UPLC–MS–MS同时测定人参中4种植物生长调节剂残留量

化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第25卷，第6期2016年11月V ol. 25，No. 6Nov. 201646doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2016.06.011UPLC–MS–MS 同时测定人参中4种植物生长调节剂残留量*宋志峰，李刚，何智勇，孟繁磊，牛红红，魏春雁［吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，农业部农产品质量安全风险评估实验室（长春），长春　130033］摘要　建立超高效液相色谱–串联质谱法测定人参中4种植物生长调节剂残留的方法。

样品以50%乙腈溶液室温振荡提取30 min ，并采用分散固相萃取(DSPE)法净化,其中每毫升提取液加入50 mg C 18吸附剂，在优化后的仪器条件下进行测定。

2，4-二氯苯氧乙酸、矮壮素、赤霉素、乙烯利分别在10～500，0.5～250，5～500，200～5 000 μg ／L 范围内线性良好，相关系数r 2＞0.99，检出限分别为7.5，0.4，4.0，150.0 μg ／kg ，测定结果的相对标准偏差为3.05%～14.77%(n =6)，加标回收率为69.6%～97.4%。

该方法样品处理简单快速，检出限低，准确度和精密度高，适合于人参中2，4-二氯苯氧乙酸、矮壮素、赤霉素和乙烯利4种植物生长调节剂残留量的测定。

关键词　超高效液相色谱–串联质谱法；分散固相萃取法；人参；植物生长调节剂中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2016)06–0046–05Determination of 4 kinds of Plant Growth Regulator Residues in Ginseng by UPLC–MS ／MSSong Zhifeng ，Li Gang ，He Zhiyong ，Meng Fanlei ，Niu Honghong ，Wei Chunyan[Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology ，Jilin Academy of Agricultural Sciences; Risk Assessment Lab of Agro–products Quality and Safety(Changchun), Agriculture Ministry of P.R.C ，Changchun 130033, China]Abstract A method of UPLC–MS ／MS was established for the determination of 4 kinds of plant growth regulator residues in ginseng. The samples were extracted with 50% acetonitrile and mechanical shaking for 30 min at room temperature. The extracts were cleaned by dispersive–solid phase extraction(DSPE), and per milliliter extract add 50 mg C 18 adsorbent, the extracts were analyzed by UPLC–MS ／MS. The linear range of 2，4-Dichlorophenoxyacetic acid, chlormequat chloride, gibberellic acid and ethephon was 10–500, 0.5–250, 5–500, 200–5 000 μg ／L, respectively. The correlation coefficient was more than 0.99, the detection limits of 4 kinds of plant growth regulator were 7.5, 0.4, 4.0, 150 μg ／kg, the recoveries of 4 kinds of plant growth regulator were in the range of 69.6%–97.4%， the relative standard deviations were in the range of 3.05%–14.77%(n =6). The method is suitable for determination of 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid, chlormequat chloride, gibberellic acid and ethephon residues in ginseng with the advantages of simple and rapid sample processing, low detection limit, high accuracy and precision.Keywords UPLC–MS–MS; DSPE; ginseng; plant growth regulator植物生长调节剂为人工合成，具有与天然植物激素同样功能，其活性甚至比天然植物激素更为优越［1］。

在农业生产中，使用植物生长调节剂主要是为了达到增加产量、改善口感、促芽、防倒、催熟等目的。

20世纪80年代以来，中药种植面积扩大，为了增加产量，植物生长调节剂也开始被广泛使用［2］。

人参是驰名中外的药材，属于五加科，是多年宿根性阴生植物，生长缓慢，通常6年才能收获。

在生产中，常常采用植物生长调节剂处理人参，达到促进生产，增加产量，改善品质，提高效益的目的［3］。

随着植物生长调节剂应用范围的不断扩大，其残留问题已引起人们的高度重视。

目前，部分植物生长调节剂对土壤和植物乃至食物链都有不同程度的污染，影响了农产品的质量［4］。

为了保证人参产品的质量安全，建立人参产品中植物生长调节剂残留量快速、准确的检测方法十分必要。

目前，植物生长调节剂的检测方法主要包括气相色谱法［5–7］、气相色谱–质谱法［8–9］、气相色谱–串联质谱法［10］、高效液相色谱法［11–13］、高效液相色谱–质谱法［14］及高效液相色谱–串联质谱法［15–17］*吉林省重点科技攻关项目（20140204006YY ）；国家农产品质量安全风险评估重大专项（GJFP201600604）联系人：魏春雁；E-mail: weichy@ 收稿日期：2016–10–1847宋志峰，等：UPLC–MS–MS同时测定人参中4种植物生长调节剂残留量等。

其中串联质谱法由于定性可靠，检测灵敏度高，抗干扰能力强等优点，成为农药等化学污染物多残留检测的研究热点。

近年来，利用UPLC–MS–MS 法检测蔬菜、水果及粮油产品中植物生长调节剂报道较多，但检测人参中植物生长调节剂的报道较少。

笔者建立了乙腈溶液提取，分散固相萃取（DSPE）法净化，使用UPLC–MS–MS分析人参中2，4-二氯苯氧乙酸、矮壮素、赤霉素和乙烯利4种植物生长调节剂的方法。

该方法具有样品前处理简单、检出限低、准确度和精密度高等优点。

1　实验部分1.1　主要仪器与试剂高效液相色谱仪：1200型，美国安捷伦科技有限公司；三重四级杆串联质谱仪：6410B型，配有电喷雾离子源，美国安捷伦科技有限公司；电子天平(1)：BT124S型，感量为0.1 mg，德国赛多利斯公司；电子天平(2)：PL602型，感量为0.01 g，梅特勒托利多仪器（上海）有限公司；冷冻离心机：Multifuge X3R型，美国赛默飞世尔科技有限公司；超纯水系统：Milli–Q型，密理博中国有限公司；空气浴振荡器：HZQ–C型，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；涡旋混匀器：VORTEX 3000型，德国Wiggens 公司；乙腈、甲醇：HPLC级，赛默飞世尔（中国）有限公司；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、C18净化吸附剂：40 μm，美国安捷伦科技有限公司；无水硫酸镁：分析纯，上海山浦化工有限公司；氯化钠：分析纯，天津光复科技发展有限公司；乙酸铵：优级纯，天津光复科技发展有限公司；2，4-二氯苯氧乙酸、矮壮素、赤霉素标准物质：纯度均不小于98%，阿拉丁（中国）有限公司；乙烯利标准物质：纯度为99%，德国Dr.Ehrenstorfer公司；针式尼龙滤膜：0.22 μm，天津市津腾实验设备有限公司；实验用水为一级水，符合GB／T 6682–2008要求；人参样品（福星一号）采自吉林省农业科学院人参实验基地。

1.2　样品处理用电子天平(2)精确称取2.00 g样品于20 mL 离心管中，加入2.5 mL水和2.5 mL乙腈，室温振荡提取30 min后，于4℃下，以5 000 r／min转速离心5 min，吸取上清液1 mL于1.5 mL离心管中，加入50 mg C18吸附剂，涡旋1 min，过0.22 μm针式尼龙滤膜于色谱进样瓶中，上机测定。

1.3　标准溶液配制标准储备液：用电子天平(1)分别准确称取适量2，4-二氯苯氧乙酸、矮壮素、赤霉素和乙烯利标准物质，用甲醇配制成质量浓度均为100 mg／L的标准储备液，于–18℃冰箱中保存。

标准中间液：分别准确吸取适量的标准储备液，用50%甲醇溶液稀释成质量浓度均为5 mg／L 的标准中间液，于–18℃冰箱中保存。

系列混合标准工作溶液：分别准确吸取适量的标准中间液，用50%甲醇溶液稀释，得到系列混合标准工作溶液见表１，临用时配制。

表1　系列混合标准工作溶液 μg／Ｌ编号2，4-二氯苯氧乙酸矮壮素赤霉素乙烯利1100.55200 225525500 310025100 1 000 4250100250 2 500 5500250500 5 000基质提取溶液：按照1.2方法处理空白样品得到的溶液。

基质标准工作溶液：将表1中系列混合标准工作溶液系列用氮气吹干，用相同体积的基质提取溶液复溶，此工作溶液用于人参样品中4种植物生长调节剂的定性定量分析。

1.4　仪器工作条件1.4.1　色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB–C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm，美国安捷伦科技有限公司）；柱温：40℃；进样体积：5 μL；流动相：A为10 mmol／L乙酸铵水溶液，B为甲醇，流量：0.3 mL／min，梯度洗脱程序见表２。

表2　梯度洗脱程序时间／min体积分数／%A B0.050500.0~8.050~1050~908.0~8.110~090~1008.1~13.0010013.0~13.10~50100~5013.1~19.05050化学分析计量2016年，第25卷，第6期481.4.2　质谱条件电离方式：电喷雾电离（ESI）；扫描方式：正负离子同时扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；离子源温度：350℃；干燥气：氮气，流量为10 L／min；母离子、子离子、碎裂电压及碰撞能量参数见表3。