两种β-环糊精单臂键合固定相液相色谱法拆分三唑类手性农药

．（．．Ｃ．．．．Ｈ．．．．．３．．Ｃ．．．．Ｈ．．．．．ｅ．．Ｏ．．．．．）．．３．．．Ｓ．．．ｉ．．（．．Ｃ．．．．Ｈ．．．．．２．．）．．３．．Ｎ．．．．．＝．．．．．．．．Ｃ．．．．＝．．．．．．—Ｏ—
ＤＭＦ，Ｎ２，８０℃
节害
节篙
Ｆｉｇ・２
∞。萏０。一明小。８“∞哪蜘篙掣
（Ｈｏ’菖沪。Ｃ－ＮＨ－（ＣＨ２）３－Ｓｉ啪ＳＢＡ－１５
．闰ｏ （ＣＨ３ＣＨ晰ｚＯ）３，Ｓ№ｉ（ＣＨ：，２）３℃Ｎ＝Ｃ＝０．∞。歹一一㈣办￥“∞心明勘 丫
ＤＭＦ，Ｎ２，２５℃
！里垒：！ｉ些！！！！１
１１０℃
（Ｈ０’酉Ⅻ一∥一）３．Ｓｉ≤ＳＢ汩Ａ－１
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ①）
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｒｏｕｔ姻ｏｆ ＮＣＤＳＰ
５
ｔｗｏ＃－ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ
ｂｏｎｄｅｄ ＳＢＡ－１５ ｃｈｉｒａ］ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ
收稿日期：２０１４—１２－１５．网络出版日期：２０１５－０４—１５． 基金项目：国家自然科学基金（批准号：２１１６５０１２）、江西省自然科学基金（批准号：２０１０ＧＺＨ００８９）和江西省教育厅科技项目（批准 号：ＧＪＪｌｌ２７４）资助． 联系人简介：李来生，男，博士，教授，主要从事色谱分析与生化分析研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｌａｉｓｈｅｎｇｃｎ＠１６３．ｃｏｍ
１．１仪器与试剂
Ｗａｔｅｒｓ公司）；Ｖａｒｉｏ
Ｍｉｌｌｉ—Ｑ超纯水（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）；ＡＲｌｌ４０型电子天平（美国Ｏｈａｕｓ公司）． 有序介孔ＳＢＡ一１５类球形颗粒（孔径约２５ ａｍ，比表面积４２０ ｎ１２／ｇ，粒径２．５～４．５仙ｍ）为自制¨７｜； 三嵌段聚合物Ｐ１２３（平均分子量～５８００）、正硅酸乙酯（ＴＥＯＳ）、口一环糊精和３．氨丙基三乙氧基硅烷购 于Ｓｉｇｍａ公司；氨基卢一环糊精（纯度≥９８％）购于山东滨州智源生物科技有限公司；１，３，５．三甲苯 （ＴＭＢ）和Ⅳ，Ⅳ一二甲基甲酰胺（ＤＭＦ）为分析纯，购于阿拉丁试剂（上海）有限公司，ＤＭＦ使用前经过氢 化钙除水后减压重蒸；外消旋的灭菌唑（Ｔｒｉｔｉｃｏｎａｚｏｌｅ，纯度Ｉ＞９８．２％）、烯唑醇（Ｄｉｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ，纯度≥ ９８．６％）、戊唑醇（Ｔｅｂｕｃｏｎａｚｏｌｅ，纯度≥９８．６％）、己唑醇（Ｈｅｘａｃｏｎａｚｏｌｅ，纯度≥９９．９％）、粉唑醇（Ｆｌｕ— ｔｒｉａｆｏｌ，纯度Ｉ＞９８．２％）、烯效唑（Ｕｎｉｃｏｎａｚｏｌｅ，纯度／＞９９．８％）、抑霉唑（Ｉｍａｚａｌｉｌ，纯度ｔ＞９７．７％）、腈菌 唑（Ｍｙｃｌｏｂｕｔａｎｉｌ，纯度９９．０％）、三唑醇（Ｔｆｉａｄｉｍｅｎｏｌ，纯度≥９７．９％）和三唑酮（Ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ，纯 度Ｉ＞９８．６％）标准品均购于上海市农药研究所；乙腈（ＡＣＮ）和甲醇（ＭｅＯＨ）为色谱淋洗剂（美国Ｔｅｄｉａ 公司）；三乙胺（ＴＥＡ，分析纯，国药集团化学试剂有限公司），使用前重蒸一次；冰醋酸（ＨＡｃ，分析 纯，上海青析化工科技有限公司）；实验用水为超纯水；其它试剂均为分析纯．
Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ
ｏｆ １０ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｕｓｅｄ ｃｈｉｒａｌ ｔｒｉａｚｏｌｅ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ
万方数据
高等学校化学学报
１
实验部分
２６９５型高效液相色谱，配有２９９６型二极管阵列检测器（ＰＡＤ），Ｍａｓｓｌｙｎｘ４．１色谱工作站（美国 ＥＬ ＩＩＩ型元素分析仪（德国Ｅｌｅｍｅｎｔａｒ公司）；色谱柱填柱装置（美国Ｈａｓｋｅｌ公司）；
万方数据
程彪平等：两种口一环糊精单臂键合固定相液相色谱法拆分三唑类手性农药
在正相色谱模式下拆分７种三唑类手性农药，其中己唑醇和三唑醇２种农药得到了部分拆分，其余５ 种农药则未被拆分．Ｌｉ等一。采用菲罗门公司的Ｃｈｉｒｅｘ ３０２０手性Ｐｉｒｋｌｅ柱（ｓ．亮氨酸．Ｒ一萘乙胺）对烯效 唑、烯唑醇和丙环唑对映体进行手性分离，其中丙环唑有４个对映体，在该柱上仅分离得到２个峰． Ｗａｎｇ等¨引使用涂覆型的３，５．二甲苯氨基甲酸酯化纤维素固定相，以正己烷．异丙醇为流动相，拆分了 烯唑醇等５种农药对映体，该方法溶质被洗脱的时间较长（３０～５０ ｍｉｎ），且峰有展宽，将柱温下降至 ０℃时才表现出较好的分离选择性．李朝阳等ｕｕ利用Ｄａｉｃｅｌ公司的Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ－Ｈ和Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ—Ｈ纤 维素类商品柱，在正相色谱条件下拆分了烯唑醇、三唑酮和三唑醇对映体，并进一步确定了其对映体 的绝对构型．为了克服涂覆型纤维素类固定相只能用于正相色谱分离的不足，Ｚｈａｎｇ等¨引尝试使用商 品化的部分键合型Ｌｕｘ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－２纤维素手性柱，在反相色谱模式下实现了一对粉唑醇对映体的拆分， 其分离度为１．８２． 环糊精（ＣＤ）是由Ｄ一吡喃葡萄糖单元通过Ｏｔ－１，４一糖苷键连接而成的环状分子，其中每个届－环糊精 含有３５个规整的手性位点，已成为高效液相色谱固定相中一类重要的手性选择剂．环糊精类手性固定 相是可以在正相、反相和极性有机溶剂液相色谱条件下使用的多模式固定相¨３｜，其性能稳定，且自制 的环糊精手性柱的成本约为上述商品柱的１／１０，大大节省了分析成本．稳定的环糊精键合固定相最早 由Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ等ｕ４１开发，主要是通过ＮａＨ活化口一环糊精的羟基，再与含环氧基的ＫＨ５６０偶联剂硅胶反 应制得固定相．后续发展的衍生化届．环糊精固定相多数在全衍生化后会造成环糊精端口的部分拥堵， 不利于发挥环糊精腔体对溶质的包结作用． Ｚｈａｏ等［１副首次合成了有序介孔材料ＳＢＡ．１５，并用作ｃ，。键合基质，因其具有比表面积大、孔大小 可控、孔道结构规则、渗透性好、传质快且水热稳定性良好等优点，故作为液相色谱填料具有良好的 应用前景．最近，我们［１刚合成了一种新型的双口一环糊精键合ＳＢＡ一１５液相色谱固定相，利用双环糊精 模拟酶手性识别功能，结合ＳＢＡ一１５有序介孔基质，建立了心血管类卢一受体阻滞剂手性药物对映体的 快速拆分方法．迄今，尚未见环糊精类键合液相色谱固定相拆分三唑类手性农药对映体的报道． 本文合成了２种分别含有稳定的氨基甲酸酯基和脲基连接臂的口一环糊精键合有序介孔ＳＢＡ一１５手 性固定相（ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ）．氨基甲酸酯基和脲基既是稳定的键合臂，又相当于单衍生化的酯基和脲 基衍生化基团．所制备的２种单衍生化届一环糊精手性固定相不会造成环糊精端Ｉ＝Ｉ的拥堵，使环糊精配 体仍保留对溶质客体较强的包结能力，具有较好的对映体拆分效果．采用新固定相拆分了１０种常见的 三唑类农药对映体（结构见图１），优化了手性分离条件，并比较了２种不同连接臂结构对手性分离的 影响，探讨了新环糊精类固定相对三唑类农药的手性分离机理，期望用于蔬菜、水果、土壤和水体等 食品和环境样品中三唑类农药残留量的快速检测及其活性、毒性和代谢等药代动力学研究．
摘要以有序介孔材料ＳＢＡ一１５为基质，卢一环糊精和氨基卢－环糊精为配体，通过环糊精端口的羟基和氨基与 ３－异氰酸丙基三乙氧基硅烷偶联剂上活泼的异氰酸酯基之间的加成反应，制备了２种不同单键合臂的口一环 糊精修饰ＳＢＡ－１５手性固定相（ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ），它们分别含有稳定的氨基甲酸酯基和脲基键合臂．在反相 高效液相色谱模式下，以灭菌唑、烯唑醇、己唑醇和戊唑醇等１０种常见的三唑类手性农药为探针，考察了 ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ的基本手性色谱性能．研究结果表明，２种新固定相对三唑类农药对映体均有较好的快速拆 分能力，所需分离时间较短（＜３０ ｍｉｎ），其中灭菌唑和烯唑醇的选择性因子（ａ）分别为１．２９和１．２８，分离度 分别达到３．８４和３．２３．采用甲醇、乙腈和水组成的简单流动相，室温下在ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ上分别拆分了 ９种和８种三唑类手性农药对映体．研究发现拥有适当大小和手性碳连接羟基的三唑类农药在上述２种新固 定相上有较好的拆分效果，说明固定相上的环糊精配体对溶质的包结、氢键和空间位阻等协同作用对空间 手性识别有重要贡献．不同批次ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ的键合量分别为０．１３９—０．１５６和０．１２０—０．１３７斗ｍｏｌ／ｍ２， 表明２种固定相的制备方法有较好的重现性．与涂覆型纤维素商品柱相比，新的脲基环糊精固定相性能更 稳定，反相色谱实用性更强，且制备方法简便，成本较低，在三唑类手性农药对映体残留量检测中具有良好 的应用前景． 关键词 高效液相色谱法；卢・环糊精键合ＳＢＡ一１５固定相；三唑类手性农药；手性分离；分离机理 文献标志码Ａ
１．２环糊精类键合相ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ的制备
以Ｐ１２３为模板，ＴＭＢ为扩孔剂，ＴＥＯＳ为硅源，在酸性条件下ＴＥＯＳ水解，自组装后转入水热反 应釜中静态晶化，除模板后得到有序介孔二氧化硅ＳＢＡ一１５类球形颗粒，表征图谱及合成方法见文献
［１７］．
ＣＤＳＰ和ＮＣＤＳＰ的制备路线如图２所示．将１．１５ ｇ干燥的口一环糊精（Ａ）在搅拌下溶于２０ ｍＬ无水 ＤＭＦ中，室温下缓慢滴加０．３ ｍＬ异氰酸丙基三乙氧基硅烷，滴毕升温至８０℃反应６ ｈ，得到产物 （Ｂ）．向上述溶液中加人３．０
Ｖ０１．３６ ２０１５年５月
高等学校化学学报
ＣＨＥＭＩＣＡＬ
Ｎｏ．５
８７２—８８０
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＩＥＳ
ｄｏｉ：１０．７５０３／ｃｊｅｕ２０１４１０９５
两种卢・环糊精单臂键合固定相液相色谱法 拆分三唑类手性农药
程彪平，李来生，周仁丹，李 良，张宏福
（南昌大学分析测试中心，南昌３３００４７）
ｇ
ＳＢＡ－１５，升温至１１０℃继续反应２４ ｈ，冷至室温后过滤，得到粗产品．
将粗产品反复用ＤＭＦ、甲醇和丙酮洗涤至滤液澄清为止，再以丙酮为溶剂索氏提取１２ ｈ用于清洗孔 道，将固体于５０℃真空干燥１２ ｈ，得到固定相ＣＤＳＰ（Ｃ）．
将１．１５ ｇ干燥的氨基卢一环糊精（Ｄ）在搅拌下溶于２０ ｍＬ无水ＤＭＦ中，缓慢滴加０．３ ｍＬ异氰酸丙
ｐｈａｓｅｓ（ＣＤＳＰ
ａｎｄ ＮＣＤＳＰ）
万方数据
程彪平等：两种口－环糊精单臂键合固定相液相色谱法拆分三唑类手性农药
基三乙氧基硅烷，滴毕在室温下继续搅拌反应６ ｈ，得到产物（Ｅ）．加入３．０ 溶剂索氏提取１２ ｈ，将固体于５０℃真空干燥１２ ｈ，得到固定相ＮＣＤＳＰ（Ｆ）．