植物细胞工程的基本设备和无菌操作
植物组织培养实验室组成仪器设备及基本操作
显微镜的使用方法包括样品 制备、观察和拍照等。
显微镜的维护和保养包括清 洁、校准和更换灯泡等。
摇床
作用：用于培 养植物组织， 促进细胞分裂
和生长
结构：主要由 底座、摇杆、 摇板、夹具等
组成
操作方法：将 植物组织放入 摇板，调整摇 杆高度，设定 转速和时间，
开始摇动
注意事项：摇 动过程中避免 剧烈震动，以 免影响植物组
结构：主要由箱体、加热器、制冷器、加湿器、光照系统等组成
操作：设置温度、湿度、光照等参数，将植物组织培养材料放入培养箱，定期观察并记录生 长情况
注意事项：保持培养箱清洁，定期更换培养基，避免污染和交叉污染。
灭菌锅
作用：对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
原理：利用高温 蒸汽对培养基、 器皿等进行灭菌 处理
细胞培养与观察
培养基的制备：选择合适的培养基，按照配方进行配制
细胞接种：将细胞接种到培养基中，进行培养
细胞观察：使用显微镜观察细胞生长情况，记录细胞形态和生长速度
细胞分离与纯化：使用细胞分离技术，如差速离心法、流式细胞术等， 将细胞进行分离和纯化
细胞培养条件的优化：调整培养条件，如温度、pH值、气体环境等， 以获得最佳的细胞生长效果
恒温水浴锅：用于加热 和冷却培养基
03
基本操作流程实验准备准备培养基： 选择合适的培 养基，如MS培 养基、B5培养
基等
准备培养皿： 选择合适的培 养皿，如玻璃 培养皿、塑料
培养皿等
准备无菌操作 台：确保操作 台无菌，避免
污染
准备培养室： 确保培养室温 度、湿度、光 照等条件适宜，
避免污染
组织取材与消毒
止污染和感染
试剂：如激素、抗生素 等，用于调节植物组织
植物生物技术 第一章 植物组织培养实验室的构建与无菌操作技术
第一章
本章主要内容
第一节、植物组织培养实验室建设 第二节、培养基配制 第三节、植物组织培养离体操作技术
第一章
本章教学目的与要求
了解植物组织培养实验室的基本设置 掌握培养基的选择及配制方法 掌握基本的无菌操作技术
第一章
第一节 植物组织培养室建设
低速离心，使用80~100g的离心力即可，太大有时可能引起细胞 的损伤。因此配置4000rpm的国产台式离心机，离心速度 1000rpm即可。
第一节
（三）培养设备
第一节
1. 空调 作用：控制培养温度 2. 加湿器和去湿机 作用：控制培养室内湿度状况
3. 定时器 作用：控制光照时间 4. 培养架 作用：盛放培养物
元素 作用：提供植物生长所需营养元素
第二节
（三）有机营养成分---糖类
最常用的碳源是蔗糖和葡萄糖 使用浓度为2%－5% 作为植物生长发育所需的营养物质 调节培养基中的渗透压
第二节
（三）有机营养成分---维生素
硫胺素（VB1）一般认为是一种必需的成分 吡哆醇（VB6），烟酸（VB3），泛酸钙（VB5）和肌醇也都能显著
第二节
其中IBA和NAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进茎的增殖 2，4-D对于愈伤组织的诱导和生长非常有效
2，4-D+KT
IBA+KT
第二节 （四）植物生长调节剂—细胞分裂素
细胞分裂素影响植物细胞分裂、顶端优势的变化和茎的分化等 常用的细胞分裂素有：BAP（苄氨基嘌呤）、6—BA（苄基腺膘呤）、2—
第二节
一、培养基的构成
（一）水分
类型：蒸馏水 作用：构成培养基的主要成分
《细胞工程》实验指导书
实验指导书课程：细胞工程授课专业：生物工程、生物技术主编：徐艳实验一实验室的概况与培养基母液的配制一、实验目的：熟悉植物细胞工程实验室的基本结构、必须的基本设备及其用途与作用方法，掌握配制培养基母液的基本技能。
二、材料与用具：1、药品：生长调节类物质、无机盐类、有机化合物等。
2、用具：分析天平、移液管、量筒、培养瓶、烧杯、冰箱、母液瓶等。
三、教学时数：4课时。
四、实验内容：（一）实验室的基本结构及主要设备：1、洗涤室：水槽、工作台、蒸馏水器等功能：器皿及材料洗涤；蒸馏水制备。
2、消毒室：高压蒸汽灭菌锅、烘箱等功能：器皿的干燥；器皿及培养基的消毒。
3、试剂室：试剂柜、冰箱功能：存放试剂及器皿。
4、准备室：工作台、天平、水浴锅、电炉、显微镜及各种玻璃仪器、金属仪器等功能：培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析。
5、接种室（含缓冲室）：超净工作台、接种箱等功能：无菌操作。
6、培养室：培养架、摇床等功能：培养物的控制培养。
7、驯化移栽室：如温室、大棚等功能：试管苗的驯化移栽。
（二）培养基母液的配制：1、MS基本培养基母液：各成分单独称量、单独溶解后混合定容①大量元素母液：10倍，1L注意：CaCl2.2H2O易与其他成分反应产生沉淀；②微量元素母液：100倍，0.5L③铁盐母液：100倍，0.5L注意：两者等体积溶解后混合，且需80℃水浴1h充分螯合，等待冷却后定容；④有机母液：100倍，0.5L2、激素类母液的配制：①1mg/ml的6－BA 50ml：先用0.1mol∕L的 HCL或NaOH溶解后再加水定容；②0.1mg/ml的NAA 50ml：先用少量0.1mol∕L的NaOH溶解后再加水定容。
注：精度要求精确到小数点后三位。
（三）培养器皿的洗涤：1、对污染的培养器皿先进行消毒灭菌处理；2、清除残渣，用清水洗净，浸泡于合成洗涤剂中6-24小时；3、用洗涤刷洗涤，并用自来水冲洗干净；4、用烘箱烘干或晾干，存放于防尘橱内备用。
细胞工程实验室组成及无菌操作技术
玻璃漏斗式滤器
微孔滤膜滤器
干热灭菌箱/烘箱
电热灭菌器
2.培养仪器设备
培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。
3.细胞学观察设备
应备有普通显微镜和倒置显微镜。
4. 化学实验常规设备
主要用于试剂保存与称量、培养基配制与 分装和水处理等，根据实际需要予以配置。
冰箱、天平、酸度计、离心机、加热器、 纯水器、分装设备等。
操作的场所。 要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空气
对流。外应设缓冲室、更衣室 。
基本的设备：超净工作台（接种箱）、电热灭菌器、喷雾
消毒器、紫外灯、酒精灯等。
③培养室 功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的 场所。 要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁， 防止微生物感染。
培养室基本设备：培养架、摇床、光照培养箱、通 风设施、时间过程控制器、空调机、加湿器、除湿 机及温度感应器等。
▪ 灭菌(sterilization)：是指用物理或化学的方法， 杀灭或清除传播媒介上的所有微生物，使之达到无 菌程度。
▪ 消毒（disinfection）：是指杀死、消除或充分抑 制部分微生物，使之不再发生危害作用。经过消毒， 许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死， 即消毒后的环境里、物品上还有活着的微生物。
4、滤 器
▪ 玻璃滤器：与玻璃器皿清洗相同。无论是水 浸泡还是酸浸泡，都可用抽滤法。
▪ 不锈钢滤器：使用后弃去石棉滤膜，金属部 分刷洗干净，最后用蒸馏水漂洗2～3次，晾 干备用。
▪ 微孔滤膜滤器：使用后弃去微孔滤膜，滤器 用清水充分冲洗，最后用蒸馏水漂洗，晾干 备用。
二、灭菌和消毒方法
灭菌和消毒是组织培养重要的工作之一 。
第二节、无菌操作技术
细胞工程基本技术
四、培养用品的清洗
在培养物中无毒和无菌是保证培养细胞生存的首要条件，因此对培 养器皿的清洗和灭菌是极为重要的环节。
清洗的目的是清除杂质和微生物,使器皿内不残留任何影响细胞生长 的成分(有害物质、微生物、细胞碎片及非营养性化学成分）。
三．电离辐射消毒
○ 适用于消毒量大和不适于做高压或滤过的用品。
三．湿热灭菌
湿热灭菌即高压蒸气灭菌，是最常用和最有效 的一种方法。布类、胶塞、金属器械、玻璃器 皿及某些培养用液都可用此法消毒灭菌。
各种物品有效消毒灭菌压力和时间不同，一般 培养用液、橡胶制品要求10磅(114℃)，10～ 20分钟或8磅(112℃)30分钟。布类、玻璃制 品、金属器械等为15磅(12l℃)20分钟。
玻璃滤器适用于各种培养液的滤过除菌。玻璃滤器根据滤板的孔 径分为G1一G6几种规格，一般采用G6型(孔径在1.5μm以下)， 可达到除菌目的。
微孔滤膜滤器，应选用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌。 各种滤器必须先经高压蒸气消毒、烤干后方可使用。
2. 化学消毒法
3. 消毒剂
○ 细胞培养室的工作面、家具、墙壁、地面和空气等可用消毒剂进 行灭菌处理。如：75％酒精常用于皮肤和瓶皿开口部位的消毒； 0.1％新洁尔灭是目前最常用的消毒剂，可以对器械、皮肤、操 作面进行擦拭和浸泡消毒；乳酸可用于空气消毒：来苏儿可用于 地面消毒；过氧乙酸消毒能力很强，在0.5%的浓度下，10min 就可将芽孢菌杀死。甲醛是一种光谱灭菌剂，其水溶液和气体对 各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。
○ 支原体的污染是一个常见而棘手的问题，外观 上看不出明显的变化，实际上或多或少的影响 到细胞的众多机能。目前尚无有效的防范措施。 可通过支原体培养、PCR及电镜观察等方法进行 检测。
植物细胞工程课件
• 低温预处理有利于打破胚的休眠，低温对花培形成胚状 体也有促进作用。
定，大多数植物组织培养的pH值在 5.8～6.0.
3. 培养基的渗透压
• 渗透压对细胞的脱分化、再分化和器官的建成有重要 影响。在外植体与培养基等渗或略低于培养基的渗透 压时，有利于外植体从培养基中吸收水分和营养。
• 不同外植体、不同培养方式和不同培养时期对渗透压
有不同的要求。 • 培养基的渗透压通常采用糖类进行调节，以蔗糖最为 常用。也可使用非代谢的糖类。
tttt
主要培养基中离子成分表
2. 碳 源
碳源可以提供有机营养和渗透调 节作用。一般添加的碳源为蔗糖、葡萄 糖、果糖。有时也用麦芽糖、山梨醇糖。 其中最常用的为蔗糖，浓度一般为2% ~ 6%（W / V）。有时也可以用的PEG、 甘露醇代替部分碳源。
3. 维生素
维生素与植物体内的各种酶的作用有关，
必需元素
S
Fe Mn B
Ca(NO3)2, KNO3, KH2PO4, K2SO4, MgSO4, Fe-EDTA, etc.
微量元素
Zn Cu Mo Cl
早期的培养基借鉴微生物培养
基的方法，根据植物水培培养基的 成分，同时结合对植物的营养需求 的分析，经过实验后和反复修改后 得到培养基的配方。现在人们能够
（二）、培养基的基本成分
• 无机盐（Inorganic salts)：
• 碳源(carbon Source)
• 维生素(Vitamins) • 氨基酸和有机附加物(amino acids and organic additives) • 植物生长调节物质(Plant growth regulators)
• 细胞分裂素类:促进细胞分裂和器官分化，延缓组织衰老， 增强蛋白质的合成，促进腋芽的生长，影响和改变其他 激素的作用。作用的强弱表现为 TDZ （噻苯隆） > ZT >2-iP> 6-BA>KT，从价格上考虑，通常使用人工合成的 KT和6-BA，使用浓度为10-6~来自10-7mol.L-1。
植物细胞组织培养的基本设备
植物细胞组织培养的基本设备利用植物细胞组织培养技术获得的材料，需要放存一定的温度、湿度、光照、养分条什下培养生长、发育和繁殖，这就必需要有一定的条件。
常用的基本设备如下：1．超净工作台超净工作台主要是用以举行无菌操作。
普通由鼓风机、滤板、操作台、紫外光灯和照明灯等部分组成。
在小型鼓风机带动下，先让空气穿过一个粗过滤器，存这里把大部分空气尘埃先滤掉。
然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，把大于0．3μm的颗粒包括细菌和真菌孢子等都滤掉，然后这种不带真菌和细菌的超净空气吹过台面上的囫囵工作区域，超净空气的流速为每分钟24～30m，这个气流速度足够防止因附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会阻碍酒精灯对器械的灼烧消毒，只要超净工作台不停地运转，在台面上即可保持一个彻低无菌的环境，可保证无菌材料在接种过程中不受污染。
在每次操作之前，要把试验材料和在操作中须用法的各种器械、药品等先放入台内，不要中途拿入；同时，台面上放置的东西也不宜太多，特殊注重不要把东西迎面堆得太高，以致拦住气流。
最后，在用法超净工作台时应注重平安，当台面上的酒精灯点燃以后，千万不要再喷洒酒精消毒台面，否则很简单引起火灾。
按照风幕形成的方式，超净台可分为水平式和垂直式两种，它有单人式、双人式及三人式的，也有开放式和密封式的，目前这两种超净工作台我国都生产。
2．解剖镜种类无数，可用于分别解剖微茎尖，可采纳双筒解剖镜。
3．大型工作台其高度应适合于站着工作。
4．药品柜用于放置常用药品。
5．低温冰箱或一般冰箱冰箱主要用于储藏培养基贮备液，某些酶和椰子汁，各种易变质、易分解的化学药品和植物材料等。
6．药物天平和电子分析天平药物天平主要用于称取蔗糖、大量元素和琼脂等，称量精度为0．1g。
电子分析天平用于称取微量元素、维牛素、激素等微鼍药品，精确度为0．0001g。
7．制蒸馏水或去离子水装置水中还有无机和有机杂质，如不除去势必会影响培养效果。
植物细胞组织培养中常用法蒸馏水和无离子水，蒸馏水多是采纳硬质玻璃或金属蒸馏水器制成，第1页共3页。
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术，它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时，需要一些基本的设备和无菌操作培训，以确保实验的准确性和成功率。
首先，进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备，它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时，可以通过UV灯消毒空气和工作台表面，以确保实验材料的无菌状态。
其次，植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备，它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境，保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时，需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基，以保证培养环境的无菌性。
此外，进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具，如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作，避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说，他们需要接受一定的无菌操作培训，以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中，实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装，严格按照无菌操作规程和流程进行操作，避免外界微生物的污染。
总的来说，植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的，它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验，保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作，才能获得高质量的植物组织培养材料，为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术，在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养，可以获得大量无病害的植物材料，实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而，植物组织培养实验过程中，需要一定的无菌操作技能和必要的设备，才能保证培养物的无菌状态，从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时，无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境，有效地阻止外界微生物的污染。
组织培养的基本设备和无菌操作
光周期
大多数植物对光周期是敏感的 最常用的光周期：16h光照＋8h黑暗 园艺上常用：12h光照＋12h黑暗 林木商品化组培：22h光照＋2h黑暗至24h光照
光周期对植物形态建成影响显著
例如：
天竺葵：15h～16h光照下，愈伤组织诱导芽形成最多 敏感型葡萄品种：其茎切段在短日照下形成根，长日照 下形成愈伤组织。
第二章
植物组织培养的基本设备和无菌操作
本章主要内容
组织培养实验室的组成 组织培养的基本设备 组织培养所需的环境条件 组织培养的无菌操作
第一节 组织培养实验室的组成
基本 实验室
组织培养 实验室
辅助 实验室
基本实验室
洗涤室 配制室 灭菌室 无菌操作室 培养室 驯化移栽室
辅助实验室
第四节 组织培养的无菌操作
无菌操作是组织培养的关键技术，其中 最重要的是培养基、接种工具、器皿及环 境的消毒处理；如果环境、介质近乎无 菌，那么人为操作技术引起污染的可能性 会大大降低。
一、常用的灭菌方法
干热灭菌法 湿热灭菌法 过滤灭菌 烧灼灭菌 药剂灭菌 熏蒸灭菌 照射灭菌
干热灭菌法
本章复习重点
了解植物组织培养实验室的基本构成及所 需的仪器设备；
熟悉植物组织培养所需的环境条件； 了解常用的灭菌方法，掌握高压灭菌锅的
使用（结合实验课）； 掌握无菌操作的要点（结合实验课）。
在植物组织培养前，先对培养材料进行不同 温度处理，往往起到诱导和促进生长的作用。
例如：
胡萝卜切片进行4 ℃，16~32min的低温处理，比不 处理的生长大大加快。
天竺葵10℃低温处理茎芽分化优于20℃和30℃ 菊芋块茎组织的低温和高温处理均可促进生根。
植物组织培养无菌操作技术
无菌操作技术植物组织培养要求严格的无菌条件及无菌操作技术。
无菌操作技术如下：一、接种室的无菌技术无菌操作室或接种室除用甲醛和高锰酸钾按2比1的比例定期熏蒸灭菌，在实验室用甲醛和高锰酸钾封闭消毒器具，不宜进入消毒空间。
消毒后通风换气，等气味散尽后再出入。
使用前用20%新洁尔灭（苯扎溴铵溶液）对接种室内墙壁、地板及设备擦洗，用70%酒精喷雾（使灰尘迅速沉淀），用紫外线灭菌20分钟或更长，照射期间接种室门要关严。
当接种室紫外线消毒期间，工作人员不要处于正消毒的空间内，更不要用眼睛注视紫外灯，也要避免长时间在开着紫外灯的超净工作台内进行操作。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
应在关闭紫外线灯15-20分钟后再进入室内。
二、工作人员的无菌技术工作人员要经常洗头、洗澡、剪指甲，保持个人清洁卫生。
在接种室穿医护用的特制工作衣帽。
工作衣、帽、口罩也要经常清洗，洗净晾干后用纸包好进行高温高压消毒。
工作衣使用前后挂于预备间，并用紫外线照射灭菌。
接种前洗手，最好用肥皂水或新洁尔灭、洗手液等清洗，然后用酒精擦洗或喷洒。
三、接种器械无菌技术接种时首先要用紫外线照射超净工作台面后，用70%酒精喷雾或擦洗工作台面。
工作前送风15-30分钟左右。
首先对器械支架进行灼烧消毒，然后对接种工具如手术剪、手术刀、镊子等进行灼烧消毒，方法一般是用70%酒精浸渍、擦拭或喷洒后再酒精灯上灼烧。
接种工具灼烧后放在器械支架上冷却待用。
接种一定数量材料后，接种器械要重新灼烧灭菌，避免因沾有植物材料或琼脂等引起双重污染和交叉污染。
通常采用两套接种工具，使用一套时，另一套灼烧后冷却。
对于较大的器械如显微镜等，可用70%酒精擦洗表面，然后用紫外线照射灭菌。
继代转接时，要注意对待转接的培养物进行仔细观察挑选，防止将已经污染的培养物继代扩增；放置了很久的试管或三角瓶表面和瓶塞宜用70%酒精棉擦洗。
植物细胞工程的基本设备和无菌操作
外植体选择 （无菌操作）
表面消毒 培养室培养
接种 观察。
5、作业：
在无菌操作过程中，造成污染的原因 有哪些？
2021/4/6
25
感谢您的阅读收藏，谢谢！
2021/4/6
26
2021/4/6
17
实验一 培养基母液的配制
1、实验目的：掌握培养基母液的配制方法。 2、实验内容：（1）培养基母液配制的各种准 备工作；（2）以常用基本培养基MS母液的配 制以及各种附加成分母液的配制为例，学习培 养基母液的配制方法. 3、实验仪器：主要包括电子天平、烘干箱、 蒸馏水器、冰箱、各类常用玻璃器皿和容器等。
玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗 B 灭菌 ※ 培养材料的灭菌 以药剂灭菌法为主
主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药 剂的耐受力
2021/4/6
12
2021/4/6
13
2021/4/6
14
※ 培养基灭菌 高压蒸汽灭菌
过滤灭菌
C 接种
经过表面灭菌的材料，按不同的要求， 经过剪切、整理后，移植到培养基上培 养的过程。
植物细胞工程的基本设备 和无菌操作
福建农林大学生命科学学院 张健
2021/4/6
1
一、基本设备
1、植物细胞工程实验室的组成 洗涤室 灭菌室 配制室 无菌操作室 培养室 鉴定室 驯化移植室
2021/4/6
2
2、基本设备
玻璃器皿和器械 无菌操作设备 培养设备 其它设备
2021/4/6
3
2021/4/6
量取微量元素
量取钙盐、铁盐和其它有机物 称取
蔗糖和琼脂 配制MS培养基
调PH值
分装培养基
培
养基灭菌.
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2、培养基母液配制
配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常 将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类和激 素类分别配制成比培养基浓度大若干倍的母液。 当配制培养基时，只需按预先计算好的量吸取 母液稀释即可。 母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长， 当母液出现沉淀或霉菌团时，则不能使用。
实验一 培养基母液的配制
4、实验操作方法： 实验操作方法： 外植体选择 表面消毒 接种 （无菌操作） 培养室培养 观察。 作业： 5、作业： 在无菌操作过程中， 在无菌操作过程中，造成污染的原因 有哪些？ 有哪些？
1、实验目的：掌握培养基母液的配制方法。 实验目的： 实验内容： 2、实验内容：（1）培养基母液配制的各种准 备工作；（2）以常用基本培养基MS母液的配 制以及各种附加成分母液的配制为例，学习培 养基母液的配制方法. 实验仪器： 3 、 实验仪器 ： 主要包括电子天平、烘干箱、 蒸馏水器、冰箱、各类常用玻璃器皿和容器等。
实验二：MS培养基的配制与灭 实验二：MS培养基的配制与灭 菌
实验目的: 1、 实验目的:学习培养基的配制与灭菌 操作方法. 实验内容： 2、 实验内容：培养基的配制,培养基的 灭菌. 实验仪器： 3、 实验仪器：主要为台秤,高压灭菌锅, 各种玻璃器皿和容器等。
实验操作方法： 4、 实验操作方法： 量取大量元素 量取微量元素 量取钙盐、铁盐和其它有机物 称取 蔗糖和琼脂 配制MS培养基 调PH值 分装培养基 培 养基灭菌.
三、培养基的组成及母液的配制
1、培养基的组成
无机营养： 大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、Cu等 有机营养： 碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖 氮源：氨基酸类、酰胺类 活性物质：烟酸、肌醇、生物素等 植物激素： 生长素类：IAA、NAA、IBA等 细胞分裂素类：激动素、玉米素等 其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯 附加物类： 琼脂、椰乳、水解蛋白等
2、无菌操作过程 A 清洗 玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗 B 灭菌 ※ 培养材料的灭菌 以药剂灭菌法为主 主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药 剂的耐受力
※ 培养基灭菌 高压蒸汽灭菌 过滤灭菌
C 接种
经过表面灭菌的材料，按不同的要求， 经过剪切、整理后，移植到培养基上培 养的过程。 接种室（无菌操作室）的灭菌 接种台的灭菌 工作人员注意事项
实验三： 实验三：无菌操作技术
实验目的： 1、实验目的：掌握细胞工程中的无菌操 作技术。学习植物外植体的消毒技术、 离体培养的无菌操作技术。 实验内容： 2、实验内容：以柑桔种子为例，完成从 外植体表面消毒到接种整个过程的操作。 每人均独立操作完成。 实验仪器： 3、实验仪器：主要为超净工作台等。
植物细胞工程的基本设备 和无菌操作
福建农林大学生命科学学院 张 健
一、基本设备
1、植物细胞工程实验室的组成 洗涤室 灭菌室 配制室 无菌操作室 培养室 鉴定室 驯化移植室
2、基本设备 玻璃器皿和器械 无菌操作设备 培养设备 其它设备
二、无菌操作
1、各种灭菌方法及其适用范围 A 干热灭菌法 B 湿热灭菌法 C 熏蒸灭菌法 D 过滤灭菌法 E 药剂灭菌法 F 灼烧灭菌法 G 照射灭菌法
实验操作方法： 4 、 实验操作方法 ： 玻璃器皿的清洗与 干燥 药品用量计算 称取药品 大量元素母液的配制 微量元素母 液的配制 钙盐和铁盐母液的配 制 激素及其它有机物母液的配制.
5、作业： 作业： MS培养基配方需要量计算配制 1）按MS培养基配方需要量计算配制 100ml母液所需药品量 母液所需药品量、 100ml母液所需药品量、母液浓度及配制 500ml培养基各种母液吸取量 500ml培养基各种母液吸取量 2）为什么在配制培养基之前要先配制 ） 母液？ 母液？
作业： 5、 作业： 高压蒸汽灭菌注意事项有哪些？ 1）高压蒸汽灭菌注意事项有哪些？ 列表计算配制300ml下列培养基 300ml 下列培养基（ 2 ） 列表计算配制 300ml 下列培养基 （ pH 所需的各种母液及其它成分用量。 ＝5.8）所需的各种母液及其它成分用量。 A MS基本培养基附加琼脂10g/L B MS 基 本 培 养 基 附 加 IAA1mg/L 、 BA2mg/L、琼脂10g/L、蔗糖30g/L