siRNA沉默人类急性髓细胞白血病HL-60细胞HDAC1基因表达的实验研究

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siRNA沉默EZH2对HL-60细胞迁移、增殖能力的影响及其机制

论著㊃基础研究 d o i :10.3969/j.i s s n .1671-8348.2021.10.007网络首发 h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s /d e t a i l /50.1097.R.20201127.1227.010.h t m l (2020-11-27)s i R N A 沉默E Z H 2对H L -60细胞迁移㊁增殖能力的影响及其机制*朱秋花,潘学谊,曾文彬,周兰兰,关则兵ә(广东药科大学附属第一医院血液内科,广州510080) [摘要] 目的探讨人类同源基因2(E Z H 2)对人急性早幼粒细胞白血病细胞系H L -60细胞迁移㊁增殖能力的影响及其机制㊂方法通过慢病毒转染技术用s i R N A s 沉默H L -60细胞的E Z H 2基因,用实时荧光定量P C R (qR T -P C R )及W e s t e r n b l o t 验证3个不同序列的s i R N A 敲除E Z H 2的效果并筛选出最佳序列㊂随后用C C K -8和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和凋亡,并用T r a n s w e l l 迁移小室试验检测细胞的迁移能力,用W e s t e r n b l o t 方法检测细胞迁移㊁增殖及凋亡相关蛋白的表达水平㊂结果在H L -60细胞中用s i R N A s 敲除E Z H 2后其增殖能力下降(P <0.05),凋亡增加(P <0.05)㊂T r a n s w e l l 迁移小室试验结果显示,H L -60细胞敲除E Z H 2组(s i E Z H 2组)的下室细胞比例比H L -60野生株细胞组(w i l d 组)和空病毒组(N C 组)明显降低;苏木素染色后发现s i E Z H 2组膜上细胞基数明显低于w i l d 组和N C 组㊂W e s t e r n b l o t 检测显示,s i R N A 沉默E Z H 2后细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MM P -2)表达下调,E -钙黏蛋白(E -c a d h e r i n)上调,增殖及凋亡相关蛋白B 淋巴细胞瘤-2(B c l -2)基因下调,而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(c a s p a s e -3)上调㊂结论在H L -60细胞中敲除E Z H 2基因后其增殖㊁迁移能力下降,凋亡增加㊂[关键词] 急性早幼粒细胞白血病;H L -60;人类同源基因2;细胞迁移;髓外浸润[中图法分类号] R 557+.3[文献标识码] A[文章编号] 1671-8348(2021)10-1653-05E f f e c t a n d m e c h a n i s m o f s i R N A s i l e n c i n g E Z H 2o n m i gr a t i o n a n d p r o l i f e r a t i o n a b i l i t y of H L -60c e l l s *Z HU Q i u h u a ,P A N X u e y i ,Z E N G W e n b i n ,Z H O U L a n l a n ,G U A N Z e b i n g ә(D e p a r t m e n t o f H e m a t o l o g y ,F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f G u a n g d o n g P h a r m a c e u t i c a l U n i v e r s i t y ,G u a n g z h o u ,G u a n g d o n g 510080,C h i n a ) [A b s t r a c t ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e ef f e c t a n d m e c h a n i s m o f E Z H 2o n t h e m ig r a t i o n a n d p r o l i f e r a -t i o n a b i l i t y o f a c u t e p r o m y e l o c yt i c l e u k e m i a H L -60c e l l s .M e t h o d s s i R N A s w e r e u s e d t o s i l e n c e t h e E Z H 2g e n e i n H L -60c e l l s b y l e n t i v i r a l t r a n s f e c t i o n .T h e e f f e c t o f t h r e e d i f f e r e n t s e q u e n c e s o f s i R N A k n o c k i n g ou t E Z H 2w a s c o n f i r m e d b y q u a n t i t a t i v e r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e -p o l ym e r a s e c h a i n r e a c t i o n (Q R T -P C R )a n d W e s t -e r n b l o t ,m o r e o v e r t h e o p t i m a l s e q u e n c e w a s s c r e e n e d o u t .S u b s e q u e n t l y ,t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n a c t i v i t y a n d a p-o p t o s i s w e r e d e t e c t e d b y c e l l c o u n t i n g k i t -8(C C K -8)a n d f l o w c y t o m e t r y ,t h e c e l l m i g r a t i o n a b i l i t y wa s d e t e c -t e db y T r a n s w e l l m i g r a t i o n a s s a y ,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f m i g r a t i o n ,p r o l i f e r a t i o n a n d a p o pt o s i s a s s o c i a t e d p r o t e i n s w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t .R e s u l t s A f t e r s i R N A s k n o c k i n g ou t E Z H 2i n H L -60c e l l s ,t h e p r o l i f -e r a t i o n a b i l i t y w a s d e c r e a s e d (P <0.05)a n d a p o p t o s i s w a s i n c r e a s e d (P <0.05).T h e T r a n s w e l l m i gr a t i o n c h a m b e r t e s t r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e r a t i o o f m i g r a t e d c e l l s i n t h e l o w e r c o m p a r t m e n t s i n E Z H 2g r o u p(s i E Z H 2g r o u p )w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d c o m p a r e d w i t h t h a t i n t h e H L -60w i l d c e l l s g r o u p (w i l d g r o u p )a n d e m p t y v i r u s g r o u p (N C g r o u p ),a n d t h e c e l l sb a s e n u m b e r o n t h e m e m b r a n e i n t h e s i E Z H 2g r o u p w a s s i g-n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e w i l d g r o u p a n d N C g r o u p a f t e r H e m a t o x y l i n s t a i n i n g .T h e W e s t e r n b l o t d e -t e c t i o n f o u n d t h a t a f t e r s i l e n c i n g E Z H 2b y s i R N A ,t h e e x p r e s s i o n o f m i gr a t i o n -r e l a t e d p r o t e i n MM P -2w a s d o w n -r e g u l a t e d a n d E -c a d h e r i n w a s u p -r e g u l a t e d ;a n d t h e p r o l i f e r a t i o n a n d a p o pt o s i s r e l a t e d p r o t e i n B -c e l l l y m p h o m a -2(B c l -2)g e n e w a s d o w n -r e g u l a t e d ,w h i l e c a s p a s e -3w a s u p -r e gu l a t e d .C o n c l u s i o n A f t e r E Z H 2k n o c k i n g o u t E Z H 3g e n e i n H L -60c e l l s ,i t s p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n a b i l i t y i s d e c r e a s e d a n d a p o pt o s i s i s i n c r e a s e d .3561重庆医学2021年第50卷第10期*基金项目:广东省自然科学基金项目(2017A 030313664);广州市越秀区科技计划项目(2017-W S -008)㊂作者简介:朱秋花(1989 ),住院医师,硕士,主要从事白血病及其髓外浸润的研究㊂ ә 通信作者,E -m a i l :z e b i n g gu a n @126.c o m ㊂[K e y w o r d s]a c u t e p r o m y e l o c y t i c l e u k e m i a;H L-60;e n h a n c e r o f z e s t e h o m o l o g2;c e l l u l a r m i g r a t o r y;e x-t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n初诊的急性髓系白血病(AM L)患者中有30%~ 40%可伴有髓外浸润(E M I),E M I主要表现为淋巴结肿大㊁皮肤结节㊁齿龈增生㊁中枢神经系统的侵犯及肝脾肿大等[1]㊂急性早幼粒细胞白血病(A P L)占成人AM L的10%~15%,具有特殊的生物学和遗传学特征㊂A P L常起病较凶险,有10%~20%的患者死于早期出血㊂E M I在A P L中发生不少见,且研究显示E M I与AM L患者预后差相关[2]㊂作为多梳家族蛋白(P c G)中具有催化活性的亚基,果蝇z e s t e基因增强子的人类同源基因2(E Z H2)是主要起组蛋白甲基转移酶的作用,通过甲基化修饰核小体组蛋白H3K27位点赖氨酸调节细胞分化㊁增殖及肿瘤的形成[3-4]㊂有研究发现,E Z H2在多种恶性实体肿瘤如肾癌㊁肺癌及甲状腺癌迁移及预后差相关[5-7],且有研究报道E Z H2抑制剂在体外有抗白血病作用[8]㊂但是E Z H2在白血病的作用及其参与E M I的机制研究较少㊂本课题前期研究证实人A P L细胞系H L-60和K a s u m i-1细胞均高表达E Z H2,且已通过实验证实在K a s u-m i-1细胞株中E Z H2促进其细胞迁移㊁增殖,抑制其凋亡[9]㊂本研究旨在探究E Z H2对H L-60细胞迁移㊁增殖能力的影响及可能的机制,以为A P L的表观遗传学治疗提供理论依据㊂1材料与方法1.1材料及试剂55例初治AM L患者骨髓单个核细胞标本来源于南方医院血液科㊂H L-60细胞购自天津血液病研究所㊂细胞的培养基为含有10%新生牛血清(杭州四季青公司,中国)的R P I M-1640培养基(H y c l o n e, U S A),并添加100U/L青霉素㊁100μg/L链霉素;在含有37ħ㊁5%C O2饱和湿度条件进行培养㊂R N A 提取试剂T r i z o l试剂盒及逆转录试剂盒均购自中国T a R a R a公司㊂E Z H2和β-a c t i n基因引物均由上海英俊捷基公司设计并合成㊂核蛋白/胞浆蛋白试剂盒购自中国弗德生物公司,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (c a s p a s e-3)单抗㊁E Z H2单抗㊁基质金属蛋白酶2 (MM P-2)单抗㊁H3K27m e3单抗㊁E-钙黏蛋白(E-c a d-h e r i n)单抗㊁B淋巴细胞瘤-2(B c l-2)单抗㊁G A P D H单抗均购自美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y(C S T)公司,二氨基联苯胺(D A B)显色液购自中国D A K O公司㊂能够敲除E H Z2的3种不同序列小干扰R N A(s i R-N A-1:A A C A G C T G C C T T A G C T T C A,s i R N A-2:A A C A G C T C T A G A C A A C A A A,s i R N A-3: G G A T A G A G A A T G T G G G T T T)及对照组空病毒(N C:T T C T C C G A A C G T G T C A C G T)购自中国吉凯基因㊂1.2方法1.2.1实时荧光定量P C R(q R T-P C R)方法检测E Z H2表达q R T-P C R方法检测AM L患者骨髓E Z H2m R-N A的表达水平,并分析其表达与临床特征的关系㊂1.2.2建立敲除E Z H2的H L-60细胞株6孔板接种对数生长期的H L-60细胞,使每个孔细胞数为1ˑ105个,H L-60细胞分别用3种不同序列s i R N A的慢病毒(分别为s i R N A-1组㊁s i R N A-2组㊁s i R N A-3组)及空载体慢病毒(为N C组,而未转染的H L-60则为w i l d组)转染,培养72h后在荧光显微镜下拍照㊂随后流式细胞术用来检测细胞的绿色荧光蛋白(G F P)转染率,并筛选出G F P阳性的细胞,用q R T-P C R及W e s t e r n b l o t验证3个不同序列的s i R N A敲除E Z H2的效果并筛选出最佳序列记为s i E Z H2组,体外扩大培养㊂1.2.3 T r a n s w e l l实验检测细胞迁徙能力细胞的迁移能力用T r a n s w e l l迁移小室实验来检测,小室基底膜的孔径为8μm㊂H L-60的3个处理组细胞株(w i l d㊁N C和s i E Z H2组),用磷酸缓冲盐溶(P B S)分别洗涤细胞2次,R P I M-1640培养基重悬细胞使细胞浓度为3ˑ106个/L㊂分别取3ˑ105个细胞接种到T r a n s w e l l小室的上室㊂下室加入500μL 各自细胞所需含有血清的正常培养基,在含有37ħ㊁5%C O2饱和湿度条件下培养18h后,对迁移到下室的细胞进行计数㊂同上处理各组细胞,培养时间为10 h㊂取出小室,用苏木素对小室膜上细胞进行染色,选择相同位置的5个视野进行计数并拍照㊂上述实验均重复3次㊂1.2.4 C C K8检测细胞增殖活性C C K8实验用来检测细胞的增殖活性,将H L-60的w i l d㊁N C㊁s i E Z H23组对数生长期的细胞接种于96孔板,调整每孔细胞数为1ˑ104个,各组设3个复孔㊂分别于0㊁24㊁48㊁72㊁96h后加入C C K8试剂,培养3h后在酶标仪下测定各孔450n m吸光度(A)值,以上试验重复3次㊂1.2.5流式细胞术检测细胞凋亡细胞凋亡用细胞凋亡双标检测试剂盒膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(A n n e x i n V-A P C/P I)检测,用P B S液漂洗w i l d㊁N C㊁s i E Z H23组细胞,1ˑB i n d i n g B u f f e r漂洗细胞1次离心弃上清液,随后用100μL1ˑB i n d i n g B u f f e r重悬3组细胞,加5μLA n n e x i n V-A P C,室温光孵育15m i n㊂1ˑB i n d i n gB u f f e r漂洗细胞1次之后离心弃上清液,在200μL 1ˑB i n d i n g B u f f e r重悬的3组细胞中加入5μL P I;用流式细胞仪来检测细胞凋亡㊂1.2.6q R T-P C R及W e s t e r n b l o t方法检测相关基4561重庆医学2021年第50卷第10期因及蛋白表达采用q R T -P C R 方法检测相关基因表达,具体方法同本课题组前期研究[10-11]㊂W e s t e r n b l o t 方法用来测定相关蛋白,取H L -60的w i l d ㊁N C ㊁s i E Z H 23组细胞提取蛋白,蛋白浓度用二喹啉甲酸(B C A )法检测,行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(S D S -P A G E )之后转膜,加入一抗在4ħ冰箱孵育过夜,次日洗膜之后加入二抗孵育2h ㊂以G A P D H 为内参,化学发光显色后拍照分析E Z H 2㊁组蛋白H 3第27位赖氨酸上三甲基化(H 3K 27m e 3)㊁MM P -2及E -c a d -h e r i n 蛋白表达水平㊂1.3 统计学处理数据用S P S S 13.0软件分析,用2-ΔC T 表示E Z H 2m R N A 表达水平,计量资料以x ʃs 表示,符合正态分布的两组比较采用t 检验(方差齐时)或校正t 检验(方差不齐时);多组间比较采用O n e -W a y A N O V A检验,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 AM L 患者E Z H 2表达水平与临床特征的关系55例AM L 患者E Z H 2表达与临床特征的关系,在AM L 中高表达E Z H 2患者E M I 发生率明显升高(P <0.01),见表1㊂2.2 各组细胞E Z H 2的表达水平比较在H L -60细胞中转染载有不同s i R N A 片段的慢病毒,培养72h ,荧光显微镜下拍照,见图1㊂q R T -P C R及W e s t e r n b l o t 检测E H Z 2基因及蛋白表达均下调㊂s i R N A -1组E Z H 2m R N A (0.0030ʃ0.0002)明显低于s i R N A -3组(0.0043ʃ0.0001)和s i R N A -2组(0.0064ʃ0.0006),差异均有统计学意义(P <0.001)㊂其中以s i R N A -1(序列A A C A G C T G C C T TA G C T T C A )下调H L -60细胞的E Z H 2最明显,W e s t e r n b l o t 检测结果与P C R 结果一致,流式筛选s i R N A -1组G F P 阳性细胞体外扩大培养用于后续实验,随后检测N C ㊁s i E Z H 2㊁w i l d 3组细胞E Z H 2的表达,qR T -P C R 及W e s t e r n b l o t 结果均显示,s i E Z H 2组E Z H 2表达均明显低于N C 组及w i l d 组(P <0.001),见图2㊂2.3 各组H L -60细胞增殖活性及凋亡率比较C C K 8实验提示在H L -60细胞中敲除E Z H 2后s i E Z H 2组的增殖能力明显下降(P <0.05)㊂通过流式细胞术检测细胞凋亡,发现s i E Z H 2组细胞凋亡明显增加(P <0.05),见图3㊂ A :s i R N A -1组;B :s i R N A -2组;C :s i R N A -3组㊂图1 荧光显微镜下拍照观察细胞G F P 表达(ˑ200) a :P <0.001,与w i l d 组比较;bP <0.001,与s i R N A -1组比较㊂图2 W e s t e r n b l o t 和q R T -P C R 检测E Z H 2的表达水平表1 AM L 患者E Z H 2表达与临床特征关系项目n低表达(n =23)高表达(n =32)χ2/ZP性别(男/女)555/1821/1110.3400.001年龄һ5531.0925.781.2130.225B M%һ5526.3929.16-0.6310.526P B %һ5422.5031.21-2.0120.044W B Cһ5522.1132.23-2.3120.021L D H (正常/升高)478/123/243.8590.049E M I (无/有)5518/57/2517.1600.001核型(正常/复杂)3812/223/10.2420.623续表1 AM L 患者E Z H 2表达与临床特征关系项目n低表达(n =23)高表达(n =32)χ2/ZP预后(低/中/高)472/15/24/22/20.2780.870诱导(D A /I A)#5510/1318/140.8730.350巩固(a /b /c )446/6/615/1/107.4950.024һ:平均秩;#:诱导方案中8例H A 合并到D A ,3例MA 合并到I A ;B M%:骨髓原始细胞比例;P B %:外周血原始细胞比例;a :诱导方案联合小于4个疗程的中㊁大剂量阿糖胞苷(M D /H D -A r a -C );b :诱导方案联合大于或等于4个疗程M D /H D -A r a -C 或自体造血干细胞移植(a u t o -H S C T );c :诱导方案联合异基因H S C T (a l l o -H S C T )㊂5561重庆医学2021年第50卷第10期2.4 各组H L -60细胞敲除E Z H 2后细胞迁移能力比较T r a n s w e l l 迁移实验中s i E Z H 2组的下室细胞比例[(4.50ʃ0.26)%]明显低于w i l d 组[(9.05ʃ0.30)%]和N C 组[(9.03ʃ0.27)%],差异有统计学意义(P <0.001);苏木素染色后发现s i E Z H 2组小室膜上细胞基数比w i l d 组和N C 组明显降低,差异有统计学意义(P =0.001),见图4㊂ a:P <0.05,与s i E Z H 2组比较㊂图3 C C K 8及流式细胞术检测H L -60细胞增殖及凋亡a:P <0.001,与s i E Z H 2组比较㊂图4 T r a n s w e l l 实验检测H L -60细胞的迁移能力2.5 各组H L -60细胞敲除E Z H 2后H 3K 27m e 3和MM P -2蛋白水平比较在H L -60细胞中敲除E Z H 2,H 3K 27m e 3和MM P -2蛋白均明显下调(P <0.05),而E -c a d h e r i n 则上调(P <0.05),同时发现E Z H 2下调后抗凋亡蛋白B c l -2亦下调,而细胞凋亡途径关键蛋白c a s p a s e -3上调,见图5㊂图5 W e s t e r n b l o t 检测相关蛋白表达3 讨论E Z H 2作为P c G 蛋白家族成员之一,在多种肿瘤中起原癌基因作用㊂E Z H 2参与调节细胞分化㊁增殖及肿瘤的形成[3],有研究显示E H Z 2与多种实体肿瘤迁移能力相关[5-7]㊂A P L 为白血病中一种特殊类型,E M I 发生率较高,E M I 中以中枢浸润较常见,一旦发生中枢侵犯预后较差㊂目前国内外有关A P L 与E Z H 2的关系及其E M I 机制研究极少㊂本课题组前期研究已证实在AM L 细胞株H L -60及K a s u m i -1存在E Z H 2高表达,且在K a s s u m i -1细胞中证实敲除E Z H 2细胞凋亡增加,增殖减慢,机制研究显示E Z H 2通过调控E -c a d h e r i n 蛋白及p -E R K /p -c m yc /MM P -2通路影响细胞迁移[9-10]㊂且T A N A K A 等[11]研究显示,在H L -60细胞中下调E Z H 2可抑制其增殖㊂因此,本研究猜测E Z H 2与A P L 细胞增殖㊁凋亡及迁移相关㊂本研究旨在探究在H L -60中敲除E Z H 2对细胞的增殖㊁凋亡及迁移的影响及其可能的机制㊂相对于实体肿瘤的迁移而言,在白血病中则表现为E M I ,白血病一旦发生E M I 则预后较差㊂MM P s ㊁黏附分子㊁趋化因子及E -c a d h e r i n 异常表达均可影响白血病细胞E M I ㊂当骨髓中白血病细胞表面的黏附因子表达异常时其黏附能力下降促使细胞趋化黏附于血管内皮上,进而分泌MM P s 促使细胞外基质降解,最终细胞迁移至骨髓外导致E M I[12-14]㊂相关研究6561重庆医学2021年第50卷第10期表明,在AM L中E M I的发生亦与MM P s表达增加密切相关[15-16]㊂E Z H2可通过甲基化肾癌㊁口腔癌细胞核小体组蛋白下调E-c a d h e r i n表达从而增强细胞的转移能力[5,17]㊂本研究结果显示,在H L-60细胞中敲除E Z H2后E-c a d h e r i n表达上调,MM P-2下调,细胞迁移能力减弱㊂因此,本研究认为E Z H2可能通过上调H L-60细胞的MM P-2降解细胞外基质或通过下调E-c a d h e r i n来增强A P L细胞迁移能力㊂E Z H2主要通过甲基化周期蛋白㊁抑癌基因等靶基因参与调节细胞分化增殖及肿瘤的形成[4]㊂林璐慧等[18]研究发现,敲除E Z H2后H L-60细胞中H3K27m e3亦下调从而导致B c l-2下调促进细胞凋亡㊂B c l-2是一种癌基因,具有抑制凋亡的作用㊂有研究报道,在H L-60细胞存在B c l-2过表达,抑制B c l-2的表达能够增加细胞凋亡关键基因c a s p a s e-3活性,进而抑制细胞增殖并促进其凋亡[19]㊂本研究发现,敲除E Z H2后H L-60细胞的增殖减弱㊁凋亡增加㊂本研究认为,敲除E Z H2后对组蛋白H3K27的甲基化作用减弱,进而其对靶基因抑制作用减弱,从而引起B c l-2下调及c a s p a s e-3上调㊂综上所述,E Z H2可能通过上调B c l-2及下调c a s p a s e-3促进H L-60细胞增殖并抑制其凋亡㊂临床中使用去甲基化药物如地西他滨及阿扎胞苷治疗白血病可能基于表观遗传学调控,这为将来使用E Z H2抑制剂或其他类型去甲基化药物治疗白血病提供一定理论基础,更深的机制研究仍需进一步探究㊂在A P L细胞株(H L-60)中敲除E Z H2能有效抑制其增殖和迁移能力,并促进其凋亡,且E Z H2可能通过MM P-2及E-c a d h e r i n影响H L-60细胞的迁移能力, E Z H2可能通过调节B c l-2及c a s p a s e-3影响H L-60细胞增殖凋亡,这将为A P L表观遗传学治疗提供新靶点㊂参考文献[1]H IÇSÖNM E Z G,ÇE T I N M,T U N C E R A M,e ta l.C h i l d r e n w i t h a c u t e m y e l ob l a s t ic l e u k e m i ap r e s e n t i n g w i t h e x t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n:t h ee f f e c t s o f h i g h-d o s e s t e r o i d t r e a t m e n t[J].L e u kR e s,2004,28(1):25-34.[2]K O B A Y A S H I R,T A W A A,H A N A D A R,e t a l.E x-t r a m e d u l l a r y i n f i l t r a t i o n a t d i a g n o s i s a n d p r o g n o s i si n c h i l d r e n w i t h a c u t e m y e l o g e n o u s l e u k e m i a[J].P e-d i a t r B l o o d C a n ce r,2007,48(4):393-398.[3]C A O R,WA N G L,WA N G H,e t a l.R o l e o f h i s-t o n e H3l y s i n e27m e t h y l a t i o n i n P o l y c o m b-g r o u p s i l e n c i n g[J].S c i e n c e,2002,298(5595):1039-1043.[4]N A K A G AWA S,O K A B E H,S A K AMO T O Y,e t a l.E n h a n c e r of z e s t e h o m o l o g2(E Z H2) p r o m o t e s p 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L-Asp诱导急性髓细胞白血病细胞株HL-60凋亡

L-Asp诱导急性髓细胞白血病细胞株HL-60凋亡研究生：刘元军导师：李晓明教授摘要自从1967年Oetten等首次发现左旋门冬酰胺酶（L-Asparaginase，L-Asp）的抗肿瘤作用以来[1]，它已被广泛应用于临床上许多肿瘤疾病的治疗，并且显著提高了患者的完全缓解率（CR）和长期无病生存率（DFS）。

左旋门冬酰胺酶（L-Asparaginase，L-Asp）是临床上治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的主要药物，尤其对儿童患者疗效显著。

以前研究者们普遍认为L-Asp抗肿瘤药理机制是：L-Asp能特异性催化门冬酰胺（Asn）分解成氨和门冬氨酸（Aspa）从而耗竭血浆中Asn。

由于正常细胞内部存在充足门冬酰胺合成酶（Asparaginase synthetase，AsnS）及活性，能够催化门冬氨酸再合成门冬酰胺，从而保证了正常细胞内的蛋白生物合成不受影响。

但在肿瘤细胞中，特别是急性淋巴细胞白血病细胞和非霍奇金淋巴瘤细胞，这些肿瘤细胞内的AsnS表达量和活性都远远低于正常细胞，所以不能为肿瘤细胞合成足够的Asn,而必须依赖细胞外Asn的供应，当细胞外Asn被L-Asp耗竭后，肿瘤细胞蛋白生物合成严重受阻，导致其DNA和RNA合成严重受抑制，最终导致细胞功能受损，肿瘤细胞死亡，此为L-Asp抗肿瘤公认的原理。

但是临床治疗中发现不同类型疾病以及相同疾病的不同患者对L-Asp敏感性和疗效都不尽相同，而且这些患者血液中的Asn都已被耗竭。

这提示细胞对L-Asp的敏感性存在于细胞内部对这种氨基酸耗竭的反应性不尽相同，从而表明不能将血浆中Asn是否已被完全耗竭作为L-Asp是否发挥作用的标准。

以往临床上主要是将L-Asp用于治疗ALL和NHL，一般不用于治疗髄系白血病。

但是最近国内外研究表明用甲基硫氮二烯五环四唑分析法（MTT法）体外测定L-Asp对急性髄系白血病（AML）FAB分型（French-American-British subtype of acute myeloid leukemia）中M4,M5型细胞的毒性等同于对ALL细胞的毒性[2],并且此现象可用于预测临床上用L-Asp初始化疗的疗效反应。

沉默核干细胞因子基因对HL-60白血病细胞形态学和细胞化学影响的检测

ｉｓｏ．ＭｅｈｄＨ－０ｃｌｅｅｄｒｃｙｔｎｆｔｄｂＳｓｅｉｃｓｏｔａｉＲＡ（ｈＮ．ＴｅｅｅｔｏＳｒｔｏｓＬ６ｅｓｒｉｔｒｓｃｅｙＮｐｃｉｈｒｈｉｎＮｌｗｅｌａｅｆｒｐｓＲＡ）ｈｆｃｓｆｆＮ
Ｗｒｈ— ｉｓｉｔｅａ染色观察细胞形态学改变，ｇＧｍ血液分析仪测定细胞大小、粒度和均一性变化，过氧化物酶（Ｏ）一髓ＭＰ、乙酸萘酯酶（ＮＥ和过碘酸一 — Ａ）雪夫反应（Ａ）ＰＳ测定反映细胞化学特征变化。结果沉默Ｎｓ基因导致ＨＬ６－０白血病细胞发生了形态学变化，细胞核和细胞质出现了进一步分化和成熟特征，ｉｔｉｍａ染色观察到细胞核Ｗｒｈ— ｅｓｇＧ
ＹＥＢｏｏｇ，Ｈｏｇｈｎ，ＷＮｉｘＬＵＳｕｉ，ＷＮＧＹａｙａ ‘ ＵＬｎＺＡＧＧｎｙａＵａｈｎＳＥＨｎｃｕＡＧＱｎｉ，ＩｈａｇａＡｕｎｕｎ，Ｙｉａ，ＨＮｏｇｕｎ，
ＺＡＧＱｎｉｎ．（．ｅａｔｅｔｆＣｉｃｌＬｂｒｔｙｔｅＦｒｆｌｔｏｉｌＺｅｇｈｕＵｉｒｔ，ＨｎｎＨＮｉｘ。ａ１Ｄｐｒｎｏｌｉａｏａｏ，ｈｉｔｆｉｅＨｓｔ，ｈｎｚｏｎｅｉｍｎａｒｓＡａｄｐａｉｖｓｙｅａ
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文章编号：６３８４（０９０４２１０１７ —６０２０）４３８－５
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两种常用转染试剂转染siRNA至HL-60细胞转染效率的比较

两种常用转染试剂转染siRNA至HL-60细胞转染效率的比较王巍;张晓希;刘新光【摘要】目的比较两种常用转染试剂转染小干扰RNA(siRNA)至悬浮细胞的转染效率及对细胞毒性的影响.方法以羧基荧光素(FAM)标记的siRNA为报告基因,以lipofectamine 2000和siPORT NeoFX为转染试剂,用流式细胞仪检测转染效率,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率.结果 siRNA>100 nmol/L 时,lipofectamine 2000的转染效率高于siPORT NeoFX(P<0.05);siRNA<100 nmol/L时,前者低于后者(P<0.05).siRNA终浓度及转染试剂用量相同时,lipofectamine 2000组HL-60细胞存活率与SiPORT NeoFX组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论在使用高浓度siRNA时,lipofectamine 2000对HL-60细胞有较高的转染效率和较小细胞毒性.%Objective To compare the transfection efficiency and cytotoxicity between two cationic transfection reagents. Methods Small interfering RNA(siRNA) marked with FAM as a report gene,lipofectamine 2000 and siPORT NeoFX were used as the transfection reagents. Flow cytometer,microscope and MTT assay were used to detect transfection efficiency and cytotoxicity. Results The transfection efficiency of lipofectamine 2000 was higher than siPORT NeoFX when siRNA was over 100 nmol/L(P＜0.05) ,otherwise with siRNA under 100 nmol/L(P＜0. 05). At the same siRNA concentration and transfection reagent volume, there was no significant difference of vial cells ratios between two groups(P＞0.05). Conclusion lipofectamine 2000is an effective and safe transfection reagent to HL-60 cells when siRNA is over 100 nmol/L.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2011(040)004【总页数】4页(P313-314,318,封2)【关键词】脂质体;转染;RNA,小分子干扰【作者】王巍;张晓希;刘新光【作者单位】广东医学院临床血液检验学教研室,东莞,523808;中国人民解放军第四二二医院,广东湛江,524023;广东医学院检验医学研究所,东莞,523808【正文语种】中文RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA 诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象[1-3]。

抑制HL-60癌细胞(人早幼粒白血病细胞)药物的最新研究进展

抑制HL-60癌细胞(人早幼粒白血病细胞)药物的最新研究进展丘杭娜;陈泓霖【摘要】白血病是来源于造血干细胞的恶性疾病,一种常见的造血组织肿瘤性疾病,治愈率较低.开发针对白血病更有效、更安全的药物成为近年研究的焦点.人早幼粒白血病细胞(HL-60细胞)能够为研究药物的抗白血病作用持续提供人类癌细胞.近两年来,化学合成类药物研发步伐逐步加快,并推动绿色化学合成类药物发展,衍生出了生物合成类药物.随着化学与生物学科的结合发展,开辟了从微生物和海洋生物的获取抗癌药物的新方向.对已知化合物的结构改造和开发海洋生物资源,将为抗白血病药物的研发迎来非常好的前景.【期刊名称】《广西师范学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】5页(P83-87)【关键词】化学合成;绿色化学;生物合成;抗癌活性【作者】丘杭娜;陈泓霖【作者单位】南宁师范大学北部湾环境演变与资源利用教育部重点实验室;广西地表过程与智能模拟重点实验室,广西南宁 530001;南宁师范大学北部湾环境演变与资源利用教育部重点实验室;广西地表过程与智能模拟重点实验室,广西南宁530001【正文语种】中文【中图分类】O6250 引言白血病是一类来源于造血干细胞的恶性疾病，是一种常见的造血组织肿瘤性疾病。

其特征为细胞增殖失控，分化障碍，凋亡受阻，而停止在细胞发育的不同阶段。

目前白血病的治愈率较低，为此，开发针对白血病更有效、更安全的药物成为近年来研究的焦点。

HL-60细胞(人早幼粒白血病细胞)主要是一种嗜中性的早幼粒细胞，能够为研究药物的抗癌作用持续提供人类癌细胞。

1 合成类药物1.1 化学合成类药物2017年，Tomoki[1]等人以钯催化串联环化/交叉偶联反应为关键步骤，以吲哚基硼酸酯indolylborate为合成中间体，用合成方法合成了8个吡啶多氮唑生物碱及其中两个吡啶多氮唑生物碱的构象异构体，并首次报道其合成的吡啶多氮唑生物碱guatambuine及其构象异构体具有抗癌活性，抑制HL-60细胞的IC50值( μM )分别为44.61 ± 1.58和13.37 ± 1.41 。

siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡

siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡李育敏;朱雪姣;谷景义;费嘉【摘要】AIM: To investigate the effect of siRNA - induced knockdown of v - ral simian leukemia viral onco -gene homolog A(RALA) on proliferation and apoptosis of chronic myelogenous leukemia (CML) K562 cells. METHODS; The chemically synthesized siRNA targeting to RALA gene was transfected into K562 cells using Lipofectamine 2000. The proliferation and viability of K562 cells were detected by MTT assay and trypan blue dye exclusion . The expression levels of RALA mRNA and protein were determined by quantitative real - time PCR and Westernblotting ,respectively. The cell apoptosis was analyzed using flow cytometry by double staining with annexin V and propidium iodide , and the apoptotic morphological changes were detected by Hoechst 33258 staining. RESULTS: RALA siRNA significantly down - regulated RALA mRNA and protein expression in K562 cells (P < 0. 05). The proliferation of K562 cells in RALA siRNA group was inhibited compared with control group (P < 0. 05). The apoptotic rate was much higher in RALA siRNA group than that in negative control group (P < 0. 05). The apoptotic morphological changes were observed in the nuclei of K 562 cells transfected with RALA siR -NA. CONCLUSION: The siRNA - mediated knockdown of RALA results in inhibition of proliferation and induction of apop -tosis in K562 cells, indicating that RALA might be used as a potential therapeutic target in chronic myelogenous leukemia .%目的:研究小干扰RNA(siRNA)抑制v-ral 猴白血病病毒癌基因同系物A(RALA)基因表达对人慢性粒细胞性白血病K562细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA 转染体外培养的K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RALA siRNA对K562细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测RALA siRNA对K562细胞存活率的影响;real-time PCR检测RALA mRNA表达水平;Western blotting检测RALA蛋白表达水平;annexin V/PI双染流式细胞仪检测RALA siRNA对K562细胞凋亡的影响;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞形态学变化.结果:RALA siRNA可明显抑制K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达(P<0.05);与阴性对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示转染RALA siRNA的K562细胞凋亡较阴性对照组显著增加(P<0.05);Hoechst 33258染色见转染RALA siRNA的K562细胞出现典型的凋亡形态学变化.结论:癌基因RALA在白血病发生发展过程中发挥重要作用.siRNA下调RALA mRNA和蛋白的表达,可抑制人白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示RALA可能是白血病治疗的新靶点.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2012(028)004【总页数】6页(P625-630)【关键词】v-ral猴白血病病毒癌基因同系物A;小干扰RNA;白血病;细胞增殖;细胞凋亡【作者】李育敏;朱雪姣;谷景义;费嘉【作者单位】暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510632;暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510632;暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510632;暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R342.7△通讯作者Tel*************;E-mail:***************慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)是慢性骨髓增生性疾病中最常见的一种，属于造血干细胞恶性增殖性疾病，以粒系增生为主。

hl60细胞表达的基因

hl60细胞表达的基因
HL60细胞是一种来源于人类急性髓系白血病细胞的细胞株，它在实验室中被广泛用于研究血细胞的形成和相关基因表达。

根据已有的研究，HL60细胞中表达的一些关键基因包括：
1. 原癌基因：在HL60细胞中，原癌基因的表达会发生改变。

例如，c-myc、c-h-ras、c-sis和c-erbA、B等基因在TPA（十四酸酯）作用下，其表达和结构会发生变化。

这些基因与细胞增殖、分化和癌变等过程密切相关。

2. 调控基因：HL60细胞中的一些调控基因，如细胞周期蛋白（CDK4、CDK6、CCND1等）和细胞周期调控因子（如p21、p53等），参与调控细胞周期、生长和分化。

3. 表面受体基因：HL60细胞表达多种表面受体基因，如CD34、CD38、CD117等。

这些基因在细胞生长、分化和信号传导过程中发挥作用。

4. 与其他细胞类型相互作用的基因：HL60细胞中表达一些与其他细胞类型相互作用的基因，如细胞黏附分子（ICAM-1、VCAM-1等）和细胞因子受体（如IL-2R、IFN-γR等）。

这些基因在细胞间相互作
用、免疫应答和炎症反应中起重要作用。

5. 代谢相关基因：HL60细胞中表达一些代谢相关基因，如葡萄糖转运蛋白（GLUT1、GLUT3等）、乳酸脱氢酶（LDH）和丙酮酸激酶（PK）等。

这些基因参与糖酵解和能量代谢过程。

需要注意，这些基因在HL60细胞中的表达可能会受到不同因素（如生长条件、细胞周期、信号通路等）的影响，从而导致表达水平的变化。

在研究HL60细胞时，需要关注这些基因在不同条件下的表达特征。

Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

ｇｒｏｕｐ； ②Ａｍ— Ｃｇｒｏｕｐ；￣ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｓｍｉｄｇｒｏｕｐ；＠ｎｅｇａｔｉｖｅｐｌａｓｍｉｄｇｒｏｕｐ；￣ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｓｍｉｄ＋Ａｒａ－Ｃｇｒｏｕｐ；￣ｎｅｇ —
２０１３年４月第１０卷第１１期
・
实验研究・
ＳｕｒｖｉｖｉｎｓｈＲＫＮＩＡＡ促进
ＨＬ－６０细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究
冯霞杨红。
１．昆明医科大学第一附属医院检验科，云南昆明６５００３２；２．昆明医科大学第二附属医院血１阿糖胞苷；细胞凋亡；ＲＮＡ干扰
【中图分类号】Ｒ５５
【文献标识码】Ａ
【文章编号】１６７３ — ７２１０（２０１３）０４（ｂ）一００２５ — ０４
ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＳｕｒｖｉｖｉｎｓｈＲＮＡｏｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏＡＲａ－－ＣｏｆＨＬ－６０ｃｅｌｌｓ
胞凋率改变的检测。结果与空白实验组比较，阳性质粒组的ｍＲＮＡ表达抑制率为５７．７％，表达下降，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；阳性质粒组细胞凋亡率为５．８７％，阳性质粒＋Ａｒａ — Ｃ组细胞对Ａｒａ — Ｃ敏感性明显提高，细胞凋亡率为１２．４％，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论ＳｕｒｖｉｖｉｎｓｉＲＮＡ能够高效特异的抑制ＨＬ一６０细胞内Ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因的表达，诱导细胞凋亡。并提高了ＨＬ一６０细胞对Ａｒａ — Ｃ的敏感性，这有助于白血病基因治疗的进

HL-60细胞内核干细胞因子抑制后全基因组表达谱的变化的开题报告

HL-60细胞内核干细胞因子抑制后全基因组表达谱
的变化的开题报告
1. 研究背景
HL-60细胞为人类骨髓单核细胞系中的一种，被广泛用作白血病和
炎症等疾病的模型细胞。

HL-60细胞具有干细胞样的特征，可以分化为类似粒细胞的细胞。

细胞因子在HL-60细胞分化调控中发挥重要作用，包
括促进分化的因子和抑制分化的因子。

然而，HL-60细胞因子信号通路调控的全面机制还未完全阐明。

2. 研究目的
本研究旨在探究干细胞因子在HL-60细胞分化调控过程中的作用机制，以及细胞因子抑制后全基因组表达谱的变化情况，为进一步研究HL-60细胞分化调控提供参考。

3. 研究方法
- HL-60细胞培养及分化处理。

将HL-60细胞分为处理组和对照组，处理组细胞加入细胞因子抑制剂，对照组细胞不加入抑制剂。

采用光镜
观察和细胞计数法检测细胞形态变化和细胞增殖情况，实时荧光定量
PCR检测分化标记基因的表达情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况。

- 全基因组表达谱测序及分析。

提取处理组和对照组细胞的总RNA，建立文库并进行高通量基因表达测序。

通过生物信息学分析，筛选出表
达量差异最显著的基因，进行Gene Ontology和Pathway分析。

此外，
采用实时荧光定量PCR验证关键差异表达基因的表达情况。

4. 研究意义
本研究将加深对HL-60细胞分化调控的理解，特别是研究干细胞因
子在该过程中的作用机制。

此外，通过全基因组表达谱的分析，可以发
现新的分化调控关键基因，为进一步研究HL-60细胞分化和治疗提供了理论基础。

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究魏一生;叶庆林;金静君;林德馨;曹祖蕊;杨俐丽【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】1999(015)008【摘要】目的和方法:实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响,探索亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制.结果:8×10-6mol/L或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制HL-60细胞的生长增殖,作用5 d可在一定程度上诱导HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化.8×10-6mol/L亚硒酸钠作用一段时间,可增强自由基清除系统酶活性,减低胞内自由基水平,降低细胞内cGMP累积而对cAMP累积无明显影响.结论:硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关.【总页数】3页(P723-725)【作者】魏一生;叶庆林;金静君;林德馨;曹祖蕊;杨俐丽【作者单位】福建省医学科学研究所,福州,350001;福建医科大学;福建省医学科学研究所,福州,350001;福建医科大学;福建省医学科学研究所,福州,350001;福建医科大学【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的影响 [J], 刘新光;于树玉2.亚硒酸钠抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导白血病细胞HL-60凋亡的机制研究 [J], 许京淑;朱晓健;李松3.抑制HL-60癌细胞(人早幼粒白血病细胞)药物的最新研究进展 [J], 丘杭娜;陈泓霖4.中药对人急性髓系白血病细胞株HL-60的作用机制 [J], 张晓丹;周永明;王巍5.三氧化二砷对人髓性白血病HL-60细胞作用机制 [J], 徐功立;李莉;樊娟;马兰英;徐健因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Survivin shRNA促进HL—60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

Survivin shRNA促进HL—60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究目的研究RNA干扰Survivin基因表达对HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的影响。

方法采用PCR扩增以及定向克隆技术重组构建shRNA的表达载体pshRNA-Survivin，使用脂质体介导转染至HL-60细胞，分为6组：①空白实验组；②阿糖胞苷（Ara-C）组；③阳性质粒组；④阴性质粒组；⑤阳性质粒+Ara-C组；⑥阴性质粒+Ara-C组。

采用RT-PCR技术检测HL-60细胞内Survivin 及其mRNA表达，运用流式细胞仪进行细胞凋亡率改变的检测。

结果与空白实验组比较，阳性质粒组的mRNA表达抑制率为57.7%，表达下降，差异有统计学意义（P < 0.05）；阳性质粒组细胞凋亡率为5.87%，阳性质粒+Ara-C组细胞对Ara-C敏感性明显提高，细胞凋亡率为12.4%，差异有统计学意义（P < 0.05）。

结论Survivin siRNA能够高效特异的抑制HL-60细胞内Survivin基因的表达，诱导细胞凋亡，并提高了HL-60细胞对Ara-C的敏感性，这有助于白血病基因治疗的进一步发展标签：阿糖胞苷；细胞凋亡；RNA干扰Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的重要成员，是由Ambrosini等[1]在1997年使用效应细胞蛋白酶受体-1（effecter cell protease receptor-1，EPR-1）的cDNA经杂交的方法从人类基因组文库中间筛选出来并完成鉴定，是到目前为止凋亡抑制作用最强的因子，Survivin蛋白能够调节全部细胞的分裂和存活[2]，其在包括急性髓系白血病的各种肿瘤组织中广泛表达，而在正常组织不表达[3]，说明Survivin参与白血病的发生与发展。

Wheatley等[4]研究显示在给予高强度的多次化疗后的急性髓细胞白血病（AML）患者中，Survivin在其耐药组织中的表达显著高于对照组（P < 0.01），说明其与白血病的耐药性有关，是白血病基因水平治疗一个理想的靶点。

siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞HO-1表达的影响的开题报告

siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞HO-1表达的影响的开题报告背景：黑色素瘤是一种恶性肿瘤，由于其极高的转移和死亡率，已成为临床难以治愈的一个重要问题。

缺氧是肿瘤微环境中普遍存在的条件之一，可以诱导肿瘤细胞中HIF-1α的表达，进而激活一系列针对缺氧适应反应的基因。

HO-1是一个重要的缺氧反应分子，它的表达受到HIF-1α的调控。

一些研究表明，HO-1的过度表达与黑色素瘤的发生和发展有关。

因此，研究如何干扰HIF-1α，从而抑制HO-1的表达，有望成为开发黑色素瘤治疗方法的新思路。

目的：本课题的主要目的是探究siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞中HO-1表达的影响，为新型黑色素瘤治疗方法的研发提供理论依据。

方法：1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：使用商用ELISA试剂盒检测HIF-1α和HO-1在缺氧条件下的表达水平。

2. Western blot：检测HIF-1α和HO-1的蛋白质表达水平。

3. 实时荧光定量PCR：检测HIF-1α和HO-1的mRNA表达水平。

4. 细胞培养和RNA干扰技术：使用缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞，通过siRNA干扰技术沉默HIF-1α。

预期结果：1. siRNA干扰HIF-1α能够降低缺氧培养的黑色素瘤细胞中HO-1的表达水平。

2. siRNA干扰HIF-1α也可能会影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡。

结论：通过本研究，我们可以更加全面地了解HIF-1α与黑色素瘤HO-1的关系，为黑色素瘤治疗方法的研发提供新思路。

但是，由于本研究仅在体外细胞实验中进行，所以还需要进一步进行动物实验和临床研究来验证这一方法的可行性和安全性。

siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO表达的影响的开题报告

siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO表达的影响的开题报告一、研究背景和意义人脉络膜黑色素瘤是一种恶性肿瘤，特点是易发生转移和复发，病情严重，治疗难度大，通常的化疗和放疗效果有限。

因此，寻找新的治疗方法和靶点具有重要的临床意义。

缺氧是恶性肿瘤生长、转移和化疗耐受的重要因素，其中HIF-1α是一个重要的调节因子。

HIF-1α的稳定性直接决定了恶性肿瘤细胞对缺氧环境的适应性以及瘤细胞转化和恶化的过程。

在恶性肿瘤中HIF-1α的过表达和功能异常已经成为研究早期诊断、治疗和预后的热点。

表观遗传调控已经成为耐药性和转移性增强的重要因素之一，siRNA 技术已经成为一种有效的靶向表观遗传调控的方法。

因此，通过沉默HIF-1α基因来探讨其对细胞生长和生理功能的影响具有很高的理论和实践意义。

此外，由于人脉络膜黑色素瘤细胞的特殊性质，EPO对其生长和发展也具有重要的作用。

因此，本课题将探索沉默HIF-1α对EPO表达的影响，以及其对人脉络膜黑色素瘤细胞生长和转移的影响，为临床治疗提供新的理论和实践基础。

二、研究目的1.通过siRNA沉默方法降低细胞内HIF-1α的表达，评估其对EPO表达的影响。

2.观察沉默HIF-1α对人脉络膜黑色素瘤细胞生长、增殖、移动和侵袭的影响，探讨其对肿瘤发展的抑制作用。

三、研究计划1.实验方法（1）分别采用siRNA沉默和对照组干预人脉络膜黑色素瘤细胞HIF-1α基因的表达，提取蛋白质，并用Western blot方法检测HIF-1α的表达水平。

（2）利用ELISA检测不同组细胞培养液中EPO的含量。

（3）通过细胞培养、MTT实验、克隆形成、划痕实验、Transwell 侵袭实验等评估细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

2.预期结果（1）成功探究沉默HIF-1α对EPO表达的影响，初步评估其作用机制。

（2）明确沉默HIF-1α对人脉络膜黑色素瘤细胞生长、增殖、移动和侵袭的影响，为临床治疗提供新的思路和方法。

小分子干扰RNA抑制HLX1表达对急性髓系白血病细胞侵袭的影响及机制探讨

小分子干扰RNA抑制HLX1表达对急性髓系白血病细胞侵袭的影响及机制探讨沈健;林颖超;朱夏吟【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2017(22)6【摘要】目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)抑制人同源异型盒基因(H2.0-like homeobox,HLX1)表达对急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖与侵袭能力的影响。

方法:利用HLX1特异的siRNA瞬时转染U937细胞,通过实时定量(RTPCR)与蛋白印迹法(Western blot)分别测定HLX1的mRNA及蛋白质的表达水平,应用细胞体外增殖实验法(MTT)与体外侵袭实验观察siRNA抑制HLX1表达后的U937细胞增殖与侵袭变化。

结果:相对于空白对照组,HLX1特异的siRNA转染24 h后可抑制U937细胞HLX1 mRNA表达,抑制率为(70.0±2.7)%(P<0.01);转染48 h 后可有效抑制HLX1蛋白质表达,抑制率为(81.0±3.1)%(P<0.01);转染组U937细胞增殖能力显著下降(P<0.01),转染组穿过基质胶的U937细胞数(22.0±2.3)显著低于空白对照组(66.0±5.0)(P<0.01),p-21活化激酶1(PAK1)蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。

结论:siRNA下调HLX1表达水平可显著抑制急性髓系白血病细胞的增殖与侵袭能力。

【总页数】6页(P627-632)【关键词】急性髓系白血病细胞;U937;同源异型盒基因;RNA干扰;侵袭【作者】沈健;林颖超;朱夏吟【作者单位】台州医院血液肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R965.2;R552【相关文献】1.MSI-2小干扰RNA对急性髓系白血病细胞株THP-1细胞增殖及NUMB表达的影响 [J], 黄芸菲;牧启田;余梦霞;王云贵;金洁2.RNA干扰对急性髓系白血病AML1-ETO融合基因表达的抑制作用 [J], 卫菊;李肃;王椿;秦尤文;马晓霞;谢匡成;颜式可;高彦荣;蔡琦3.RNA干扰HuR基因表达对急性髓系白血病细胞凋亡和CD7、CD19表达的影响及机制研究 [J], 李光曦;张军;靳小可;徐又海4.miR-143通过靶向调控HK2的表达抑制急性髓系白血病细胞迁移和侵袭的分子机制 [J], 姚金晓;杨如玉;马海龙;李超;魏旭东5.PR结构域蛋白5过表达对人急性髓系白血病细胞系U937迁移侵袭的影响及其机制 [J], 苏杰;杨小静;周雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因

采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因汤参娥;肖志强;谭潭;肖艳华;阮林;李萃;彭芳;李茂玉;张鹏飞;易红【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(35)7【摘要】目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据.方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis, F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理的HL-60细胞的总蛋白质,Decyder和PDquest图像分析软件识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定差异表达蛋白质.结果:建立了5-aza-2-dC 处理与未处理的HL-60 细胞蛋白质的F-2D-DIGE图谱,图像分析识别了53个差异表达的蛋白质点,质谱分析鉴定了35个差异表达的蛋白质,其中32个蛋白质在5-aza-2-dC 处理后的HL-60 细胞中表达上调,3个蛋白质表达下调.结论:35个差异表达蛋白可能与甲基化相关,为白血病的表观遗传学研究提供了有价值的信息.【总页数】8页(P641-648)【作者】汤参娥;肖志强;谭潭;肖艳华;阮林;李萃;彭芳;李茂玉;张鹏飞;易红【作者单位】中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院医学实验研究中心,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;湖南省郴州市第一人民医院检验科,湖南,郴州,432000;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008;中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室,长沙,410008【正文语种】中文【相关文献】1.CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究 [J], 宋清晓;吴勇;陈元仲2.急性髓系白血病细胞多药耐药相关基因的筛选 [J], 付劲蓉;刘文励;周剑锋;孙汉英;罗莉;冉丹;张恒3.急性髓系白血病BCL2L10基因启动子区异常甲基化定量研究 [J], 杜传清;毛平;王艳茹;羊乃康4.5-氮-2'脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响 [J], 陶钧宇;王艳丽5.白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究 [J], 陈雪欣;王一倩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

SLC7A11在急性髓系白血病患者中的表达及抑制HL-60细胞增殖的机制

SLC7A11在急性髓系白血病患者中的表达及抑制HL-60细胞增殖的机制王雅云;张鸿雁;马树沛;郝鲁梅;刘爽爽;于淑媛;钟玉萍【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2023(31)2【摘要】目的:探讨SLC7A11 siRNA及Erastin对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞株HL-60细胞活性的影响。

方法:应用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中AML患者样本的数据,比较SLC7A11不同表达水平患者的预后。

利用实时荧光定量聚合酶联反应(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印记法(Western-blot)检测SLC7A11在AML患者和缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)患者中mRNA 和蛋白的表达水平。

培养人AML细胞株HL-60,用病毒介导的siRNA转染HL-60细胞,建立SLC7A11基因沉默的HL-60细胞株(siSLC7A11),用Erastin和DMSO 分别处理HL-60细胞。

利用qRT-PCR和Western-blot方法检测HL-60细胞和siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白的表达水平。

利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。

结果:SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平在AML患者中明显高于IDA患者(P<0.05)。

siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05)。

siSLC7A11细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。

结论:SLC7A11在AML患者中表达增加,通过siRNA或Erastin抑制SLC7A11能明显抑制人AML细胞株HL-60细胞增殖,SLC7A11基因可能成为治疗AML的新靶点。

【总页数】4页(P316-319)【作者】王雅云;张鸿雁;马树沛;郝鲁梅;刘爽爽;于淑媛;钟玉萍【作者单位】青岛市市立医院【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.吲哚美辛联合X线照射对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用2.阿糖胞苷通过调控miR-126表达抑制急性髓系白血病细胞增殖及诱导细胞凋亡的分子机制研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RNAi抑制HL-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡的研究的开题报告

RNAi抑制HL-60细胞FLT3基因表达及诱导凋亡的研究的开题报告研究背景及意义：FLT3 (FMS-like tyrosine kinase 3)是骨髓细胞生长因子受体家族的一员，是一种重要的细胞膜受体，参与了人类体内造血及维持造血稳态的过程中。

FLT3的突变或异常表达会导致白血病等血液系统恶性肿瘤的发生和发展。

HL-60是一种来源于人骨髓的急性髓系白血病细胞系，在浸润、增殖和分化等关键生命过程中，FLT3在其中扮演着至关重要的角色。

RNAi (RNA interference)技术是利用小分子的RNA通过作用于靶点mRNA上而达到对靶点的下调或抑制，已被广泛用于生理学、病理学和药理学等领域的研究和治疗。

在这个研究中，我们将应用RNAi技术探究FLT3在HL-60细胞中的作用，并提供一种通过抑制FLT3表达诱导细胞凋亡的新方法。

研究内容和方法：本研究旨在通过RNAi技术抑制HL-60细胞中FLT3基因的表达，进而研究FLT3在细胞增殖、分化及凋亡中的作用机制。

1. 获得合适的RNAi引物并转染细胞。

通过文献调查，在NCBI数据库中查找到最佳的siRNA序列，并通过化学合成获得相应的siRNA分子，并在HL-60细胞中进行转染，达到抑制FLT3基因表达的目的。

2. 确定FLT3的下调对HL-60细胞增殖和分化的影响。

将转染后的HL-60细胞进行细胞增殖、分化实验，通过MTT方法检测细胞的增殖情况，同时通过FACS技术检测细胞的分化率。

3. 确认FLT3的下调是否会诱导HL-60细胞发生凋亡。

通过流式细胞术检测细胞的凋亡率，通过Western blotting技术检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平，以确认FLT3在细胞凋亡中的作用。

预期结果：本研究将应用RNAi技术成功抑制HL-60细胞中FLT3的表达，并通过实验确定FLT3在细胞增殖、分化及凋亡中的作用。

预期结果为，FLT3的下调将抑制细胞生长和分化，同时诱导细胞凋亡，从而为治疗血液系统恶性肿瘤提供新的思路和手段。

二烯丙基二硫诱导人白血病细胞系HL-60细胞分化的实验研究

二烯丙基二硫诱导人白血病细胞系HL-60细胞分化的实验研究武明花;苏琦;程爱兰;谭晖;宋颖【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2003(019)003【摘要】目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞增殖抑制及诱导分化作用的影响.方法采用MTT法检测对细胞增殖的影响,通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应、流式细胞仪测定鉴定细胞分化.结果HL-60细胞经DADS处理后,细胞增殖受抑,呈剂量效应关系.0.625～1.25 mg*L-1时NBT还原反应增强(P<0.01或<0.05),流式细胞术显示可诱导表面分化抗原CD11b表达升高及细胞周期阻滞于G1期.结论小剂量DADS长时间作用对HL-60细胞具有诱导分化作用,其作用相当于全反式维甲酸,对于白血病的治疗具有潜在的应用价值.【总页数】4页(P319-322)【作者】武明花;苏琦;程爱兰;谭晖;宋颖【作者单位】南华大学肿瘤研究所,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,衡阳,421001【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R329.25;R73-361;R733.70.2;R979.1【相关文献】1.Mcl-1在二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞G2/M阻滞中的作用 [J], 吉晓霞;谭晖;易岚;唐章文;唐仪;文玲;苏琦2.二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病HL-60细胞增殖及诱导分化 [J], 王娟;杨叶宁;秦晶;唐玉娴;李清叶;苏琦;谭晖3.二烯丙基二硫上调p21、STAT1和CAMTA1诱导人白血病HL-60细胞分化 [J], 黄卫国;谭晖;易岚;何洁;苏琦4.二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞分化差异表达cDNA文库的构建 [J], 黄卫国;苏琦;黄琛;武明花;赵洁;周建国;周湘5.二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞凋亡及机制 [J], 谭晖;苏琦;罗招阳;凌晖;唐荣军;许金华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

依他尼酸甲酯诱导人急性髓性白血病HL-60细胞凋亡作用和机制的初步探讨

依他尼酸甲酯诱导人急性髓性白血病HL-60细胞凋亡作用和机制的初步探讨王蕊;徐永鹏;赵桂森;赵临襄;景永奎【期刊名称】《沈阳药科大学学报》【年(卷),期】2008(25)5【摘要】目的研究依他尼酸甲酯(EAME)对人急性髓性白血病HL-60细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨EAME诱导HL-60细胞凋亡的机制。

方法采用吖啶橙(AO)、溴化乙啶(EB)双染法考察药物的凋亡诱导活性;采用流式细胞术检测活性氧的蓄积和线粒体膜电位的变化;利用荧光标记法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量的变化。

结果EAME浓度在2~10μmol.L-1内对HL-60细胞具有显著的凋亡诱导能力;EAME诱导活性氧蓄积,降低线粒体膜电位和细胞内GSH含量;N-乙酰半胱氨酸(NAC)能够完全逆转EAME对GSH水平的耗竭作用及对HL-60细胞的凋亡诱导作用;丁硫氨酸亚砜胺(BSO)可以协同EAME进一步降低细胞内GSH水平,同时增强凋亡诱导能力。

结论EAME可诱导HL-60细胞发生凋亡,活性氧在凋亡诱导过程中起主要作用。

细胞内GSH水平与细胞对EAME诱导凋亡的敏感性呈反向相关。

【总页数】6页(P393-398)【关键词】人急性髓性白血病;依他尼酸;依他尼酸甲酯;活性氧;还原型谷胱甘肽;细胞凋亡【作者】王蕊;徐永鹏;赵桂森;赵临襄;景永奎【作者单位】沈阳药科大学生命科学与生物制药学院,辽宁沈阳110016;山东大学药学院,山东济南250012;沈阳药科大学制药工程学院,辽宁沈阳110016【正文语种】中文【中图分类】R733;R96【相关文献】1.双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用 [J], 陈伟;王玲;杜苑苑;曹东林;胡亮杉2.雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用 [J], 刘静;胡维新;叶茂;何莉芳;张彬3.西米特酸诱导人急性白血病HL-60细胞凋亡作用及其机制初探 [J], 郭经锋;周军民;冯公侃;刘宗潮;肖定军;邓松之;邓蓉;朱孝峰4.雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究 [J], 徐银海;严杰5.青蒿琥酯诱导人急性白血病原代细胞凋亡、胀亡的作用机制研究 [J], 黄利华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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Ｈ３Ｋ２７乙酰化水平，下调Ｈ３Ｋ９甲基化水平，对Ｈ４乙酰化无明显影响。
结论沉默ＨＤＡＣ１基因表达后可能
通过上调与基因转录激活有关的组蛋白Ｈ３，Ｈ３Ｋ１４，Ｈ３Ｋ９，Ｈ３Ｋ２７乙酰化水平，下调与基因转录抑制有关Ｈ３Ｋ９
马旭东，卢善良
摘要：目的探讨ｓｉＲＮＡ沉默人类急性髓细胞白血病ＨＬ一６０细胞ＨＤＡＣ１基因表达后对细胞增殖、凋亡以方法Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００为载体将ＨＤＡＣ１特异性ｓｉＲＮＡ转染人
导致细胞凋亡抑制和分化障碍６］。本文通过ＲＮＡ干扰沉默ＨＤＡＣ１基因，探讨其对人类急性髓细胞
ｃａｓｐａｓｅ一３、ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ一９、ｃ — Ｍｙｃ单克隆抗体及及羊
国ＢＤ公司）｝鼠抗人ＨＤＡＣ１、Ｊ３一ａｃｔｉｎ、Ｂｃｌ一２、ｐｒｏ —
胰腺癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤相关［１－５］。ＨＤＡＣ１可以介导核小体结构改变和调节基因表达及位点特异ＤＮＡ结合的转录抑制子的转录抑制作用，参与细胞周期进程和分化，还能通过线粒体转位促进癌基因合成，抑制基因转录，
ｉＪ壁Ｆ萼ｕｊｉａｎＭｅ堂ｄ堂匿Ｕｎｉｖ２０１３Ｆｅ …… ｂｒｕａｒｙ … ＇ｖ。ｌ４７Ｎ … 。
ｓｉＲＮＡ沉默人类急性髓细胞白血病ＨＬ．６０细胞ＨＤＡＣ１基因表达的实验研究
１６７２ — ４１９４（２０１３）０卜ＯＯｌｌ — Ｏ６
文献标识码：Ａ
文章编号：
组蛋白去乙酰化酶１（ＨＤＡＣ１）是１９９６年Ｔａｕｎｔｏｎ等发现的第一个哺乳动物的ＨＤＡＣ，它与癌症的关系最具代表性，ＨＤＡＣ１过表达与肺腺癌、
甲基化水平，从而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。关键词：ＲＮＡ，小分子干扰；ＲＮＡ干扰；白血病，髓样，急性；基因；基因表达；ＨＬ一６０细胞；组蛋白类中图分类号：Ｒ３２９．２；Ｒ３２９．２５；Ｒ３４２．２；Ｒ３９４．２；Ｒ７３３．７１２；Ｒ９７７．６
抗鼠二抗、羊抗兔二抗（美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）；兔
抗人组蛋白乙酰化Ｈ３、Ｈ４、Ｈ３Ｋ９、Ｈ３Ｋ１４ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ、Ｈ３Ｋ２７
及组蛋白甲基化Ｈ３Ｋ９ｍｅ３多克隆抗体（美国Ｕｐ－
ＨＤＡＣ１ｓｉＲＮＡ转染ＨＬ一６Ｏ细胞后可沉默该基因表达；抑制ＨＩ一６０细胞增殖，呈量效和时效关系；诱导ＨＬ一６０细
胞凋亡，经０，３０，６０，１２０ｎｍｏｌ／ＬＨＤＡＣ１ｓｉＲＮＡ处理２４ｈ后，细胞凋亡率分别为（１．４３士０．１９），（１４．４ ±３．１），（５７．７－＋－４．２），（６８．７４－ｌ＿６）；与空白对照组（１．４３ ±０．１９）比较，差别具有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）；且ＨＤＡＣ１基因沉默后，可下调Ｂｃｌ一２，Ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－９，Ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ３，ｃ — Ｍｙｃ的表达；上调组蛋白Ｈ３，Ｈ３Ｋ９，Ｈ３Ｋ１４，
ｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂、Ｏｐｔｉ — ＭＥＭ（美国Ｉｎ —
ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６＠ＡＱｕｅｏｕｓＮ０１１－Ｒａｄｉ－
ｏａｃｔｉｖｅＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＡｓｓａｙ（美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司），细胞凋亡检测试剂盒（ＡｎｎｅｘｉｎＶ — ＦＩＴＣ／ＰＩ，美
及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响。
ＨＬ一６Ｏ细胞后，ＲＴ — ＰＣＲ检测ＨＬ６０细胞ＨＤＡＣ１ｍＲＮＡ表达，ＭＴＳ法绘制细胞生长曲线，流式细胞术分析细胞凋亡，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测ＨＤＡＣ１的表达及其对凋亡相关蛋白及组蛋白甲基化、乙酰化表达的影响。结果