酵母菌DNA
酵母基因提取实验报告
一、实验目的1. 学习酵母基因提取的基本原理和操作步骤。
2. 掌握利用CTAB法提取酵母基因组DNA的方法。
3. 熟悉DNA纯化、定量和鉴定等实验技术。
二、实验原理酵母基因提取是通过物理或化学方法将酵母细胞中的DNA与蛋白质、RNA等杂质分离的过程。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA的结合能力，以及酚/氯仿等有机溶剂的界面作用，将DNA从细胞中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：酵母菌（如酿酒酵母）、Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿、无水乙醇、RNase A、DNA标准品、琼脂糖凝胶电泳系统等。
2. 仪器：高速离心机、恒温培养箱、紫外分光光度计、凝胶成像系统、电泳仪、微波炉等。
四、实验步骤1. 酵母菌培养：将酵母菌接种于YEP培养基中，于28℃恒温培养箱中培养至对数生长期。
2. 酵母菌收集：用无菌吸管吸取适量酵母菌培养液，转移到无菌离心管中，以8000 r/min离心5分钟，弃上清液。
3. 细胞裂解：向离心管中加入适量Tris-HCl缓冲液、NaCl、CTAB、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
4. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
5. DNA纯化：向沉淀中加入适量Tris-HCl缓冲液、酚/氯仿，混匀后室温放置10分钟。
6. 分相：将上述混合液转移至新的离心管中，以12,000 r/min离心5分钟，取上清液。
7. 洗涤：向上清液加入等体积的无水乙醇，混匀后室温放置10分钟。
8. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
9. 洗涤：向沉淀中加入适量70%乙醇，混匀后室温放置5分钟。
10. 离心：以12,000 r/min离心5分钟，弃上清液。
11. DNA溶解：向沉淀中加入适量TE缓冲液，室温放置5分钟，使DNA溶解。
12. 定量：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度。
酵母菌DNA的提取
酵母DNA提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min 收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μL 裂解液(50 mmol/ L Tris-HCl pH 8.0 , 180 mmol/ LEDTA pH 8.0 , 1 % SDS , 现配)中，加入3/10 总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min 将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。
2、加入200μL 5mol/L KAc，冰浴8min；3、12000rpm×5min 转移上清至新的离心管中；4、加入 3 mol/L NaAc 35μl，加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min，12000rpm×5min收集沉淀；5、200μL TE 溶解，加入RNase10μL，65℃水浴10min；6、加入200μL 氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、温柔地取上清150μL ，加入20μL 3 mol/L NaAc及375μL 无水乙醇，混匀后12000rpm×8min 收集DNA；8、70% 乙醇洗涤沉淀，吹干后TE 溶解，-20℃保藏。
方法二：蜗牛酶法1. 接种于5 ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16 h。
2. 3500 rpm离心5min沉淀细胞，用1ml 的无菌水洗涤一次，再加0.5ml solution Ⅰ(1M 山梨醇，0.1M EDTA, pH=7.5)重悬。
3. 转移细胞至1.5 ml 的离心管中，加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min, 以获得原生质体。
4. 最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl, 20mM EDTA,pH=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl 10% SDS, 混合65℃保温30min。
5. 加入200μl 5M 醋酸钾，放于冰上30 min。
第八章酵母基因工程详解
以酵母标记基因（his3)的5’端和3’ 端作同源序列
3 用于酵母转化子筛选的标记基因
营养缺陷型的互补基因
显性基因
营养缺陷型的互补基因
宿主细胞：为氨基酸或核苷酸生物合成缺陷型突变子
主要有：LEU-、TRP-、HIS-、URA载体：携带相应的合成基因 如：leu1/leu2、trp1、his3/his4 、ura3 选择压力：不完全培养基 如：YNB、无机盐培养基
STB
B
人工构建酵母质粒的共同特点
含有大肠杆菌质粒的复制元点，以便克隆操作 含有一定数量供克隆操作的单一酶切位点 含有在酵母和大肠杆菌中进行选择的双标记 除YIp型质粒外均为穿梭载体
YEp质粒
*复制子：2m质粒来源的ori
*拷贝数50-100
*不稳定 培养几代后，质粒的丢失率高 达50%-70%，主要是由于分配 不均匀所致。
UAS
GAL1
GAL7
GAL10
A、 GAL1、GAL7和 GAL10基因连锁在一起，独立转录，共同调控 B、GAL4产物与UAS结合，促进转录；GAL80产物抑制GAL4产物的活性，阻遏转录
C、野生型GAL4表达水平低，产物活性可被GLAL80产物完全抑制，半乳糖诱导效果差
2）半乳糖激酶启动子（GAL1）
碱金属离子介导的酵母菌完整细胞的转化 细胞：带壁的完整细胞 原理：通过碱金属离子（如Li+等）、PEG和热休克处理诱 导细胞吸收外源DNA。 特点：
吸收线型DNA的能力明显大于环状DNA，两者相差80倍 共转化现象极为罕见
酵母菌电击转化法
细胞：带壁完整细胞或原生质体
原理：通过电脉冲对细胞膜造成DNA摄取通道
二、酵母转化系统
酵母宿主系统 酵母载体系统
酵母引物设计实验报告
摘要：本实验旨在设计针对酵母菌DNA的特异性引物，用于聚合酶链式反应（PCR）技术中的基因扩增。
通过分析酵母菌基因组序列，设计引物对以实现特定基因的定向扩增。
实验结果表明，所设计的引物具有良好的特异性和扩增效率，为后续的分子生物学研究提供了有力支持。
关键词：酵母引物设计，PCR，特异性，扩增效率一、引言引物设计是分子生物学和遗传学研究中的关键步骤之一。
在聚合酶链式反应（PCR）等实验中，引物是一段特定序列的DNA或RNA片段，用于定向扩增或检测特定的目标基因。
对于酵母菌等微生物的研究，引物设计尤为关键，它直接影响实验结果的准确性和可靠性。
二、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母菌基因组DNA2. 试剂：DNA模板提取试剂盒，PCR反应试剂，DNA测序引物，核酸序列分析软件等三、实验方法1. 酵母菌基因组DNA提取：采用DNA模板提取试剂盒提取酵母菌基因组DNA。
2. 引物设计：利用在线引物设计软件（如Primer Premier、Primer 5等）进行引物设计。
选择目标基因上下游区域的保守序列，确保引物具有高特异性和扩增效率。
3. PCR反应：设计引物后，进行PCR反应。
PCR反应体系如下：- DNA模板：1μl- 上游引物：1μl- 下游引物：1μl- dNTPs：1μl- Taq酶：0.5μl- 灭菌去离子水：补充至25μl- 反应条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，最后延伸7min。
4. PCR产物分析：对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增片段大小是否符合预期。
四、结果与分析1. 引物设计：通过在线引物设计软件，设计出针对酵母菌目标基因的上下游引物，预期扩增片段长度为500bp。
2. PCR反应：实验结果显示，PCR产物大小与预期相符，表明引物设计合理，扩增效率较高。
3. 琼脂糖凝胶电泳：通过琼脂糖凝胶电泳，观察到明显的扩增条带，表明PCR反应成功。
酵母菌中表观遗传机制及其应用
酵母菌中表观遗传机制及其应用酵母菌是一种单细胞真菌，在食品、药品发酵等领域有着广泛的应用。
与其它真核生物一样，酵母菌也拥有表观遗传机制，控制着基因表达和细胞分化，对其生命活动和应用价值的影响不容忽视。
一、表观遗传学基础知识表观遗传学是研究基因表达调控和细胞分化的机制和遗传变异，但不涉及DNA序列的改变的学科。
它的核心是表观基因组学，即研究如何通过不同的化学修饰以及染色体结构重组机制，影响染色体上基因的表达。
常见的表观遗传修饰有DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA等。
DNA甲基化是增加methyl与DNA 核苷酸的共价化学键来标记位于DNA质心上的碱基。
组蛋白修饰则与组蛋白上的氨基酸侧链附着修饰基团相关。
这些修饰可以互相作用而且能够切换不同化合物之间的状态，最终影响染色体上基因的表达和功能。
二、酵母菌表观遗传机制在酵母菌中，表观遗传机制也经受了大量重视。
酵母菌表观基因组学的分析表明，许多基因表达与DNA甲基化和组蛋白修饰密切相关。
这些修饰可以影响染色体结构和基因表达的调控因子接近，从而实现基因表达的调节。
（一）酵母菌DNA甲基化早期的研究结果表明，酵母菌在大部分情况下缺乏DNA甲基化。
但是最近的高通量测序研究发现，变异株间的DNA甲基化水平可以相差很大，并可能与其他基因表达级联。
例如，在酿酒酿酒酵母中，对酒精发酵过程中的气体压力的稳定性有很大影响的DNA甲基化区域已经被证明是可逆的，并且是从基因群到单个基因的范围内的相互作用，从而形成一个表观遗传记忆路线。
此外，酵母菌中还存在反式RNA（ribozyme），在基因表达调控的过程中起到重要的作用。
（二）组蛋白修饰与DNA甲基化一样，组蛋白修饰在酵母菌中也起到重要作用。
许多组蛋白修饰酵母菌中都有抗体检测，除了一些明显的结果外，也可以通过研究分化中标记的基因来揭示组蛋白修饰的作用。
例如，在酿酒酵母中，喜好条件下的脂肪代谢基因表达重要的组蛋白H3K56AC的修饰水平较高，而在生长状态中则较低。
酵母菌遗传
酵母线粒体基因组图谱
第二节
接合型基因及其基因型转换
一、酿酒酵母的生活史
二、 酵母接合型的遗传控制
酵母的有性生殖取决于两个单倍体细胞的接合型，其接合型 的“性别” 是由其本身的遗传物质所决定的，是稳定的遗 传特征。
基因 asg(a型细胞特异的基因） MFa1、MFa2 a-因子 基因产物或功能
ste2
接合型基因的转换
HO基因的转录受几种调控影响： ① HO的转录受接合型基因的调控，它不在MATa／MATα 二倍体细胞内合成。 ② HO在亲代细胞里而不是子代细胞被转录。 ③ HO的转录也与细胞周期相关，该基因只在亲代细胞G1 期末表达。
第三节
酵母菌中的质粒
一、2μm质粒
REP1 REP3
FRT
嗜杀型酵母
敏感型酵母
含L型类病毒 和M型类病毒
只含L型类病毒 不含M型类病毒
L型类病毒： 含有4.5kb的双 链RNA
M型类病毒：含 有两条1.8kb双 链RNA
不含L型类病毒 不含M型类病毒
第四节 酵母的载体系统
根据其功能可分为三大类：
克隆载体 表达载体 分泌载体 转化方法：电转化法 醋酸锂法
一、克隆载体
依据酵母菌质粒载体的构成和复制方式，克隆载体分为：
整合型载体(integrative plasmid , YIp) 附加体载体(episomal plasmid , YEp) 复制型载体(replicative plasmid , YRp) 着丝粒载体(centromere plasmid , YCp) 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome, YAC)
根据dsRNA存在状态，将其分为L-型和M-型：
酵母单杂交实验dna载体构建流程
酵母单杂交实验DNA载体构建流程1.引言酵母单杂交实验是一种常用的研究基因互作或蛋白相互作用的方法。
在酵母单杂交实验中，需要构建适合该实验的DN A载体。
本文将详细介绍酵母单杂交实验DN A载体的构建流程。
2.实验原理在酵母单杂交实验中，需要构建包含目标基因的D NA载体。
DN A载体的构建通常由以下几个步骤组成：2.1D N A提取首先，从参与实验的酵母菌株中提取D NA。
可以使用商业D NA提取试剂盒或自制D NA提取方法。
确保提取的D NA质量和纯度满足实验要求。
2.2扩增目标基因利用聚合酶链反应（P C R）方法，从酵母菌株的基因组DN A中扩增目标基因。
设计合适的引物，使扩增出的目标基因片段与DN A载体连接所需的限制性内切酶切位点相匹配。
2.3D N A片段连接将扩增出的目标基因片段与适当的DN A载体进行连接。
使用限制性内切酶切割目标基因片段和DN A载体，使它们产生互补的粘性末端，在适当的缓冲液中对其进行连接。
使用DN A连接酶催化连接反应，形成目标基因片段与D NA载体的连接产物。
2.4转化酵母菌将连接产物转化到酵母菌中。
通过电击法或化学法将连接产物导入酵母菌细胞中。
待酵母菌细胞经过恢复和选择后，转化出的菌落中将含有目标基因的DN A载体。
2.5验证构建成功进行酵母单杂交实验前，需要对构建的DN A载体进行验证。
可以通过限制性内切酶切、PC R扩增、测序等方法验证目标基因的正确连接和插入。
3.实验步骤根据上述原理，下面给出酵母单杂交实验D NA载体构建的详细步骤：3.1D N A提取-从酵母菌培养物中收集菌落。
-使用D NA提取试剂盒或自制方法提取DN A。
-检测D NA的质量和纯度，确保满足实验要求。
3.2目标基因扩增-根据目标基因序列设计引物。
-进行P CR反应，扩增目标基因片段。
3.3D N A片段连接-利用限制性内切酶切割扩增出的目标基因片段和DN A载体。
-在相关缓冲液中进行D NA片段连接反应。
酵母菌DNA的提取
酵母菌DNA的提取酵母dna提取方法方法一：石英砂法1、5000rpm×5min收集过夜培养的菌体（5ml左右），于200μl裂解液(50mmol/ltris-hclph8.0,180mmol/ledtaph8.0,1%sds,现配)中，加入3/10总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min，每隔4min将离心管取出用力甩几下，然后65℃水浴10min。
2、加入200μl5mol/lkac，冰浴8min；3、12000rpm×5min转移上清至新的离心管中；4、重新加入3mol/lnaac35μl，重新加入异丙醇200μl搅匀后冰浴8min，12000rpm×5min搜集结晶；5、200μlte溶解，加入rnase10μl，65℃水浴10min；6、加入200μl氯仿－异戊醇（24:1）,抽提；7、柔情地拉苏特兰明150μl，重新加入20μl3mol/lnaac及375μl无水乙醇，搅匀后12000rpm×8min搜集dna；8、70%乙醇洗涤沉淀，吹干后te溶解，-20℃保藏。
方法二：蜗牛酶法1.注射于5ml的yepd培养基中在25℃-28℃震荡培育12-16h。
2.3500rpm离心5min沉淀细胞，用1ml的无菌水洗涤一次，再加0.5mlsolutionⅰ(1m山梨醇，0.1medta,ph=7.5)重悬。
3.迁移细胞至1.5ml的离心管中，重新加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液，37℃保温30-60min,以赢得原生质体。
4.最大转速离心1min以沉淀细胞，用500ulsolutionⅱ(50mmtris-hcl,20mmedta,ph=7.4)溶液悬浮，然后加入50μl10%sds,混合65℃保温30min。
5.加入200μl5m醋酸钾，放于冰上30min。
6.最小输出功率Vergt15min，迁移上清液至代莱离心管中，用等体积的异丙醇结晶dna。
酵母菌DNA提取方法
1.将种子液接入100mL液体YPD培养基中培养48h。
2.离心获取湿菌体，用蒸馏水多次洗涤，放在60℃烘箱中烘干备用。
3.选用Eeup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒对DNA进行提取。
（1）取50-100mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入1.5mL离心管中。
加入200µL Buffer Digestion 和2µLβ-巯基乙醇，再加入20µL Proteinase K液体，震荡混匀。
56℃水浴1h至细胞完全裂解。
（2）加入100µL Buffer PF，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
（3）室温10000rpm离心5min，将上清转移到新的1.5mL离心管中。
（4）加入200µL Buffer BD，充分颠倒混匀。
（5）加入200µL的无水乙醇，充分颠倒混匀。
（6）将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm温室离心1min，倒掉收集管中的废液。
（7）将吸附柱放回收集管，加入500µL PW Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（8）将吸附柱放回收集管，加入500µL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉收集管中的废液。
（9）将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，离去残留的Wash Solution。
（10）取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50µL TE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液。
提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
4.对提取的DNA进行PCR扩增。
5.对提取到的DNA进行琼脂糖凝胶电泳实验，检测DNA的提取情况。
酵母菌-中文百科
酵母菌-中文百科酵母菌提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。
我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒也离不开酵母菌的贡献。
酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒。
酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做成高级营养品添加到食品中，或用作饲养动物的高级饲料。
酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。
酵母菌简介酵母菌形态图酵母菌（yeast）是一群单细胞的真核微生物。
酵母菌是个通俗名称，是以芽殖或裂殖来进行无性繁殖的单细胞真菌的通称，以与霉菌区分开。
极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。
酵母菌主要分布在含糖质较高的偏酸性环境，如各种水果的表皮、发酵的果汁、蔬菜、花蜜、植物叶面、菜园果园土壤和酒曲中。
它们多为腐生菌，少数为寄生菌，能引起人和植物的病害，有的酵母菌可与昆虫共生。
酵母菌与人类的关系密切，是工业上最重要，应用最广泛的一类微生物，在酿造、食品、医药工业等方面占有重要地位。
可用来制面包；发酵生产酒精和含酒精的饮料，如啤酒、葡萄酒和白酒；生产食品工业的酶，如蔗糖酶，半乳糖苷酶；也可用来提取核苷酸、麦角甾醇、辅酶A、细胞色素C、凝血质和维生素等生化药物；酵母菌细胞蛋白质含量高达细胞干重的50%，并含有人体必需的氨基酸，因此酵母菌可用于生产饲用、食用和药物的单细胞蛋白（SCP, single cell protein）。
有的酵母菌还具有氧化石蜡降低石油凝固点的作用，或者以烃类为原料发酵制取柠檬酸、反丁烯二酸、脂肪酸、甘油、甘露醇、酒精等。
酵母菌属单细胞真核生物，与高等动、植物的单个细胞相比，具有基本相同的细胞结构，但由于酵母菌具有世代时间短，可在简单的培养基上生长，单个细胞能完成全部生命活动，能获得各个生长阶段的细胞等特点，用其进行细胞学研究比用多细胞真核生物容易得多，因此在分子生物学、分子遗传学等重要理论研究中具有特殊的研究价值。
微生物遗传-8-酵母菌遗传
3.2 酵母的基因组和染色体
3.2.1 酵母基因组
1996年完成酿酒酵母全基因组的测序，是真核生 物中最早被测序的生物。
12068kb；6607 ORFs。 平均每隔2kb就存在一个编码蛋白质的基因（线 虫6Kb，人30Kb），即整个基因组有72％的核苷 酸顺序由开放阅读框组成。 平均 ORF长度1.4Kb。
酵母的遗传重组即双链断裂的相对发生 Nhomakorabea 与染色体的GC丰富区相耦合，而且不同染 色体的重组频率有所差别，较小的Ⅰ、Ⅲ、 Ⅳ和Ⅸ号染色体的重组频率比整个基因组 的平均重组频率高。
② 酵母基因组遗传丰余的主要结构
DNA重复序列：如开放阅读框或者基因的间隔区包 含大量的三核苷酸重复 染色体末端重复：具有长度超过几十个kb的高度 同源区，它们是遗传丰余的主要区域 ，重组频繁。
3、酵母菌遗传
3.1 概论
酵母属于真核生物，是单细胞真菌，生长较 快，目前已知有1000多种酵母。 可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子 囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过芽殖 来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵 母”。
酵母生活史
通过出芽进行无性生殖， 也可以通过形成子囊孢 子进行有性生殖。 无性生殖：在环境条件 适合时，从母细胞上长 出一个芽，逐渐长到成 熟大小后与母体分离。 有性生殖：营养状况不 好时，一些可进行有性 生殖的酵母会形成孢子 （一般是四个），在条 件适合时再萌发。
自我复制型酵母载体-YEp系列
YEp系列含有2μ质粒的复 制起始部位和rep基因片 段，和选择基因LEU2。 该质粒可在酵母中产生特 异的重组酶，使YEp很快 与酵母内源质粒重组。重 组一旦发生，YEp载体则 很快复制并扩增。因此 YEp质粒拷贝数多并且较 稳定。 YEp13是一个穿梭质粒， 包含pBR322的完整序列， 因此可以在大肠杆菌也可 以在酵母中进行选择。 YEp的结构
酵母菌及其生物学特性简介
酵母菌及其生物学特性简介酵母菌是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。
酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。
可在缺氧环境中生存。
目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子(子囊孢子和担孢子)的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。
不形成孢子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”(类酵母)。
目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。
酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，而在酿酒中，它也十分重要。
生理酵母营专性或兼性好氧生活，目前未知专性厌氧的酵母。
在缺乏氧气时，发酵型的酵母通过将糖类转化成为二氧化碳和乙醇(俗称酒精)来获取能量。
C6H12O6(酶)→2C2H5OH(酒精)+2CO2+少量能量在酿酒过程中，乙醇被保留下来;在烤面包或蒸馒头的过程中，二氧化碳将面团发起，而酒精则挥发。
在有氧气的环境中，酵母菌将葡萄糖转化为水和二氧化碳。
无氧的条件下，将葡萄糖分解为二氧化碳和酒精。
在温度适合时，氧气和养料充足的条件下，以出芽方式迅速增殖。
化学元素组分酵母的化学组成与培养基、培养条件和酵母本身所处的生理状态有关。
一般情况下：酵母细胞的平均元素组成(%)如下：碳-47 氢-6.5 氧-31 氮-7.5~10 磷-1.6~3.5其他元素的含量很少(%) 钙-0.3~0.8 钾-1.5-2.5 镁--0.1~0.4 钠-0.06-0.2 硫-0.2 在酵母中发现的微量元素(mg/kg) 铁--90-350 铜：20-135 锌：100-160 钴：15-65细胞壁细胞壁厚约25~70nm，细胞壁分为三层，外层为甘露聚糖;中层为蛋白质，其中多数是酶，少数是结构蛋白;内层为葡聚糖，它使细胞保持一定的机械强度。
此外，细胞壁还含有少量脂类和几丁质(芽痕)。
不同种属的酵母菌细胞壁不含甘露聚糖。
细胞膜酵母菌的细胞膜是由磷脂双分子层构成，中间嵌有甾醇和蛋白质。
细胞核每个细胞通常只有一个核，但也有含有两个核或者甚至多个核。
酵母菌种鉴定引物
酵母菌种鉴定引物-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分应该对文章的主题进行简要介绍，引起读者的兴趣，并提供一个背景和前景。
以下是一个示例：酵母菌是一类广泛存在于自然界和工业生产中的微生物，具有重要的应用价值。
酵母菌种鉴定作为酵母菌研究中的重要一环，为科学家提供了重要的信息和工具。
然而，酵母菌种鉴定的准确性和效率一直是一个挑战，传统的鉴定方法存在一定的局限性。
为了解决酵母菌种鉴定的问题，科学家们开始致力于开发和优化酵母菌种鉴定引物。
引物是在聚合酶链反应（PCR）中使用的特异性序列，可以选择性地扩增目标酵母菌的DNA片段，从而实现对特定酵母菌种类的鉴定。
本文将介绍酵母菌种鉴定引物的设计原则、筛选与优化方法，以及这些引物的有效性和对酵母菌种鉴定的意义。
我们将通过对已有的酵母菌种鉴定研究进行综合分析和总结，为进一步研究和应用酵母菌种鉴定引物提供指导和展望。
通过本文的阅读，读者将能够了解酵母菌种鉴定引物的研究进展和应用前景，并对酵母菌种鉴定技术有一个整体的认识。
同时，本文的内容也将对加强酵母菌相关产业发展和科学研究提供重要的参考和指导。
1.2 文章结构文章结构部分主要介绍了本篇文章的整体结构布局。
通过对各个章节的简要概述，读者可以对整篇文章的内容有一个整体的把握和预期：1. 引言部分：在引言部分，首先对研究对象的背景进行了概述，引出了本篇文章的研究重点；其次，介绍了文章的结构，即各个章节的内容将如何展开；最后，明确了本篇文章的研究目的，即为了解酵母菌种鉴定引物的特点和有效性。
2. 正文部分：正文部分详细介绍了酵母菌种鉴定方法的相关知识，包括引物设计原则和引物筛选与优化的具体方法。
其中，引物设计原则将详细阐述酵母菌种鉴定引物的设计原则，使读者对引物的选择和设计有更加清晰的认识；而引物筛选与优化则将介绍如何通过实验和数据分析，选取合适的引物并对其进行进一步的优化，以提高酵母菌种鉴定的准确性和可靠性。
3. 结论部分：结论部分对本篇文章的研究结果进行总结和归纳，首先验证了酵母菌种鉴定引物的有效性，并分析了在实际应用中酵母菌种鉴定的意义；其次，展望了进一步研究的方向，介绍了可能的研究内容和意义，以期为酵母菌种鉴定领域的后续研究提供参考和借鉴。
酵母菌在分子生物学研究中的应用
酵母菌在分子生物学研究中的应用酵母菌是一种单细胞真菌，因其易于培养，遗传操纵方便，成为了一种重要的模式生物，尤其是在分子生物学领域中的应用。
本文将重点介绍酵母菌在DNA重组、基因控制、蛋白质组学和人类基因疾病等方面的研究进展和应用。
一、DNA重组在分子生物学领域中，酵母菌被广泛应用于DNA重组领域。
DNA重组是指DNA跨越染色体的重组技术，是细胞进化和基因治疗的重要工具之一。
酵母菌的DNA重组技术主要分为两种：酵母菌介导的酵母菌重组和人类酵母菌杂交。
酵母菌介导的酵母菌重组是指利用酵母菌的同源重组机制，将外源DNA转入到酵母菌中，进而重组为单一染色体中的不同部分。
此技术已成为遗传工程领域中基因插入和替换的标准技术。
而人类酵母菌杂交技术则是指将人类的DNA序列与酵母菌的序列杂交，利用酵母菌的同源重组机制实现对人类DNA序列的重组和修复。
二、基因控制基因控制是指对基因表达及其调控的研究。
酵母菌由于其基因组小，易于实验室处理，成为了探索基因控制机制的重要工具。
酵母菌的基因控制研究通常是利用大规模的基因改变前和改变后的转录组分析研究，这些变化包括基因表达差异、剪切变化、RNA降解等。
这些数据可以帮助研究人员确定特定基因的功能，并阐明转录因子及其他基因控制元件系统的构建和分子细节。
三、蛋白质组学蛋白质组学是指对蛋白质在不同条件下的表达及其相互作用网络的研究。
酵母菌在蛋白质组学研究中可以提供它小而易于操作的基因组，大规模的纯化和变异的蛋白质，以及高通量分析，同时还可以利用现代技术，分析蛋白质基础，重构蛋白质复杂结构并研究其功能。
四、人类基因疾病在人类基因疾病领域，酵母菌也展现了很大的潜力。
酵母菌可以利用其同源重组互补的特性，通过表达人类基因，进行基因功能研究。
这可以帮助确定个别基因及其突变，导致人类疾病的机制，开发治疗方案和寻找新的治疗药物。
总之，酵母菌在分子生物学研究中的应用，得益于其小型、易于操控、易于扩增，能够克服这些迫在眉睫的问题。
酵母的dna提取实验报告
酵母的dna提取实验报告
（最新版）
目录
一、实验目的
二、实验材料
三、实验步骤
四、实验结果
五、实验讨论
六、实验结论
正文
一、实验目的
本实验旨在通过提取酵母的 DNA，研究酵母的基因组成，并为后续的基因工程实验提供 DNA 样本。
二、实验材料
1.酵母菌种
2.蒸馏水
3.乙醇
4.氯化钠
5.滤纸
6.蒸馏器
7.离心机
三、实验步骤
1.酵母菌种的准备：选用新鲜的酵母菌种，将其放入蒸馏水中，保持适当的浓度。
2.提取 DNA：将酵母菌种放入离心机中，离心一定时间后，取出上清液。
向上清液中加入适量的氯化钠，使 DNA 逐渐析出。
3.滤过：将析出的 DNA 溶液倒入装有滤纸的漏斗中，通过滤纸将杂质滤除。
4.洗涤：将滤纸放入蒸馏水中，反复洗涤，直至滤纸上的 DNA 纯净。
5.乙醇沉淀：将洗涤后的滤纸放入乙醇中，静置一段时间，DNA 会逐渐沉淀。
6.收集 DNA：将沉淀后的 DNA 收集起来，即为提取的酵母 DNA。
四、实验结果
通过实验，成功提取到了酵母的 DNA，实验结果符合预期。
五、实验讨论
在实验过程中，我们发现在加入氯化钠后，DNA 的析出速度较快，说明氯化钠对 DNA 的析出有一定的促进作用。
此外，通过多次洗涤和乙醇沉淀，我们成功地提取到了纯净的酵母 DNA。
六、实验结论
通过本实验，我们成功地提取了酵母的 DNA，为后续的基因工程实验提供了必要的材料。
酵母菌的遗传变异及其相关基因
酵母菌的遗传变异及其相关基因酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体、植物表面以及消化系统中等。
酵母菌在生物学研究中具有重要作用，是模式生物之一，几乎所有的有关基因表达和生化代谢调控的实验方法都可以在酵母菌上开展。
而酵母菌的遗传变异是构建酵母菌基因网络的必要过程，进而推动细胞生长和代谢的实现。
1. 酵母菌的遗传变异在自然界和实验室中，酵母菌可通过遗传变异来适应不同环境。
遗传变异包括基础性的点突变和复杂的染色体水平变异等。
其中，点突变是最常见的遗传变异形式，也是人们对遗传变异研究的重点。
点突变可分为错义突变和无义突变两类：错义突变是因为DNA序列发生了变化，让该基因表达的蛋白质发生了氨基酸的变异，从而使蛋白质结构和功能发生了改变；而无义突变则是该DNA序列变异后终止密码子生成一条截断的蛋白质链，导致细胞失能或者细胞死亡。
除此之外，酵母菌还可通过发生基因重组的方式来形成染色体水平的遗传变异。
这种变异形式通常会改变基因组的规模和染色体结构，并产生新的基因型或表型。
研究者们已通过染色体水平变异实现了酵母菌的进化人工控制，例如弱化或强化单一环境下的竞争能力、对环境毒性的适应能力等。
2. 酵母菌遗传变异相关基因（1）交叉交叉是酵母菌中基因重组的一种形式。
当酵母菌进行有性繁殖时，交叉会对基因组进行一定的乱序，从而生成不同的基因型。
正常的交叉作用需要受到遗传信号的诱导，这些信号来自酵母菌营养环境、细胞周期等不同因素。
恰当地配置这些因素可以控制交叉率，让繁殖酵母菌的下一代具有更加多样化的基因组。
事实上，随着研究进程不断深入，越来越多的基因被证明是直接或间接影响酵母菌交叉率的。
例如，环境因子下调的酵母菌细胞容易变得非常敏感，由此会减小交叉率和对外因的适应性；反之，高温和高氨基酸浓度等条件会刺激交叉率的上升。
（2）加工酵母菌的遗传变异在很大程度上是通过基因加工过程实现的。
基因加工是指对DNA进行重组、修饰、转录和翻译等一系列调节和加速基因转录的过程。
重组法酵母转基因的操作流程
重组法酵母转基因的操作流程1.酵母基因组DNA的提取酵母基因组DNA提取的目的是获取酵母菌体内的DNA用于后续的操作。
一般采用裂解酵母菌体的方法提取DNA，具体步骤如下：-通过酵母预培养，得到酵母菌悬浮液。
-沉淀酵母菌悬浮液，去除培养基。
-使用细胞裂解缓冲液裂解酵母细胞，释放DNA。
-使用丙酮沉淀DNA，去除其他杂质。
-通过洗涤、溶解等步骤得到纯化的酵母基因组DNA。
2.外源DNA的构建外源DNA的构建是将目标基因或其他DNA片段经过特定的操作，构建成可用于转基因的载体DNA。
-针对目标基因，进行PCR扩增或使用其他适当的方法获得目标DNA片段。
-将目标DNA片段与载体DNA进行连接，一般采用限制酶切和DNA连接酶的方法。
-外源DNA还可以构建其他特殊序列，如启动子、标记基因等，以实现特定的目标。
3.酵母菌体的转化转化是将外源DNA导入酵母中，使酵母细胞能够表达外源基因。
酵母菌体转化一般有两种方法：化学法和电转化法。
-化学法转化：-制备酵母靶菌株，包括选择合适的酵母菌株及对应培养基成分的调整。
-制备产生低盐胆固醇溶液和转化缓冲盐溶液。
-稀释酵母导入质粉末，并加入充足的低盐胆固醇溶液。
-在冰上孵育一段时间，将混合液通过热激冷冻的方法转移到电泳气泡中。
-通过勺子串入导入液，冻结导入液后，电泳电环泵注入电泳。
-电泳过程中伴有导入液的减量。
结束电泳时，针尾切割成小片。
-电转化法转化：-将酵母细胞培养至对应的生长期。
-调整酵母细胞浓度。
-准备转化缓冲盐溶液和性相为空凝气泡的溶液。
-将酵母细胞和目标DNA溶液混合。
-通过不同电压的电击法将酵母细胞进行电转化。
-回收转化后的酵母菌体并进行培养。
4.筛选转基因酵母为了筛选出成功转基因的酵母细胞，一般采用标记基因的方法。
-构建一个可表达特定筛选标记基因的转基因酵母菌株。
-将转化后的酵母菌种悬浮液培养在含有选择性的培养基中，使只有转基因酵母能够存活下来。
-通过对菌落进行PCR扩增或其他方法，确认是否成功获得目标基因的酵母菌株。
酵母菌DNA
采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。
通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/" target="_blank">基因组DNA的提取一：仪器：同方法一二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作1.5ml 对数生长期细菌细胞离心，12000rpm,1-2min沉淀溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr离心，12000rpm,8-10min沉淀溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀 65℃,30min等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心,12000rpm,4-5min上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。
酵母抽提物是一种优良的天然调味料，在食品行业中具有广泛的用途。
对国内和国外酵母抽提物的发展状况做了分析，综述了酵母抽提物应用新进展酵母DNA的提取酵母DNA的提取 1. x新鲜的菌体中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2. 离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul 3. 加入25ul，10%SDS。
酵母菌基因组及其功能研究
酵母菌基因组及其功能研究酵母菌是一种常见的微生物，被广泛应用于食品、药物、酿造等生产过程中。
同时，酵母菌也是生物学研究中常用的模式生物。
然而，要全面了解酵母菌的生物学特性，需要对其基因组结构和功能进行细致的研究。
下面，我们就来探讨一下酵母菌基因组及其功能研究的相关问题。
一、酵母菌基因组结构酵母菌基因组是指酵母菌细胞中所有基因的组合。
酵母菌基因组的大小和结构因品种而异，最常用的实验酵母菌S. cerevisiae的基因组大小约为12.1 Mb，包含6000多个基因。
酵母菌基因组主要由DNA和不同类型的非编码RNA构成。
酵母菌的基因组呈现出明显的染色体结构，S. cerevisiae基因组由16条染色体组成，其中染色体I至XIII为单染色体，染色体XIV、XV、XVI为它位点染色体。
除了染色体，酵母菌的基因组中还存在一些线性和环形的质粒，它们携带了多种重要基因。
这些质粒在酵母菌的基因表达、代谢调节以及逆境抗性等方面起着重要作用。
此外，近年来的研究表明，酵母菌的基因组还存在着多样的基因拷贝数变异现象，这对基因调控和表达具有重要影响。
二、酵母菌基因组功能研究酵母菌基因组的研究可以从多个层面入手，包括基因序列和表达调控、基因蛋白质产物特性和功能等方面。
1. 基因序列和表达调控酵母菌基因的调控机制复杂，包括转录激活、转录抑制、RNA加工、核糖体识别等多个环节。
研究人员利用基因组测序和计算生物学方法，探索酵母菌基因调控网络中各个基因之间的相互作用和影响。
同时，通过基因编辑和敲除技术进行实验验证，可以证明与酵母菌基因调控网络相关的基因功能、细胞生长、代谢和逆境应答等生理过程。
2. 基因蛋白质产物特性和功能酵母菌基因蛋白质产物特性和功能的研究是揭示其生物学体系和代谢网络的重要方面。
基因蛋白的各种性质，如结构、互作、代谢途径等，对于酵母菌基因功能的理解和应用具有重要价值。
其中，蛋白质相互作用是研究基因功能的关键环节之一。
酵母菌的生殖方式
酵母菌的生殖方式
酵母菌主要通过分裂来进行生殖。
在适当的条件下，酵母菌会在细胞质中形成一条新的分裂线，然后将细胞分为两个独立的细胞。
这种方式称为二分裂或mitosis。
在这种情况下，每个新细胞都有相同的遗传信息和结构。
此外，酵母菌还可以通过性繁殖来生殖。
性繁殖是指两个细胞之间进行核交换来形成新的细胞。
这种方式称为酵母菌的配对和交换（mating and shuffling）。
在这种情况下，新细胞会拥有来自两个父本的遗传信息。
酵母菌的性繁殖可以帮助它们产生遗传多样性，这对于酵母菌来说是非常重要的，因为它们可以适应不同的环境条件。
需要注意的是,大多数酵母菌属于单倍体,而不是双倍体,这意味着它们只有一个完整的DNA染色体.在一些酵母菌中,性繁殖并不需要配对,它们可以通过直接进行核交换来形成新的细胞,这种方式称为自交。
另外,在环境条件不利的情况下，酵母菌还可以通过萎缩变形来生存，这种方式称为萎缩或胞囊化，在这种情况下，酵母菌会形成一个保护膜，以减少水分流失和保护其遗传信息。
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采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。
通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/" target="_blank">基因组DNA的提取一：仪器：同方法一二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作1.5ml 对数生长期细菌细胞离心，12000rpm,1-2min沉淀溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr离心，12000rpm,8-10min沉淀溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀 65℃,30min等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心,12000rpm,4-5min上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。
酵母抽提物是一种优良的天然调味料，在食品行业中具有广泛的用途。
对国内和国外酵母抽提物的发展状况做了分析，综述了酵母抽提物应用新进展酵母DNA的提取酵母DNA的提取 1. x新鲜的菌体中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2. 离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul 3. 加入25ul，10%SDS。
65度，30min水浴。
4. 加入25ul5mol/lKAC，冰浴60分钟（4度冰箱放置就可以） 5. 12000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心） 6. 12000rmp，15min，弃上清。
7. 150ul，bufferIII 溶液沉淀，12000rmp，15min 8. 将上清溶液转到干净的离心管中，加入6ul （10ug/ul），ran酶，37度，30min 9. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中 10. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提 11. bufferI：0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA 12. bufferII：50mmol/l Tris，20mmol/l EDTA 13. bufferIII：10mmol/l tris，1mol/l EDTA 14. 筛选AD/BD可以直接使用抗生素筛选的方法酵母菌落PCR 1. 酵母质粒和基因组DNAPCR模版的制备取对数生长期酵母菌株1.5ml，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min 离心15s，沉淀悬浮于200ulTE缓冲液中，在沸水上煮1-10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存于－20度取1ul用于PCR 2. 从平板上调取长势良好的菌落少许，悬浮于含20ul无菌水的0.5ml eppendofff离心管中（离心管中央预先用注射器针头扎一个小孔，放置盖子因受热膨胀）水浴煮沸0.2.5.10min 3. 利用微波炉快速制备酵母治理以及菌落取直径大于3mm的酵母干菌落，至于EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30ulTE振荡，13000r/min，离心2-5min，上清储存浴－20度，取1ul 来作PCR 真菌DNA的提取方法改良 1. 酵母活化后加入YEPD培养基，25-28度培养16-24小时，收集菌体 2. 取少许新鲜的菌体，加入0.6ml缓冲液I（0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA）1ml。
0.1ml蜗牛酶（30mg/ml），37度温浴60min 3. 3000r/min离心10s，去上清，沉淀加入加入bufferII150mmol/l Tris，20mmol/l EDTA 1ml 10%SDS0.1ml65度，30min水浴。
4. 加入0.3ml ，5mol/lKAC冰浴60分钟 5. 10000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心）在5000-6000r/min离心15s 6. 沉淀用0.6ml缓冲液III10mmol/l tris，1mol/l EDTA溶解1000r/min，离心15min 7. 上清液转移一个干净的离心管中，加入6ul10ug/ul），ran酶，37度，30min 8. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中 9. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提实验一酿酒酵母总DNA的提取【实验目的】了解酿酒酵母基因组DNA提取的原理，掌握将基因组DNA从细胞各种生物大分子中分离的技术。
【实验原理】从各种生物材料中提取DNA（包括质粒DNA的提取）是基因工程实验最常见的操作之一。
高质量DNA的获得是基因组文库构建、基因克隆、序列测定、PCR及DNA杂交等实验的基础。
基因组DNA提取的方法依实验材料和实验目的而略有不同，但总的原则都是首先将细胞破碎，然后用有机溶剂及盐类将DNA与蛋白质、大分子RNA及其它细胞碎片分开，用RNA酶将剩余的RNA降解，最后用乙醇（或异丙醇）将DNA沉淀出来。
本实验以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）(1)细胞（图1）为材料提取DNA。
酵母具有较厚的细胞壁，所以先用溶壁酶如Zymolyase将细胞壁溶解，然后用SDS将细胞裂解并使蛋白质变性，再用醋酸钾（KAc）溶液将DNA与其它细胞成份分开，最后用乙醇或异丙醇将DNA沉淀。
此法的优点是各种操作条件较温和，可获得较完整的基因组DNA。
图1. 酵母细胞。
（A）电镜切片横切面；（B）扫描电镜图。
【试剂与器材】1．菌种：酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W303a：单倍体菌株。
2．培养基：YPD （酵母粉 10 g, 蛋白胨20 g，葡萄糖 20 g, 加水至1000mL，溶解，自然pH值，121℃灭菌20分钟，如果配制固体培养基，则加入2%的琼脂粉溶解灭菌。
3．试剂： 1mol/L 甘露醇，0.1mol/L Na2EDTA (pH7.5)，10％ SDS，5mol/L 醋酸钾（pH5.5），50mmol/L Tris-Cl (pH7.4)，20mmol/L Na2EDTA (pH7.5)，100% 异丙醇，TE (pH8.0)：10mmol/L Tris-Cl(pH8.0), 1mmol/L Na2EDTA；3M NaAc (pH7.4)，Zymolyase 100,000溶液：配成2.5mg/mL [溶于1mol/L甘露醇，0.1mol/L Na2EDTA (pH7.5)中。
] 4． RNase A溶液（备择）：称取一定量RNase A溶于50mmol/L 醋酸钾（pH5.5）中配成1mg/L浓度，煮开10分钟，-20℃保存（2）。
【操作方法】1．用接种环（或无菌牙签）从YPD平板上刮取新鲜的单菌落，接种在含5mL YPD的大试管中，30℃振荡培养过夜（3）；2．测培养液在OD600的值，然后将培养液转至10mL离心管中，于室温下以2,000r/min 离心5分钟，倒去上清液；3．加入0.5mL的1mol/L甘露醇，0.1mol/L Na2EDTA以悬浮细胞，然后用移液枪将悬浮液转至1.5mL的Eppendorf离心管中；4．加0.02mL的溶壁酶，37℃水浴反应60分钟（4）；5．于台式离心机上以10,000r/min 离心30秒；6．去上清，将沉淀悬浮在0.5mL的50mmol/L Tris-Cl和20mmol/L的Na2EDTA中；7．加0.05mL的10％ SDS，充分混匀；8．65℃保温30分钟（以裂解细胞膜和将蛋白质变性）；9．加0.2mL的5mol/L醋酸钾，将管置冰上60分钟；10． 12,000r/min 离心5分钟；小心地将上清转入一新鲜的离心管中（切勿吸到下层沉淀！），加入等体积的异丙醇，轻混匀并置室温5分钟，然后12,000r/min离心10秒，小心吸去上清，将核酸沉淀物晾干（5）；11．将沉淀重新悬浮在300μL的TE（pH8.0）中;12． (12/13/14为选做) 加15μL的1mg/L RNase A 溶液，37℃水浴反应20分钟；13．加30μL（1/10体积）的3mol/L醋酸钠，混匀，再加入0.2mL 100％异丙醇沉淀，同步骤10离心，收沉淀，室温晾干。
14．将沉淀重新溶于0.1-0.3mL的TE中。
15．琼脂糖凝胶电泳检测纯度和质量（参见本书实验二）。
【注意事项与提示】(1) 酿酒酵母是一种单细胞的低等真核模式生物，培养简单，遗传背景清楚，基因操作简便，广泛应用于遗传学、细胞及分子生物学各方面的研究。
(2) RNase A来自小牛胰腺，特异性地在C和U位点处降解单链RNA。
此酶非常耐热，100℃加热15分钟，也不能将其灭活；而DNase在此温度下已完全失活。
(3) 在此条件下酵母大约每1.5个小时增殖1代，过夜培养后菌液将达到饱和。
(4) 此时可在显微镜下观测酶解的效果。
做法是：取数微升菌液加在载玻片上，滴加1滴10%的SDS，放显微镜下观察。
消化完全的酵母菌呈透明的圆形。
(5) 切勿晾得过干，否则难于溶在TE缓冲液或水中。
以沉淀边缘变透明而中间尚为白色（未完全干燥）为宜。
【实验安排】第1天配好各种试剂和培养基，下午接酵母菌至试管中培养过夜，第二天完成DNA 提取和鉴定实验。
【实验报告要求与思考题】1. 上交总DNA电泳图；2. 为什么要在操作步骤2中测培养液OD600的值？3. 加0.2mL的5mol/L醋酸钾的作用是什么？4. 沉淀DNA时加1/10体积的3mol/L醋酸钠，为什么？。