微生物斜面接种、高压锅使用、细胞染色实验
微生物实验技术操作规范示例
微生物实验技术操作规范示例
2.试管的包扎
微生物实验技术操作规范示例
微生物实验技术操作规范示例
（五）获得菌种的途径：
1.从专业机构、科研机构、高等院校等获 取
*广东省微生物研究所微生物菌种保 藏中心中国广州市先烈中路一百号省微生 物所实验楼五楼
电话：(020)37656629,35973334 *有微生物教学任务的高等院校 2.通过菌种分离
微生物实验技术操作规 范示例
2020/11/14
微生物实验技术操作规范示例
（一）斜面接种无菌操作技术
微生物实验技术操作规范示例
微生物实验技术操作规范示例
微生物实验技术操作规范示例
(二）倒平板及平板划线接种
1.倒平板：按无菌要求，在火焰旁操作，取融化并冷却至 不烫手的固化培养基（约50℃），倒入无菌培养皿中，倒 量以铺满皿底为限，不超过培养皿高度的1/3。
微生物实验技术操作规范示例
2.平板划线接种：
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（三）棉塞的制作
制作棉塞原则上采用普通棉花（非脱脂棉）
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(四）玻璃仪器的包扎
微生物实验技术操作规范示例
1.移液管的包扎
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(1) 从自来水中分离大肠杆菌
我国城市自来水卫生标准，大肠杆菌指 Nhomakorabea<10个／升
微生物实验技术操作规范示例
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3rew
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
微生物常用的接种方法
微生物常用的接种方法微生物接种是微生物学实验中的一项重要步骤，它可以使微生物在实验室中进行培养和繁殖，为微生物学研究提供了基础条件。
接种方法的选择对于微生物的培养和实验结果至关重要，下面将介绍微生物常用的接种方法。
一、平板接种法。
平板接种法是微生物学实验中最常用的一种接种方法。
首先将琼脂平板加热至液态状态，然后将所需接种的微生物悬液均匀地倒在琼脂平板表面，用接种棒均匀涂抹，使微生物均匀分布在琼脂平板表面。
接种后将琼脂平板放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物形成菌落后进行观察和实验。
二、液体培养基接种法。
液体培养基接种法适用于需要大量培养微生物的实验。
首先将所需的液体培养基倒入培养瓶中，然后将微生物接种悬液加入培养瓶中，用接种棒均匀搅拌使微生物均匀分布在培养基中。
接种后将培养瓶放置在恒温摇床上进行培养，待微生物培养达到所需数量后进行后续实验。
三、斜面接种法。
斜面接种法适用于需要进行纯培养的微生物。
首先将琼脂斜面培养基倾斜放置，等琼脂凝固后将微生物接种在斜面上并均匀涂抹，使微生物均匀分布在斜面上。
接种后将琼脂斜面培养基放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物形成菌落后进行观察和纯培养。
四、深层接种法。
深层接种法适用于需要进行微生物氧气需求的实验。
首先将所需的琼脂深层培养基加热至液态状态，然后将微生物接种悬液倒入琼脂深层培养基中并均匀混合，接种后将琼脂深层培养基倒入培养瓶中，待琼脂凝固后放置在恒温培养箱中进行培养，待微生物培养达到所需数量后进行后续实验。
以上就是微生物常用的接种方法，不同的实验需要选择合适的接种方法来保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文所介绍的接种方法能够帮助到需要进行微生物学实验的研究人员，提高实验效率和准确性。
微生物实验总结
灭菌：1．热力灭菌法干热灭菌法：160-170℃，2h高压蒸汽灭菌法：103.4kPa (121℃)，15-30min 2．紫外线灭菌：265-266nm，破坏DNA构型培养基：1.液体培养基——基础培养、生化反应、糖发酵管2.固体培养基（斜面培养基）——纯培养、短期保存菌株3.半固体培养基——检测细菌动力化脓性球菌的分离鉴定：致病性肠道杆菌的分离鉴定：平板划线法接种工具：接种环培养基——化脓菌：血平板，肠道菌：SS平板注意事项：菌量适当；遵守无菌操作原则，全程避免杂菌污染；划线力度、划线角度观察细菌的形态特征1.单染色法：观察细菌形态，但不能鉴别2.复染色法（观察形态，鉴别细菌）革兰染色法、抗酸染色法3.特殊染色法——特殊结构或特殊成分的染色常见应用：荚膜、芽胞、鞭毛、异染颗粒染色革兰染色法：1.涂片标记载玻片→滴加标本→用接种环涂布均匀，形成直径约1cm菌膜2.干燥：空气中，或酒精灯火焰上方热空气中3.固定：迅速通过酒精灯外焰三次，冷却4.染色初染：滴加结晶紫，覆盖菌膜，静臵1min，流水冲洗(背面) 媒染：滴加卢戈碘液，覆盖菌膜，静臵1min，流水冲洗脱色：玻片浸入95%乙醇中，冲洗至染料不再溶下为止，水洗(背面)复染：滴加石炭酸稀释复红，覆盖菌膜，静臵30s，流水冲洗(背面)5.干燥(滤纸吸干水分)、镜检(油浸镜)甘露醇发酵实验培养基：甘露醇发酵管接种工具：接种针方法1灭菌接种针2从斜面沾取菌落3接种至培养基液面下4灭菌接种针5培养18-24h结果判定阳性：蓝→黄致病性葡萄球菌血浆凝固酶实验玻片凝集试验方法1玻片划分两格2灭菌接种环3分别取盐水或兔血浆于两4取待检菌，盐水中研磨5灭菌接种环6取待检菌，兔血浆中研磨7摇动玻片，2min内观察结果判断阳性：出现凝集致病性葡萄球菌常(+)药敏试验培养基：普通平板方法：药片扩散法按照无菌操作原则，用接种环取少量纯培养物接种于平板上，反复交叉密集划线镊子灭菌，冷却，分别取4种药片，平贴于平板上，轻轻压药片间距>24mm、药片距平板边缘>15mm静臵15min，平板倒臵培养16-18h，观察结果因子血清鉴定步骤鉴定属：A-E多价血清鉴定组：A-E单价0抗体血清鉴定种：H抗体血清注意事项血清量足够，避免干燥每格研磨后，灭菌接种环，避免交叉污染2min内观察结果在SS琼脂平板上，致病性肠道杆菌菌落特征是直径小，无色或淡红色半透明，非致病性肠道杆菌的菌落特征是直径中等大小，深红色。
微生物实验中的接种分离和培养操作步骤
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、实验材料1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
食品生物技术实验指导
食品生物技术实验指导实验一、微生物保藏菌种的活化一.目的要求学习各类菌种的活化方法。
二、实验器材：斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。
三、实验内容斜面冰箱保藏菌种→接种环灼烧无菌→挑取一环菌苔→新鲜配置的斜面培养基→划线→恒温培养→菌苔长丰满后备用。
四、思考题1.什么是菌种的活化？2.保藏菌种在使用时为何要活化？实验二、紫外线诱变一.目的要求通过本次实验课，使学生学会单细胞悬浮液的制备方法，掌握紫外线诱变的机理及具体操作。
二.实验器材：紫外线诱变箱、斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、培养皿、玻璃珠、磁力震荡器、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、三角瓶、水浴锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。
三、实验内容 6ml活 化28℃2-3 单胞悬液无菌平皿紫外线诱变 取诱变液1ml2′无菌水9ml 10-1-2-3-4 -5分别加入无菌空平皿 倒入培养基 迅速摇匀 凝固后 恒温培养四、思考题1.什么是诱变育种？2.紫外线诱变育种的机理是什么？实验三、PDA 培养基的制备一.目的要求学习PDA 培养基的配制的方法。
二.实验器材：菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、蒸锅、高压蒸汽灭菌锅、电炉、葡萄糖、琼脂、马铃薯。
三、实验内容马铃薯去皮→称量20g→切条（或切块）→加1000ml水→煮沸30分钟→双层纱布过滤→取滤液→补足水分→加20g琼脂→加热融化→加20g葡萄糖→pH自然→趁热分装于三角瓶→121℃灭菌30分钟。
四、思考题1.PDA培养基属于哪类培养基？2.配培养基时为何最后放入葡萄糖？3.PDA培养基适合培养哪一类细菌？实验四、乳酸菌发酵剂的制备一.目的要求学习乳酸菌发酵剂的制备方法。
二.实验器材：菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、磷酸二氢钾、琼脂。
微生物接种技术
实验八微生物无菌接种技术一、实验原理微生物接种就是在无菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上扩大培养的技术。
要想得到大量的菌种，适应生产、科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。
接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但它们的基本要求是相同的。
通常接种都应在空气经过消毒灭菌的接种室或接种箱或超净工作台内完成。
二、实验步骤1.斜面接种（1）左手夹住试管（2）灼烧接种环（3）拔出棉塞，夹在小指、无名指上，管口过火（4）取菌、接种，接种后在火焰上方迅速塞好棉塞（5）写好标签（菌种名、日期、接种者姓名），贴于斜面正上方前端约1cm处.（6）于37度培养箱中培养24小时。
（全班统一装入一保鲜袋）（7）一星期后观察分离效果，拍照，分析结果2.平板培养基（平板）制备（1）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。
（2）右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。
（3）用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10到20ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
（4）等待平板冷却凝固。
3.涂布平板法（以小组为单位，对混合菌菌悬液进行涂布分离）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
（2）将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
(3) 取少量菌液滴加到培养基表面。
（4）将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s。
（5）用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。
（6）将接种好的平板在皿底做好标记。
（7）涂布分离的平板全班一起放入保鲜袋中，37度培养箱中倒置培养24h。
（8）一星期后以小组为单位观察分离效果，拍照，分析结果4.划线分离：从污染平板中纯化细菌菌落（每人1个平板）(1)用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗双手,进行消毒处理。
细菌的斜面接种实验原理
细菌的斜面接种实验原理
细菌的斜面接种实验是一种常见的微生物学实验，用于检测细菌的生长和纯化。
其原理是将细菌样品均匀地涂覆在含有营养物质的平斜面培养基上，然后在适宜的温度下进行培养，以促进细菌的生长和繁殖。
在实验过程中，需要先准备好含有营养物质的平斜面培养基，并将其倾斜放置，使其形成约45度的斜面。
然后，将待检测的细菌样品通过火焰消毒的方式取样，用无菌的细胞刮片将其均匀地涂覆在斜面上。
接着将平板培养基倒置放置在适宜的温度下进行培养，以促进细菌的生长和繁殖。
通过观察斜面上的细菌生长情况，可以判断细菌的数量、形态和生长情况，从而对其进行纯化和鉴定。
此外，斜面接种实验还可用于检测细菌对不同抗生素的敏感性，以指导临床用药。
细菌斜面接种实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌斜面接种的基本操作方法。
2. 熟悉斜面培养基的制作和保存方法。
3. 学习通过斜面接种法分离纯化细菌。
4. 了解细菌在不同培养基上的生长特性。
二、实验原理斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，通过将细菌接种到含有营养成分的斜面培养基上，使细菌在适宜的环境中繁殖生长。
斜面培养基通常由琼脂、蛋白胨、牛肉膏等成分组成，提供细菌生长所需的碳源、氮源、生长因子等。
三、实验材料1. 细菌样品：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 斜面培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面。
3. 实验器材：接种环、酒精灯、无菌试管、无菌培养皿、无菌水、记号笔等。
四、实验步骤1. 斜面培养基制备- 称取25g牛肉膏蛋白胨琼脂，加入100ml蒸馏水，加热溶解。
- 将溶液煮沸10分钟，以去除杂菌。
- 待溶液冷却至50-60℃时，加入无菌水调整pH至7.0-7.2。
- 将溶液分装至无菌试管中，每管10ml。
- 将试管置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌15分钟。
- 灭菌后，待培养基冷却至45-50℃时，将试管倾斜45°，使培养基沿试管壁流下，形成斜面。
- 待培养基凝固后，将试管倒置，置于无菌环境中保存。
2. 斜面接种- 将待接种的细菌样品接种环在酒精灯上灼烧灭菌。
- 待接种环冷却后，挑取适量细菌样品，沿斜面培养基壁涂抹。
- 重复上述步骤，接种第二管斜面培养基。
3. 培养- 将接种后的斜面培养基放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
4. 观察与记录- 观察斜面培养基上的细菌生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上生长良好，形成金黄色、表面光滑、边缘整齐的菌落。
2. 大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上生长良好，形成白色、表面光滑、边缘整齐的菌落。
六、实验讨论1. 斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，适用于分离纯化细菌。
2. 在斜面接种过程中，无菌操作至关重要，避免杂菌污染。
斜面画线接种实验报告
斜面画线接种实验报告实验目的通过斜面画线接种实验，观察和研究斜面对植物纵向生长的影响，揭示植物斜面生长的适应性和生长规律。
实验器材1. 青色画线斜面2. 植物种子3. 培养皿4. 温湿度计5. 喷雾器6. 显微镜实验步骤1. 准备工作将青色画线斜面放置于实验台上并固定好，保证斜面的稳定性。
2. 种子处理将一批相同类型的植物种子取出，并进行适当的处理，如清洗、消毒或浸泡等。
处理完毕后，用纸巾将种子表面的水分擦干。
3. 斜面接种将处理好的种子均匀撒在青色画线斜面的上方，使种子自然滑下斜面，并最终沉积在底部。
注意保持种子的均匀性和密度一致。
4. 浇水与环境调节根据不同植物的生长需求，控制适宜的温度、湿度和光照条件。
使用喷雾器进行适量的浇水，保持斜面画线接种区域的湿润。
5. 观察记录每天定时观察斜面上植物的生长情况，包括发芽率、幼苗高度、叶片颜色等。
注意记录并比较不同位置的植物生长情况。
6. 收集数据在观察期间，使用显微镜对植物进行进一步的观察和测量，包括根系形态、叶片表面结构等。
实验结果及分析经过一段时间的观察和记录，我们得到了以下实验结果和分析：1. 发芽率通过观察不同位置的植物，我们发现斜面上的植物发芽率普遍高于普通直立生长条件下的植物。
这可能是因为斜面画线接种提供了更好的通风和光照条件，从而促进了种子的萌发和生长。
2. 幼苗高度在观察期间，我们发现斜面上的植物幼苗高度普遍较低。
这可能是因为斜面的倾斜度使得植物必须用更多的能量来抵抗重力，从而减缓生长速度。
3. 根系形态使用显微镜观察后发现，斜面上植物的根系较为发达且纵向延伸较长。
这可能是因为斜面上植物为了更好地摄取养分和水分，适应了斜面画线接种的环境，根系发育出较长且较深的根。
4. 叶片表面结构通过显微镜观察发现，斜面上植物的叶片表面结构相比直立生长的植物有所变化。
叶片表面出现了更多的气孔和刺状突起，可能是植物为了适应斜面环境而产生的适应性结构。
微生物斜面接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
• 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新 鲜斜面培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人 姓名
2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四
指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量 放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
3）接种： （4）拔管塞： 用右手的
无名指、小指和手掌边 先后取下菌种管和待接 试管的管塞，让试管口 缓缓过火灭菌(切勿烧 得过烫)
※ 斜面接种
3）接种： （5）取菌: 接种环冷却，轻沾取
少量菌体或胞子，然后将接 种环移出菌种管，注意不要 使接种环碰到管壁，取出后 带菌接种环不可通过火焰。
微生物斜面接种实验
一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：
指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染 及其干扰的一系列操作方法和有关措施。
二、 微生物接种技术
超净工作台的使用
斜面接种的操作方法
无菌环境的要求与保持
超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施， 以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供 某些程度的保护以防污染并保护操作者。
※ 斜面接种
3）接种：
（6）接种: – 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管 。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线 ，勿划破培养基。 – 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直 线作斜面接种，直线接种可观察不种：
(7) 塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将 管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时 纳入不洁空气。
微生物检验细菌的接种方法
微⽣物检验细菌的接种⽅法微⽣物检验细菌的接种⽅法 常⽤的细菌接种⽅法有平板划线分离法、斜⾯接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。
下⾯是yjbys ⼩编为⼤家带来的关于微⽣物检验细菌的接种⽅法的知识，欢迎阅读。
⼀、平板划线分离法 平板划线分离法:是指把混杂在⼀起的微⽣物或同⼀微⽣物群体中的不同细胞⽤接种环在平板培养基表⾯，通过分区划线稀释⽽得到较多独⽴分布的单个细胞，经培养后⽣长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微⽣物的纯种。
有时这种单菌落并⾮都由单个细胞繁殖⽽来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微⽣物样品在固体培养基表⾯多次作“由点到线”稀释⽽达到分离⽬的的。
为⽅便划线，⼀般培养基不宜太薄，每⽫约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表⾯光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种(如图1， A、B)。
分区划线法是将平板分四区，故⼜称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换⼀次⾓度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线; 另⼀种连续划线法是从平板边缘⼀点开始，连续作波浪式划线直到平板的另⼀端为⽌，当中不需灼烧接种环上的菌。
1)连续划线法 将琼脂平⽫半开盖倒置于培养箱内⾄⽆冷凝⽔，接种环于酒精灯外焰烧⾄红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环⾄红。
轻轻摇匀待接种试管，左⼿⼿⼼托待接种试管底侧部，右⼿执接种环，右⼿⼩指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插⼊待接接种液中，蘸⼀下，取满⼀环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开⽫盖的缝隙伸⼊平板，在平板边缘空⽩处接触⼀下使接种环冷却，然后以⽆菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平⽫盖约30°，右⼿将环伸进平⽫，将菌种点种在平板边缘⼀处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘(如图2)，抽出接种环，盖上平⽫盖，然后将接种环上多余的培养液在⽕焰中灼烧，打开平⽫盖约30°伸⼊接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表⾯轻巧滑动划线，接种环不要嵌⼊培养基内划破培养基，线条要平⾏密集，充分利⽤平板表⾯积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上⽫盖。
斜面的接种实验报告
一、实验目的1. 熟悉斜面培养基的基本特性及其在微生物培养中的应用。
2. 掌握斜面接种法的操作步骤，提高无菌操作技能。
3. 通过实验，学习微生物的纯培养方法。
二、实验原理斜面培养基是一种在微生物学实验中常用的培养基，其特点是培养基的琼脂含量较高，凝固后形成斜面，有利于微生物的生长和观察。
斜面接种法是一种将微生物从一种培养基接种到另一种培养基上的方法，通过无菌操作，确保接种过程的无菌性，从而获得纯培养。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌2. 斜面培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂3. 接种工具：接种环、酒精灯、无菌操作台4. 其他：无菌生理盐水、无菌棉塞、无菌培养皿等四、实验步骤1. 无菌操作台的准备在无菌操作台内，将实验材料、接种工具等放置在无菌操作台上，确保实验环境的无菌性。
2. 菌种复苏将保存的菌种接种到牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基上，在37℃恒温培养箱中培养24小时，待菌落生长后，用无菌生理盐水洗下菌苔，制成菌悬液。
3. 斜面接种将菌悬液用接种环取少量，在酒精灯火焰上灼烧，待接种环冷却后，蘸取菌悬液，在斜面培养基上划线接种。
4. 无菌操作在接种过程中，严格遵循无菌操作原则，确保接种过程的无菌性。
5. 培养与观察将接种后的斜面培养基在37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
五、实验结果接种后的斜面培养基上，金黄色葡萄球菌菌落生长良好，菌落呈金黄色，形态规则，边缘整齐。
六、实验分析1. 斜面培养基的琼脂含量较高，凝固后形成斜面，有利于微生物的生长和观察。
2. 斜面接种法是一种将微生物从一种培养基接种到另一种培养基上的方法，通过无菌操作，确保接种过程的无菌性，从而获得纯培养。
3. 在实验过程中，严格遵循无菌操作原则，是获得纯培养的关键。
七、实验总结本次实验成功完成了斜面接种操作，掌握了斜面培养基的基本特性及其在微生物培养中的应用，提高了无菌操作技能。
在实验过程中，应严格遵守无菌操作原则，确保实验结果的准确性。
斜面培养基实验报告
一、实验目的1. 掌握斜面培养基的制备方法。
2. 了解斜面培养基在微生物培养中的应用。
3. 熟悉斜面培养基的接种方法。
二、实验原理斜面培养基是一种固体培养基，其主要成分是琼脂。
琼脂是一种天然的多糖，具有良好的生物相容性和生物降解性，可以提供微生物生长所需的营养物质。
斜面培养基在微生物培养中主要用于菌种扩大、纯化和保藏。
三、实验材料1. 琼脂：2.0g2. 蒸馏水：100mL3. pH试纸4. 灭菌锅5. 灭菌接种环6. 微生物培养箱7. 试管四、实验步骤1. 配制培养基：称取2.0g琼脂，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀后煮沸，使琼脂完全溶解。
用pH试纸测试培养基的pH值，如不符合要求，可用10%HCl或10%NaOH 进行调节。
2. 灭菌：将配制好的培养基分装到试管中，每管约10mL。
将试管口用棉花塞住，放入灭菌锅中，进行高压蒸汽灭菌，压力为0.11MPa，灭菌时间为15分钟。
3. 冷却：将灭菌后的试管取出，待培养基冷却至约60℃时，进行斜面接种。
4. 接种：用灭菌接种环挑取适量菌种，从培养基底部向上划一道直线，然后以蛇形划线接种在琼脂斜面上。
5. 培养：将接种后的试管放入微生物培养箱中，培养温度为37℃，培养时间为24小时。
五、实验结果与分析1. 成功制备斜面培养基，培养基呈透明状，表面光滑。
2. 接种后的斜面培养基上出现了明显的菌落，说明菌种已成功接种。
3. 通过观察菌落形态、颜色和生长速度，可以初步判断菌种的特征。
六、实验总结1. 本实验成功制备了斜面培养基，并掌握了斜面培养基的接种方法。
2. 斜面培养基在微生物培养中具有重要作用，可以用于菌种扩大、纯化和保藏。
3. 在进行斜面培养基实验时，应注意以下几点：a. 培养基的配制要准确，避免误差；b. 灭菌过程要严格，确保培养基的无菌性；c. 接种时要避免污染，保证菌种的纯度。
七、实验反思1. 在本实验中，我掌握了斜面培养基的制备方法，提高了自己的实验技能。
斜面接种法
斜面接种法
斜面接种法是一种常用于病原菌细胞的繁殖和生长的方法。
其原理基于在斜面（如琼脂或培养基）上方便生长细胞和菌落，而不必在液态培养基中操作。
与其他接种方法相比，使用斜面接种法具有多个优点。
首先，该方法可以有效减少液态培养基中的细胞密度，使得细胞之间有更多空间，从而有利于细胞的生长和分裂。
其次，与直接镊子切割并接种细胞的方法相比，由于使用了扩展涂法，可以有效减少细胞的破坏。
斜面接种法不仅仅可以用于细菌的接种，也可以用于真菌和酵母等其他微生物的接种。
而对于细菌的接种，一般的操作流程为：首先，将琼脂或其他培养基倒入培养皿中，并在培养基表面生成一个斜面；接着，将所需的细菌放入琼脂上，并用铁环进行扩展涂抹。
最后，在琼脂表面的菌落出现时，可以对其进行观察和分离，并进行进一步的检测和分析。
然而，斜面接种法也存在一些缺点。
首先，由于斜面的倾斜角度通常为45度，因此难以在表面上生长某些类型的微生物。
其次，该方法的操作比其他繁殖方法更加复杂，需要熟练的技能才能够得到一个良好的结果。
除了上述的限制，斜面接种法还存在一些其他的注意事项。
例如，在斜面上扩展涂抹的时候，要避免过度深度，否则可能会破坏菌落的生长。
同时，在使用新制备的琼脂时，也需要进行严格的消毒和灭菌，以避免可能的感染和交叉污染。
总的来说，斜面接种法是一种常用的微生物繁殖和检测的方法，是实验室中必不可少的技术之一。
通过使用斜面接种法可以得到高质量的细菌、酵母和真菌等微生物的纯化菌株，从而有助于进一步的微生物研究和应用。
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斜面接种
将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法，称为斜面接种法。
其方法步骤如下：
首先，点燃酒精灯。
将菌种和斜面培养基的两只试管平行放在左手上，用拇指与其它四指夹住，并使中指位于两试管之间，两试管的管口齐平。
其次，用右手先将棉塞拧转松动，并稍拉出一些，以利接种时拔出。
第三，右手持接种针，在酒精灯将针凡糠稚蘸烀鹁。
针头以上凡是接种时可能进入试管的部分，均应用火灼烧。
以下操作都要使试管口靠近火旁。
第四，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3秒钟左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。
第五，将烧过的接种针伸入菌种管内，先将针头接触培养基上没有菌的部位（如斜面的顶端），使其冷却，以免烫死被接种的菌体。
然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针抽出试管，接种针抽出时不要使针头部分碰到管壁和管口，取出后，不可使针头通过火焰，更不可触及其它无关物品或桌面。
第六，迅速将接种针伸进另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。
划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面面积，但不要将培养基划破。
第七，烧灼试管口，将棉塞塞上。
塞棉塞时，不要移动试管迎接棉塞，以免试管在移动中纳入可能含菌的空气。
第八，将针头在火焰上烧灼灭菌。
放回原处后，腾出手将棉塞塞紧。
高压灭菌锅的使用
1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全
排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。
5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
6．将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。
灭菌锅使用注意事项
a 待灭菌的物品放置不宜过紧；
b 必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果；
c 灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。
须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖；
d 现在已有微电脑自动控制的高压蒸气灭菌锅，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。
细菌简单染色技术
5.1涂片取两块洁净无油的载玻片，在无菌的条件下各滴一小滴生理盐水(或蒸溜水)于玻片中央，用接种环以无菌操作，分别从枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌和大肠杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。
若用菌悬液(或液体培养物)涂片，可用接种环挑取2～3环直接涂于载玻片上。
注意滴生理盐水（蒸馏水）和取菌时不宜过多且涂抹要均匀，不宜过厚。
5.2干燥室温自然干燥。
也可以将涂面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥。
但切勿离火焰太近，因温度太高会破坏菌体形态。
5.3固定如用加热干燥，固定与干燥合为一步，方法同干燥。
涂片、干燥和热固定。
5.4染色将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液1～2滴于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。
吕氏碱性美蓝染色1～2min，石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约1min。
5.5水洗倾去染液，用自来水从载玻片一端轻轻冲洗，直至从涂片上流下的水无色为止。
水洗时，不要水流直接冲洗涂面。
水流不宜过急、过大，以免涂片薄膜脱落。
5.6干燥甩去玻片上的水珠自然干燥、电吹风吹干或用吸水纸吸干均可以（注意勿擦去菌体）。
5.7镜检涂片干后镜检。
涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。