免疫荧光(内源性PCDH1与突触前后Marker共定位)
免疫荧光发光原理
免疫荧光发光原理免疫荧光发光原理是一种通过使用荧光染料来标记目标分子并利用荧光显微镜观察的技术。
该技术被广泛应用于生物医学领域，例如免疫细胞化学、分子生物学、免疫学等领域。
通过与相应抗体的结合，能够识别特定的蛋白质在细胞和组织中的分布和定位。
免疫荧光发光原理的基本原理是利用特异性抗体与目标分子结合，并使用标记荧光物质的方法来检测目标分子的位置。
免疫荧光技术是通过特异性抗体与目标分子结合的原理，来实现对细胞和组织中特定蛋白质的检测和定位。
该技术的基本原理是将待检测的蛋白质与特异性的抗体结合，然后使用荧光标记的二抗或荧光标记的蛋白A/G来识别已结合的抗体。
免疫荧光技术通过荧光显微镜的观察，可以清晰地显示蛋白质在细胞或组织中的位置和分布情况，为生物学研究提供了重要的信息。
在免疫荧光发光原理的应用中，荧光物质是不可或缺的关键元素。
荧光物质可以分为有机染料和荧光蛋白两类。
有机染料是目前应用最广泛的荧光标记物质，其在荧光显微镜下呈现出明亮和稳定的荧光信号，适用于多色染色和多波长检测。
而荧光蛋白则是一类来源于生物体的天然荧光染料，常用于实时观察生物过程和蛋白质相互作用。
免疫荧光技术的发展使得科研人员可以更加准确和快速地研究生物体内复杂的分子和细胞结构。
在细胞生物学领域，免疫荧光技术被广泛应用于细胞分子标记、细胞分泌途径和细胞表面受体的研究。
通过将荧光染料标记于细胞内的特定蛋白质，可以直观地观察到这些蛋白质在细胞内的位置和表达水平，为研究细胞信号传导和细胞功能提供了重要的手段。
在生物医学领域，免疫荧光技术也被广泛运用于疾病的诊断和治疗。
通过检测患者体液或组织中的特定蛋白质标志物，可以实现早期疾病的诊断和追踪疾病的进展。
在免疫组织化学中，免疫荧光技术也被用于检测肿瘤标志物和炎症因子，为肿瘤诊断和治疗提供了可靠的手段。
除了在生物医学领域，免疫荧光技术还在植物学、微生物学和生物技术等领域有着广泛的应用。
在植物学领域，免疫荧光技术被用于研究植物生长发育和植物对环境逆境的应答机制。
免疫荧光（内源性PCDH1与突触前后Marker共定位）
免疫荧光（内源性PCDH1与突触前后Marker共定位）
免疫荧光(内源性PCDH1与兴奋性和抑制性突触前后Marker共定位) ⼆、免疫荧光
神经元：DIV15-16
1.将细胞培养液吸掉；
Note：甲醛固定之前没必要⽤1ＸPBS洗，防⽌渗透压不合适导致细胞破裂
2. 4% PFA（1ＸPBS配制）室温固定10min；
Note: 4%PFA不能⽤TBS配制，TBS中的Tris会与甲醛的醛基反应，影响甲醛与蛋⽩的结合，降低固定效果；
3. 1ＸTBS 洗三次，5min/次；
Note：TBS中有Tris，可洗掉没有形成粘连的甲醛，减少荧光背景，
4. 0.4% Triton X-100（1ＸPBS配制）室温透化20 min；
Note: Triton透化时间长，细胞易脱落；
5. 1ＸPBS洗三次，5 min/次(此步可省略)；
6. 10%驴⾎清室温封闭1h；
7. ⼀抗（1ＸPBS配制）Rb@PCDH-1 (1:200, proteintech) Ms@VGLUT1(1:500, MAB5502) 、Ms@PSD95(1:100, mal-046)、Ms@VGAT (1:500, SYSY 131011)、Ms@Gephyrin (1:1000, SYSY 147011 ) 4℃过夜
8. 1ＸPBS洗三次，5 min/次；
9. 荧光⼆抗（1ＸPBS配制），594 Donkey@Rb）(1:1000) 和488 Donkey@Ms(1:1000),室温孵育1h；
10. 1ＸPBS洗三次，5 min/次；
11.加防荧光淬灭剂封⽚固定，倒置荧光显微镜观察。
免疫荧光技术名词解释细胞生物学
一、免疫荧光技术概述免疫荧光技术是一种通过荧光显微镜观察细胞或组织中特定分子的方法。
它利用抗体与待检测分子结合后，再加上荧光标记的二抗或荧光标记的直抗，通过荧光显微镜观察标记分子的位置和数量。
免疫荧光技术在细胞生物学和免疫学研究中得到了广泛应用，为研究生物分子的定位、表达和相互作用提供了重要技术支持。
二、免疫荧光技术的原理1. 抗体结合在免疫荧光技术中，首先需要用特异性抗体与待检测的分子结合。
这些抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，通过它们与目标分子的结合，实现对待检测分子的高度特异性识别。
2. 荧光标记待检测分子与抗体结合后，需要加入荧光标记的二抗或直抗，使得待检测分子与荧光物质结合形成复合物。
通常使用的荧光分子有FITC、TRITC、Alexa Fluor等，它们在不同激发波长下显示出不同的荧光颜色。
3. 观察和分析最后通过荧光显微镜观察标记的细胞或组织样品，根据荧光信号的强度和分布情况，可以判断待检测分子的位置和数量，从而了解其在细胞内的表达和功能。
三、免疫荧光技术的应用1. 细胞膜标记免疫荧光技术可用于标记细胞膜上的特定蛋白，例如细胞黏附蛋白、受体蛋白等，从而观察它们在细胞膜上的分布情况和动态变化，揭示细胞膜的结构和功能。
2. 细胞器定位通过标记特定的蛋白或抗体，免疫荧光技术可以用于观察细胞器的定位，如线粒体、内质网、高尔基体等，帮助研究者了解细胞器在细胞内的分布和相互作用。
3. 蛋白相互作用免疫荧光技术也被广泛应用于研究蛋白之间的相互作用关系，通过标记不同的蛋白并观察它们在细胞内的共定位情况，可以揭示蛋白间的相互作用网络和信号传导路径。
4. 细胞功能研究通过观察细胞内荧光标记物的动态变化，免疫荧光技术可以帮助研究者了解细胞的代谢活动、信号转导和细胞周期等重要的生物学过程。
四、免疫荧光技术的发展和趋势1. 自动化和高通量随着技术的发展，免疫荧光技术已经向自动化和高通量方向发展。
自动化的设备和流程使得实验操作更加标准和高效，而高通量的技术则可以同时观察大量样品，加快研究进程。
免疫荧光检测的基本原理与技术
免疫荧光检测的基本原理与技术免疫荧光检测是一种常用于生物医学研究和临床诊断的技术手段，它通过标记抗体或抗原的荧光探针来实现对特定生物分子的高度敏感和选择性检测，具有很高的灵敏度和分辨率。
本文将介绍免疫荧光检测的基本原理与技术。
一、基本原理免疫荧光检测是基于免疫学理论的，其中最重要的原理是抗体与抗原的特异性结合。
抗原是指能够诱导机体免疫反应并与抗体特异性结合的分子，抗体则是由生物体对抗原刺激产生的特异性蛋白质。
在免疫荧光检测中，首先需要标记荧光物质的抗体或抗原，一般常用荧光染料如荧光素和荧光素同功酶等。
这些荧光染料可以通过共价偶联或非共价结合的方式与抗体或抗原结合，形成荧光标记的抗体或抗原。
当标记好的抗体或抗原与待检测的样品中的目标生物分子结合时，通过荧光显微镜观察，荧光信号可以被捕捉和记录下来。
荧光信号的强弱与待测物质的浓度有关，可以通过定量分析来获得样品中目标生物分子的含量。
因此，免疫荧光检测可以实现对各种生物分子的定性和定量分析。
二、技术步骤免疫荧光检测通常需要进行一系列的步骤，包括试样制备、标记物制备、免疫反应、荧光显微镜观察和结果分析等。
下面将详细介绍每个步骤的具体操作。
1. 试样制备试样制备是免疫荧光检测的第一步，它决定了后续免疫反应的成功与否。
首先需要从待测样品中提取目标生物分子，并将其纯化和浓缩。
这些样品可以是血液、组织、细胞等。
对于血液样品，可以通过离心和纯化步骤来获取血清或血浆，使样品中的干扰物质最小化。
2. 标记物制备标记物制备是将荧光染料与抗体或抗原结合的步骤。
一般来说，需要事先准备好标记物，如标记荧光素的抗体。
标记荧光染料可以通过化学反应或酶促反应将其与抗体或抗原发生结合。
3. 免疫反应免疫反应是免疫荧光检测的核心步骤，它通过免疫荧光染色来实现对样品中目标生物分子的检测。
在进行免疫反应时，将标记好的抗体或抗原加入到准备好的样品中，允许它们与样品中的目标生物分子结合。
随后，对免疫反应进行洗涤和缓冲处理，以去除未结合的抗体或抗原，并减少背景噪音信号。
免疫荧光共定位定量
免疫荧光共定位定量
免疫荧光共定位定量是一种常用的细胞学研究技术，用于同时检测和定量两个或多个蛋白质在细胞或组织中的分布情况。
利用免疫荧光共定位定量，可以通过特异性的抗体和荧光标记技术将不同蛋白质标记上不同颜色的荧光染料。
这些荧光标记的抗体将与样本中的目标蛋白质结合，并在荧光显微镜下观察和定量。
在定量分析方面，可以使用计算机软件来计算和比较目标蛋白质的荧光强度、亮度以及位置等参数。
这些参数的分析可以得出目标蛋白质在细胞或组织中的定量分布，以及与其他蛋白质的相对关系。
免疫荧光共定位定量广泛应用于细胞分子生物学、细胞信号转导、蛋白质定位和相互作用研究等领域。
它能够提供有关蛋白质亚细胞定位和相互作用的关键信息，有助于深入理解生物学过程和疾病的发生机制。
免疫荧光成像的原理
免疫荧光成像的原理
免疫荧光成像是利用激发荧光染料的特异性与抗原抗体反应来实现对特定生物分子的定位和可视化的一种技术。
其基本原理是将特定抗原抗体对结合到荧光染料上，然后将这种特定的荧光染料标记的抗体与待检测样品中的特定抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后在荧光显微镜下，通过激光或荧光光源对荧光染料进行激发，使其发出荧光信号。
通过特定的荧光滤光片和荧光探测器，可以选择性地收集荧光信号，并将其转化为数字图像。
通过分析图像，可以确定抗原在样品中的分布情况、数量和相关的定量信息。
免疫荧光成像广泛应用于生物医学研究中，可用于研究细胞分子定位、表达水平、相互作用关系等。
同时，它也具有高灵敏度、高分辨率和多参数分析的特点，因此在生物医学诊断和药物研发中也具有重要的应用价值。
(完整word版)免疫荧光介绍
由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。总之，免疫荧光实验从细胞样品处理、固定、封闭、抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。
免疫荧光技术基本原理
免疫荧光技术基本原理宝子们，今天咱们来唠唠免疫荧光技术的基本原理，这可是个超有趣的东西呢！免疫荧光技术啊，就像是一场微观世界里的捉迷藏游戏。
咱们的身体里有好多好多小卫士，也就是抗体啦。
这些抗体就像超级侦探一样，专门寻找那些不应该出现在身体里的东西，比如说病菌啊，或者是身体里出了问题的细胞啥的。
那这个技术是怎么玩这个捉迷藏的呢？在这个微观的世界里，咱们有个特殊的舞台，就是细胞或者组织的切片。
把这个切片放在显微镜下看，就像是在看一个小小的星球，里面充满了各种各样的小生物（当然是细胞之类的啦）。
咱们的抗体这个超级侦探呢，有个特别的本事。
它能够非常精准地识别自己要找的目标，就像你在一群人中一眼就能认出你的好朋友一样。
这个目标呢，可能是某个特定的蛋白质或者其他的生物分子。
一旦抗体发现了目标，就会紧紧地抱住它，就像两个久别重逢的小伙伴拥抱在一起。
这时候，荧光就闪亮登场啦！这个抗体身上被咱们偷偷地做了个小标记，这个标记就是荧光物质。
你可以想象这个荧光物质就像是抗体身上的一个小彩灯。
当抗体抱住目标的时候，这个小彩灯就开始闪闪发光啦。
在显微镜下看，就像是黑暗中的小星星一样，特别的耀眼。
比如说，咱们想看看某个细胞里有没有一种特殊的病毒蛋白。
咱们就把带有荧光标记的专门针对这个病毒蛋白的抗体放到这个细胞的切片上。
如果这个细胞里有这个病毒蛋白，抗体就会和它结合，然后在荧光显微镜下，咱们就能看到有荧光的地方，就知道这个病毒蛋白在哪里啦。
而且哦，这个免疫荧光技术还能同时玩好几轮捉迷藏呢。
咱们可以用不同颜色的荧光标记不同的抗体，这样就能在同一个切片上看到好几种不同的东西啦。
比如说，用绿色的荧光标记一种抗体去寻找细胞里的一种结构，再用红色的荧光标记另一种抗体去寻找另一种蛋白质。
这样在显微镜下看的时候，就像是一个五彩斑斓的微观世界，绿色的部分是一种东西，红色的部分是另一种东西，特别的神奇。
免疫荧光技术就像是一把神奇的钥匙，打开了微观世界里很多秘密的大门。
免疫荧光共定位一抗孵育方法
免疫荧光共定位一抗孵育方法嘿，朋友们！今天咱就来唠唠免疫荧光共定位一抗孵育方法。
这可真是个有意思的事儿，就好像是给细胞们精心准备一场特别的“派对”。
咱先得把细胞准备好呀，就像给小客人们打扫干净房间一样。
然后呢，把一抗这个“主角”请出来。
这一抗可重要啦，它就像是一把特别的钥匙，能准确地找到它要开启的“锁”。
你可别小看了这一抗的选择哦，得选对才行！就跟你去参加聚会得穿合适的衣服一样。
选好了一抗，就该让它和细胞来个亲密接触啦。
把一抗小心翼翼地滴在细胞上，就好像给细胞轻轻地披上一件特别的“披风”。
这时候就得有耐心啦，让一抗慢慢地和细胞相互熟悉、相互作用。
你想想，要是你去认识新朋友，不也得花点时间了解一下嘛。
在这个过程中，可不能太着急，得给它们足够的时间来“交流感情”。
然后呢，等它们相处得差不多了，就得把多余的一抗洗掉啦。
这就像是派对结束后，把场地清理干净一样。
可别留着那些多余的呀，不然会干扰后面的观察呢。
这整个过程就像是一场精心编排的舞蹈，每一个步骤都得恰到好处。
要是哪个环节出了差错，那可就跳不好这支舞啦。
你说，这免疫荧光共定位一抗孵育是不是很神奇？就这么一系列的操作，就能让我们看到细胞里面那些奇妙的现象。
这就像是打开了一个微观世界的大门，让我们看到了平时看不到的精彩。
而且啊，这可不是随随便便就能做好的，得细心、得耐心、得有技巧。
就像做菜一样，调料放多了或者放少了，味道就不一样了。
咱这一抗孵育也是同样的道理呀，稍微不注意，可能结果就不理想啦。
所以啊，朋友们，当你们进行免疫荧光共定位一抗孵育的时候，一定要认真对待，把每个细节都把握好。
别嫌麻烦，这可是为了看到更美丽、更准确的结果呀！这就好像是追求一个梦想，过程可能会有点辛苦，但当你看到那令人惊喜的成果时，一切都值得啦！你们说是不是呢？反正我是这么觉得的！。
免疫荧光共定位
免疫荧光共定位免疫荧光共定位是利用抗原抗体的特异性结合免疫荧光共定位是利用抗原抗体的特异性结合，进行定位研究。
用特异性抗体包被的单克隆抗体与可溶性标记物结合，使它在细胞表面呈固相抗体，并将此抗体沉淀于固相载体上。
经洗涤后，将固相载体上的抗体与特异性抗原进行反应。
若抗原为荧光物质，其发射出的荧光被抗体捕获，标记物与抗原特异性结合后，通过捕获抗体后而固定下来。
经放射自显影后，在荧光显微镜下观察，能对抗原或抗体的位置作出判断。
所以，称此法为免疫荧光共定位。
免疫荧光技术用于抗原抗体的定位，主要包括免疫沉淀技术和免疫印迹技术两种。
免疫沉淀技术是用已知的抗原抗体复合物与荧光抗体或固相抗体反应，形成固相抗原或固相抗体，洗涤除去未结合的游离抗体或非特异性结合的结合物。
然后加入一定量的荧光素或某些能吸收光的染料，以固定或保护未结合的抗体和染料，在电子显微镜下观察标记的抗原抗体。
最常用的荧光染料有鲁米诺、辣根过氧化物酶和邻苯二甲酸二硝酯。
免疫印迹技术是先将可溶性的荧光抗体或固相抗体与细菌细胞共同培养，形成细胞内外均匀分布的抗原抗体复合物。
然后用特异性抗体包被细菌细胞，与细胞共同培养，在细菌细胞壁上出现固相抗体。
当细菌细胞被裂解后，游离抗体或未结合的抗体便暴露出来，并且可与固相抗体进行反应。
这样便可检测到游离抗体或未结合的抗体。
如果将抗原或抗体复合物与固相抗体一起加入酶标记的某些底物，则与底物结合的酶的活性受到抑制。
然后再用底物显色，经电子显微镜观察后，即可观察到固相抗原的显色情况。
如果同时将固相抗体和酶标记的抗原进行反应，也可产生相应的颜色。
在免疫学研究中，有时还需要使抗原抗体结合后再作免疫沉淀技术；或使抗原抗体偶联形成复合物再作免疫沉淀技术。
但无论采取哪种技术，均应考虑三点：一是必须选择合适的固相载体。
二是抗原和抗体都要纯化。
三是与固相载体结合的抗原抗体量要适当，要在一定限度内才能达到检测目的。
总之，免疫印迹技术不仅可用于抗原抗体的定位，而且也可用于抗原抗体的免疫检测。
免疫荧光技术原理
免疫荧光技术原理
免疫荧光技术是一种通过特定抗体和荧光染料的结合来检测和定位抗原的方法。
其基本原理是利用抗体的高度特异性和荧光染料的高度敏感性，在光学显微镜下观察和分析。
以下是免疫荧光技术的基本步骤和原理：
1. 样品制备：首先，需要将要检测的样品进行处理和制备。
这可能涉及到细胞培养、组织切片或体液的准备等。
2. 抗体标记：将特异性抗体与荧光染料结合。
荧光染料通常包括荧光素、染料片段（如FITC、Rhodamine等）或其他荧光物质。
3. 样品固定：将样品进行固定，防止抗体和抗原在后续步骤中的失活或破坏。
常用的样品固定方法包括冷冻切片、固定液浸泡和染色等。
4. 抗原检测：将标记过的抗体与样品中的抗原结合。
由于抗体的高度特异性，只有目标抗原与抗体匹配才会发生结合。
5. 洗涤：通过洗涤步骤去除非特异性结合物。
这可以减少背景信号，提高检测的敏感性和特异性。
6. 观察和分析：将样品放置在显微镜下，使用特定的荧光显微镜进行观察。
荧光染料的激发光源会使标记过的抗体发出荧光信号，这样可以定位和分析抗原的位置、数量和分布。
通过免疫荧光技术，研究人员可以在细胞、组织和体内分析抗原的表达、定位和相互作用。
它在免疫学、生物学、医学和病毒学等领域有广泛的应用，如抗体检测、细胞标记、癌症研究等。
它的高灵敏度和高空间分辨率使其成为了一种重要的研究技术。
免疫荧光介绍
免疫荧光介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。
利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位。
一、基本原理及特点：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。
在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
与放射免疫法相比，荧光免疫法无放射性污染，并且大多操作简便，便于推广。
国外生产的TDM用试剂盒，有相当一部分即属于此类，并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。
由于一般荧光测定中的本底较高等问题，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。
新发展了几种特殊的荧光免疫测定，与酶免疫测定和放射免疫分析一样，在临床检验中应用。
免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等。
细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。
免疫荧光标记实验原理
免疫荧光标记实验原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊免疫荧光标记实验原理。
你说这免疫荧光标记啊，就像是给细胞们穿上了特别的“衣服”，让我们能清楚地看到它们在干啥呢！想象一下，细胞就像一群小调皮，在我们身体这个大“游乐场”里跑来跑去。
我们怎么才能知道它们具体在哪个位置，在做什么呢？这时候免疫荧光标记就派上用场啦！它的原理呢，其实并不复杂。
我们先有一些针对特定分子的抗体，这些抗体就像是小侦探，能专门找到它们要找的目标。
然后呢，我们把这些抗体和一些能发光的东西结合起来，哇哦，这就厉害啦！当这些带着发光标记的抗体找到目标细胞上的特定分子后，那个地方就会亮起来，就像夜晚里的小星星一样，我们一下子就能看到啦！比如说，我们想看看某个蛋白质在细胞里的分布情况。
我们就用针对这个蛋白质的抗体，给它贴上发光的标签，然后把细胞放进去。
等一会儿，我们用显微镜一看，嘿，哪里有亮光，哪里就有这个蛋白质呀！这多神奇呀！这就好比是在一场盛大的派对上，我们给每个我们感兴趣的人贴上一个独特的荧光贴纸，这样我们就能在人群中快速找到他们，知道他们在哪个角落玩呢！免疫荧光标记实验能帮我们解决好多问题呢。
它可以让我们了解细胞的结构、功能，还能看看不同分子之间的关系。
就像是给我们配备了一副超级厉害的眼镜，让我们能看清细胞世界里的一切秘密。
而且哦，这个实验还很灵活呢！我们可以根据自己的需要选择不同的抗体，不同的荧光标记，就像是给自己搭配不同风格的衣服一样。
是不是很有意思呀？做这个实验的时候，可得细心点哦。
就像给小娃娃穿衣服一样，要轻轻地，不能弄疼了细胞呀。
每一步都要认真对待，不然可能就看不到那些漂亮的荧光啦！总之呢，免疫荧光标记实验原理就是这么神奇又实用。
它让我们能更深入地了解细胞的世界，为医学研究、生物学研究等提供了强大的工具。
让我们一起好好利用它，去探索更多的未知吧！怎么样，是不是对这个实验充满了好奇和期待呀？赶紧去试试吧！。
荧光免疫工作原理
荧光免疫工作原理
嘿，朋友！今天咱来聊聊那个超酷的荧光免疫工作原理呀！你知道吗，这就像是一场神奇的微观世界大冒险！
咱就说啊，荧光免疫就像是一个精确的侦探，能在细胞的海洋里找到目标呢！比如说，在医学领域，它能检测出那些隐藏在身体里的小坏蛋——病原体。
想象一下，一个个小小的抗体就像勇敢的小战士，带着荧光标记这个闪闪发光的“武器”。
它们在那片微观战场上，精准地找到它们要对付的敌人，这不就是活生生的一场战斗嘛！就好像警察抓小偷，一下就能锁定目标！
然后呢，当这些带着荧光的小战士和目标结合后，我们就能通过特殊的仪器看到那闪耀的荧光啦！哇塞，这可不是一般的神奇啊！医生们就能根据这些荧光信号，清楚地知道身体里发生了什么情况。
这可比大海捞针容易多了吧！
再比如说，科学家们研究细胞的各种活动时，荧光免疫也大显身手呢！它能让我们直观地看到细胞内部的各种变化，就像给我们打开了一个微观世界的窗口，让我们能偷偷瞄一眼细胞们都在干啥。
哎呀，这多有意思呀！
你看，荧光免疫是不是超厉害的！它给医学研究和临床诊断带来了多大的帮助呀！它就像是黑暗中的一盏明灯，照亮了我们了解身体内部秘密的道路。
所以啊，我们真得好好感谢这个伟大的技术呢！反正我是觉得它太牛了，你呢？是不是也对它充满了好奇和佩服呀！。
免疫荧光实验技术
595～600nm（橙 FITC的衬比染色或双
红色）
标记FAT
四甲基异硫氰酸罗 丹明 (TRITC) 藻红蛋白（PE）
Eu3+螯合物
550nm 490-560nm 340nm
620nm（橙红色） FITC的衬比染色或双 标记FAT
575nm（红色） 双标记FAT、流式细 胞术
613nm
时间分辨荧光免疫测 定
免疫荧光技术实验 封闭，抗体孵育
封闭：目的是为了减少抗体的非特异性结合，最常 用的封闭剂为 BSA, （PBS pH 7.5）,其他可选择的封 闭剂还有 1% 凝胶 gelatin, 1% bovine 或与二抗种 属相同的血清（3-10%）等。室温和4℃均可以。
抗体孵育：直接免疫荧光法中的一抗和间接免疫荧 光法中的二抗都是荧光抗体，因此在这些抗体孵育 的时候必须注意避光。此外，为保证结合质量和防 止干燥，抗体孵育应尽量在湿盒中进行。
免疫荧光技术简介:荧光
发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样品发射荧光的强 度。
激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品记录 的相应的荧光发射强度。
荧光寿命：荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的 时间。
荧光淬灭：荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退 称为荧光淬灭。如紫外线照射、高温（≥20℃）、苯胺、酚、硝基苯、 I-等 。
荧光显微镜
Chance Favors Only the Prepared Mind.
免疫荧光技术简介:抗体
抗体（Antibody）：抗体指机体的免疫系统在抗原刺 激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞 所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球 蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分 泌液中。
免疫荧光共定位曲线
免疫荧光共定位曲线标题：光明启示——深入解析免疫荧光共定位曲线导语：在生物医学领域中，一种重要的实验技术——免疫荧光共定位曲线，不仅能够帮助我们观察和理解分子在细胞或组织中的定位情况，更能为疾病治疗提供重要线索。
本文将从简到繁，逐步揭示免疫荧光共定位曲线的核心原理、实验步骤及应用前景，带您深入了解这一有价值的研究方法。
一、什么是免疫荧光共定位曲线？免疫荧光共定位曲线（Immunofluorescence Co-Localization Curves，简称ICC）是一种用于评估蛋白质在细胞或组织中的定位情况和相互作用的实验方法。
通过使用不同的抗体标记目标蛋白和融合蛋白，再借助荧光显微镜观察染色标记的信号重叠情况，从而得出蛋白质在细胞内的定位。
二、免疫荧光共定位曲线实验步骤：1. 样品制备：收集所需的细胞或组织样品，进行固定、渗透化处理和染色。
2. 抗体标记：选择适当的一抗和二抗进行蛋白质的标记，并注意调整浓度和特异性。
3. 荧光显微镜观察：将样品放置在荧光显微镜下观察，并记录下融合蛋白和目标蛋白的荧光信号分布情况。
4. 定量分析：使用图像分析软件对观察到的荧光信号进行定量分析。
5. 统计和曲线绘制：整理并统计分析数据，并根据结果绘制免疫荧光共定位曲线。
三、免疫荧光共定位曲线的应用：1. 确定蛋白定位：通过观察免疫荧光共定位曲线，可以准确判断蛋白质在细胞或组织中的定位，为进一步研究其功能和相互作用提供重要依据。
2. 探索蛋白相互作用：利用免疫荧光共定位曲线，可以分析蛋白之间的相互作用关系，揭示生物学过程中的信号传递和调控机制。
3. 疾病诊断和治疗：通过对免疫荧光共定位曲线的研究，可以发现蛋白质在疾病发展中的定位变化，为疾病诊断和治疗提供新的靶点和策略。
四、个人观点和理解：免疫荧光共定位曲线作为一种实验技术，对于生物医学研究具有重要的意义。
通过观察蛋白质在细胞或组织中的定位，我们可以更深入地了解生物分子的功能和相互关系，进而揭示疾病发生的机制。
免疫荧光定义
免疫荧光定义《嘿，免疫荧光定义，了解一下呗！》咱今儿来聊聊免疫荧光定义这个听起来有点专业的玩意儿。
其实啊，免疫荧光简单来说，就是一种很牛的生物技术手段啦！想象一下，细胞就像一个小小的微观世界，里面有着各种各样的分子在“奔跑”和“互动”。
而免疫荧光就像是我们给这个微观世界亮起的一盏盏“小灯”，让我们能清楚地看到那些重要的分子在干什么。
它是怎么做到的呢？嘿嘿，这就扯到抗体啦！这些抗体就像小侦探一样，专门去和特定的分子“牵手”。
然后，再给这些抗体带上一些能发光的“小饰品”，哇，这时候，那些特定的分子就变得闪闪发光啦！通过显微镜一看，嘿，一目了然，它们在哪儿，数量多少，都能看得清清楚楚。
这可太有用啦！比如说，医生们可以用这个技术来看看细胞里面有没有什么病变的蛋白，从而诊断疾病。
科研人员们也可以用它来研究细胞的各种活动和机制，就像看一场微观世界的大戏。
我第一次了解免疫荧光的时候，就觉得这简直太神奇啦！就好像进入了一个充满魔法的世界，那些小小的细胞在免疫荧光的照耀下，变得如此清晰和有趣。
记得有一次在实验室里，我和小伙伴们一起做免疫荧光实验，满心期待着看到那些漂亮的荧光图像。
结果呢，一开始因为操作不当，啥都没看到，一片黑乎乎的。
我们几个那叫一个沮丧啊，以为实验失败了。
但是，咱可不能轻易放弃呀，赶紧查资料找原因，重新来过。
最后，当我们终于在显微镜下看到那些闪闪发光的信号时，哎呀呀，那心情，别提有多激动了！免疫荧光定义虽然听起来有点深奥，但实际上，它就像一把打开微观世界大门的钥匙，让我们能更深入地了解生命的奥秘。
所以啊，大家别被它的专业名字吓住啦，其实它很有趣很神奇的哦！不管是医生还是科学家，或者是像我这样对生物学充满好奇的普通人，都能在免疫荧光的世界里发现别样的精彩呢！朋友们，一起去探索这个充满魅力的免疫荧光世界吧！。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
免疫荧光(内源性PCDH1与兴奋性和抑制性突触前后Marker共定位) 二、免疫荧光
神经元：DIV15-16
1.将细胞培养液吸掉；
Note：甲醛固定之前没必要用1ＸPBS洗，防止渗透压不合适导致细胞破裂
2. 4% PFA（1ＸPBS配制）室温固定10min；
Note: 4%PFA不能用TBS配制，TBS中的Tris会与甲醛的醛基反应，影响甲醛与蛋白的结合，降低固定效果；
3. 1ＸTBS 洗三次，5min/次；
Note：TBS中有Tris，可洗掉没有形成粘连的甲醛，减少荧光背景，
4. 0.4% Triton X-100（1ＸPBS配制）室温透化20 min；
Note: Triton透化时间长，细胞易脱落；
5. 1ＸPBS洗三次，5 min/次(此步可省略)；
6. 10%驴血清室温封闭1h；
7. 一抗（1ＸPBS配制）Rb@PCDH-1 (1:200, proteintech) Ms@VGLUT1(1:500, MAB5502) 、Ms@PSD95(1:100, mal-046) 、Ms@VGAT (1:500, SYSY 131011)、Ms@Gephyrin (1:1000, SYSY 147011 ) 4℃过夜
8. 1ＸPBS洗三次，5 min/次；
9. 荧光二抗（1ＸPBS配制），594 Donkey@Rb）(1:1000) 和488 Donkey@Ms(1:1000),室温孵育1h；
10. 1ＸPBS洗三次，5 min/次；
11.加防荧光淬灭剂封片固定，倒置荧光显微镜观察。