the 古静燕李雪萍海洋放线菌 %抗肿瘤成分研究guide download

!第!"卷!第#期!
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中国海洋大学学报
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海洋放线菌;+"<=%抗肿瘤成分研究"
古静燕%!$!李雪萍>!朱天骄%!李德海%!顾谦群%""
!%?中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室$医药学院$山东青岛$@@"">%$?绵阳师范学院化学与化工学院$四川绵阳@$%"""%
>?山东省青岛疗养院$山东青岛$@@"7%"
摘!要!!采用活性追踪的方法$经硅胶柱色谱&凝胶3A B C9D A E.6=$"&制备液相从其活性组分中分离得到!个异黄酮类
化合物’根据化合物的光谱特征和理化性质$结合文献$分别鉴定为F A G H I J A H G!%"&D9H D K A H G!$"&!(!L A J C M E:=@$7=D H=
C:D N M E:=H I M O P9Q M G A I!>"和!(=C:D N M E:H G O P9Q M G A!!"$其中化合物!和"为首次从海洋放线菌中分离得到’抗肿瘤活性评
价表明$!个化合物均显示弱的细胞毒活性’
关键词!!海洋放线菌%异黄酮%抗肿瘤活性
中图法分类号!!($<$?77!!!!!文献标志码!!-!!!!!文章编号!!%@7$=#%7!!$"%"""#="7$=">
!!海洋放线菌由于能高效的生产结构奇特&数量众多&生理活性多样的次级代谢产物$一直是海洋天然产物研究的重点’本研究室以&><<肿瘤细胞株体外抗肿瘤活性为筛选模型$开展了海洋放线菌!包括来源于浅海海泥&深海海泥&海洋动植物共附生&红树林等多种生态"的分离&筛选工作’菌株;+"<=%发酵液的乙酸乙酯提取物显示了稳定的细胞生长抑制活性$采用活性追踪的分离方法从其活性部位中分离得到!个异黄酮类化合物’本文主要报道这些化合物的提取分离&结构鉴定和活性测定’
%!材料与方法
%?%仪器与试剂
质谱用;=4*/1.4)8-R.*S-.R--"7@ .,型质谱仪型质谱仪$核磁共振谱用日本T’= *.T08=’,&@""型核磁共振仪测定’制备用高效液相色谱仪#日本岛津公司产品!.,=@-+$3&+=8$" -2&检测器$3,.=%"-2型系统控制器$,9B U A P P&9N V ,%<柱##"L$%"L LW$#"L L"’柱层析及薄层层析用硅胶6!%"!!""L"#青岛海洋化工集团公司’3A B C9D A E.6=$"#&C9N L9U H9公司’活性测试采用&><<肿瘤细胞’胎牛血清!/S3"和(&8)=%@!"细胞培养基分别为6:=U P M G A公司!,9J?0M?34/7$%"和R)S,*S(.公司产品’丽丝胺罗丹明S!3(S"为3H F= L9公司产品’
%?$菌种发酵
按培养微生物的常规方法$取菌种适量$接种到高氏%号琼脂固体斜面培养基上$在$<X培养箱中培养!D’用接种针挑取适量孢子和菌体$接种到含%""L.种子培养液!葡萄糖$Y$可溶性淀粉%Y$酵母提取物%Y$牛肉膏"?>Y$Z$6&*!"?""#Y$8F3*!"?""#Y$ ,9,*>"?"$Y$人工海水配制$B6值调至7?""的#"" L.三角烧瓶中$置于摇床中$在$<X&%$"N)L H G条件下培养!<C$获得种子培养液’取该种子培养液按# Y的接种量接种到内装%#"L.培养液!成分同上"的#""L.三角烧瓶中$置于$<X&%$"N)L H G的摇床上发酵7D$在培养结束!C前按照>"F).加入[-+=%@树脂$过滤树脂$即得菌株发酵物’
%?>提取物的制备
将富集了菌株培养物的树脂加入丙酮搅拌过夜$过滤后取清液$浓缩至干$用丙酮提取树脂$次后$合并萃取液$浓缩至干$得总浸膏’
%?!活性成分的追踪分离
浸膏拌硅胶过柱$以石油醚\氯仿\甲醇梯度洗脱$得到%"个组分/N%!/N%"’每个组分经上述活性测试方法进行活性测试$取活性组分#经3A B C9D A E .6=$"$氯仿=甲醇!%\%"洗脱$正相硅胶加压柱$最后经半制备反相高效液相色谱$甲醇=水洗脱$物分别得到化合物%!!?$!L F"$化合物$!%"?%$L F"$化合物>!>?#7L F"$化合物!!%?>"L F"’
%?#活性测试
按照文献*%+采用3(S!I]P O M N C M D9L H G A S$丽丝胺罗丹明S"法结合显微镜观察细胞形态变化’
" " "基金项目#微生物资源前期开发国家重点实验室开放基金!3Z.8(="<"@"%"资助
收稿日期#$""^=%$=$#%修订日期#$"%"=">=%7
作者简介#古静燕!%^7@="$女$博士生$讲师$从事天然药物化学与资源微生物学研究’’=L9H P#F]_H G F:9G7@#:9C M M?U G 通讯作者#4A P#<@=#>$=<$">$"@#%’=L9H P#F]‘H9G‘#M]U?A D]?U G
#期古静燕$等#海洋放线菌;+"<=%抗肿瘤成分研究
$!结果
$?%化合物结构鉴定
化合物#!淡黄色晶体$阴离子’3)=83在L)K$@^处
给出准离子峰*8=6+$提示分子量为$7"$结合%6=
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$?$抗肿瘤活性
采用3(S法测定了!个异黄酮化合物的体外抗肿瘤活性$结果表明$!个化合物均有弱的活性$在#" "F)L P加样浓度下$化合物%&$&>&!对肿瘤细胞的抑制率分别%^?^"$%^?%7$%@?>>$%>?""’
>!讨论
异黄酮类化合物广泛的分布于植物中$尤其是豆类植物中最为常见$然而也陆续有众多的文献报道在微生物中发现了异黄酮*@=<+’据文献*^=%%+报道$以F A G H I J A H G&D9H D K A H G为代表的大豆异黄酮具有抗癌&抗心血管疾病&抗骨质疏松症&抗妇女更年期综合症等多种作用’其抗肿瘤活性被认为是通过以下几个途径实现的#!%"类雌激素样作用%!$"抑制肿瘤细胞合成过程中所需酶%!>"抗氧化作用%!!"调节细胞周期蛋白及凋亡相关蛋白表达%!#"抑制肿瘤血管生成$间接抑制肿瘤细胞生长’本文首次从海洋放线菌;+"<=%中发现的$个异黄酮类化合物!(=L A J C M E:=@$7=D H C:D N M E:= H I M O P9Q M G A I&!(=C:D N M E:H G O P9Q M G A丰富了海洋放线菌中次级代谢产物种类$扩大了异黄酮类化合物的来源’
参考文献!
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