香荚兰内生微生物的分离_陈雪华_2010
药用植物内生真菌的分离及其次生代谢产物抗乙酰胆碱酯酶活性研究
物次生代谢产物进行转化， � 还能独立产生丰富的次生 基上， 每个平板放置 4 块， 然后置 2 8 培养箱中倒置 ， ， 3 7d � 代谢产物 是天然产物的重要来源 是具有高度开发价 培养 取切口处新长出的菌丝 ， 及时转接至新 值的新型生物资源� 近十年来植物内生菌及其活性代 谢产物已成为微生物学研究的一大热点［6 - 8］�为了得 到具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的次级代谢产物 ， 本文 b ia pu l c her r im a ) � 对 4 种 植 物 一 品 红 ( Eu phor 半夏 ( Pinel l ia t er nat e) � 细辛 ( M anc hu r ian W il dging er )� 狼毒 鲜的 PDA 培养基上培养， 待菌落出现后， 根据菌落形 态� 颜色的差异以及长出时间的不同， 分别挑取各菌落 边缘菌丝转接于分离培养基平板上进行再培养� 培养 数日后 ， 观察记录菌落的形态� 对获得的菌株进行纯 化培养， 经菌株 编号后， 转至 PDA 斜面 培养基上， 于
收稿日期 : 2 0 1 1- 0 4 - 0 8 0 4) 年教师培养计划 ( 编号 : Q20 0 9 9 76 - ) ， 作者简介 : 杨中铎 ( 1 男， 博士 ， 副教授 ， 硕士研究生导师 ， 主 要研 究方向为 天 然 药 物研 究 与 开 发 � E - m ail : ang hongdu o @ 1 2 6 .c om
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［ 7］ 刘超祥， 高雪芹， 蒋继宏， 等 . 杉木根皮的 化学成分 研究［ J ］ .林 产 化学与工业， 20 0 9 ， 29 ( 1) : 1 00 -1 02. ［ 8］ 李林玺 .白沙蒿化学成分研究［ D］ .开封 : 河南大学， 2 0 0 7. ［ 9 ］ 安琪 ， ［J ］ .天然 产 杨春娟 ， 宋洋 ， 等 .无梗 五加果化学 成分的研 究 2 0 0 8， 2 0 ( 5 ) : 76 5 - 76 9. 物研究与开发 ， ［ 1 0］ J acqu es R .I sot opic m u l t ipl et s in t he c ar b on - 1 3 NM R spect r a ofani � l ine der i vat ives and nec l eosides w i t h par t ial deu t er at ed am ino Am . Chem .Soc.， 1 9 87 ， 1 09 (2 ): 3 1 6 - 3 2 1.
9种药用植物内生或附生真菌的分离及其杀虫、抑菌活性
抑制 真菌活性 测定 ： 株发酵液 １ 与９ 融化 的 将菌 ｍＬ ｍＬ Ｐ Ａ培养 基混 匀 ， 入无 菌 的培养 皿 中制成带 药培 养基 平 Ｄ 倒 板 。待培 养 基凝 同后 ， 每个 培 养基 平 面上 放 １ 在 个供 试 菌
基平 板上 ， ４ ２ ２ ～ ６℃ 下避 光培 养”。 ’ 表 １ 内生 、 附生 真 菌 的分 离 结 果
植物样品
坐
内 菌 菌株 生真 ／
株 编 号
１ ． 菌株的纯化 ＿２ ２
尖 端 蔺 丝 挑 取 法 对 所 分 离 的 内生 、 生 真 菌 进 附 行 纯 化 。 定 期 观 察 其 生 长情 况 ． 新 长 的菌 丝 挑 取 将
本研究选用9种药用植物采用5种植物病原真菌5种病原细菌1种蚊幼虫进行系统的生物测定以期评价这些植物内生附生真菌的生物活性为筛选结构新颖的农药活性化合物和综合开发利用植物资源提供依据
第 ４ 卷第 ４ ８ 期
农 药
ＡＧＲ０ＣＨＥ＾ 缸ＣＡＬ Ｓ
Ｖ ． ８ ＮＯ ４ ｂ１ ４ ． ．
至
Ａｐ ． ０９ １ ２０
挑取 少量 蔺落接种 于培养 瓶 巾 ， 在转 速为 １ ０ ２ ０ｒ ｉ 的 ～ ０ ／ ｎ ８ ａ ｒ
摇床 上于 ２～ ８Ｇ培养 ７ １ ： ６ ２ （ ： ～ ２ｄ １ ． 发 酵产 物 处理 ＿４ ２ 发酵终止后 ， 滤 纸过滤发 酵产物 ， 液备用 。 用 滤
１２５ 生 物 活 性 测 定 ＿．
均 可 分 离 到 较 多 的 附生 真菌 或 内生 真 菌 ， 比例依 次为 其
附生 真菌 的分 离培养 ： 采 集 的新鲜 植物各 部分 组织 ２ ．４ ３ ．８ 、 ２６ ％ 、９５ ％（ 将 ３７ ％、 ４０ ％ ２ ．３ １ ．５ 见表 １ 。 ） 用 来 水 冲洗 ， 去表 面 附着 的泥 沙 ， 内晾 干后 直接 在 除 室 超 净 Ｔ作 台上 ｊ无 菌 刀片切 成小块 样品 ， ＝ ｝ ＿ Ｊ 紧贴于 分离 培养
香荚兰豆挥发性成分及其质量标准研究
香荚兰豆挥发性成分及其质量标准研究香荚兰豆挥发性成分及其质量标准研究一、引言香荚兰豆是一种重要的花卉植物，具有独特的香气，广泛应用于香精、食品、药物等领域。
香荚兰豆的香气来自于其挥发性成分，因此对其挥发性成分的研究具有重要意义。
本文旨在通过研究香荚兰豆挥发性成分及其质量标准，探讨其用途和开发潜力。
二、香荚兰豆挥发性成分的提取与分析方法1.提取方法香荚兰豆的挥发性成分可以通过水蒸气蒸馏、溶剂提取、超声波辅助提取等方法来提取。
其中，水蒸气蒸馏是常用的提取方法，可以在较低的温度下避免高温对挥发性成分的破坏。
2.分析方法为了准确测定香荚兰豆中挥发性成分的组成和含量，可以采用气相色谱-质谱联用技术。
该技术具有高分辨率、高灵敏度、高选择性等优点，可以有效地分析香荚兰豆中的挥发性成分。
三、香荚兰豆挥发性成分的主要组成香荚兰豆的挥发性成分主要包括萜烯类化合物、醇类化合物、酯类化合物等。
其中，萜烯类化合物是香荚兰豆独特香气的主要来源，具有较高的占比。
醇类化合物则对其香气的柔和和甜度起着重要作用。
酯类化合物则增加了香荚兰豆的复杂性和层次感。
四、香荚兰豆挥发性成分的质量标准1.气味质量标准香荚兰豆的气味对其市场价值有重要影响。
目前，根据香荚兰豆的气味特性，可以建立一套气味质量标准，包括香气的强度、持久度、新鲜度等方面的评价指标。
2.化学成分质量标准香荚兰豆的化学成分质量标准主要包括挥发性成分的组成和含量。
通过建立分析方法和标准物质，可以准确测定香荚兰豆中的挥发性成分，并进行质量控制。
五、香荚兰豆挥发性成分的应用和开发潜力香荚兰豆的挥发性成分可以应用于多个领域，如香精、食品、药物等。
在香精行业中，香荚兰豆的挥发性成分可以作为主要的调香成分，用于制造香水、香薰产品等。
在食品行业中，香荚兰豆的挥发性成分可以用于增香、调味等。
在药物领域，香荚兰豆的挥发性成分具有抗菌、消炎、镇静等药理活性，可以用于药品的研发和生产。
六、结论通过对香荚兰豆挥发性成分及其质量标准的研究，可以有效地了解其成分和含量，为其应用和开发提供科学依据。
内生细菌EA19的分离鉴定论文
内生细菌EA19的分离鉴定论文摘要：从药用植物一年蓬茎组织中分离并筛选获得了1株内生生防细菌ea19。
经形态学、生理生化和16 s rrna编码基因序列分析等实验，ea19与解淀粉芽孢杆菌（bacillus amyloliquefaciens）亲缘关系最近。
采用菌丝生长速率法对ea19进行了10种植物病原真菌的抑菌活性测定。
结果表明，ea19菌体对稻梨孢、镰孢菌、胶孢炭疽菌、稻平脐蠕孢、立枯丝核菌、核盘菌、链格孢和青霉菌等植物病原真菌具有拮抗活性，对稻梨孢和核盘菌的抑制率分别达到96.99%±1.10%和99.16%±0.65%。
ea19菌体对小麦白粉病菌（blumeria graminis f. sp. tritici）的分生孢子萌发和吸器形成具有极显著的抑制作用（p目前应用生防细菌来防治小麦白粉病已有很多报道。
范瑛阁等[3]从土样中分离并筛选获得的3株细菌对小麦白粉病具有60%以上的防治效果，且具有增产作用。
王美玲等[4]对白粉病生防细菌pe4进行发酵条件的探索。
枯草芽孢杆菌a2发酵液防治小麦白粉病的最好效果可达72.22%[5]。
植物内生细菌是防治植物病害的重要生防菌资源之一。
它们不仅能与植物互惠共生，而且很多成员具有优良的抑菌活性。
本研究旨在从植物组织中分离具有拮抗活性的内生细菌，为防治小麦白粉病等重要植物病害提供生防菌材料，并为进一步开发环境友好型生物农药奠定基础。
1 材料与方法1.1 材料药用植物一年蓬[erigeron annuus（l.）pers]从中国科学院武汉植物园药用植物园采集获得。
培养基：psa固体培养基；na培养基；lb培养基。
供试菌株：禾布氏白粉菌小麦专化型（blumeria graminis f. sp. tritici）、稻梨孢（magnaporthe grisea）、镰孢菌（fusarium graminearum）、胶孢炭疽菌（colletotrichum capsici）、稻平脐蠕孢（bipolaris oryzae breda de haam）、大丽轮枝孢（verticillium albo-atrum reinke et berthold）、立枯丝核菌（rhizoctonia solani kühn）、核盘菌[sclerotinia sclerotiorum （lib.） de bary]、链格孢[altermaria altemata （fries）keissler]、齐整小核菌（sclerotium rolfsii sacc）和青霉菌[penicillium expansum（link）thom] 均由本实验室保存。
利用香荚兰内生菌制备天然复合香味料及其在卷烟中
27.利用香荚兰内生菌制备天然复合香味料及其在卷烟中的应用研究李雪梅1 徐若飞2 杨黎华1 施红林1缪恩铭1 黄海涛1弓新国1（1、云南烟草科学研究院 2、红云集团技术中心）摘要：从香荚兰气生根中分离到一株产香内生芽胞杆菌Van-1a，200r/min、37℃摇床培养3天，Van-1a可转化阿魏酸生成含有香兰素及愈创木酚衍生香味物的天然复合香味料。
采用GC/MS从中分离鉴定出10种挥发性香味化学成分：香兰素、香草酸、丁香酚、对乙烯基愈创木酚，对乙基愈创木酚、对丙基愈创木酚、4,4’-二联愈创木酚、1-丁醇、3-羟基-2-丁酮和2-乙基-1-己醇。
卷烟加香实验表明：天然复合香味料能与烟支较好谐调，具有明显提调烟香、细腻醇和烟气、改善卷烟吸味的良好效果。
关键词：香荚兰 产香内生菌 天然复合香味料 卷烟应用The Natural Fermented-Flavor Produced by An Endophytic Bacillus sp. Van-1a Screened from Vanillia and Its Application in Tobacco Casing Abstract：An Endophytic Bacillus sp. Van-1a, having the activity of converting ferulic acid to vanillin and 4-vinylguiacol, wasobstained from Vanilla root by repeated screening. The natural fermented-flavor was produced and extracted by theshake-incubation of Van-1a on the ferulic acid at 200r/min, 37℃ for 3 days. Ten volatile chemical components of this natural fermented-flavor were identified by GC/MS, including vanillin, vanillic acid, eugenol，p-vinylguiacol, p-ethylguiacol, p-propylguiacol, 4,4’-diguiacol, 1-butanol, 3-hydroxy-2-butanone and 2-ethyl-1-hexanol. The tobacco casing experiment showed that the natural fermented-flavor could mellow smoke and improve smoking taste effectively.Keywords: Vanilla endophytic microbe natural fermented-flavor tobacco casing在研制“高香气、低焦油、低危害”的中式烤烟型卷烟过程中，随着一些降焦减害手段的应用会导致烟香气的损失而影响吸味。
新疆大学2013年度大学生创新训练计划(一般)项目
信息科学与工程学院 数字语音变声器 基于FPGA的视频图像采集系统的实 现 基于IPv6校园网过渡技术的研究与 信息科学与工程学院 实现 新疆民族地毯图案设计系统的设计 信息科学与工程学院 与实现 信息科学与工程学院 教务处 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 地质与矿业工程学院 新疆大学学生创新网站设计及实现 急倾斜煤层巷道布置方法与支护技 术研究 某矿己17-22021工作面防突措施效 果检验 基于数字化矿山软件的实践设计应 用 准噶尔盆地南缘二叠系芦草沟组油 页岩元素地球化学特征研究 新疆库鲁克塔格早元古代变质作用 PTt轨迹及大地构造意义 新疆库鲁克塔格西段南华纪地层沉 积体系分析 铁路隧道Ⅳ级围岩加固区高性能混 凝土强度抗渗性试验研究
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生命科学与技术学院 生命科学与技术学院 生命科学与技术学院 生命科学与技术学院 生命科学与技术学院 生命科学与技术学院 生命科学与技术学院
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化学化工学院 化学化工学院 化学化工学院 化学化工学院 化学化工学院
具有近红外电致变色性能的含邻菲 罗啉基喹喔啉共轭聚合物的合成及 性能研究 生物质炭对Cd2+/Cr6+竞争吸附性能
新疆大学2013年度大学生创新训练计划（一般）项目
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 19 20 21 22 23 24 25 学院 政治与公共管理学院 政治与公共管理学院 政治与公共管理学院 政治与公共管理学院 法学院 人文学院 人文学院 人文学院 人文学院 人文学院 新闻与传播学院 新闻与传播学院 外国语学院 外国语学院 外国语学院 外国语学院 数学与系统科学学院 项目名称 项目负责人 项目组成员 曹晶晶、于超 张朋林、何梦琪 张迪、阿卜杜艾尼· 奥布力 夏慧慧、张梦媛、刘 威 刘梦梦、陈晨、王昌 武、李凯、王小英 夏小花、张刘婷、胡 静 马悦、马丹、张宪、 聂国群 胡向楠、李停、阿布 都萨拉木·塞麦提 沈婷、史珂、刘茜、 毛小琴 郑丹丹、任欢、努尔 扎提、刘依云 崔鹤、林菲、朱敏、 杨婷婷 满丽、木斯达帕·艾 依沙 娜迪艳、何雪晴、关 艳霞、马娟娟、陈婷 李娜、陈国锐、李媛 媛、高元睿 周薇、左夏露、李明 霞、虎冬琴 宋宛桦、孙会 阿孜古丽.牙生,祖丽 皮耶.如孜 吴帮民、杨钧满 邹鑫，王春花 新疆基层公务员培训问题研究-以伊 何秋 犁哈萨克自治州为个案分析 城市化进程中城中村存在的问题及 冯婷玉 对策分析-以乌鲁木齐市沙依巴克区 为例 关于流浪儿童救助模式的调查-以阿 张淑娟 克苏地区为例 新疆城市化进程中拆迁安置补偿研 孙玥 究-以乌鲁木齐经济开发区为例 人民调解制度在新疆伊犁牧区的施 王照东 行状况 新疆区域形象的影像建构及其传播 邹赞 策略研究 新疆微电影题材开发与产品转化研 王敏 究 喀什市维吾尔族传统手工业现状调 李香寒 查 探析大学校园的文化市场资源现状宋娇娇 以新疆大学为例 新疆喀什地区维吾尔族民间文化习 孙维 俗特色调查研究 新疆大学大学生新闻阅读与社会认 王婷婷 知研究 新媒体使用与大学生社交网络空间 赵桓 的建构—以乌鲁木齐市高校大学生 为例 新疆高校俄语专业学生实习现状调 毕新惠 查研究 公共俄语与专业俄语的有效对接--王萍 以新疆大学为例 新疆高校英语二课堂建设的实践与 李菁 思考---以乌鲁木齐五大高校为例 将音乐剧引入英语专业第二课堂的 丁钰君 可行性研究 非定常对流-扩散问题的高精度数值 开依沙尔.热合 方法研究 曼 吴黎军 刘丛 吴荣
药用植物内生真菌分离及其次级代谢产物生物活性研究
药用植物内生真菌分离及其次级代谢产物生物活性研究杨中铎;东建丽;赵维花【摘要】为分离药用植物中内生真菌，从次级代谢产物中筛选对单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶有较高抑制率的提取物。
用分块法分离5种植物，马铃薯葡萄糖琼脂（PDA ）培养基纯化内生真菌，液体培养基发酵，用乙酸乙酯萃取菌液，甲醇提取菌丝体，用酶标法检测提取物对单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶的抑制率。
共分离得到45株菌，制备了90种提取物，其中5株菌的菌液提取物对单胺氧化酶有不同程度的抑制率，露蕊乌头39（L RW T‐39）的菌液提取物对单胺氧化酶的抑制率最高，所有提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制率不高。
表明药用植物内生真菌中存在抗单胺氧化酶的活性成分，值得进一步研究。
%Endophytic fungi is isolated from medicinal plants and higher inhibition rate of inhibition of monoamine oxidase(MAO) and acetylcholinesterase(AChE) are found from their secondary metabolites . Endophytic fungi is isolated by issue‐culture method and purified by potato dextrose agar medium . The fermentation of endophytic fungi are extracted by ethyl acetate , and the mycelium of endophytes are extracted by methanol to obtain methanol fractions . All fungi are tested for AChE and MAO inhibiting activity by colorimetric method in 96‐well microplates . Results show that 45 strains of endophytic fungi are isolated and extracted to obtain 90 extracts . Among them ,5 strains of Fungi exh ibite significant anti‐monoamine oxidase activity . The ethyl acetate extract of LRWT‐39 are demonstrated to have most high activity against MAO . The active constituents in the endophytic Fungi of medicinal plants are worthy to be further studied .【期刊名称】《西北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(052)002【总页数】5页(P79-83)【关键词】内生真菌;单胺氧化酶;乙酰胆碱酯酶;次级代谢产物【作者】杨中铎;东建丽;赵维花【作者单位】兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院，甘肃兰州 730050【正文语种】中文【中图分类】R285.5乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AChE),是一个含有537个氨基酸的蛋白，通向酶活性中心的是一个细长、下端扩展的通道，也称“芳香峡谷”[1].它是通过减少突触间隙乙酰胆碱降解、增加突触间乙酰胆碱的可利用性，来治疗阿尔兹海默症.单胺氧化酶(Monoamine oxidase，MAO)是机体内参与胺类代谢的主要酶类，其活性高低与多种疾病如阿尔兹海默症、抑郁症、衰老等密切相关[2-3]，目前用抑制单胺氧化酶活性的方法治疗这些疾病.但所用的抗乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶的药物毒副作用大，所以寻找新药刻不容缓.近年来，有关与植物有互利共生关系的植物内生真菌的研究越来越热门，它们产生的活性物质在生物防治和医药领域有巨大的应用潜力[4]，有关内生真菌在医学领域的报道主要与抗菌、抗肿瘤、抗氧化活性类物质和免疫活性物质相关[5].内生真菌是生活在健康植物组织内部且不引起植物产生明显病症的一类真菌.这类真菌生长在植物体的特殊环境中，不但可以促进宿主植物的生长发育，而且自身能产生许多活性物质，包括一些结构新颖的化合物[6].当前国内外对植物内生真菌的研究还处于初级阶段，所研究的植物对于庞大的内生真菌来说是一小部分，我国对内生真菌的研究比较晚，主要是菌的分离及生物活性研究[7].为了寻找具有抑制乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶的活性物质，本文对露蕊乌头(Aconitum gymnandrum Maxim)、紫堇(Corydalis edulis Maxim)、翠雀(Delphinium grandiflorum)、高乌头(Aconitum sinomontanum Nakai)、甘青乌头(Aconitumtanguticum(Maxim)Stapf)5种植物的内生真菌进行分离，并检测其次级代谢产物对乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶的抑制率，旨在为治疗阿尔兹海默症和抑郁症寻找有效而副作用少的新药奠定基础.露蕊乌头、翠雀、高乌头、紫堇、甘青乌头采自甘南草原，标本由兰州理工大学生命科学与工程学院杨林副教授鉴定.Wistar雌鼠购自兰州大学实验动物中心.pH=7.6，7.0,8.0磷酸盐缓冲溶液(PBS)；磷酸异丙烟肼(东京化工有限公司)、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)、5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、乙酰胆碱酯酶(AChE，百灵威科技有限公司)、石杉碱甲(Huperzine -A)、4-氨基安替吡啉、辣根过氧化物酶、4-(三氟甲基)苄胺、香草酸(阿拉丁试剂公司).博迅SPX-100B-Z生化培养箱(上海博迅实业有限公司)、SHZ-82型恒温振荡培养箱(江苏省荣华仪器制造有限公司)、酶标分析仪DNM-9602、旋转蒸发仪RE-52(上海亚荣生化仪器厂).分离和纯化培养基：PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基+硫酸链霉素(200 mg·L-1).PDA培养基配法：马铃薯200 g·L-1，葡萄糖0.2 g·L-1，琼脂0.2 g·L-1.所有样品重复3次，结果计算取平均值.采用改进的Ellman方法[9,10]测定样品对乙酰胆碱酯酶的抑制活性.在96孔酶标板中，与单胺氧化酶相同设定组别.空白组依次加入160 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)，15 μL AChE(0.28 U·mL-1，pH=7.0 PBS溶解稀释)，本底组加140 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)，15 μL AChE和20 μL石杉碱甲(1 mg·mL-1)；阳性药组依次加入140 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)，15 μL AChE和20 μL石杉碱甲(6种不同梯度)，本底组加入155 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)和20 μL石杉碱甲；样品组依次加入140 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)，15 μL AChE和20 μL样品(1 mg·mL-1)，本底组加入155 μL PBS(0.1 mol pH=8.0)和20 μL样品.4 ℃孵育20 min，然后在各孔中加DTNB及ATCI各10 μL，37 ℃孵育20 min后在405 nm处用酶标仪测定其吸光度值.根据下式计算抑制率：抑制率(%)=[(空白组-完全抑制组)-(样品组-样品本底组)]/(空白组-完全抑制组)×100%.所有样品重复3次，结果计算取平均值.从露蕊乌头中分离到内生真菌25株，从翠雀中分离到内生真菌8株，从高乌头组织中分离到内生真菌5株，从紫堇中分离到内生真菌3株，从甘青乌头中分离到内生真菌4株(表1).表明药用植物中存在大量的内生真菌.用酶标法测定所有内生真菌提取物对单胺氧化酶的抑制率，结果显示(表2)，露蕊乌头中的2株(WT-39，WT-26-1)、高乌头中的2株(GWT-7，GWT-8)、雀翠中的1株(CQ-17)内生真菌发酵提取物具有强的单胺氧化酶抑制活性.内生真菌提取物用Ellman法测定抑制乙酰胆碱酯酶活性，得出提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制率不高,其中抑制率最高的只有25%(表3).老年痴呆症亦称阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，简称AD),即在没有意识障碍的状态下，记忆、思维、分析判断、辨认等方面出现障碍.随着人口的老龄化，其发病率呈逐年上升趋势，因此对老年痴呆症的认识和治疗有重要的医学和社会意义[11].目前科学家提出的主要治疗方法是抑制乙酰胆碱酯酶和单胺氧化酶的活性[12].但临床上所用的从天然药物中分离的几种乙酰胆碱酯酶抑制剂，如石杉碱甲、毒扁豆碱等毒性大、选择性低；单胺氧化酶抑制剂苯乙肼长期服用可使肾上腺素α2受体和β受体与递质的亲和力下降[13]；药用植物中的有效成分含量少，生长周期慢，资源匮乏.自1993年Stierle等[14]从短叶红豆杉(Taxussp andreanae)中分离到 1 株产抗癌药物紫杉醇内生真菌以来，从传统药用植物的内生真菌代谢产物中寻找新型活性物质成为内生真菌研究的主流[15].内生真菌与植物是互利共生的关系，这种共生的关系使双方在生理代谢和遗传基因表达方面都相互影响[16].一些内生真菌与植物共同生长，使这些内生真菌能够代谢产生与宿主植物相同或相近的生理活性成分[17].研究发现几乎所有的植物组织中都有内生真菌的存在[18]，平均每种宿主植物有 4～5 种专性内生真菌，按地球目前已知的30万种植物计算，内生真菌的总数可以超过100万种[19]，郭波等[20]就从抗癌药用植物长春花中筛选到4株能产抗癌药长春新碱的内生真菌.20世纪90年代，人们从微生物中获得乙酰胆碱酯酶抑制剂Cyclophostin，Arisugacin A,B 和 Territrem B,C[21]，周兰兰等[22]发现从白僵菌中提取的BCEF0083具有一定的抗单胺氧化酶的作用，丁海娥等[23]从药用植物的内生真菌中筛选出了16株对单胺氧化酶有不同抑制活性的内生真菌，2株对乙酰胆碱酯酶有活性的内生真菌.这些研究表明从药用植物中筛选对单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶有抑制作用的内生真菌的方法可行.本研究利用已经成熟的菌种分离技术，对5种植物体的内生真菌进行分离，共得到45株菌，制备90种浸膏，通过生物活性测定，结果显示LRWT-L-39的粗浸膏对单胺氧化酶的抑制率最高，它的半抑制浓度达6.47 μg·mL-1，GWT-L-8的粗浸膏对单胺氧化酶的半抑制浓度达9.54 μg·mL-1, LRWT-L-26-1,GWT-L-7,CQ-L-17三株菌对单胺氧化酶的半抑制浓度也在30 μg·mL-1以下，说明这5株菌的次级代谢产物都可能有单胺氧化酶抑制剂的存在，通过跟踪分离有望得到新型的单胺氧化酶抑制剂.另外，发现植物内生真菌中抗乙酰胆碱酯酶活性成分较少，这与文献报道的结果一致.。
从87种中草药植物中分离内生放线菌及其规律的初探
Ｔａ ｉ－， ｈ ｎ ｉＣ ｅ ｇ ｕｘａ ｇ Ｃ ｅ ｈ ｎｈ ａ Ｚ ｏ ｎ Ｗａ ｇＴ ｏ Ｆ ｎ ｕ ， ｉ Ｘ ｎｌ Ｚ ｏ ｇＬ， ｈ ｎ —ｉ ， ｈ ｎＺ ｅ—ｕ ， ｈ ｕＭｉ， ｎ ａ ， ａ ｎ ｎ ｉ Ｑｉ ｎ Ｙ
Ｙ ｎ ｏ ｇ Ｇｕ ｅｇ Ｘｉ Ｈ ｉ ａ ｇａ ｄＱｉ Ｚ ｏ ｇｊｎ ａ ｇＹ ｎ ， ｏＰ ｎ ， ａ ａ— ｎ ｎ ｎ ｈ ｎ － ｙ ｕ
中 国抗 生 素 杂 志２ １年 ９ 第 ３ 卷 第９ ００ 月 ５ 期
６９ ５
文 章 编 号 ： １０ —６ ９２ １）９０５ ・４ ０ １８ ８ （０ ００ —６ ９０
从８ 种 中草药植物 中分离 内生放线菌及其规律 的初探 ７
田新莉 钟莉 成秋香 陈振华 周敏 王韬 范云 杨勇 郭鹏 夏海洋 覃重军
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香荚兰内生微生物的分离
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广西农业科 学 ２ １ ， １１ ） １６ — ２ ８ ０ ０ ４ （ ２ ：２ ６ １６
Ｇｕ ｎ ｘ ｎｃ ｌ ｒｌＳ ｉｎ ｅ ａ ｇｉ Ａｇ ｕｔ ａ ｃｅ ｃ ｓ ｕ
香荚兰 内生微生物的分离
陈雪 华 ，吕岱 竹
（ 国热 带 农 业科 学 院分 析 测试 中心 ，海 口 ５ １０ ） 中 ７ １１
摘要 ： 为寻求利用香荚兰植株组织 中的 内生菌资源制备天然香 兰素生物合成 的新 方法 ， 以不 同时期采集 的香荚
兰 气 生 根 、 干 、 片等 为 材 料 ， 行 内生 微 生 物初 步分 离 。 果 表 明 ， 同季 节 取样 的植 株 组 织分 离 获 得 菌株 数 量 有 茎 叶 进 结 不 所 不 同 ，得 ５ 株 菌株 ， 中２０ 年６ １月 分 别 获 得 ２ 、Ｏ 菌 株 ，００ 在 个 ２ 其 ０９ 、１ ３２株 ２ １年 １ 月获 得 ９ 菌 株 ； 荚 兰植 株 不 同 组 织 中 内生 微 生物 分 布 存 在 明显 差 异 ； 获 得 的５ 株 菌 株 中 ， 菌 ３株 ， 菌 １株 ， 株 香 在 ２ 细 ３ 真 ９
一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基及其制备方法[发明专利]
![一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/aadd8cd9e109581b6bd97f19227916888486b99f.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710176481.5(22)申请日 2017.03.23(71)申请人 伍亭亦地址 530004 广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路100号广西大学西校园北区28栋1单元601室(72)发明人 伍亭亦 (74)专利代理机构 广西南宁汇博专利代理有限公司 45114代理人 黄南概(51)Int.Cl.C12N 1/14(2006.01)C12N 1/02(2006.01)(54)发明名称一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基及其制备方法(57)摘要本发明属于微生物培养技术领域，提供了一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，由包括以下原料组分制备而得：马铃薯、藜麦、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。
本发明同时提供了该培养基的制备方法。
从试验结果得知，本发明培养基分离到的沉香内生真菌数量明显增多，在液体摇菌培养中沉香内生真菌在短时间内能达到最大生长量，从而大大缩短了摇菌时间。
而且这种培养基营养成分全部来自天然食材食材（马铃薯、藜麦）加葡萄糖，没有任何其他添加剂，对做为入口治病药材的沉香结香菌的培养尤为重要，绿色环保，且制备简便经济实用。
权利要求书1页 说明书5页CN 106967617 A 2017.07.21C N 106967617A1.一种沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基，其特征在于，由包括以下重量份数比的原料组分制备而得：马铃薯100-200份、藜麦15-40份、葡萄糖15-25份、琼脂0-20份、蒸馏水700-900份。
2.如权利要求1所述沉香结香内生真菌分离与快繁用培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将马铃薯削皮、切片后与水混合，打浆，浆渣分离，得马铃薯汁；或将马铃薯削皮、切块后加水煮沸，浆渣分离，得马铃薯汁；（2）将藜麦用水浸泡过夜，打浆，浆渣分离，得藜麦汁；（3）将马铃薯汁和藜麦汁混合，加入葡糖糖、琼脂和蒸馏水，混匀，调节pH为5.8-6.0,121℃灭菌20min，即得。
一株白木香不同组织内生菌的分离鉴定与多样性分析
一株白木香不同组织内生菌的分离鉴定与多样性分析作者：邓力唐冰沣黄文政陈卫国刘学林陈欣强符韵林刘鑫来源：《安徽农业科学》2023年第20期摘要［目的］全面了解百年树龄白木香的可培养内生菌组成。
［方法］利用多种培养基对白木香不同组织的真菌和细菌进行分离筛选，结合16S rRNA序列和ITS序列分析，对分离得到的菌株进行初步鉴定。
［结果］共筛选得到细菌111株，主要菌属为芽孢杆菌属（Bacillus）、肠杆菌属（Enterobacter）和假单孢菌属（Pseudomonas），分离频率分别为36.03%、22.52%和9.91%；真菌49株，主要菌属为镰刀菌属（Fusarium）、可可毛色二孢菌属（Lasiodiplodia）和炭疽菌属（Colletotrichum），分离频率分别为24.49%、22.45%和20.41%；白木香不同部位内生菌的多样性和结构差异较大，茎干中分离得到的内生菌最多，其中细菌占不同部位细菌总数的86.48%，真菌占不同部位真菌总数的70.59%。
［结论］试验结果为人工接菌诱导结香提供了参考并丰富了菌种资源。
关键词白木香；内生菌；分离鉴定；多样性中图分类号 Q93 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2023）20-0006-05doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.20.002Isolation，Identification and Diversity Analysis of Endophytic Bacteria in Different Tissues of Aquilaria sinensisDENG Li1，TANG Bing-feng2，HUANG Wen-zheng1 et al（1.Guangxi State-own Qinlian Forest Farm，Qinzhou，Guangxi 535000;2.College of Life Science and Technology，Guangxi University，Nanning，Guangxi 530000）Abstract ［Objective］To better understand the composition of culturable endophytes of Aquilaria sinensis.［Method］A variety of media cultures were used in this study to isolate and screen fungi and bacteria from different parts of Aquilaria bining with 16S rRNA sequence and ITS sequence analysis，the isolated strains were preliminarily analyzed and identified.［Result］A total of 111 bacterial strains were screened，mainly Bacillus sp，Enterobacter and Pseudomonas，with isolation frequencies of 36.03%，22.52%，and 9.91%，respectively.There were 49 fungi strains，mainly Fusarium，Lasiodiplodia and Colletotrichum，with isolation frequencies of 24.49%，22.45% and 20.41%，respectively.The diversity and structure of endophytes in different parts of agarwood were quite unique.The most endophytes were isolated from stems，among which bacteria accounted for 86.48% of the total number of isolated bacteria，and fungi accounted for 70.59% of the total number of isolated fungi.［Conclusion］ The experimental results provide a reference for artificial inoculation to induce aroma formation and enrich bacterial resources.Key words Aquilaria sinensis;Endophytes;Isolation and identification;Diversity白木香［Aquilaria sinensis （Lour.） Gilg.］又稱土沉香，主要分布在我国南部地区，如海南、广西、广东、云南、香港、台湾等［1］。
利用香荚兰内生菌制备天然香料及其在卷烟中的应用
利用香荚兰内生菌制备天然香料及其在卷烟中的应用李雪梅;徐若飞;杨黎华;杨金奎;张克勤【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2008(000)003【摘要】为了获得具有良好应用效果的特色风味料,从香荚兰气生根中分离到一株产香内生芽孢杆菌Van-1a.200 r/min、37℃摇床培养3 d,Van-1a可转化阿魏酸生成含有香兰素及愈创木酚衍生香味物的天然香料.采用GC/MS从中分离鉴定出10种挥发性香味化学成分.卷烟加香试验表明:该天然香料能与烟香较好谐调,具有提调烟香、细腻醇和烟气、改善卷烟吸味的良好效果.【总页数】5页(P31-34,62)【作者】李雪梅;徐若飞;杨黎华;杨金奎;张克勤【作者单位】云南烟草科学研究院,昆明高新开发区科医路41号,650106;云南省微生物发酵重点实验室,昆明市翠湖北路2号,650091;云南省红云集团技术中心,昆明市北市区,650202;云南烟草科学研究院,昆明高新开发区科医路41号,650106;云南省微生物发酵重点实验室,昆明市翠湖北路2号,650091;云南省微生物发酵重点实验室,昆明市翠湖北路2号,650091【正文语种】中文【中图分类】TS264.3【相关文献】1.二年残孔菌胞外多糖组分分析及其在卷烟中的应用 [J], 曹健;张惠杰;许春平2.利用高速逆流色谱对一株内生真菌代谢物中抗肿瘤活性物质的分离 [J], 胡德军;夏兴;赵凤生;陈代杰;戈梅3.辛夷净油中致香组分的制备、成分分析及其在卷烟中的应用 [J], 孙胜南;卢真保;黄艳;周仲良4.香荚兰豆专题系列之五-香荚兰豆在卷烟及食品中的应用 [J], 陈德新5.利用宏基因组学方法对马铃薯中某未培养内生菌的1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶基因(acdS)操纵子进行分析 [J], Nikolic;B;胡小丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分离马齿苋内生放线菌的思路
植物内生菌是一类相对未开发的微生物资源，目前已经受到越来越多学者的关注。
据报道，近年来发现的新的生物活性物质有51%分离自植物内生菌的新物种，而仅有38%分离自土壤微生物，可见植物内生菌资源巨大的开发潜力。
植物内生菌普遍存在于目前已经研究过的各种类型的植物中。
目前全世界至少已在80多个属290多种禾本科植物中发现有内生真菌。
20世纪70年代后期，内生菌在一些重要的经济林木，如冷杉、云杉、紫杉等植物树皮、枝叶中相继被发现并得到了广泛的研究。
同时在多种灌木、草本植物以及栽培植物、果树等发现了大量的内生菌。
从目前研究来看，尚未发现没有分离到内生菌的植株，因此可以推断内生菌在马齿苋体内是普遍存在的。
马齿苋（Portulaca oleracea L.）为马齿苋科一年生草本植物，《中华人民共和国药典》2010年版记载，马齿苋的功能与主治包括：清热解毒，凉血止血，止痢。
用于热毒血痢，痈肿疔疮，湿疹，丹毒，蛇虫咬伤，便血，痔血，崩漏下血。
其药用价值体现为以下几个方面：预防和治疗糖尿病、降血脂和防治动脉粥样硬化、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤和提高机体免疫、抗细菌作用等六个方面。
放线菌一直是抗生素、酶和酶抑制剂等有用生理活性物质的主要产生菌。
云南独特的气候环境蕴藏着丰富的生物资源，马齿苋内生放线菌的研究意义重大。
一、菌种的分离植物内生菌大多生存于植物组织的内部，它们或定植于植物组织细胞内部或定植于组织细胞之间，与植物组织与优质高中教育资源的短缺现状之间的矛盾也日益尖锐。
其中出现的择校热、高收费、乱收费等问题，反映出我国目前的高中教育存在以下一些问题：高中教育资源差距大；在城乡高中之间、普通高中和重点高中之间的教育资源差异使区域间、区域内的办学质量差距大；这些，引起人民群众的不满。
4.高等教育资源不均衡，入学机会不公。
首先，高等教育资源分布不平衡，地区间高等教育入学机会存在明显差异。
受我国地理人文环境的制约，东西部高等学校数量差异大，办学质量上差距也很大。
植物内生放线菌的分离方法_陈华红
放线菌研究专栏植物内生放线菌的分离方法*陈华红1,2 杨 颖1 姜 怡1 唐蜀昆1 徐丽华1** (云南大学省微生物研究所 昆明 650091)1 (楚雄师范学院化学与生命科学学院 楚雄 675000)2摘要:植物内生放线菌是一类大有开发潜力的微生物资源。
目前使用的分离条件和技术尚不完善,容易被外源菌和内生真菌、细菌污染,因此内生放线菌尤其是稀有内生放线菌的选择性分离技术至少是今后一段时间研究的重点。
介绍了植物内生放线菌选择性分离方法并提出值得研究的问题。
关键词:植物内生放线菌,分离方法中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:0253 2654(2006)04 0182 041 植物内生放线菌的定义及其研究意义对植物内生菌的定义一直争议较多,Bacon和W hite作出了一个较普遍接受的定义:植物内生菌(endophy tes)是指在其生活史的一定阶段或[1]全部阶段生活于健康植物组织内部或细胞间隙、不引起植物产生明显病症的微生物。
植物与其内生菌构成了稳定的共生关系。
植物茎和叶的化石提供的证据表明,植物与其内生菌之间的内生关系早在高等植物出现在地球上的时候就已存在了。
在植物与内生菌长期的协同进化中,建立了独特的遗传与代谢关系。
由于植物与内生菌相互间基因交换的结果,使内生菌具有产生某些与植物相同或相似化合物的能力,因此,可作为天然活性物质的重要来源。
地球上有数十万种植物,每一种都有一种或多种内生菌与之共生,但只有几百种植物的内生菌被较为全面的研究过。
因此,从大量未研究过的植物中发现新内生菌种的机率较高。
而新物种通常都会有新的功能基因,新基因又意味着新的天然产物。
研究表明,近来发现的新的生物活性物质有51%分离自内生菌的新物种,而仅有38%来自土壤微生物[2]。
最容易分离到的内生菌是真菌和细菌。
由于放线菌的生长较慢,分离比较困难,必须用特殊的具有高度选择性的分离条件才能分离到。
放线菌属于细菌域放线菌门,是抗生素、酶和酶抑制剂等生理活性物质的主要产生菌。
藿香内生真菌的分离及抗氧化活性研究
藿香内生真菌的分离及抗氧化活性研究马建苹;魏永威;李善家;郭涛;晋玲【摘要】目的分离和纯化藿香内生真菌,检测其次级代谢产物的抗氧化活性.方法采用组织分离法从藿香茎中分离内生真菌,根据形态初步鉴定;运用DPPH·自由基清除法评价藿香内生真菌发酵产物的抗氧化活性.结果从藿香茎中共分离得到8株内生真菌,鉴定出7株,分别属于短梗霉属、交链孢霉属、葡柄霉属、刺盘孢菌属、棒孢霉属.菌株发酵液的乙酸乙酯部位多数具有抗氧化活性,其中HX-J7对DPPH·自由基清除率为97.44％与Vc活性相当.结论藿香内生真菌的次级代谢产物具有抗氧化活性,是潜在的天然抗氧化剂.【期刊名称】《中国食品工业》【年(卷),期】2018(000)004【总页数】3页(P69-71)【关键词】藿香;内生真菌;分离;抗氧化活性【作者】马建苹;魏永威;李善家;郭涛;晋玲【作者单位】兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州730050;甘肃省中藏药筛选评价及深加工重点实验室,兰州理工大学,兰州730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州730050;甘肃省中藏药筛选评价及深加工重点实验室,兰州理工大学,兰州730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州730050;甘肃省中藏药筛选评价及深加工重点实验室,兰州理工大学,兰州730050;甘肃中医药大学药学院,兰州730000【正文语种】中文藿香（Agastache rugosa）唇形科藿香属多年生草本植物，是我国常用的芳香化湿类中药，全草入药，有止呕吐，治霍乱腹痛，驱逐肠胃充气，清暑等功效；果可作香料，叶与茎均富含挥发性芳香油，有浓郁的香味，是芳香化湿类中药[1]。
现代药理学研究表明藿香具有抗炎、抗菌等作用[2]。
藿香全草中所含有的挥发油成分能够促进胃肠道蠕动，分泌胃液，促进人体对食物的吸收。
还有扩张血管，促进排汗，能够有效缓解因排汗不利所引起的慢性疾病。
18株植物内生真菌的分离纯化及鉴定
桃金娘科番樱桃属
月橘
Murraya paniculata
芸香科九里香属
半夏
Pinellia ternata
天南星科半夏属
青木
Aucuba japonica 桃叶珊瑚科桃叶珊瑚属
舟山新木姜子 Neolitsea sericea
樟科新木姜子属
水蜡树
Ligustrum obtusifolium
木犀科女贞属
number of isolation and screening to obtain valuable endophytic fungi，it can provide more sources for novel
natural products.In this study，12 kinds of plants were randomly picked.18 strains of endophytic fungi were isolated
山茶花
Camellia japonica
山茶科山茶属
主要功效及用途 清热降火、消肿解毒、活血化瘀 化湿清热、祛风通络，治痢疾、腰痛 药材、调味料，健胃、活血、散寒
叶片肥厚，主要用于观赏 有催吐功效，主要治疗痢疾 盆栽，果肉多汁可食，制作优质软糖 祛风除湿、行气活血、散瘀止痛 用于痰多咳喘，眩晕，呕吐反胃 园林装饰及盆栽，保护肝功能 平喘，抗心律失常，抗真菌
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
收稿日期： 2015－02－12 作者简介： 鲁群（ 1987－ ） ，女，博士，讲师，研究方向： 天然产物化学与食品功能因子，E－ mail： luqun@ 。 基金项目： 中国国家留学基金委资助。
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表 1 采集植物信息 Table 1 Information of plants
苦槛蓝内生真菌不同培养条件代谢产物抗植物病原菌活性及LC-MS研究
苦槛蓝内生真菌不同培养条件代谢产物抗植物病原菌活性及
LC-MS研究
丁唯嘉;龚兵;王锦华;黄松;李春远
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2013(40)23
【摘要】利用滤纸片法和LC-MS分别对比了100多种苦槛蓝内生菌固液培养条件,高盐与无盐培养条件、单培养及共培养条件下抗菌活性及代谢产物成分的差异,报道了其中部分筛选出的改变相应培养条件后代谢产物活性显著增加及成分明显变化的菌株的实验数据.
【总页数】4页(P19-21,32)
【作者】丁唯嘉;龚兵;王锦华;黄松;李春远
【作者单位】华南农业大学理学院生物材料研究所,广东广州510642;华南农业大学理学院生物材料研究所,广东广州510642;华南农业大学理学院生物材料研究所,广东广州510642;华南农业大学理学院生物材料研究所,广东广州510642;华南农业大学理学院生物材料研究所,广东广州510642
【正文语种】中文
【中图分类】TQ
【相关文献】
1.半红树植物苦槛蓝内生真菌的分离及抗物病原活性研究 [J], 丁唯嘉;张穗强;龚兵;李春远;王秀芳
2.一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09抗植物病菌产物的研究 [J], 龚兵;张穗强;林悦霞;王秀芳;丁唯嘉;李春远
3.药用植物内生真菌的分离及其次生代谢产物抗乙酰胆碱酯酶活性研究 [J], 杨中铎;周静怡;杨明俊
4.两株红树内生真菌混合发酵液提取物抗植物病原菌活性及LC-MS研究 [J], 丁唯嘉;张杰;黎荣棠;李春远
5.当归内生真菌抗植物病原菌的活性研究 [J], 江曙;段金廒;钱大玮;陶金华
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总数 Total
细菌（株） Bacterium
3 0 2 5 9 2 4 15 7 2 4 13
真菌（株） 总数（株） Fungus Total
2
5
1
1
1
3
4
9
514Biblioteka 1326
8
23
4
11
0
2
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7
7
20
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广西农业科学
表 2 香荚兰不同植株器官内生微生物的类群分布
Table 2 Species distribution of endogenous microbes in differ－ ent organs of vanilla
表 1 不同采样时间香荚兰植株不同组织分离获得的内生微 生物数量
Table 1 Quantities of endogenous microbes isolated from different vanilla organs as sampled at different stages
时间 Time
而以叶片的菌株（30株）最高，其次为气生根（16株）和茎干（6株）。根据分离获得的菌落大小、颜色、透明度、干湿程度
等表面形态特征，并结合光学显微镜的观察，这些菌株分属于7个类群，即4个细菌类和3个真菌类。该研究初步探明了
香荚兰植株组织中内生微生物的分布状况，为今后更进一步的分离筛选工作奠定坚实的基础。
根据分离获得的菌落大小、颜色、透明度、干湿 程 度 等 表 面 形 态 特 征 ，并结 合 光 学 显 微 镜 的 观 察 ， 分离获得的菌株分属于7个类群， 即4个细菌类和3 个真菌类（表2）。 经初步染色和观察，其中的4个细 菌类菌株均为革兰氏阴性杆菌，可作为目标菌株 进一步筛选。 用VITEK2 COMPACT 全自动微生物 鉴定仪对从叶片中分离出 的 1 株 米 黄 色 菌 落 进 行 鉴 定 ，结果表明，该 菌落 为 阴 沟 肠杆 菌 （Enterobacter cloacae），这可能是香荚兰植株体内的一种致病 菌，此病原物与香荚兰植 株 的 何 种 病 害 有 关 ，以及 可能导致何种病害有待进一步研究。
关键词：香荚兰；内生微生物；分离
中图分类号：S573+.9
文献标识码：A
文章编号：1002－8161（2010）12－1266－03
Isolation of endogenous microbes from vanilla
CHEN Xue－hua，Lü Dai－zhu
（Analysis and Testing Center, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101, China）
广西农业科学 2010，41（12）：1266-1268 Guangxi Agricultural Sciences
香荚兰内生微生物的分离
陈雪华，吕岱竹
（中国热带农业科学院分析测试中心，海口 571101）
摘要：为寻求利用香荚兰植株组织中的内生菌资源制备天然香兰素生物合成的新方法，以不同时期采集的香荚
兰气生根、茎干、叶片等为材料，进行内生微生物初步分离。结果表明，不同季节取样的植株组织分离获得菌株数量有
所不同，在3个时期采样的香荚兰植株组织中共分离获得52株菌株，其中2009年6、11月分别获得23、20株菌株，2010年
1月获得9株菌株；香荚兰植株不同组织中内生微生物分布存在明显差异；在获得的52株菌株中，细菌33株，真菌19株，
1． 1 试验材料 香荚兰新鲜植株样品分别于2009年6月24日 、
11月 25日 及 2010年1月 29日 采 自 中 国 热 带 农 业 科 学 院香料饮料研究所内的香荚兰种植地。 选取植株 生长健康、外观无任何病斑的枝条若干，剪下带回 实验室，按常规无菌操作方法进行消毒处理。
普通培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g， 琼脂15～20 g，蒸馏水定容至1000 mL，调节pH值为 7．4～7．6。 PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖10 g，琼 脂20 g，蒸馏水1000 mL，pH值自然，将上述培养 基 于1×105 Pa高压蒸汽灭菌30 min， 冷却至45℃后分 别倒平板待用。 1． 2 试验方法 1． 2． 1 材 料 消 毒 随 机 剪 取 枝 条 上 不 同 部 位 的 气生根、茎干、叶片等，按下列步骤进行表面消毒： 自来水冲冼→将冼净的气生根、茎干剪成长2．0 cm 小段、叶片剪成2．0 cm×2．0 cm方块→75％乙醇漂洗 5 min→无菌水冲洗3次→0．1％氯化汞漂洗1 min→ 无菌水冲洗5次→无菌条件下用无菌刀片将气生 根、茎干分别切去两端，取中央约0．5 cm的小段，叶 片切去四周边沿，取中间约0．5 cm×0．5 cm的小方块 作定植培养用。 为检验材料表面消毒效果，吸取最 后一次冲冼液0．1 mL涂 布 在 上述2种 培 养基 平 板 ， 经培养后无微生物长出，表明材料表面消毒彻底。 1． 2． 2 分 离 培 养 将 处 理 的 样 品 分 别 置 于 普 通 培 养 基 平 板 上 ，每 个 平 皿 接 种 5～8 小 块 ，（28±1）℃ 培 养， 待样品 边 缘 有菌 落 长 出时 转 入PDA培 养基 培 养，反复纯化得到纯培养菌落。 1． 3 内生微生物的初步鉴定 1． 3． 1 将 不 同 采 样 时 间 和 不 同 部 位 的 植 株 器 官 分离获得的菌落置于放大镜下观察，根据菌落的大 小、颜色、透明度、干湿程度等表面形态特征，并结 合 光 学 显 微镜 观 察 ，对分 离 的 菌 落进 行 分 析 归类 。 1． 3． 2 选 取 从 叶 片 中 分 离 获 得 的 1 株 米 黄 色 菌 落，经普通培养基培养24 h后 ，挑 取单 个 纯 菌 落的 少许菌体放入盛有3 mL 0．45％氯化钠 溶 液的 小 试 管中，用无菌玻璃棉签搅拌均匀，在比浊仪上进行 浊度测定， 使小试管中的菌液浊度在0．50~0．63麦 氏 标 准之 间 ，然 后把 革 兰 氏 阴性 （GN）菌 鉴 定 卡插 入小试管中，随即用VITEK2 COMPACT全自动微生 物鉴定仪进行读卡鉴定。
部位 Organ
叶 Leaf
2010年 1月
茎 Stem
Jan., 2010 气生根 Aerial root
总数 Total
叶 Leaf
2009年6月
茎 Stem
Jun., 2009 气生根 Aerial root
总数 Total
叶 Leaf
2009年11月
茎 Stem
Nov., 2009 气生根 Aerial root
收稿日期：2010－10-11 基金项目：中国热带农业科学院分析测试中心主任基金项目（2009－02） 作者简介：陈雪华（1960－），女，海南海口人，实验师，主要从事微生物检测、电子显微镜仪器分析工作。
陈雪华等：香荚兰内生微生物的分离
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新的天然香兰素合成方法奠定基础。
1 材料与方法
Abstract：T he present experiment was conducted to isolate and identify the endogenous microbes in vanilla plant. The aerial root, stem and leaf of vanilla plant sampled at different stages, and used to isolate the endogenous microbes preliminarily. The results showed that the microbe quantities and species separated from different plant organs varied in different stage samples. Total 52 strains were isolated from aerial root, stem and leaf, of which, 23 and 20 strains isolated from plant organs sampled on Jun. and Nov., 2009, respectively, and 9 strains were isolated from plant organs sampled on Jan., 2010. Out of 52 strains, 33 belonged to bacteria and 19 to fungus. The strans isolated from leaf were the highest (30) in number, followed by aerial root (16) and stem (6). The isolated strains were classified into 7 monoids including 4 bacterial species and 3 fungul species according to the size, color, transparency and humidity parameters of isolated colony surface and also the microscopic observation. The present study indicated the distribution of endogenous microbes in vanilla plant, and provides basis for the further isolation and screening researches.
Key words: vanilla; endogenous microbe; isolation