单核细胞增生李斯特菌的检测技术进展

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单核细胞增生李斯特氏菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特氏菌检测技术研究进展
段霞;赖卫华;张莉莉
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2009(030)015
【摘要】单核细胞增生李斯特氏菌在病原学上作为一种人畜共患和食源性疾病的致病菌已得到世界范围普遍的公认.WHO也将其列为20世纪90年代食品四大致病菌之一.近年来,单核细胞增生李斯特氏菌作为食品卫生及流行病学的研究热点,其分离和鉴定方法已取得较大的进步.除传统的检测方法外,利用其生化特性、免疫原性以及现代分子生物学技术建立的方法,可以从多方面对单核增生李斯特氏菌进行检测.本文对近十年的各种检测方法作了系统综述.
【总页数】4页(P281-284)
【作者】段霞;赖卫华;张莉莉
【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西,南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西,南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西,南昌,330047
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.4
【相关文献】
1.食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法研究进展 [J], 刘书花;魏云波;林小静;李景超
2.单核细胞增生性李斯特氏菌快速检测技术研究进展 [J], 刘海泉;沈潇;吴启华;潘迎捷;孙晓红
3.PCR技术检测单核细胞增生李斯特氏菌研究进展 [J], 徐伟;李素芳;刘军
4.单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展 [J], 孙静娟;曾海娟;丁承超;王广彬;翟绪昭;王淑娟;李杰;刘箐
5.食品中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果及分析 [J], 杨丰旭;曹欢欢;李爽;孟凡信
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单核细胞增生李斯特氏菌检验技术

1mL
•小的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷
10mLLB2
TSA-YE
鼠李糖
TSA-YE
阳性
选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定
革兰氏染色
单增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在刺种点周围产生狭小的透明溶血环；在靠近金黄色葡萄球菌的接种端溶血增强
革兰氏阳性短杆菌
动力试验
MR试验
一、单核增生李斯特氏菌概况
生物学特性
该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和食品中能长期存活；对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌；湿热灭菌（121℃，至少15min）和干热灭菌（160-170℃，至少1hr）可杀灭该菌，对紫外线和γ射线敏感；对青霉素、氨苄青霉素、氨基糖苷类、氯霉素均敏感。
食品中单核增生李斯特氏菌检验
食品微生物检验技术
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分类学研究表明，其分为六个种：单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、绵羊（伊氏）李斯特氏菌、英诺克（无害）李斯特氏菌、斯氏李斯特氏菌、威氏李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌在李斯特氏菌属只有两种致病菌：单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最有检测意义是单核增生李斯特氏菌。
一、单核增生李斯特氏菌概况
李斯特氏菌属
革兰氏阳性,老龄培养物多转为革兰阴性;兼性厌氧,无芽孢、无荚膜;生长温度范围为2-42℃（也有报道在0℃能缓慢生长）,pH范围pH4.4-pH9.6;LM的幼龄菌（16~24h的培养物），为革兰阳性小杆菌，常呈V字形，成对排列。在22~25℃环境中形成4根鞭毛，故在25℃肉汤培养液中出现轻微旋转或翻滚样的运动。而在32℃时仅形成一根鞭毛，动力缓慢。

单核细胞增生李斯特菌的检测技术进展

中图分类号Ｑ８１９单核细胞增生李斯特菌简称“ 单增李斯特菌” ，是一种重要的食源性致病菌，它是目前国际上确认的７种李斯特菌：单增李斯特菌Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，绵羊李斯特菌Ｌ．ｉｕａｎｕｉｉ、英诺克李斯特菌Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ，威尔斯李斯．ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ，西尔李斯特菌Ｌ．ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ，格氏李斯特菌Ｌ特菌Ｌ．ｇｒａｙｉ，默氏李斯特菌Ｌ．ｍｕｒｒａｙｉ中唯一能引起人类疾病的菌
。对于食品中单增李斯特菌的检测主要是将培养
收稿日期：２００８０２１４修回日期：２００８０３０７电子信箱：ｊｙｙｉｎ＠ｓｔａｆｆ．ｓｈｕ．ｅｄｕ．ｃｎ通讯作者，
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牛奶），则以改良的ＦＤＡ法更佳。
特菌均给予高度重视，ＷＨＯ将其列为２０世纪９０年代食品中四大致病菌之一。根据检测原理，食品中单增李斯特菌的检测方法大致可以分为三类：平板培养法、免疫学方法和分子生物学方法。这三类检测方法各有利弊，并且仍在不断地改进和完善中，建立简便快捷、灵敏度好、特异性高的单增李斯特菌检测技术成为众多研究者的共同期望。
［１］
分离后的可疑菌落通过生化反应实验、溶血实验和动物实验等，鉴定为李斯特菌后进一步进行血清分型。国际上的检测方法大部分都是由ＵＳＤＡＦＳＩＳ（ｔｈｅＵＳ ? ＦｏｏｄＳａｆｅｔｙａｎｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ? Ｓｅｒｖｉｃｅ）、ＦＤＡ（ｔｈｅＦｅｄｅｒａｌＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）和ＮＧＦＩＳ（ｔｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓＧｏｖｅｒｎｍｅｎｔＦｏｏｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎ）的方法发展而来的，根据检测食品样品的不同Ｓｅｒｖｉｃｅ选用不同的选择性培养基进行增菌培养。平板培养法灵敏度高，成本低，可以给出定性和定量的结果。但检测过程中，制备培养基、计算菌落数量和鉴定菌落的生化特性都耗时耗力，并且培养方法的成功依赖于样本中细菌的数量和状况、培养基的灵敏度、孵化条件和分离培养基的选择性，不适合当前食品快速检测的需求。因此这类方法趋向与其它方法进行结合，并在自动化和系统化的方向上发展，如生化复合试剂盒ＡＰＩＬｉｓｔｅｒｉａ等的一些快速检测试剂盒也是由此发展而来的。目前我国常用的检验方法主要有国标法（ＧＢ４７８９．３０１９９４）和ＡＰＩＬｉｓｔｅｒｉａ法，这两种方法都需要增菌和 ?

食品中单核细胞增生李斯特菌检测技术方法进展

食品中单核细胞增生李斯特菌检测技术方法进展【中图分类号】R155 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）15-0112-01 单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称LM，以下简称单增李斯特菌），广泛存在于自然界，如土壤、污水、青饲料、食品生产加工器具、多种食品。

动物和人体也带有此菌[1]，是一种重要的食源性致病菌。

该菌具有很强的环境适应性，存活温度范围在-1℃～45℃，PH范围为4.0～9.5，耐盐性相当强，Nacl浓度范围为0.5%～10%，所以在食品加工、生产过程中单增李斯特菌很难被杀灭，而且单增李斯特菌在4℃仍能生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一[2][3]。

单核细胞增生李斯特菌中毒严重时可引起人类的败血症、脑膜炎及单核细胞增生等多种疾病，死亡率高达35%～70%[4]，所以对实验室检验人员来说，提高单增李斯特菌的检出率具有重要的现实意义。

食品中单增李斯特菌的检测方法大致分为三类，即分离培养法、免疫学方法和分子生物学方法。

1 分离培养法是最传统的检测方法，应用国标法，即GB/4789.30—2010作为检测方法，先两次增菌，即LB1增菌液36℃±1℃培养24小时，然后再移取到LB2增菌液36℃±1℃培养18～24小时，对被检样品进行增菌，然后取LB2增菌液划线接种在科玛嘉李斯特菌显色培养基和PALCAM琼脂平板，36℃±1℃培养24～,48小时，然后经初筛鉴定等试验步骤，结果符合生化试验和溶血试验结果进行报告，但该菌革兰氏染色和镜检时要特别加以注意，因为单增李斯特菌在新鲜培养液为G+小杆菌，但在陈旧的培养液中菌体多转为G－,特别是该菌在22℃～25℃环境中能形成4根鞭毛，运动活泼，在32℃环境中仅能形成1根鞭毛，运动缓慢，在36℃培养则无动力，所以容易误判。

虽然该方法实验设备要求不高，可操作性强，但检验周期长，需6～7d，这种传统的检测方法已无法满足食品生产过程中的在线检测、食品上市和消费前的快速检验要求 [5]。

单核细胞增生性李斯特菌研究进展_郭宏华

基金项目：吉林省科技项目资助（２０１００７４２）吉林省卫生厅项目资（３Ｄ５１１ＢＣ４３４３０）＊通讯作者文章编号：１００７－４２８７（２０１３）０１－０１９７－０３单核细胞增生性李斯特菌研究进展郭宏华１，贾芙蓉２，韩晓英３，何成彦１＊（１．吉林大学中日联谊医院，吉林长春１３００３３；２．解放军第２０８医院；３．长春八一医院）单核细胞增生性李斯特菌是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌，是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病。

李斯特菌属（１ｉｓｔｅｒｉａ）现在有２个群７个种，分别是单核细胞增生性李斯特菌（Ｌ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，ＬＭ）（亦称产单核细胞李斯特菌）、伊氏李斯特（Ｌ．ｉｖａｎｏｖｉｉ）（亦称绵羊李斯特菌）、英诺克李斯特菌（Ｌ　ｉｎｎｏｃｕａ）（亦称无害李斯特菌）、韦氏李斯特菌（Ｌ　ｗｅｌｓｈｉｍｅｉ）、塞氏李斯特菌（Ｌｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）、格氏李斯特菌（Ｌ．ｇｒａｙｉ）和莫氏李斯特菌（Ｌ．ｍｕｒｒａｙｉ）。

１　生物学特性ＬＭ的幼龄菌（取１６ｈ－２４ｈ的培养物进行革兰染色），呈革兰阳性小杆菌，长０．５μｍ－２μｍ，宽０．４μｍ－０．６μｍ，直或稍弯，常呈Ｖ字形，成对排列。

在营养肉汤中２Ｏ℃－２５℃培养２４ｈ可形成４根小鞭毛，有动力；３６℃培养时无鞭毛，动力消失。

此菌营养要求不高，在普通营养琼脂平板上３６℃培养２４ｈ呈细小、半透明、微带珠光的露水样菌落，直径约０．２ｍｍ－０．４ｍｍ，在斜射光下，菌落呈典型的蓝绿色光泽。

在血平板上３６℃培养２４ｈ－９６ｈ，菌落呈β溶血［１］。

２　流行病学ＬＭ是一种人畜共患的致病菌，也是重要的食源性致病菌之一。

ＬＭ感染家畜后可引起脑膜炎、脑炎以及自发性流产等，可暴发流行。

ＬＭ引起人类的疾病统称为李斯特菌病（１ｉｓｔ—ｅｒｉｏｓｉｓ），人感染后主要表现为脑膜炎、败血症和单核细胞增多。

婴幼儿、怀孕妇女和免疫耐受病人的感染死亡率可高达２０％－３０％［２］。

单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究

单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。

因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。

本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。

一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。

在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。

由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。

二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。

然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。

三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。

以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。

qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。

2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。

研究人员通过设计特定的探针，可以在芯片上同时检测多种致病菌，包括单核细胞增生性李斯特菌，提高了检测效率和准确性。

单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展

食品微生物期末考核题目：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展姓名：学号：班级：单核细胞增生李斯特氏菌检测方法进展康阳妃西南大学食品科学学院，重庆400715摘要：单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患病的食源性致病菌之一，在自然界中分布广泛。

近年来，在许多国家，它是卫生部门重点监测的几种食源性致病菌之一。

本文介绍了单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性，流行病学特征。

总结了单核细胞增生李斯特氏菌现行有效的的常规和快速的检测方法及流程，并对各方法的优缺点进行了比较。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌；生物学特征；流行病学特性；检测；致病菌The progress of detection methods to ListeriamonocytogenesKang yangfeiCollege of Food Science ,Southwest University,Chongqing 400715Abstract:Listeria monocytogenes is one of foodborne pathogens that can cause zoonosis,it is found ubiquitously in the environment. In recent years, it is one of several kind of foodborne pathogens that the Health department focus on surveillance to in many countries.This paper introduce the biological and epidemiological characteristics of Listeria monocytogenes. Summarize the current effective conventional and rapid detection methods and processes of Listeria monocytogenes.Key words:Listeria monocytogenes; biological characteristics;epidemiological characteristics ; Detection;pathogens引言单核细胞增生性李斯特菌是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌，是一种人畜共患病的致病菌，可使人和动物患李斯特菌病。

应用环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究

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中国动物检疫
２１００年第２７卷第９期
一２５一
持人：藕祥ｇｗｙ胡ｄｊ＠ｉ肿ｍ
应用环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究
唐梦君 ’，一高玉时，生张小燕，周，唐修君，蒲俊华２葛庆联 Ⅲ ，（．１农业部家禽品质监督检验测试中心，苏扬州２０；．江２０３２中国农业科学院家禽研究所，５江苏扬州２５０）２０３
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单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定

单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，是一种常见的细菌性食物中毒病原体。

单核细胞增生组织均为生化鉴定的一种常见方法。

以下是李斯特氏菌生化鉴定的一些特征：
1. 嗜冷性：李斯特氏菌生长适宜温度为2-45℃，菌株能够在4℃下生长，并在冷藏食品中繁殖。

2. β-溶血素产生：李斯特氏菌能够产生β-溶血素，可以通过血琼脂（Blood agar）培养基上的溶血环进行观察。

3. 乳酸发酵：李斯特氏菌是一种革兰氏阳性乳酸菌，能够进行乳酸发酵。

可以使用乳糖发酵基质（Lactose fermentation medium）进行鉴定，如果产生乳酸则为阳性。

4. 半胱氨酸脱羧：李斯特氏菌具有半胱氨酸脱羧酶活性，可以将半胱氨酸转化为硫代氨基酸。

可使用兰氏差异培养基（LDC medium）进行鉴定。

5. 半乳糖酶活性：李斯特氏菌具有半乳糖酶活性，可以将乳糖转化为半乳糖。

可使用半乳糖发酵基质（Rhamnose fermentation medium）进行鉴定。

此外，李斯特氏菌还可以进行PCR扩增目标基因进行鉴定，
如16S rRNA基因、Internal Transcribed Spacer（ITS）区域等。

需要指出的是，单纯进行生化鉴定可能存在一定的误判率，结合其他检测方法可以提高鉴定的准确性。

此外，由于李斯特氏菌在环境中广泛存在，饮食中也常常带菌，所以对于临床病例的确诊还需要结合患者的临床表现、流行病学调查等综合分析。

食源性单核细胞增生李斯特菌快速检测研究进展

引用格式：林琦钰, 王丹庆, 马沁沁. 食源性单核细胞增生李斯特菌快速检测研究进展[J]. 中国测试，2023, 49(11): 68-75. LIN Qiyu, WANG Danqing, MA Qinqin. Research progress in rapid detection of food-borne Listeria monocytogenes [J]. China Measurement & Test, 2023, 49(11): 68-75. DOI: 10.11857/j.issn.1674-5124.2023080111食源性单核细胞增生李斯特菌快速检测研究进展林琦钰，王丹庆，马沁沁(四川师范大学生命科学学院，四川成都 610101)摘　要: 食品安全是人类健康非常关注的问题，其中微生物污染是其主要的风险因素之一。

单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原体，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

该菌广泛存在于自然环境中，低温条件下仍可生长繁殖，是威胁人类健康的主要病原菌之一。

传统细菌检测方法耗时长，不能满足现场检测的需求。

因此开发快速、准确、高效、可靠的单核细胞增生李斯特菌检测方法是目前研究的热点。

基于免疫学、分子生物学、生物传感器和噬菌体等技术的检测方法成为单核细胞增生李斯特菌检测的重要手段。

该文综述各类检测技术的研究进展，阐述各个方法在致病菌检测中的原理、特点、应用现状和发展，并讨论各方法的优缺点，以期为单核细胞增生李斯特菌检测新技术的研发提供参考。

关键词: 食品安全; 单核细胞增生李斯特菌; 快速检测中图分类号: TB9文献标志码: A文章编号: 1674–5124(2023)11–0068–08Research progress in rapid detection of food-borne Listeria monocytogenesLIN Qiyu, WANG Danqing, MA Qinqin(College of Life Sciences, Sichuan Normal University, Chengdu 610101, China)Abstract : Bacterial contamination is one of the major problems that is considered a serious health risk factor for food safety and human health. Listeria monocytogenes (LM) is a zoonotic pathogen that can cause a variety of clinical syndromes such as reason sepsis, meningitis, and monocytosis and is widely distributed in nature.Specifically, it can grow and reproduce at low temperatures, threatening the human health of raw foods.Conventional methods of LM detection are time-consuming and cannot meet the requirements for on-site detection. Therefore, there has been an increase in demand for the development of fast, accurate, efficient, and reliable detection methods for LM in recent years. Recent rapid detection methods have been developed based on immunology, molecular biology, biosensors, and bacteriophages. Herein, we summarize the principles,characteristics, and application of various rapid detection technologies for LM, and the advantages and disadvantages of these technologies were fully discussed. Hopefully, the review can provide a reference and offer a blueprint for the research and development of new technologies for detecting LM.Keywords : food safety; Listeria monocytogenes ; rapid detection收稿日期: 2023-08-24；收到修改稿日期: 2023-10-19基金项目: 国家自然科学基金（31800158）作者简介: 林琦钰（1998-），男，四川凉山彝族自治州人，硕士研究生，专业方向为资源与应用微生物学。

FAPAS_乳粉中单核细胞增生李斯特菌能力验证结果分析与讨论

分析检测FAPAS乳粉中单核细胞增生李斯特菌能力验证结果分析与讨论刘　霓（辽宁省检验检测认证中心，辽宁沈阳 110000）摘　要：为了提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力，本实验室参加了FAPAS分析实验室能力验证机构组织的实验室能力验证，分别运用国标方法、分子生物学方法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法对样品进行检测鉴定。

结果表明，M224d02-A样品检出单核细胞增生李斯特氏菌，M224d02-B样品检出英诺克李斯特菌，属于李斯特氏菌属。

2个样品检验结果均取得满意结果。

关键词：单核细胞增生李斯特氏菌；FAPAS考核；李斯特菌Analysis and Discussion About the Verification Resultsof Listeria monocytogenes in Milk Powder from FAPASLaboratoryLIU Ni(Liaoning Inspection Examination and Certification Center, Shenyang 110000, China) Abstract: To strengthen the detection power of Listeria monocytogenes in food, our laboratory participated in proficiency testing on Listeria monocytogenes detection in foods which was organized by Food Analysis Performance Assessment Scheme (FAPAS). We used 3 methods for the test, respectively national standard method, molecular biology method and matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) method. Listeria monocytogenes were detected in M228d02-A. Listeria innocua belonged to Listeria sp. were detected in M228d02-B. The test results of 2 samples were outstanding grade.Keywords:Listeria monocytogenes; FAPAS proficiency testing; Listeria sp.李斯特菌属（Listeria sp.）是一种革兰氏阳性菌，在自然环境中广泛存在，一般认为它包括单核细胞增生李斯特菌（L.monocytogenes，以下简称单增李斯特菌）、英诺克李斯特菌（L.innocua）等多种。

单核细胞增生性李斯特氏菌快速检测技术研究进展

ｌｔｒｓｉｅｓ．ｏｗｅｐｙｍｏｅａｄｍｏｅａｔｎｉｎｔｔＡａｉｔｆｒｐｄｄｔｃｉｎｔｃｎｑｅａｅｂｅｅｅｏｅｉｅｉｉｄｓａｅＳａｒｎｒｔｔｏｉｓｏｓｅｏ．ｖｒｅｙｏａｉｅｅｔｅｈｉｕｓｈｖｅｎｄｖｌｐｄｏｒｐｄｙｈｓｐｐｒｓｍｍａｉｅｎｉｃｓｅｈａｉｅｅｔｎｔｃｎｑｅｏｉｔｒａｍｏｏｙｏｎｓｔａａｅｎａｉｌ．ＴｉａｅｕｒｚｄａｄｄｓｕｓｄｔｅｒｐｄｄｔｃｉｅｈｉｕｓｆｒＬｓｅｉｎｃｔｇｃｈｔｂｓｄｏｏｅ
受到人们的重视，各种快速检测技术也迅速发展。综述了在单增李斯特菌检测时基于常规培养、分子生物学、免疫学和传感器的
快速检测技术，并进行了探讨。
关键词：致病菌；单核细胞增生性李斯特氏菌；快速检测
中图分类号：９９Ｑ３．９
文献标识码：Ａ
文章编号：０６００（００—０１０１０～６Ｘ２１）１００— ３１
开发完善新的快速检测方法。
患病，为典型的胞内寄生菌。ＬＭ广泛存在于环境中，据ＷＨＯ报道，健康人的粪便中ＬＭ携带率为
０６１％，７％的人可短期带菌，感染Ｌ后．％～６有０但Ｍ
引起的李斯特菌病有高达２％～００３％的致死率［１１。２０年单增李斯特菌被ＷＨ０２Ｏ列为仅次于大肠杆菌０１７沙门氏菌、贺氏菌后的第四大重要的食５、志源性致病菌。

食源性单增李斯特菌检测技术研究进展

食源性单增李斯特菌检测技术研究进展刘慧1,2，曾祥权2，谢文东1，蒋世卫1，杜洪淼1，周玉春1，黄华1（1.北京市产品质量监督检验院，北京 101300）（2.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）摘要：由单核细胞增生李斯特氏菌（简称单增李斯特菌）（Listeria monocytogenes，L. monocytogenes）引起的李斯特菌病，被认为是世界范围内主要的食源性疾病之一，致死率可高达20%~30%。

单增李斯特菌普遍存在于各类食品中，其在低温、有氧或无氧条件下、以及较宽的pH和渗透压范围内均可生长繁殖。

因此，迫切需要在整个食物链条中对其进行有效监测和控制，以更好地预防食品污染和食源性疾病的爆发。

食品中的单增李斯特菌是低细胞数量致病菌，且与其他非致病性李斯特菌在菌落形态、生化特性等方面具有诸多相似之处，这增加了对单增李斯特菌检测的难度。

本文对传统培养方法及免疫分析法、分子生物测定法、生物传感器、噬菌体等新兴替代方法进行了系统全面综述，并比较其各自优缺点，以期为食品中单增李斯特菌的快速检测方法研究提供参考。

关键词：食源性；单增李斯特菌；检测技术文章篇号：1673-9078(2021)06-333-344 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2021.6.1079 Advances on Detection Techniques for Foodborne Listeria monocytogenesLIU Hui1,2, ZENG Xiang-quan2, XIE Wen-dong1, JIANG Shi-wei1, DU Hong-miao1, ZHOU Yu-chun1,HUANG Hua1(1.Beijing Products Quality Supervision and Inspection Institute, Beijing 101300, China)(2.College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)Abstract: Listeriosis caused by Listeria monocytogenes is currently considered to be one of the leading foodborne diseases worldwide, with a mortality rate of 20~30%. L. monocytogenes can be found in most foods and proliferate in a wide range of pH and osmolarity, at low temperatures, and under aerobic and anaerobic conditions. Thus, effective monitoring and control over L. monocytogenes along the food chain are necessary to prevent food contamination and outbreak of foodborne diseases. Foodborne L. monocytogenes is a low-cell-count pathogenic bacterium similar to other non-pathogenic Listeria regarding colony morphology and physicochemical characteristics, which makes its detection challenging. This study comprehensively reviewed the traditional culture methods and emerging alternative protocols, such as immunoassays, molecular bioassays, biosensors, bacteriophage-based methods, and compared their respective advantages and disadvantages, so as to provide a reference for rapid detection of L. monocytogenes in food.Key words: foodborne disease; Listeria monocytogenes; detection technique引文格式：刘慧,曾祥权,谢文东,等.食源性单增李斯特菌检测技术研究进展[J].现代食品科技,2021,37(6):333-344LIU Hui, ZENG Xiang-quan, XIE Wen-dong, et al. Advances on detection techniques for foodborne Listeria monocytogenes[J]. Modern Food Science and Technology, 2021, 37(6): 333-344李斯特菌属革兰氏阳性短杆菌，兼性厌氧、无芽孢、一般不形成荚膜[1]。

食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法研究进展

达３％～０棚。内也不断有散发病例，０７％国引起了国内医学界的普遍关注。Ｏ在２ＷＨ０世纪９０年代已将其列为食品四大致病菌之＿［１菌在自然界分布广泛，家畜、禽兽４。－该５以家为主要宿主，容易污染食品而引起食物中毒和李斯特病很
抗体，其他李斯特氏菌和属外菌株不发生反应，与为建立ＬＭ
和单位在进行食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测时，其主要依据依然是国标法。国标Ｇ／４８．０１９ＢＴ７９３ — ９４自从颁布以来，别进行了３次修订，分分别是Ｇ／４８．０２０ＢＴ７９３ — ０３，
暴发【食品是导致人类受单核细胞增生李斯特氏菌感染６。
从食品中检测单核细胞增生李斯特氏菌的免疫学方法主要
是ＥＩＡ技术．标Ｇ／４８．０２０ＬＳ国ＢＴ７９３ — ０８中也曾将这一方法
繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌。绝大多数在食品中都能找到李斯特氏菌，肉类、蛋类、类、产品、禽海乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特氏菌的感染源嗍随着我。国冷藏、冻食品消费量的迅速增多，品中单增李斯特氏速食菌的潜在危险性也越来越突出，此在食品卫生微生物检因

单核细胞增生李斯特菌的现代分子生物学分型检测方法及研究进展

段。此外，电压、脉冲角度、电泳温度、缓冲液离子浓度等也是
不容忽视的条件。在制作凝胶包埋细菌时，细菌浓度对于能否
根据菌体抗原和鞭毛抗原，ＬＭ可分为１６个血清型，包括
１／２ａ，１／２ｂ１／２ｃ３ａ，３ｂ，３ｃ，４ａ，４ａｂ４ｂ４ｃ４ｄ，４ｅ，５，６ａ、６ｂ，７
数的９Ｏ［。
节。Ｂｒｉｃｚｉｎｋｉ等＿５］研究报道，用快速ＰＦＧＥ法检测１ｄ即可得
到与其他分型方法完全一致的结果，提示ＰＦＧＥ的改进可以提
ＬＭ是一种典型的能够寄生于巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞和肝细胞胞内的寄生菌，一旦引起人畜共患传染病的发
发病率分别为８．２和８．６［３３。近年来我国多次在美国、加
拿大、法国、爱尔兰、比利时、丹麦等进口肉类中检测出李斯特菌。据加拿大公共卫生署（ＰＨＡＣ）报道，加拿大每年约有
１ＯＯ～１４０人感染ＬＭ，大约死亡３Ｏ～５Ｏ人。据美国食品药品
供一个方便、快速和准确的细菌分子生物学分型方法。这对以
生，其病死率高达２Ｏ％～７Ｏｌ２］。美国食品药品管理局

单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度荧光检测方法的建立

动物医学进展，２０２０，４１（７）：４８５２ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ单核细胞增生性李斯特菌ＬＡＭＰ浊度／荧光检测方法的建立　收稿日期：２０１９０７２３　基金项目：国家重大科学仪器设备开发专项项目（２０１２ＹＱ０９０１９７０４）　作者简介：贺生芳（１９８９－），女，青海互助人，硕士研究生，助理兽医师，主要从事动物疫病研究。

通讯作者贺生芳，郭澍强，谈静惠，郝俊虎（银川海关技术中心，宁夏银川７５０００１）摘　要：将环介导等温扩增技术（ＬＡＭＰ）分别与浊度信号检测系统（ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｅｒ）和荧光信号检测系统（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）相结合，建立了ＬＡＭＰ浊度／荧光单核细胞增生性李斯特菌检测方法。

选择单核细胞增生性李斯特菌保守毒力基因ｉａｐ序列，通过环介导等温扩增引物设计在线软件设计４条特异性引物，进行反应条件的优化，并对建立的ＬＡＭＰ的特异性和灵敏度进行评价分析。

结果表明，构建的ＬＡＭＰ浊度信号检测方法优化后的扩增温度为６１℃，菌液最低检测浓度为２２．１ＣＦＵ／ｍＬ，灵敏度是普通ＰＣＲ扩增方法的１０倍；ＬＡＭＰ荧光信号检测方法优化后的扩增温度为６４℃，菌液最低检测浓度为２．２１ＣＦＵ／ｍＬ，灵敏度是普通ＰＣＲ扩增方法的１００倍；建立的两种ＬＡＭＰ方法的特异性良好，其中１株单核细胞增生性李斯特菌标准菌株和１株本试验分离保存的单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阳性，８株非单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阴性。

利用两种ＬＡＭＰ方法对６３０份肉类及其制品、人工污染样品等进行检测，检出４５个ＬＡＭＰ阳性，与国标法（ＧＢ）检测结果一致。

结果表明，建立优化的单核细胞增生性李斯特菌ＬＡＭＰ浊度／荧光检测方法具有快速、特异、灵敏等特点，特别适用于基层兽医、食品及口岸一线部门对单核细胞增生性李斯特菌快速筛查工作。

关键词：环介导等温扩增；浊度；荧光；单核细胞增生性李斯特菌中图分类号：Ｓ８５２．６１；Ｓ８５１．３４７文献标识码：Ａ文章编号：１００７５０３８（２０２０）０７００４８０５单核细胞增生性李斯特菌（犔犻狊狋犲狉犻犪犿狅狀狅犮狔狋狅犵犲狀犲狊）是一种人兽共患致病菌，常被报道在食品中检出，能够致使人和动物发生流产、败血症、神经性疾病等［１］；单核细胞增生性李斯特菌分布比较广泛，对人体健康安全的威胁不容小觑［２３］。

单核细胞增多性李斯特菌的毒力因子及检测研究进展

行检测，ｚａ筛选出针对ｈｙ基因的引物并扩增出７２ｂＡｎｒｌ０ｐ
发事例］为此单增李斯特菌成为新的重要食源性疾病病．
原菌，引起了食品卫生管理部门的广泛关注。目前，国际已在
ＦＡ、Ｈ等组织都相继成立了相应的机构或规定相应的ＤＷＯ策略去预防和控制该菌的污染、播．Ｈ于１８传ＷＯ９８年发表了 “ 源性李斯特菌病劝告书 ” 指导全世界各国如何预防食，李斯特菌污染和中毒。年来，多国家报道从多种食品中近许分离到李斯特菌或食品污染李斯特菌而引起的食物中毒暴
畜牧与饲料科学
ＡｉａＨｓａｄｙａｄＦｅｃｎｅｍｌｕｂｎｒｎｅｄＳｉｃｎｅ
２０３１： — ０９０（）６７
，
单核细胞增多性李斯特菌的毒力因子及检测研究进展
牛华星，肖永霞，旭升，志昆尹杨
ＳｕｙｄａｃｅｉｌｃａｔｒＬｓｒａｎｃｔｇｎｓｎｊｄｈｉｅｅｔｎｔｄｖｎｅｎｈｒｅｅｃｏｓｆｉｅｉｏｙｏｅｅｍｅｎｅＤｔｃｉＡｏｔＶｕｎＦｏｔｓＭｏｉＭａＴｒｏ
片段，７在２株菌株（准菌株和食品分离株）标中特异地扩增

食品中单核增生细胞李斯特氏菌快速检测研究

食品中单核增生细胞李斯特氏菌快速检测研究单核细胞增生李斯特氏菌在病原学上作为一种人畜共患和食源性疾病的致病菌已得到世界范围普遍的公认。

近年来，如何分离和鉴定食品中单核细胞增生李斯特氏菌已成为研究热点。

本文结合近十年的各种该病菌的快速检测方法作了系统综述，介绍了针对该病菌的快速检测方法，如显色培养基快速检测方法、酶联免疫试验检测方法、结合单克隆抗体技术的免疫学检测方法、反转录-PCR 检测方法、生物芯片，以期对食品中单核细胞增生李斯特菌的检测起到帮助和指导作用。

标签：单核增生细胞李斯特氏菌；检测方法单核细胞增生李斯特氏菌是一种短小的革兰氏阳性无芽孢杆菌[1]，它能引起人畜的李氏菌的病，该病发病率较低，但致死率高达20%～30%[2]，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

单核细胞增生李斯特氏菌广泛存在于自然界中，食品中存在的单核细胞增生李斯特氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。

本文拟对单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法及其当前存在的问题等作系统介绍，以期为进一步深入研究提供参考。

1快速检测方法1.1 显色培养基快速检测方法显色或荧光鉴别培养基的基本原理是针对李斯特氏菌的β-D-葡萄糖苷酶和毒力因子PI-PLC酶，设计相应的底物，加入到常规选择性培养基中，利用酶对底物的分解，产生荧光或显色物质，使其菌落形态或颜色不同于其他李斯特氏菌和非李斯特氏菌，从而实现对李斯特氏菌快速定性鉴定和菌落数目快速定量。

张淑红等[3]检测了显色培养基的特异性和灵敏度。

实验证明此种检测方法具有较高灵敏度、特异性和选择性，是非常有价值的分离平板。

1.2 免疫学检测方法1.2.1 酶联免疫试验检测方法（ELISA）早期起初人们采用简单直接的细胞计数法进行检测，运用细胞计量术对牛奶中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。

但是由于病原微生物的含量很低，仅通过细胞计数的方法检测灵敏度无法达到。

单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展资料

单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展摘要:单核细胞增生性李斯特氏菌是人类一种重要的食源性致病菌，单核增生李斯特氏菌的危害近年来引起世界各国食品和卫生部门的广泛关注. 本文主要阐述了单核细胞增生性李斯特氏菌的生长特性，包括生物学特性、流行病学、致病性的一些研究，以及对该菌的传统分离方法、免疫学检测方法、核酸检测等方法的最新进展进行了综述，为进行该菌的准确、快速检测奠定了基础.关键词：单核细胞增生性李斯特氏菌 , 生物学特性 , 检测方法Research Advance on Listeria Monocyto--genesDong QianCollege of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, ChinaAbstract: listeria monocytogenes is one of the important food-derived pathogens for human, and listeria monocytogenes have been paid close attention by public health and food bureaus the world over. The growth characteristic including biological characteristics, epidemiological, pathogenic, epidemiology, and recent advances of listeria monocytogenes detection methods, including traditional detection procedures, immunity detection patterns and nuclear acid assays were reviewed. Thus, a foundation of rapid and accurate detection methods of the bacteria were laid.Key word: Listeria monocytogenes , Biological characteristics , Detection method由近年来关于单核增生李斯特氏菌的相关消息可知，李斯特菌病尤其是由单核增生李斯特氏菌引起的各类疾病已日益成为全球性疾病，引起了国际上的高度重视。