酵母菌DNA

采用3种方法对不同酵母菌的总DNA进行提取，经琼脂糖凝胶电泳、ND-1000型微量紫外分光光度计检测以及酶切、连接、预扩增试验结果的分析，表明采用改良氯化苄法提取酵母菌的总DNA质量最好，基本无DNA碎带，蛋白质污染小。通过对野生酵母菌菌株的验证试验，进一步证明采用改良氯化苄法提取的总DNA产量稳定、重复性好，可以直接用于限制性内切酶酶切试验，完全适于AFLP分析及一些其它分子生物学研究的要求方法三：酵母菌genomics/" target="_blank">基因组DNA的提取

一：仪器：同方法一

二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前

三：操作

1.5ml 对数生长期细菌细胞

离心，12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心，12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL，0.5μl蛋白酶Ｋ，混匀，37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀 65℃,30min

等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,

离心,12000rpm,4-5min

上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。

酵母抽提物是一种优良的天然调味料，在食品行业中具有广泛的用途。对国内和国外酵母抽提物的发展状况做了分析，综述了酵母抽提物应用新进展

酵母DNA的提取

酵母DNA的提取 1. x新鲜的菌体中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。 2. 离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入

bufferII250ul 3. 加入25ul，10%SDS。65度，30min水浴。 4. 加入25ul

5mol/lKAC，冰浴60分钟（4度冰箱放置就可以） 5. 12000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心） 6. 12000rmp，15min，弃上清。 7. 150ul，bufferIII 溶液沉淀，12000rmp，15min 8. 将上清溶液转到干净的离心管中，加入6ul （10ug/ul），ran酶，37度，30min 9. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中 10. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提 11. bufferI：0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA 12. bufferII：50mmol/l Tris，20mmol/l EDTA 13. bufferIII：10mmol/l tris，1mol/l EDTA 14. 筛选AD/BD可以直接使用抗生素筛选的方法酵母菌落PCR 1. 酵母质粒和基因组DNAPCR模版的制备取对数生长期酵母菌株1.5ml，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min 离心15s，沉淀悬浮于200ulTE缓冲液中，在沸水上煮1-10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存于－20度取1ul用于PCR 2. 从平板上调取长势良好的菌落少许，悬浮于含20ul无菌水的0.5ml eppendofff离心管中（离心管中央预先用注射器针头扎一个小孔，放置盖子因受热膨胀）水浴煮沸0.2.5.10min 3. 利用微波炉快速制备酵母治理以及菌落取直径大于3mm的酵母干菌落，至于EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30ulTE振荡，13000r/min，离心2-5min，上清储存浴－20度，取1ul 来作PCR 真菌DNA的提取方法改良 1. 酵母活化后加入YEPD培养基，25-28度培养16-24小时，收集菌体 2. 取少许新鲜的菌体，加入0.6ml缓冲液I

（0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA）1ml。0.1ml蜗牛酶（30mg/ml），37度温浴60min 3. 3000r/min离心10s，去上清，沉淀加入加入bufferII150mmol/l Tris，20mmol/l EDTA 1ml 10%SDS0.1ml65度，30min水浴。 4. 加入0.3ml ，5mol/lKAC冰浴60分钟 5. 10000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心）在5000-6000r/min离心15s 6. 沉淀用0.6ml缓冲液III10mmol/l tris，1mol/l EDTA溶解1000r/min，离心15min 7. 上清液转移一个干净的离心管中，加入

6ul10ug/ul），ran酶，37度，30min 8. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中 9. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提

实验一酿酒酵母总DNA的提取

【实验目的】

了解酿酒酵母基因组DNA提取的原理，掌握将基因组DNA从细胞各种生物大分子中分离的技术。

【实验原理】

从各种生物材料中提取DNA（包括质粒DNA的提取）是基因工程实验最常见的操作之一。高质量DNA的获得是基因组文库构建、基因克隆、序列测定、PCR及DNA杂交等实验的基础。基因组DNA提取的方法依实验材料和实验目的而略有不同，但总的原则都是首先将细胞破碎，然后用有机溶剂及盐类将DNA与蛋白质、大分子RNA及其它细胞碎片分开，用RNA酶将剩余的RNA降解，最后用乙醇（或异丙醇）将DNA沉淀出来。本实验以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）(1)细胞（图1）为材料提取DNA。

酵母具有较厚的细胞壁，所以先用溶壁酶如Zymolyase将细胞壁溶解，然后用SDS将细胞裂解并使蛋白质变性，再用醋酸钾（KAc）溶液将DNA与其它细胞成份分开，最后用乙醇或异丙醇将DNA沉淀。此法的优点是各种操作条件较温和，可获得较完整的基因组DNA。