快速检测结核分支杆菌对异烟肼的耐药性的临床应用

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聚合酶链反应-测序技术快速检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG基因突变的研究

sistant strains of M 31 strains had KatG gene mutations, and with 66.0%(31/47) of mutaTB,
tion rate. 1 of 30 drug susceptibility MTB strains had KatG' gene mutation. Conclusions PCR- DNA sequencing is a seneitive, accurate and specific method for rapid detection of KatG genes mutations of MTB, and then for detecting the INH- resistant MTB.
4 1 勺
改良罗氏培养基及药敏培养基自配。
增均性和阴设阳性对照。 (4)扩增产物2%琼脂糖凝
方法:(1) 痰标本处理，罗氏培养，改良绝对浓度药敏试验，菌型鉴定操作方法参照《结核病诊断细菌学检验规程沪。药敏培养基内含INH 为:高浓度
核分枝杆菌分离株中，有31株KatG基因检出有突变，突变检出率为66.0%(31/47);30 株结核分枝杆菌敏感株检出1株KatG基因突变。结论 PCR- DNA测序技术方法敏感、特异，准确、可快速检测结核分枝杆菌KatG 耐药基因突变，有利于耐异烟脱结核分枝杆菌耐药性的快速检测。 [关键词】分枝杆菌，结核;耐异烟麟;KatG基因;聚合酶链反应一 DNA测序 Rapid detection of the genomic mutations of W11- resistant mycobacterium tuber-
culosis by polymeri se chain reaction- DNA sequencing YU Ji, XIONG Guoliang, ZHANG

熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性测定中的临床价值探究

熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性测定中的临床价值探究【摘要】目的：分析评价溶解曲线法检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药的临床应用价值。

方法：收集结核病患者痰液、胸腹腔积液、脑脊液、灌洗液、脓液等经培养证实为结核分枝杆菌的阳性标本70例，对分离的结核分枝杆菌菌株同时用溶解曲线法和培养法进行异烟肼和利福平耐药性检测。

结果：溶解曲线法检测异烟肼的灵敏度为94.44％，特异度为96.15％，与培养法检测的符合率为97.14％；检测利福平的灵敏度为100％，特异度为92.16％，与培养法检测的符合率为94.29％。

结论：溶解曲线法检测在快速检测结核患者异烟肼、利福平耐药方面具有较高的临床应用价值。

【关键词】结核分枝杆菌；耐药；溶解曲线法世界卫生组织在1992年将同时耐异烟肼和利福平的结核病定义为耐多药结核病，耐多药结核病存在治疗周期长、高治疗成本和低治愈率等问题[1]。

快速地对分枝杆菌异烟肼及利福平耐药性测定，对治疗方案的制定和结核病流行非常重要的意义。

随着分子生物学的发展，开发出了多种快速、客观、准确的耐药基因检测新诊断方法，如线性探针技术、基因芯片技术及探针熔解曲线技术等[2]。

近年来已有一些实验室的研究分析熔解曲线技术对结核分枝杆菌耐药性的测定。

本文从临床应用角度观察，对PCＲ熔解曲线法结果总结，以培养法药敏试验作为金标准，分析熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性的敏感度和特异度，探讨其在耐药结核病的诊断意义和应用价值。

1资料与方法1.1一般资料收集我院2017年1-2018年12月结核病患者痰液、胸腹腔积液、脑脊液、灌洗液、脓液等经培养证实为结核分枝杆菌的阳性标本70例，对分离的结核分枝杆菌菌株同时用溶解曲线法和培养法进行异烟肼和利福平耐药性检测。

1.2方法研究设计：以传统培养法为金标准，通过计算灵敏度、特异度、符合率等指标评价溶解曲线法检测异烟肼、利福平耐药的临床价值。

检测方法：培养法药敏试验是采用世界卫生组织/国际防痨和肺病联合会（WHO/IUATLD）推荐的比例法，所用对照和基础培养基为无淀粉改良罗氏培养基，分别对异烟肼（isoniazid，INH）和利福平（rifampin，RFP）开展药物敏感性试验。

利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法在结核病中的应用

利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法在结核病中的应用作者：辛宝林于秀坤来源：《中国实用医药》2016年第09期【摘要】目的探讨利福平和异烟肼耐药基因突变采用PCR线性杂交酶显色法建立快速检测方法的应用价值。

方法 88份送检的结核病患者临床标本，得结核分枝杆菌分离株64株，采用PCR线性杂交酶显色法建立利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法进行检测，同时采用比例法检测，并以比例法为标准评价快速检测方法的诊断价值。

结果快速检测方法中对利福平耐药24份，仅对异烟肼耐药24份，对利福平和异烟肼均耐药22份，不耐药18份。

以耐药不耐药作为分割点，比例法药敏试验结果为参考标准，快速检测方法的灵敏度100.0%，特异度90.0%，准确度97.7%；两种检验方法一致性好（P>0.05）。

结论 PCR线性杂交酶显色法建立快速检测方法可在12 h内对利福平和异烟肼耐药基因突变的作出判断，与比例法药敏试验一致性好，可信度高，值得临床推广。

【关键词】利福平；异烟肼；耐药；基因突变；结核分枝杆菌；快速检测DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.09.115利福平和异烟肼是结核病的最重要的一线抗结核药物[1]。

近年来结核分枝杆菌基因突变发生耐药的情况也时有发生，世界卫生组织报道每年有新增48.9万例耐多药结核病，其总量占结核病患者的4.8%，而在我国则更为严重。

耐多药结核病的早期确诊有利于患者的病情控制，比例法药敏试验虽然结果可靠，且被公认为判断结核分枝杆菌耐药的金标准，但该方法需要细菌培养，耗时2～4个月，易贻误病情。

随着分子生物学的飞速发展，为结核分枝杆菌耐药性快速检测提供可能。

本中心采用PCR线性杂交酶显色法建立利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法对送检的疑似耐药结核病患者临床标本进行检测，并将结果与比例法药敏试验进行分析，现报告如下。

1 材料与方法1. 1 材料取2013年10月～2015年5月送检的疑似耐药结核病患者临床标本88份，其中痰65份，肺泡灌洗23份。

结核杆菌及其耐药性快速检测

结核杆菌及其耐药性快速检测一、结核杆菌及其检测方法介绍结核分枝杆菌，又被称作结核杆菌，它是引发结核病的病原细菌。

主要通过呼吸系统结核患者传播，能够侵犯全身各个器官，最常见的为肺结核。

根据世界卫生组织的估算，全球每年增加的结核病人大约在800万左右，死于结核病的人大约在300万左右，全世界人口的三分之一，也就是大约17亿人曾经感染过结核杆菌。

在发展中国家，目前结核病的发病概率依然在持续地上升，在发达国家的病人也是有所上升的，比较常见于高危人群中（比如慢性酒精中毒的人、感染过HIV的病人、滥用药物的人以及无家可归的人）。

在控制结核的过程中，建立敏感、快速、特异的检测结核杆菌的手段具有非常重大的现实意义。

直到目前为止，结核的诊断依然主要依靠透视检查、临床症状、痰标本镜下检查、结核菌素试验或者痰标本结核杆菌培养等。

通过临床症状以及透视检查不能够发现早期的结核病人，并且特异性不是很强；结核菌素试验的特异性不是很强，阳性也只能说明在以前有否暴露在分枝杆菌下；痰标本镜检的敏感性和特异性也不能达到要求；培养的方法来分离结核杆菌是判断结核的重要标准，但是常规的培养方法需要的时间比较长，一般需要几个周的时间。

近年来，结核杆菌（包括牛型、人型、非洲型）在快速检测方面取得了快速的发展，主要包括基因扩增技术和改良液体培养方法。

建立准确、快速的耐药性检测方法，能够有效指导并制定科学合理的治疗方式，及时判断治疗是否成功，并且是否产生了耐药性，也有利于展开大规模的结核杆菌的耐药性调查。

之前基于培养方法来检测结核杆菌的耐药性，耗时比较长，并且结果不一定准确，这些年来，耐药性的快速检测方法已经取得了较大的进展，大体包括：噬菌体检测方法、改良液体培养方法以及基因检测方法等。

二、结核杆菌的快速检测方法（一）改良液体培养方法这些年来，已经建立了多种多样的改良液体培养方法，大大缩短了培养所需要的时间，这类的试剂盒包括了Bactec 9000MB、Bactec 460TB以及MGIT等。

熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究

熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究发布时间：2022-01-03T07:11:23.592Z 来源：《医师在线》2021年10月19期作者：王金会1 张志学1 郑伊雄[导读]王金会1 张志学1 郑伊雄2（1齐齐哈尔市结核病防治院；2齐齐哈尔市建华医院；黑龙江齐齐哈尔161000）【摘要】目的：研究对结核分枝杆菌的耐药性检测中应用熔解曲线技术的临床应用效果。

方法：选取我院2020年1月-2021年12月拟诊为初治菌阴性肺结核患者52例做为研究对象，分别留取痰标本2份，其中一份痰标本应用熔解曲线技术检测，另一份痰标本应用痰涂片及固体培养药敏实验，并以固体培法做为金标准比较熔解曲线检测的结果的准确性。

结果：熔解曲线检测的阳性率为69.20%（36/52），固体培法的阳性率为73.10%（38/52），以固体培法做为金标准，熔解曲线检测的敏感度为92.10%，特异度为91.70%，阳性预测值为97.20%，阴性预测值为78.60%，Kappa=0.81；熔解曲线检测的阳性率明显高于痰液TB菌涂片检测，（P＜0.05）。

结论：在结核分枝杆菌耐药检测中应用熔解曲线技术特异度、敏感度均较高，能够在短时间内对结核分枝杆菌耐药性做出判断。

【关键词】熔解曲线技术；结核分枝杆菌；耐药性；敏感度；特异度目前，如何提高耐药结核病的治疗效果并有效控制其传播是结核病防控工作的重点。

此类患者的早期诊断难度较大，而且治疗时效果慢，痰菌检验时阳性持续时间相对较长。

对于此类患者来讲通过常规的抗结核病治疗方案不能够将患者体内的病菌完全杀死，部分患者甚至至死时而具有传染性。

对于此病目前的主要诊断方案仍依赖传统的药敏试验方法，但是在进行药敏试验时其生长速度过慢导致试验的时效性不佳，一般需要长达3个月的时间才能够得到检验结果，不利于及时对患者开展治疗[1]；液体药敏技术的面市则大幅度提升了检验的速度，但是仍需要2个月的时间，依然不能满足临床上对于此病快速诊断并制定治疗方案的需求。

应用线性探针杂交技术快速检测结核分枝杆菌的多药耐药性

应用线性探针杂交技术快速检测结核分枝杆菌的多药耐药性张海燕;缪家文;潘洪秋;王捷婷;熊茜;宋戎;龚玉华;孙春红【摘要】目的:评价线性探针杂交技术(HAIN技术,GenoType MTBDR plus试剂盒)快速检测结核分枝杆菌多药耐药性的价值.方法:利用HAIN技术检测277例涂阳患者痰标本,并与比例法药敏试验作比较.结果:HAIN技术对肺结核患者耐多药的检出率和传统比例法药敏试验相比无显著差异(P＞0.05).HAIN技术检测耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核的灵敏度、特异性分别为100％、81.69％、80.77％和100％、93.90％、95.74％.利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB S531L位点[35/60(58.33％)];异烟肼耐药基因最常见的突变是katG S315 T1位点[42/71(59.15％)],其次是inhA c15t位点[23/71(32.39％)].结论:HAIN技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(027)006【总页数】3页(P539-541)【关键词】耐多药结核病;线性探针杂交技术;利福平;异烟肼;耐药【作者】张海燕;缪家文;潘洪秋;王捷婷;熊茜;宋戎;龚玉华;孙春红【作者单位】镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院肺科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005;镇江市第三人民医院检验科,江苏镇江212005【正文语种】中文【中图分类】R521第5次全国流行病学抽样调查结果显示，我国每年约有10万新发耐多药结核病（multidrug-resistant tuberculosis，MDR-TB）患者［1］。

结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分子机制研究进展

结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分子机制研究进展杨寿慧;刘惟优【摘要】结核病是由结核分枝杆菌引起的一种威胁全球健康的传染性疾病.异烟肼是结核病治疗应用最广泛的药物之一.前体异烟肼通过过氧化氢-过氧化物酶(KatG)激活,活化的异烟肼可抑制靶蛋白InhA.异烟肼耐药的分子机制涉及多个基因,其中katG基因突变是异烟肼耐药主要的原因,另外还有inhA、kasA、oxyR基因等.外排泵系统在异烟肼耐药方面也起着重要作用.了解异烟肼抗结核分枝杆菌作用机制及结核分枝杆菌耐异烟肼的分子机制将有助于异烟肼耐药结核病的诊治.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2018(031)010【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】结核分枝杆菌;异烟肼;耐药机制【作者】杨寿慧;刘惟优【作者单位】341000 赣州,赣南医学院第一附属医院呼吸科;341000 赣州,赣南医学院第一附属医院呼吸科【正文语种】中文【中图分类】R5160 引言结核病是由结核分枝杆菌引起的长期以来威胁人类健康的传染性疾病。

据世界卫生组织估计2015年全世界约有1040万新发结核病例，我国新发肺结核人数仅次于印度和印度尼西亚位高居全球第3位[1]。

作为一种典型的持留菌，体内潜伏感染的结核分枝杆菌难以清除并且有很强的耐药突变潜力[2]。

目前结核病治疗上应用最广泛的一线抗结核药物是异胭肼，但随着异烟肼耐药结核菌的增加，使得患者不得不更换昂贵且副作用大的二线抗结核药物。

结核病治疗方案的选择常常需要依据药敏结果，但传统药敏培养时间一般长达4～8周。

值得关注的是近年来分子生物学在结核菌耐药检测方面取得一些重要的进展，为结核分枝杆菌耐药检测提供了新思路。

1 异烟肼及其对结核分枝杆菌的作用机制结核分枝杆菌的细胞壁由长链分枝菌酸、高支链的阿拉伯多糖、肽聚糖组成的交叉连接网3个主要的组成成分。

异烟肼是作用于结核分枝杆菌细胞壁分枝菌酸合成的窄谱抗生素。

从1952年开始异烟肼作为抗结核药物应用于临床，其结构仅一个吡啶环连接一个酰肼基。

DNA芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因

DNA芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因潘建华;彭雪峰;邓为之;石国民;向延根【摘要】目的应用DNA芯片杂交技术快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并评价其临床应用价值.方法采用DNA芯片技术,将固定于硝酸纤维素膜上的四种药物常见耐药基因的特异性探针,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应产物进行杂交,共对97株临床分离株进行检测,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较.结果INH、RIF、SM和EMB的耐药基因检出的灵敏度分别为89.6%、98.6%、81.8%和88.2%,特异度分别为93.3%、100%、100%和100%.结论简便快速敏感的DNA芯片杂交方法适用于临床批量结核分枝杆菌耐药性的初筛.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2010(015)006【总页数】4页(P825-828)【关键词】结核;分枝杆菌;核酸杂交;药物耐受性;突变【作者】潘建华;彭雪峰;邓为之;石国民;向延根【作者单位】410004,湖南,长沙,长沙市中心医院检验科;410004,湖南,长沙,长沙市中心医院检验科;410004,湖南,长沙,长沙市中心医院检验科;410004,湖南,长沙,长沙市中心医院检验科;410004,湖南,长沙,长沙市中心医院检验科【正文语种】中文近几年耐多药/广泛耐药结核病的出现和蔓延严重阻碍了我国结核病防治工作的进程,已成为严重的公共卫生和社会问题。

2007～2008年全国结核病耐药基线调查显示我国肺结核病人中耐多药率为 8.32%,广泛耐药率为 0.68%,据此计算,我国每年新发耐多药肺结核患者12万例[1]。

2008年WHO《世界耐抗结核病药物报告》中提到,耐多药结核病发病率创历史最高记录,中国仅次于俄罗斯。

可见建立准确而快速的药物敏感性检测方法具有极其重要的意义。

本研究旨在应用 DNA芯片技术快速检测临床分离株中的耐药结核杆菌基因型,为该技术在结核耐药性领域的研究和应用奠定基础。

痰中耐药结核分枝杆菌katG基因的快速检测及异烟肼耐药机制研究

ＹＡＮＧｎ，ＳｏｇＺＨＡＮＧｏｔｎｇＺＨＯＮＧｉ，ＡＮＧ — ｉＹａ－ｉ，ＭｎＷＹｉｗｅ
（．ｐｒｍｅｔｆＲｅｐｒｔｒｓａｅ，７Ｈｏｐｉｌｏ１ＤｅａｔｎｓｉａｏｙＤｉｅｓ１５ｏｓｔｆＰＬＡ，ａｇｈｕ３３０ＣｎａＺｈｎｚｏ６００，ｈｉａ；２Ｃｅｔｒｆｕｅｃｌｓｓｇｅｅｄｉｇｎｓｓｏｏｇｉｇ，ｈｎｉｇ４０２Ｃｎ）．ｎｅｔｂｒｕｏｉｎａｏｉｆＣｈｎｑｎＣｏｇｑｎ０００，ｈｉａｏＡＢＴＳＲＡＣＴ：ＯｂｅｔｖＴｏｒｐｄｙｄｔｃａＧｇｎｆＭｙｏａｔｒｕｔｂｒｕｏｉｎｓｕｕｊｃｉｅａｉｌｅｅｔｋｔｅｅｏｃｂｃｅｉｍｕｅｃｌｓｓｉｐｔｍ
ｋｔ基因点突变有关，可能还存在其它值得探讨的机制。ａＧ但
关键词：耐药结核分枝杆菌；异烟肼；ａＧ基因；ｋｔ聚合酶链式反应
中图分类号：Ｒ７．１３８９１
文献标识码：Ａ
文章编号：００２４２０）４０９３１０ —２９（０８０ —０１—０
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基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药性

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ｃｉｃｎｌｙｎｃｍｐｒｏｔｈｏｖｎｏａｐｏｒｏｅｏ，ｗｒａＨｗ：ｆｒＩｎａｉｈｅｅｅ７％（２１，ｈｐｔｈｏｏ．ｉｏａｓｎｗｉｔｅｃｎｅｔｎｒｐｔｎｍｔｄｅｅｓｆｏｓｏｓｉｄ，ｔｙｗｒ５ｅｇｉｈｉｌｏｉｈｏｏｚ１／６）７．％（６４）４５（２２）０（６４，７．％（８６）ｅｐｃｖｌ；ｒＲｆｉｎｔｅｅｅ８．％（５１，８３３／６，５．％１／２，９％３／０）７４４／２，ｒｓｅｉｅｆｉｍｐｃｈｙｗｒ３３ｔｙｏａｉ１／８）８．％（８４）７．％（５２）９．％（８４）５５（３６，ｓｅｔｅ．ＣｎｌｓｎＴｅｅｔｔｅＭｙｏａｔｉｍｔ— ６４３／，１４１／１，２７３／１，８．％５／２）ｒｐｃｉｌｅｖｙｏｃｕｉｏｄｔｃｈｃｂｃｒｕｏｅｕ

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝【摘要】We evaluated clinical application effect of gene chip for detection of rifampin (RFP) and isoniazid (INH) resistance in Mycobacterium tuberculosis (MTB).Rifampin and isoniazid drug-resistance gene loci were detected by gene chip with sputum specimens from smear-positive tuberculosis patients and clinical strains,comparing the results of detection.BACTEC MGIT 960 drug susceptibility test results were used as control to evaluate the detection performance of gene chip.The sequences of the polymerase chain reaction products of the rpoB,katG and inhA genes from 999 strains identified as Mycobacterium tuberculosis were determined to confirm the mutations by DNA sequencing.Results showed that 100 cases were identified as nontuberculous mycobacteria by gene chip in the 1 108 cases of smear-positive samples.Among the rest 1 008 samples,there were only 9 cases of microarray results different from BACTEC MGIT960 culture-positive strains,achieving the coincidences of 99.1％.Compared with BACTEC MGIT 960 drug susceptibility testresults,the gene chip method displayed a concordance of 98.1 ％ and 94.5 ％for RFP and INH respectively in the 999 pared with the DNA sequencing method,the accuracy of gene chip method was 99.6％ for rifampin resistance and 99.8％ for isoniazid resistance.It's concluded that the gene chip technology can quickly and accurately detect rifampin andisoniazid resistance in MTB and can be used directly for the detection of sputum samples.%目的评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果.方法利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能.另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性.结果在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌.其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1％.以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1％,异烟肼的耐药性的符合率为94.5％.与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6％和99.8％.结论基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】6页(P43-48)【关键词】结核分枝杆菌;利福平;异烟肼;耐药性;基因芯片【作者】许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝【作者单位】福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008;福建省福州肺科医院检验科,福建医科大学临床教学医院,福州 350008【正文语种】中文【中图分类】R378.91Supported by the Young Research Program of Department of Public Health of Fujian Province (No. 2013-2-77) Corresponding author: Huang Ming-xiang,Email:**************结核病是全世界范围内严重威胁公共健康的传染病。

197例临床结核分枝杆菌分离株的快速耐药性检测报告

ｔｓｎｎＴｅｔｇａｄＭＢＤＲ— ｌｓａｓｙＴｅｓｎｉｖｔｎｐｃｆｃｔｆＭＴＢＤＲ— ｌｓａｓｙｗｅｅａａｙｅｎｏａｅｔｏｖｎｏａｒｇｉＰｕｓａ．ｈｅｓｔｉａｄｓｅｉｉｏｉｙｉｙＰｕｓａｒｎｌｚｄａｄｃｍｐｒｄｗｉｃｎｅｔｎｄｕｈｉｌ
ＬｉｇＺａａｌｉａ，ｈｏｎｎＱｎＹｉ
ＢｉｎｕｅｃｌｓｄＴｏａｉＴｍｏｅｅｃｓｔｔ，ｅｉｇ１１４，ｈｎｅｉｇＴｂｒｕｏｉａｈｒｃｕｒｓａｈＩｔｕｅＢｉｎ０９ＣｉａｊｓｎｃＲｒｎｉｊ１
ＭＴＤ－ｌｓ法灵敏度和特异性高，具有较好的应用前景。ＢＲＰｕ方
关键词
分枝杆菌，结核利福平异烟肼微生物敏ｌｓｓｙｆｒＲａｉｔｃｉｎｏｆｍｐｎａｄａｕｔｆＭｏＰｕａｏｐｄＤｅｅｔｆａｉｎＡｓｏＲｉＩｏｉｚｄＲｅｉｔｎｅｉ９Ｍｙｃｂｃｅｉｍｂｒｕｏｉｉｉａｓｌｔｓｓｎａｉｓｓａｃ１７ｎｏａｔｒｕｔｅｃｌｓｓＣｌｃｌｏａｅｕｎＩ
Ｔｕｅｂｒ＆ＴｈｒＴｕｍｏｒｏ，Ｍａｃ０１ｒｈ２０，Ｎｏ１．
１７例临床结核分枝杆菌分离株的快速耐药性检测报告９
北京市结核病胸部肿瘤研究所国家参比实验室
李强赵雁林
摘要目的评估线性探针ＭＢＲＰｓＴＤ — ｕ检测临床分离株对利福平（Ｆ）ｌＲＰ和异烟肼（ＨＩ）药物敏感性的效能。方法应用病例对Ｎ

荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用

354Chin J Lab Diagn,March.2021 ,Vol 25«No.3文章编号：1007 — 4287(2021)03 — 0354 —03荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用张汇征\李桓2,张珍'李俊刚、王静1，廖传玉1，周刚、陈耀凯1,严晓峰罗明^ (重庆市公共卫生医疗救治中心1.中心实验室；2.感染科；3.药剂科；4.结核科，重庆400036)摘要：目的评价荧光Pt’R熔解曲线法检测临床标本结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼敏感性的性能。

方法收集重庆市公共卫生医疗救治中心2016年7月至2018年7月进行过荧光P C R熔解曲线法结核检测的病例，分别与结核菌培养和Gen e x p e r t比较检测结核菌的灵敏度，与比例法药敏比较药敏结果。

结果在结核菌检测上，荧光P C R熔解曲线法阳性率与结核菌培养相近，低于Genexpert:与比例法药敏相比，检测利福平药敏的灵敏度为93.2%,特异度为80. 2%,符合率为84. 3%;检测异烟肼药敏的灵敏度为92. 6%,特异度为86. 3%,符合率为88. 6%。

结论荧光P C R熔解曲线法可以高灵敏地直接对临床样本快速检测结核菌及其耐药性。

关键词：焚光P C K熔解曲线法；结核分枝杆菌；耐药性；临床样丰中图分类号：R378.91 文献标识码：AApplication of fluorescence PCR melting curve assay to detect mycobacterium tuberculosis and its drug-resistance in clinical specimens Z H A N G H u i-z h e n g^L l H uan Z H A N G Zhen n et a l. (.Central Lab ^ Chongqing Public H ealth M edical Center •Chongqing A00036 ,Chi?iu)Abstract ：Objective To evaluate the ability of fluorescence PC'R melting curve assay in detection of mycobacterium tuberculosis in clinical samples. Methods The cases tested fluorescence quantitative PCR melting curve assay in C'hongqing public health medical center during Jul. 2016 to Jul. 2018 were collected. The sensitivities of fluorescence PCR melting curve assay were compared with MTB culture and Genexpert respectively. The results of rifampin and iso- niazid drug susceptibility of fluorescence PCR melting curve assay were compared with that of standard proportion method. Results The positive detection rate of MTB of fluorescence cjuantitative PCR melting curve assay was close to MTB culture，but lower than that of Genexpert; Compared with the proportion method, the sensitivity, specificity and concordance rates of rifampicin were 93. 2% ,80. 2%and 84. 3% respectively ； The sensitivity * specificity and concordance rates of isoniazid were 92. 6% ,86. 3%and 88. 6% respectively. Conclusion Fluorescence cjuantitative PCR melting curve assay can be u.sed to detect MTB and its drug-resistance directly in clinical samples with high sensitivity.Key words：fluorescence quantitative PCR melting curve assay；mycobacterium tuberculosis；drug-resistance；clinical specimen(Chiti J Lab,2021,25 ：0354)结核病（TB)是由结核分枝杆菌（MTB)引起的慢性传染病。

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性

应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【期刊名称】《中国防痨杂志》【年(卷),期】2011(033)010【摘要】目的应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增一基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和5.株耐利福平和异烟肼分离株的堆rB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照.结果应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株咖B基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型.50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为-15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变,3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.结论应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药.【总页数】6页(P680-685)【作者】张俊仙;吴雪琼;阳幼荣;梁艳【作者单位】100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室;100091,北京,解放军第三O九医院全军结核病研究所军队结核病防治重点实验室【正文语种】中文【相关文献】1.长春地区基因芯片法和比例法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 赵淑杰;2.基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究 [J], 欧维正;骆科文;王燕;秦万;蒙俊;张廷梅3.基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价 [J], 许榕青;李丹;林银霞;黄明翔;陈新朝4.基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的研究 [J], 熊敏;骆科文;周忠;欧维正5.基因芯片技术对结核分枝杆菌利福平及异烟肼的耐药性检测研究 [J], 孙桂英; 赵刚; 沈燕; 徐密琴; 高胜利; 俞净; 钮志林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价

肺结核专题荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价$刘春平\谭耀驹2,苏碧仪2，马品云2^广州医科大学附属第一医院广州呼吸健康研究院呼吸病理中心（广东广州510180); 2广州市胸科医院医学检验科（广东广州510095)【摘要】目的利用荧光PC R探针熔解曲线方法检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性，并与表型药敏试验结果比较，评价其应用价值,：方法收集216株痰涂片阳性患者的痰标本，行BACTEC MGIT960液体培养、菌种鉴定、DNA提取及荧光PC R探针熔解曲线检测。

经菌种鉴定的182例结核杆菌临床分离株行表型药敏试验。

其中174份标本同时获得表型药敏试验和荧光PC R探针熔解曲线方法检测利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的结果，以表型药敏试验结果为标准，评价荧光PC R探针熔解曲线检测方法检验效能t结果174份标本中，以表型药敏试验结果为标准，PC R探针熔解曲线法检测利福平敏感度、特异度和符合率分别为93. 75%(95%C/:79.丨9%~99. 23%)、97. 18%(95%C7:92.94%~99.23%)和96. 55%;对异烟肼敏感度、特异度和符合率分别为76.00%(95%C/:61.83%~86.94% )、W. 19%(95%C/:95. :59% ~ 98% )和91 «% ;对喹诺酮敏感度、特异度和符合率分别为85.00%(95%(：/:62.11%〜96.79%)、100.00%(95%(：/:97.63%~100.00%)和98.28%;对卡那霉素敏感度、特异性和符合率分别为 50.00%(95%(：/:6.76%〜93.24%)、100.00%(95%(：/:97.85%〜100.00%)和98. 85%。

荧光P C R探针熔解曲线法与表型药物敏感度试验检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的值为0. 89，对异烟肼耐药性的AVippa值为0. 81，对查诺自同耐药性的尺值为0. 91，对卡那霉素耐药性的尺appa值为0.66。

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测杨彩虹;杨敏;于璐;包海洋;吴长新;曹旭东;陈创夫【摘要】目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟胼耐药性的应用价值.方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析.2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点.3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率.结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株.2)测序分析结果显示:①KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变.②inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位.3)①对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55％;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30％;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10％;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5％.通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95％、特异性为100％.②用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7％、特异性为80％.③以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株.以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95％、特异性为82.76％.结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值.%We detected the isoniazid resistance in clinical Mycobacterium tuberculosis isolates by high-resolution melting (HRM) curve analysis and assessed the application value of the assay.The isoniazid resistance of 49 M.tuberculosis isolates preserved in laboratory was analyzed by the drug sensitivity test (traditional proportionmethod).Further analysis was made on the sequencing of the isoniazid resistance determining region in these test strains,and their mutation sites were screened.Specific primers used in the HRM curve analysis were designed based on the screened mutation sites,DNA mutations were assayed in the isoniazid-resistant gene determining region by the HRM curve analysis,and an assessment was made of the detection efficiency of the assay in isoniazid resistance in M.tuberculosis.Results of the drug sensitivity test (proportion method) showed that,of the 49 test strains,there were 20 isoniazid-resistant strains,29 isoniazid-sensitive strains.Results of the sequencing analysis showed that:1) KatG gene had four mutation patterns,i.e.,point mutations at site 234,at sites 234 and 315,at sites 234 and 463,and at sites 234,315 and 463;2) there were three mutations were detected in inhA gene,i.e.,mutations in inhA-8,-15 and-152.Analysis of gene mutation in drug-resistant strains found that of the 20 isoniazid-resistant strains,11 (55 ％) were mutated at codon 315 of KatG gene;6 (30％) were mutated in inhA-15 (4/20),-8 (1/20) and-153 (1/20) of inhA gene;two (10％) were mutated at codon 315 of KatG gene and in inhA-15;in one strain (5％),no mutation was detected in KatG and inhA genes.Through the gene mutation detection,the sensitivity and specificity of isoniazid resistance in M.tuberculosis were 95 ％ and100 ％,respectively.Results of HRM curve analysis of drug-resistance gene mutations in test strains showed gene mutations were present in 18 strains and absent in 24 ones;referring to DNA sequencing results,the sensitivity and specificity of the assay were 94.7％ and 80％,respectively.Judged by mutations as drug-resistance via the HRM curve analysis,19 resistant and 24 sensitive strains were tested.With the drug sensitivity test results by the proportion method as controls,the sensitivity and specificity of the assay were 95 ％ and 82.76 ％,e of the HRM curve in the detection of resistance of M.tuberculosis to isoniazid is characterized by good sensitivity and short time consuming,and has certain value in the rapid diagnosis of isoniazid-resistant tuberculosis.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)005【总页数】10页(P403-412)【关键词】结核分枝杆菌;高分辨率熔解曲线(HRM);DNA测序;耐药性;异烟肼【作者】杨彩虹;杨敏;于璐;包海洋;吴长新;曹旭东;陈创夫【作者单位】石河子大学动物科技学院,石河子 832003;石河子大学生命科学学院,石河子832003;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学动物科技学院,石河子 832003;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学动物科技学院,石河子 832003【正文语种】中文【中图分类】S855.2结核病是感染结核分枝杆菌引起的传染病。

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值阳央;冯智;侯欢;李芳芹【摘要】目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值.方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法进行MTBC和异烟肼耐药突变检测,对检出MTBC 的差异进行分析,以培养法药敏为金标准,评估熔解曲线法耐药突变检测的灵敏度、特异度、一致性等.结果 370例患者培养法检出MTBC 175株,阳性率47.3％,熔解曲线法检出157株,阳性率42.4％,两种方法检测的结果差异无统计学意义(P=0.073),一致性中等(Kappa=0.510);同时与有异烟肼药敏结果的115株进行比较,熔解曲线法灵敏度95.0％,特异度93.7％,与培养法结果比较差异无统计学意义(P=0.125),具有高度一致性(Kappa=0.807).结论熔解曲线法试剂盒可用于结核菌快速筛查及耐药突变检测,对异烟肼耐药突变检测具有高灵敏度和特异度,有助于缩短耐药结核病诊断时间.【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2019(019)004【总页数】5页(P405-409)【关键词】结核分枝杆菌;熔解曲线法;快速检测;异烟肼耐药突变【作者】阳央;冯智;侯欢;李芳芹【作者单位】延安大学医学院研究生系,陕西延安716000;延安市传染病医院检验科;延安市传染病医院检验科;延安大学附属医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R378.911;R978.3结核病是危害人类健康的古老疾病，至今仍是全球十大死亡原因之一。

据世界卫生组织2018年全球结核病控制报告，2017年中国新发结核病患者占世界的9%，平均感染人数63/100 000，位居全球第二，也是耐药结核病发生最多的三大国家之一；耐多药/利福平（RIF）耐药结核病平均发生数5.2/100 000 [1]，一例未治疗的耐药结核菌感染患者每年可以传染10～15个人，耐药结核病已成为全球结核病死灰复燃的重要原因，严重威胁公共卫生健康 [2]。

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要聚合酶链反应 —— 单链构象多态性（Ｃ — ＰＲ
（吉林省吉林市北华大学附属医院检验科
【要】目的建立快速检测结核分支杆菌耐药基因的分子药敏方法。方法摘
ＳＣ）析４ＳＰ分Ｏ株结核分支杆菌ＫａＧ基因突变。其中２ｔＯ株为异烟肼（ＮＨ）感株，Ｏ为］Ｈ耐药株，ＰＲＳＣＩ敏２株Ｎ用Ｃ —ＳＰ图谱鉴定扩增产物有无突变，７Ｖ标准株作对照．果Ｈ３Ｒ结所有ＩＮＨ敏感株ＳＣＳＰ带普与对照相同；９株Ｉ１ＮＨ耐药株中８株与对照相同，１有不同程度的差异，１株ＩＮＨ耐存Ｋｔ基因突变或缺失的阴性率为６。结论多数结核分支杆菌ＩａＧ０ＮＨ是由于其ＫｔｊａＧ
基因突变所致，ＰＲＳＣ用Ｃ —ＳＰ筛选突变株可达到快速检测结核分支杆菌Ｉ耐药的目的。ＮＨ
【键词】分枝杆菌，核；基因；多态现象，链构象；异烟肼；抗药性，毒关结单病中图分类号：３８９１Ｒ６．Ｒ７．１；９９４文献标识码：Ｂ文章编号：６３４３（０００ —２４０１７—１０２１）３０９ —２
化学结构与病原体蛋白质代谢所需物质脱酸的辅酶成分吡哆醛相似，争性地使蛋白质代谢辅酸活性降低，酸和转氨过竞脱程受阻，扰蛋白质代谢，响病原体的生长繁殖而发挥治疗干影作用。对其耐药性的研究日益受到重视。结核杆菌摄取Ｉ后，体内过氧公氢酶一氧化物酶氧化Ｉ，成活性ＮＨ菌过ＮＨ形中间产物，者可抑制分支菌酸合成酶ｅｏｌｐ还原酶，后ｎｙ— Ａｃ使分支菌酸合成减少，成细胞壁破损而杀菌。多年以来，ＮＨ造Ｉ耐药率一直居高不下，著影响抗结核药物的疗效。近期的分显子生物学研究发现ＩＮＨ的耐药主要与ＫａＧ基因改变有ｔ
下１ ℃ 电泳１～１。凝胶中ＤＮＡ片段以银染色法显０２ｈ６
色．ｌ１。１结果
材料与方法
１ＰＲ扩增结果，结核分支杆菌标准株（ｖＤ．Ｃ以Ｈ。Ｒ）ＮＡ为对照，引物Ｉ１Ｉ２扩增上述４用Ｓ、Ｓｏ株结核分支杆菌分离株，
・
２４９・
国际检验医学杂志２１００年３月第３卷第３１期
Ｉｔ．ｄＭａｃ１，，．ｎＩｂＭｅ，ｒｈＯｖｏＪａ．
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经验交流
・
快速检测结核分支杆菌对异烟肼的耐药性的Ｉ应用临床
黄阿莉，李卉１２１）３０１
仪，增条件９扩５℃预变性５ｍｉ，ｎ随后９４℃ ４、８℃ ４、５Ｓ５５Ｓ７２℃ １ｒｉ扩增３个循环，后７ｎ共ａ５最２℃ 延伸７ｒｉ。扩增产ｎａ
异烟肼（ＮＨ）为最主要的一线抗结核药物之一，ＮＨＩ作Ｉ
中国药品生物制品检定所提供。４ｏ株结核分支杆菌ｌ分离临床株来源于结核病防治研究所门诊和住院结核患者。按常规进行菌种鉴定和药敏试验。２ＰＲＳＣ．Ｃ —ＳＰ法聚合酶链式反应一链构象多态性分单析即ＰＲＳＣＣ — ＳＰ是１８９９年Ｏｒａ首先报道的一种ＰＲ扩增ｉ等ｔＣ产物的单链ＤＮ凝胶电泳技术。其原理是单链核酸通过自Ａ身互补或分子内的互补作用形成折叠构象，个核苷酸的突变单可造成其构象改变，而导致其在非变性凝胶电泳上迁移速度从
关嘲。ห้องสมุดไป่ตู้
物经２琼脂糖凝胶电泳后紫外线检测若出现２２ｂ８ｐ扩增带
再作ＳＣＳＰ分析。
５ＳＣ．ＳＰ分析
取２ＩＣ扩增产物加入８Ｌ凝胶ＰＲ
上样缓冲液（９甲酰胺）匀，８。含５混９Ｃ水浴１ｉ迅速置０ｒｎ再ａ人冰水中冷却１ｉ，样于非变性聚丙烯酰胺凝胶，恒压０ｒｎ加ａ于
均产生１３ｂ２ｐ片段，实这些分离株均为结核分支杆菌，证随后，引物Ｋａ用ｔＧ１和ＫｔａＧ２扩增上述４Ｏ株分离株。若ＰＲＣ
１菌株来源．
Ｈ。Ｒｖ标准株及其他非结核分支杆菌由