微生物作业指导书

湖南临武舜华鸭业发展有限责任公司

微生物作业指导书

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生效日期：2011年

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目录

前言：微生物检验员工作流程 (1)

第一部分：准备工作 (3)

第二部分：微生物检验相关技术 (7)

第三部分：相关仪器设备的使用 (10)

第四部分：具体的检测方法 (13)

1. 高清洁区空气沉降菌检测方法 (13)

2. 食品直接接触面卫生微生物检验 (15)

3. 食品用水卫生微生物检验 (17)

4. 菌落总数的测定 (19)

5. 大肠菌群的测定 (23)

6. 商业无菌的检测出 (26)

第五部分：相关表格 (32)

前言

微生物检验员工作流程

一、目的

做好原料、成品的微生物实验，新品的保质期跟踪实验，检验生产过程中高清洁区的卫生情况，保证成品的微生物指标符合要求。

二、工作职责

1．负责原辅料、半成品、成品、实验品、工器具、人员、自来水等微生物检测，并做好相关检验记录。

2．负责成品采样、留样以及送检样品的采集、编号、登记、保管、更新，月底与车间函接所采样品的归还以及相关数据的核实工作。

3．配合研发部做好新品的微生物跟踪检验工作。

4．负责相关记录的整理、归档、保管工作。

5．负责总结分析月度/年度微生物检测情况。

6．负责所使用仪器的保养及维护。

三、主要工作流程

A、月初/年初做好工作计划

B、具体的检测工作

1．准备工作

①填写微生物检测台帐

②将剪刀、烧杯、垃圾袋、包装完好的非透明包装样品、酒精灯、75%酒精棉、镊子、电子称放入无菌室，工作服、工作帽、工作鞋、口罩放入缓冲间进行紫外线消毒30min，关闭紫外灯过一会才能进入无菌室进行无菌操作。

③将吸量管用报纸包好、培养皿码好，分别放入相应的金属筒内，在恒温鼓风干燥箱内进行干热灭菌，160℃，2h，取出冷却至室温。

④准备相应数量的9ml及225ml生理盐水（0.85%）；同时按操作说明配好所需培养基，烧开、冷却、分装。

⑤将准备好的生理盐水及培养基放入灭菌锅入进行湿热灭菌（121℃，15min），注意不可放得太过紧密，否则可能会灭菌不完全。灭完待压力降至0，取出冷却至室温，查看液体培养基内的小倒管是否有气泡，将有气泡的剔除；培养基应放在水浴锅内或放在灭菌锅内使之保持在45℃左右。

2．无菌操作及培养

参考GB4789.2-2010、GB4789.3-2010

3．结果与报告

依据GB4789.2-2010、GB4789.3-2010中的相关内容出具微生物检测原始记录。4．及时输入电脑，整理电子版的台帐。

C、每月对工器具、人员、自来水（直接加入到食品中去的）等进行微生物检测。

D、月底与车间函接所采样品的归还以及相关数据的核实、整理、归档相关记录、做好微生物检测情况的总结分析。

E、注意所使用仪器的保养及维护

主要包括以下几个方面：①培养箱：保证培养箱内的湿度，方法是用一个小容器装一些水放入到培养箱内；定期对增养箱进行清洗消毒。

②灭菌锅内最好加蒸馏水，加热用水每个星期换一次，怕结起的水垢堵住排气管。

F、每天要对所使用的工器具进行清洗，接种了致病菌的移液管或是长了较多细菌、培养了致病菌的培养基及其它相关的用具均要进行灭菌之后方可清洗，保持整个工作环境的干净整洁，特别要注意窗户的卫生。

四、相关文件记录

《GB789》

《成品微生物检测记录》

《商业无菌原始记录》

《成品出厂检验台帐》

《高清洁区空气沉降菌原始记录》

《饮用水微生物检测原始记录》

《食品直接接触面的微生物检测原始记录》、

第一部分：准备工作

一、无菌室的准备

1. 无菌室的杀菌

（1）紫外线灯照射在每次工作前后均应打开紫外线灯，分别照射30min，进行杀菌。

（2）熏蒸先将室内打扫干净，打开无菌室的门通风干燥后，重新关闭好再进行熏蒸杀菌。常用的熏蒸药剂为福尔马林（含37%~40%甲醛的水溶液）。按6-10ml/m3的用量盛于铁制容器中，加半量高锰酸钾，通过氧化作用加热使福尔马林蒸发。熏蒸后应保持密闭12h以上，最好是隔夜。甲醛气体未散尽而要使用无菌室时，则在使用无菌室之前1-2h，按所用甲醛溶液量量取氨水，倒入搪瓷盘内，放入无菌室，使其挥发中和甲醛气体的刺激作用。除甲醛外也可用乳酸（细菌较多时），硫酸等进行熏蒸杀菌。

(3) 石碳酸液喷雾在进接种室操作前，用手持喷雾器喷5%石碳酸溶液，主要喷于台面和地面，以防空气微尘飞扬。

2. 无菌室操作的规则

（1）将所用的材料、用品先全部放入无菌室内，以避免在操作过程中进出无菌室或传递物品，使用前打开紫外线灯，照射半小时后，关闭紫外线灯，过一会儿才能使用。

（2）进入缓冲间，换好消过毒的工作服、鞋、帽，戴上口罩。

（3）操作前用酒精棉球擦手，然后严格按无菌操作进行工作。

（4）工作后应将台面、地面收拾干净，废物丢入废物桶内。

二、玻璃器皿的准备

微生物学实验常用的玻璃器皿，主要有试管、吸管、培养皿、三角瓶、载玻片、盖玻片等，都需要经过清洗，达到无灰尘，无油垢和无机盐等杂质后，才能保证获得正确的实验结果，有的器皿还需经包装、灭菌后方能使用。

1.洗涤剂的种类及应用

（1）水：水是最重要的洗涤剂，但只能洗去可溶解于水的沾污物。油、蜡等不