2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
中国药典2020微生物限度检查法
我国药典2020微生物限度检查法1.引言我国药典2020版本中，微生物限度检查法是保证药品质量和安全的重要工具。
微生物限度指的是药品中的微生物数量的限定，包括细菌、酵母和霉菌等。
微生物限度检查法的执行对于药品的生产和使用至关重要，它能够保证药品在生产、存储和使用过程中不受到微生物污染，从而确保药品的质量和安全。
2.微生物限度检查法的内容和流程微生物限度检查法主要包括取样、制备试液、接种培养和菌落计数等步骤。
首先要进行取样，从样品中取得代表性的样品；然后是制备试液，将取得的样品溶解或稀释；接下来是接种培养，将制备好的试液接种到适当的培养基上培养；最后是菌落计数，根据培养后的菌落数量来确定微生物的限度。
3.微生物限度检查法的意义微生物限度检查法的实施，可以有效地控制药品中微生物数量的合理范围内，防止药品在生产、储存和使用过程中因微生物污染而导致药品变质、降解或产生毒性。
采用微生物限度检查法，可以杜绝因微生物污染而引起的医源性感染，保障患者用药安全。
4.对我国药典2020微生物限度检查法的个人观点和理解微生物限度检查法是药品质量控制中不可或缺的一部分，它直接关系到患者的用药安全和药品的治疗效果。
我国药典2020版本对微生物限度检查法做了全面更新和完善，包括对检查方法、标准和限度值的详细规定和说明，这对于药品的生产企业和监管部门都具有重要的指导意义。
在日常生产和监管中，执行我国药典2020版的微生物限度检查法，将有助于提高药品的质量和安全水平，保护患者的用药权益，为人民健康事业做出贡献。
5.总结我国药典2020版本中的微生物限度检查法，是药品质量控制中的重要环节。
通过严格执行微生物限度检查法，可以有效地控制药品中微生物数量，防止药品因微生物污染而造成质量问题和安全隐患。
我国药典2020版的微生物限度检查法的更新和完善，将为药品生产和监管提供科学的依据和指导。
在实践中要严格执行微生物限度检查法，确保药品质量和安全，保障患者的用药权益。
强力枇杷露微生物限度检查方法学验证
强力枇杷露微生物限度检查方法学验证[摘要]目的：验证强力枇杷露的微生物限度检查方法。
方法：根据《中国药典》（2020版四部）非无菌产品微生物限度检查法规定：通则1105、1106、1107进行方法适用性试验。
结果：采用倾注法验证需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计，回收率在0.5~2范围内；采用常规法验证控制菌大肠埃希杆菌，检出阳性菌，阴性对照未检出。
结论：验证的方法可作为强力枇杷露微生物限度的检查方法。
[关键词]微生物限度检查;强力枇杷露;方法学适用性试验Validation of Microbial Limit MethodologyforQiangLiPiPa SyrupLi Na Jiang Jin-Feng Tang Xin-Zong*(YunNan YunHe Pharmaceutical INC.Ge Jiu Yun Nan 661000 China)［Abstract］Objective：The microbial limit test method of QiangLiPiPa Syrup was verified. Methods：Microbial limit tese forQiangLiPiPa Syrupwas performed according to Chinese Pharmacopoeia of 2020 versionGeneral Principles 1105、1106、1107. Results：The total bacterial count and the total molds and yeasts count adopted the tilt-pour process method.The recoveries was all in the range of 0.5 ~ 2.The control bacteria ( Escherichia coli) were verified by the routine method，the positive bacteria were detected，but negative control was not detected．Conclusion：The validated method can be used for the microbial limits of Qiang LI Pi Pa Syrup.［Key words］Microbial limit test;QiangLiPiPa Syrup;Methodological suitability test强力枇杷露是由枇杷叶、百部、罂粟壳、桑白皮、白前、桔梗、薄荷脑组成的中药复方制剂，收载于《中国药典》（2020版一部）[1]。
2020年药典中药饮片微生物限度检查法
2020年药典中药饮片微生物限度检查法在当今社会，中药饮片作为一种传统的中华医药制剂形式，其应用与研究已经历了漫长的历史。
为了确保中药饮片的质量安全，不仅需要对其有效成分进行分析检测，还需要对微生物限度进行检查。
而在2020年的药典中，围绕中药饮片微生物限度的检查法进行了更新和完善。
1. 背景及重要性：中药饮片是中华传统医学中的重要组成部分，其作为一种应用广泛的中药剂型，一直受到人们的青睐。
然而，由于中药饮片的原料和制剂过程相对复杂，很容易受到环境和操作等因素的影响，从而导致微生物的污染和滋生。
如果这些微生物超出了一定的限度，将对中药饮片的质量和安全造成不可忽视的影响，严重时可能对人体造成危害。
制定并完善中药饮片微生物限度检查法，对于保证中药饮片的质量安全具有重要意义。
2. 检查项目及标准：2020年药典中关于中药饮片微生物限度检查法的更新，将主要针对以下几个方面进行严格的检查：大肠菌群、霉菌和酵母菌。
这些微生物对中药饮片的污染可能性较高，因此对其限度的检查也显得尤为重要。
大肠菌群是指以大肠埃希菌为代表的一类微生物，其数量的增加可能会导致中毒等严重后果；而霉菌和酵母菌则会对中药饮片的有效成分造成破坏，同时也可能对使用者的健康带来风险。
根据2020年药典，对这些微生物的限度进行了更为严格的规定，以保证中药饮片的质量安全。
3. 检查方法及要求：随着科技的不断进步，中药饮片微生物限度的检查方法也在不断更新和完善。
目前，常用的检查方法主要包括菌落总数法和培养方法。
菌落总数法是指通过将中药饮片放入培养基中，培养一定时间后观察菌落的数量来判断其中微生物的含量；而培养方法则是指通过将中药饮片制成悬浊液，然后通过不同的培养基培养显微生物，进而得到微生物的数量和种类。
这些方法在有效检查微生物限度的也要求操作人员需严格掌握检查方法和操作规程，确保检查结果的准确性和可靠性。
4. 作者个人观点：作为一名从事中药研究的从业者，笔者深切地理解并赞同2020年药典中对中药饮片微生物限度检查法的更新和完善。
药品微生物检验的方法及应用分析
药品微生物检验的方法及应用分析摘要：药品微生物指标超标直接影响药品使用者的安全与健康，故需对药品微生物进行检验，该文分析了药品微生物检验中的无菌检查法和限度检查法，结合注射用头孢抗生素无菌检查和妇科胶囊微生物限度检查介绍了此二法的应用。
关键词：药品；微生物检验；检验方法药品用于治疗疾病，但被微生物污染的药品不但影响治疗效果，还会加重病情，而药品微生物检验是保证药品质量的重要手段[1]。
药品微生物污染事件屡见不鲜，已严重影响用药安全，要保证药品微生物检验结果的准确离不开检验方法的选择和应用，例如微生物限度检查方法影响检查结果的准确性，方法适用性的确认是确保检查结果准确可靠的关键环节[2]。
因此，本文对药品微生物检验的方法及应用进行了分析。
1药品微生物检验的方法1.1 无菌检查法要求无菌的药品必须进行无菌检查，所谓无菌检查即按照无菌检查标准及规定的检验条件检查是否有微生物污染。
无菌检查要求严格的无菌条件，并且操作的全过程都达到无菌要求，在这样的情况下仍检不出供试品内含有微生物判为合格。
为了满足无菌条件，应按相关标准验证和确认洁净度，即监测单向流空气区域、工作台面、环境中的悬浮粒子、浮游菌、沉降菌数量符合A级洁净度要求。
对药品进行无菌检查需验证检查方法的适用性，且药品及检验程序发生变化可能影响检验结果时需重新验证适用性。
验证适用性需对菌种及菌液制备、检查方法（薄膜过滤法或直接接种法）进行试验，并按相关要求判断结果。
《中国药典》2020年版三、四部对无菌检查的检验数量、检验量、阳性对照、阴性对照、供试品处理及接种营养基、结果判断作了明确规定。
例如注射剂批产量在101～500个时，接种每种培养基的最少检验数量为10个；供试品最少检验量在供试品装量为41～100ml时，每支供试品接入每种培养基的最少量为20ml；抗革兰氏阳性菌的供试品阳性对照菌为金黄葡萄球菌；采用薄膜过滤法；在培养基规定的温度培养至少14天；供试品管澄清或有浑浊但经确认无菌生长即合格。
2020年版《中国药典》通则 —“非无菌药品微生物限度标准”
2020年版《中国药典》通则“非无菌药品微生物限度标准”（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及、中药提取物及中药饮片的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。
2.用于手术、严重烧伤、严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表 1。
表 1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（cf u/g、cf u/m l或cf u/10c m2）霉菌和酵母菌总数（cf u/g、c fu/m l或cfu/10cm2）控制菌口服给药①固体制剂液体及半固体制剂103102102101不得检出大肠埃希菌（1g 或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g 或10ml）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂鼻用制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm2）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或10cm2）呼吸道吸入给药制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、或 10ml ） 阴道、尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g 、1ml 或 10cm 2）；中药制剂还不得检出梭菌（1g 、 1ml 或 10cm 2）直肠给药 固体制剂103102 不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 或 1ml ）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 、1ml 或 10cm 2）注 ①化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还不得检出沙门菌（10g 或 10ml ）。
银黄颗粒微生物限度检查法的方法适用性试验
银黄颗粒微生物限度检查法的方法适用性试验摘要：目的：建立银黄颗粒微生物限度检查方法并进行验证。
方法：按照《中国药典》2020年版四部的要求，对需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法和控制菌检查方法进行方法适用性试验。
结果：银黄颗粒可按常规法进行微生物限度检查。
结论：为能检出药品中被污染的微生物，应对该药品的微生物限度检查进行方法适用性试验。
关键词：银黄颗粒微生物限度检查方法适用性试验银黄颗粒由金银花提取物和黄芩提取物制得，用于外感风热、肺胃热盛所致的咽干、咽痛、喉核肿大、口渴、发热；急慢性扁桃体炎、急慢性咽炎、上呼吸道感染。
为保证能检出药品中被污染的微生物，应对微生物限度检查进行方法适用性试验。
1.试药、仪器与培养基1.1 试药银黄颗粒（成都神鹤药业有限责任公司）1.2 仪器电热恒温培养箱，电子天平，高压蒸汽灭菌器。
1.3 实验用菌种大肠埃希菌［CMCC〔B〕44 102］、金黄色葡萄球菌［CMCC〔B〕26 003］、枯草芽孢杆菌［CMCC〔B〕63 501］、白色念珠菌［CMCC〔F〕98 001］、黑曲霉［CMCC〔F〕98 003］,以上均为购自中国食品药品检定研究院0代菌株，本实验自行传代至第三代菌种。
1.4 培养基胰酪大豆胨琼脂培养基（20220120），沙氏葡萄糖琼脂培养基（20220228），胰酪大豆胨液体培养基（20220228），沙氏葡萄糖液体（20210210），麦康凯液体培养基（20210302），麦康凯琼脂培养基（20230308），北京奥博星生物科技有限责任公司；pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（20220420），青岛高科园海博生物技术有限公司。
1.5 供试液制备取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
2.需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验2.1 菌液制备取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，33℃培养24小时，取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体中，23℃培养23天，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到适宜浓度的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面培养基上，23℃培养7天，加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释到适宜浓度的孢子悬液备用。
细菌霉菌和酵母菌计数
细菌霉菌和酵母菌计数1 简述细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。
也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。
细菌、霉菌和酵母菌计数除另有外均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上常用的一种方法。
以琼脂平板上的细菌、霉菌和酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。
该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。
因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu）不应理解为细菌、霉菌和酵母菌的个数。
在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。
2 设备、仪器2.1 设备2.1.1 无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.1.1.1 结构和要求见无菌检查法2.1.1.2 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间的净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
2.1.1.3 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。
缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
2.1.1.4 洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
洁净级别尘粒数/m3 浮游菌（个）/ m3沉降菌（个）/（∮90mm·0.5h）微粒直径≥0.5µm 微粒直径≥5µm100级10000级100000级≤3，500≤350，000≤3，500，000≤0≤2000≤20，000≤5≤100≤500≤1≤3≤10沉降菌数测定（Ⅱ法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35℃预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上，在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。
微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证结果分析
微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证结果分析发布时间：2023-01-13T08:36:01.951Z 来源：《中国科技信息》2022年16期第8月作者：杨丽雯陈旭煜* 赖瑞英张卉[导读] 能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力具有重要意义。
杨丽雯陈旭煜* 赖瑞英张卉钦州市检验检测中心广西钦州 535000摘要：能力验证既是对实验室检测技术能力的考核，也是实验室内部质量控制的评价方式，对提高实验室的检测能力具有重要意义。
本文通过对此次能力验证的整个实验过程进行回顾，对“人、机、料、法、环”五个方面进行质量控制分析，通过分析总结实验室的优势及不足，充分发挥优势改正不足，以提高实验室的检测能力和管理水平，增强政府监管部门的公信力。
关键字：需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数能力验证结果分析1 前言能力验证是检验检测实验室认可活动中不可缺少的一项重要内容，不仅是针对个别检验项目的考核，同时是对整个机构质量管理体系运行情况的考核[1]，药品检验检测能力验证不仅能考核本实验室的药品检验技术，更能提高本实验室药品检验的技术能力，增强各级监管部门对本实验室能力的信任度[2]。
本实验组人员参加了2022年由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的ACAS-PT1396(2022)非无菌产品微生物限度检查：微生物（需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数）计数能力验证。
本文旨在回顾梳理实验过程，总结本次实验结果，为健全完善微生物检验内部质量控制管理体系提供理论和实践参考[2]。
2 实验试剂耗材、仪器及方法2.1 样品样品来源于中国检验检疫科学研究院测试评价中心，需氧菌总数计数样品编号为22-E290、22-X687；霉菌和酵母总数计数样品编号为22-D950、22-J547，为药品制剂的冷冻干燥物，采用玻璃西林瓶密封包装，瓶身贴有编号标识。
收到样品后立即置于4 ℃冰箱保存，并尽快安排实验。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 参考标准 (3)4. 接受标准 (3)5. 人员职责 (3)6. 抽样计划 (4)7. 设备、试剂和菌种信息 (4)8. 方法适用性试验 (5)9. 文件控制 (6)10. 不合格情况处理 (6)11. 再验证周期 (6)12. 附件清单 (6)1.目的根据中国药典2020版微生物限度检查法的要求，对产品的微生物限度检查法进行验证，以确定所采用的方法适合于本产品的微生物限度检查，即确认本品在该检查量及该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计。
保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。
2.适用范围适用于本司产品的微生物限度检查。
3.参考标准《中华人民共和国药典》（2020版第四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法）《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的测定》《医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分：产品上微生物总数的估计》4.接受标准4.1.阴性对照组不长菌；4.2.回收率（试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值）应在0.5~2范围内；4.3.若回收率小于0.5，考虑产品有抑菌性，则重新考虑检查方法的建立。
5.人员职责5.1.成员及其职责详见表一：表一人员及职责5.2.培训要求确保参与验证的所有人员了解其职责和角色，以及验证的过程和要求。
验证开始前，负责本次验证的检验员将对参与确认执行的人员讲解验证的过程和要求，并记录在《培训记录》中。
适用时，培训考核记录作为附录包含在验证报告中。
6. 抽样计划随机抽取3个批次，每个批次随机抽取7套样品。
具体信息详见表二：表二 样品信息确认人/日期： 复核人/日期： 7. 设备、试剂和菌种信息 7.1. 设备信息详见表三表三 设备信息确认人/日期：复核人/日期： 7.2. 试剂信息详见表四表四 试剂信息确认人/日期： 复核人/日期： 7.3. 菌种信息详见表五表五 菌种信息确认人/日期：复核人/日期：7.4.菌液的制备用接种环取枯草芽孢杆菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取金黄色葡萄球菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取铜绿假单胞菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的斜面培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的斜面培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。
(优质医学)《中国药典》微生物基本知识
供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌
取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度 检查：微生物计数法”（通则1105）制成1:10供试液，混匀，在20~25 ℃ 培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不繁殖（约2小时）。
取相当于1g或1供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经方法适用性试验 确定）肠道菌增菌液体培养基中，30~35 ℃培养24~48小时后，划线接种 于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，30~35 ℃培养18~24小时。如果平板上无 菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
101 : 可接受的最大菌数为20; 102 : 可接受的最大菌数为200; 103 : 可接受的最大菌数为2000:以此类推。 虽然扩大了限度的标准，但是对过程控制的要求有了很大的提高，培养 基的营养能力也有了很多的提高，未来将向参数放行方向发展。
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1101 无菌检查法-培养基
硫乙醇盐酸流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 用于真菌和需氧菌的培养。
表3 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（新增） 表4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准（新增）
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非无菌药品微生物限度标准
限度标准由“数量”向“数量级”转变 非无菌药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数照“非无菌产品微生物
限度检查：微生物计数法”（通则1105）检查；非无菌药品的控制菌照 “非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”（通则1106）检查。各 品种项下规定的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数标准解释如下：
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1101 无菌检查法-供试品无菌检查-培养及 观察
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1101 无菌检查法-结果判断
阳性对照管应生长良好，阴性随着管无菌生长。若供试品管均澄清，或 虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一 管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
霉菌与酵母菌计数方法版药典
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含％聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含％聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020（中兽药）中规定的微生物限度检查包括对药
物中的细菌总数、霉菌和酵母菌的检查。
细菌总数检查是通过将样品进行稀释，接种在固体培养基上进行培养，并统计菌落数量来确定药物中的微生物总数。
霉菌检查是将样品进行稀释，接种在含有抑制细菌生长的培养基上培养，以促进霉菌的生长，并进行观察和计数。
酵母菌检查也是将样品进行稀释，接种在适宜的培养基上培养，以促进酵母菌的生长，并进行观察和计数。
这些微生物限度检查主要是为了确定药物中是否存在超过规定限度的微生物污染，以保证药品的质量和安全性。
生药含量及中国药典2020版中颗粒剂项下的各项检测内容为指标
生药含量及中国药典2020版中颗粒剂项下的各项检测内容为指标近年来，随着人们对中药的需求不断增加，中药制剂的质量与安全问题备受关注。
生药含量的准确测定和药典中对颗粒剂的检测内容成为保证中药制剂质量的重要指标。
本文将重点讨论生药含量及中国药典2020版中颗粒剂项下的各项检测内容。
一、生药含量的意义及检测方法生药含量是指中药材制剂中有效成分的含量。
其确定对于保证中药制剂的质量具有重要意义。
常用的生药含量检测方法有：HPLC（高效液相色谱法）、UV（紫外分光光度法）、TLC（薄层色谱法）等。
这些方法可以准确测定中药材中有效成分的含量，为中药制剂的质量控制提供了依据。
二、中国药典2020版中颗粒剂项下的各项检测内容1. 颗粒剂的含量测定颗粒剂的含量测定是指对颗粒剂中含有的药物成分进行定量测定。
该测定项目是中药制剂质量控制的基础，主要通过化学分析方法进行。
中国药典2020版中对颗粒剂的含量测定提出了具体的要求和标准，以保证颗粒剂的质量和安全性。
2. 颗粒剂的质量评价颗粒剂的质量评价是指对颗粒剂样品进行一系列的理化性质检测，以确保其质量符合规定的标准。
包括外观评价、颗粒直径和颗粒分布的测定、溶出度的测定、含水量的测定等。
这些评价项目综合考虑了颗粒剂的质量特性，对于确保颗粒剂的质量具有重要作用。
3. 颗粒剂的稳定性评价颗粒剂的稳定性评价是指对颗粒剂在一定条件下的物理、化学稳定性进行评估。
通过了解颗粒剂的稳定性，可以预测其在储存和使用过程中的变化情况，为保持颗粒剂的质量提供科学依据。
稳定性评价包括溶出度变化、药物含量变化、外观变化等指标的测定。
4. 颗粒剂的微生物检验颗粒剂作为一种口服制剂，微生物检验是必不可少的检测项目之一。
微生物检验主要包括细菌总数、霉菌和酵母菌、大肠杆菌群等指标的测定。
这些检测可以评估颗粒剂的微生物质量，确保其符合卫生标准，对人体安全无害。
结论生药含量的准确测定和中国药典2020版中颗粒剂项下的各项检测内容为指标，对于保证中药制剂的质量和安全具有重要意义。
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同摘要：目的：对药品微生物限度检查和食品微生物检验进行比较，找出二者之间的异同。
方法：从检验标准、实验室环境、培养基、抽（采）样、方法验证、仪器设备、动物实验等方面对二者进行比较。
结果：药品微生物限度检查和食品微生物检验存在各种异同点。
结论：作为食品药品检验机构的检验人员，为更好的开展检验工作，应当注意二者的异同。
关键词：药品微生物食品微生物新组建的国家食品药品监督管理总局，对生产、流通、消费环节的食品安全和药品的安全性、有效性实施统一监督管理。
食品药品检验所的检验人员，由先前的单一药品检验改为食品、药品全部检验。
只有发现并掌握二者检验的异同，才能更好的开展检验工作。
本文对日常工作中发现的药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同，作如下概述。
1.检验标准1.1药品《中华人民共和国药典》2020年版四部微生物限度检查法。
1.2食品《中华人民共和国国家标准》食品微生物学检验。
1.3比较药品标准近些年来五年更新一个版本，为能及时反映当前科学发展水平，通常在新版药典出版之后，下一版药典出版之前出版增补本。
食品标准无固定更新周期。
2.实验室环境2.1药品微生物限度检查应在不低于D级背景下的生物安全柜或B级洁净区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
[1]微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。
涉及实验室监控菌株的分离鉴定、样品阳性菌株的分离分析、方法验证中的阳性菌操作等实验活动，应在专门的阳性菌实验室进行。
阳性菌操作不得在供试品检验用洁净实验室内进行。
[2]2.2食品实验室环境不影响检验结果的准确性，布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染。
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
细菌霉菌和酵母菌计数
细菌霉菌和酵母菌计数1 简述细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。
也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。
细菌、霉菌和酵母菌计数除另有外均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上常用的一种方法。
以琼脂平板上的细菌、霉菌和酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。
该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。
因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu）不应理解为细菌、霉菌和酵母菌的个数。
在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。
2 设备、仪器2.1 设备2.1.1 无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.1.1.1 结构和要求见无菌检查法2.1.1.2 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间的净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
2.1.1.3 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。
缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
2.1.1.4 洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
洁净级别尘粒数/m3 浮游菌（个）/ m3沉降菌（个）/（∮90mm·0.5h）微粒直径≥0.5µm 微粒直径≥5µm100级10000级100000级≤3，500≤350，000≤3，500，000≤0≤2000≤20，000≤5≤100≤500≤1≤3≤10沉降菌数测定（Ⅱ法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35℃预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上，在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
研究：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
研究：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……提醒：后文增加了关于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因留意结合此处的请求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……研究：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
研究：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。
……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
……研究：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。