,药物与HSA结合过程的△G<0、△S>0,表明其作 用过程是一个熵增加,自由能降低的自发分子作用过程。由于ΔH、 ΔS均大于零,推测其主要作用力为疏水作用力。结果见表4。
荧光猝灭机理可分为动态猝灭和静态猝灭,动态 猝灭是一种能量转移或电子转移过程,不影响蛋 白质的结构和生理活性。静态猝灭则是由于发 生了配合作用,通常是产生了不发荧光的配合物, 对蛋白质的二级结构可产生影响,并可影响其生 理活性。若猝灭过程为动态猝灭,则应符合 Stern-Volmer方程：F0/F = 1 + Ksv[Q] (1) 式中:F0为未加猝灭剂时的荧光强度,F为加入猝 灭剂后的荧光强度,[Q]为猝灭剂浓度,Ksv为 Stern-Volmer动态猝灭常数,实验测定了HSA 的荧光强度F0/F随曲克芦丁浓度的变化。由于 生物大分子的最大的动态猝灭过程的速率常数 Ksv<100,因此猝灭速率常数大于100 L/mol的 荧光猝灭过程为静态猝灭过程。结果见表1。
本文在模拟生理条件下,用荧光光谱法和 紫外吸收光谱法,从分子水平上研究了曲克 芦丁与人血清白蛋白(HSA)相互作用,并计 算了其平衡常数及结合点位。根据能量转 移机制计算了两者结合时的作用距离,推测 了二者之间的主要作用力。
实验部分
原理：
蛋白质具有内源荧光,可作为能量予体与某些药物受体 发生反应形成络合物,从而猝灭内源荧光。研究这种猝 灭行为可以为研究荧光能量予体与药物受体之间的作用 提供一系列理论依据。同时荧光能量给予体与受体分子 间可发生非辐射能量转移,而这种能量转移过程效率决 定于供体的发射光谱与受体的吸收光谱两者重叠的程度。 重叠的程度越大,能量转移的效率越高。因此,能量转移 的几率是供体的发射光谱与受体的吸收光谱两者重叠程 度的函数。基于荧光和紫外可见吸收光谱两种分析方法 , 本文研究曲克芦丁与人血清白蛋白的相互结合作用。
实验方法
加入1×10-5mol/L的HSA 1.0ml,一定量4× 10-4mol/L的曲克芦丁溶液,1.0 mol/L的NaCl溶 液1.0 ml(用以维持体系中的离子强度)及pH = 7.40的Tris-HCl缓冲溶液1.0 ml于10 ml比色管 中,以蒸馏水定容至刻度,25℃恒温2 h。以1 cm 石英比色皿保持25℃恒温,在激发和发射狭缝宽 度均为5 nm,λex为225 nm,测定荧光强度。按 上述操作,37℃恒温2 h同样测定。 移取1.0ml4×104mol/L的曲克芦丁溶液于 10ml比色管中,加入pH=7.4的Tris-HCl缓冲溶 液定容至刻度,以Tris-HCl缓冲溶液做参比,测定 紫外吸收光谱。