Wnt5a对人肝星状细胞促炎细胞因子IL-1β及IL-6表达的影响
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响
ｔ ａ ｎＳａ ｔ ｎ ｆｃｅ ｒ ｕ ｅ ｌ．Ｔ ｅ ｃｏ ｅ ｆ ｒ ｔ ｎ ｒｔ ｓ ｏ ｃ ｈ ｎ Ｗ ｔ ｒ ｓｅ ｔｄ ｇ ｏ ｐ ｃ ｌ ａ ｓ ｈ ｌ ｎ ｏ ｍａ ｉ ａｅ ｆｐ ＤＮＡ ． ｒ ｕ ｓ ｓ ｎ ｆ ａ ｔ ｉｈ ｒ ｔ ａ ｈ ｔｏ ｈ ｅｌ ｗｉ ｏ ３ １ ｇ ｏ ｐ ｗａ ｉ ｉ ｃ ｎ ｌ ｈ ｇ ｅ ｈ ｎ ｔ ａ ｆｔ ｅ ｃ ｌ ｔ ｇ ｉ ｙ ｓ ｈ
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IL-6及其在乙肝病毒中的作用
白介素IL-6及其在乙肝病毒中的作用细胞因子白介素IL-6主要由活化的单核细胞产生，具有广泛的多效性，影响各种淋巴样细胞的功能。
IL-6调节免疫感染，介导的细胞和体液免疫应答在确定病毒感染的结果中起关键作用。
本文主要概述目前关于IL-6在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的研究进展。
IL-6在促进对有效病毒控制至关重要的淋巴细胞反应中起重要作用。
作为炎症介质，IL-6也参与HBV诱导的肝硬化的发展，加重肝损伤。
IL-6属于HBV感染中的免疫调节细胞因子。
乙型肝炎病毒（HBV）是最常见的可能导致人类肝脏疾病的病毒，包括自限性急性肝炎、慢性肝炎、暴发性肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。
乙型肝炎是一种免疫相关疾病，由免疫应答引起，导致肝纤维组织的肝细胞变性、坏死或增生，HBV引起的肝细胞损伤是间接的。
白介素IL-6是一种多功能、有效、多效的炎性细胞因子，是关键的免疫应答调节剂。
IL-6抑制巨噬细胞产生IL-1和肿瘤坏死因子（TNF），已被证明可以介导内毒素诱发的肺损伤中的保护性和抗炎作用。
IL-6是疾病严重程度和预后的敏感指标。
IL-6在诱导对HBV抗原的免疫耐受中起关键作用，其活性可能参与确定乙型肝炎患者。
人白介素IL-6是分子量为26kD的糖基化蛋白，位于染色体7，含有5个外显子和4个内含子。
IL-6基因启动子区包含由核因子κB（NF-kB）和活化蛋白-1（AP1）以及其他蛋白质调节的重要转录控制元件。
IL-6受体由IL-6结合受体蛋白（IL-6R）和通用表达的130kD 信号转导b受体（gp130）组成。
gp130是IL-6活性的重要标志物，在大多数细胞表面表达的糖肽，能够进行跨膜信号转导。
相比之下，IL-6R表达受到肝细胞、白细胞和巨核细胞的限制，IL-6R（SIL-6R）的可溶性形式已被发现在各种体液中。
IL-6跨膜信号转导可以分为经典信号通路和反式信号通路两种。
在经典的信号通路中，IL-6与IL-6R的结合激活受体相关的gp130，在细胞中传递二次信号。
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响毕利泉;刘晓红;陈英剑;曹永成;毛蕊琪;耿明【摘要】Purpose To explore the biological effects of Wnt5a gene on hepatocellular carcinoma ( HCC ) cell line MHCC97L. Methods Using Lipofectamine 2000, MHCC97L cells were transfected with the pcDNA3. 1-Wnt5a and the empty vector controls, respectively. The integration of the plasmid DNA and the expression of Wnt5a were confirmed by RT-PCR and Western blot, respectively. The growth curves of different cells, plate clone formation test, flow cytometry ( FCM ) and scratch asssays were used to detect the biological behaviors of the transfected cells. Results Growth curve showed that after transfection the pcDNA3. I group cells grew faster than Wnt5a transfected group cells. The clone formation rates of pcDNA3.I group was significantly higher than that of the cells with Wnt5a expression vectors transfected ( P <0. 05 ). FCM analysis showed thatWnt5a expression vectors transfection blocked the progression of G,→S phase in cell cycle. The result of scratch assays showed that cells transfected with Wnt5a expression vectors displayed lower motility than vectors control transfected cells. Blocking this pathway using antibodies to Wnt5a, there was an increase in cell migration. Conclusion Wnt5a expression results in inhibition of cell proliferation and invasion, suggesting that Wnt5a plays a role of a tumor suppressor gene in HCC.%目的探讨Wnt5a基因对人肝癌细胞MHCC97L生物学行为的影响.方法脂质体法介导Wnt5a表达及阴性对照质粒转染MHCC97L细胞;RT-PCR及Western blot法检测质粒DNA片段插入和Wnt5a蛋白的表达;借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期和划痕试验对转染细胞的生物学活性进行检测.结果 pcDNA3.1组细胞生长速度明显快于Wnt5a表达组细胞;pcDNA3.1组细胞克隆形成率明显高于Wnt5a表达组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示Wnt5a表达能抑制细胞由G1期→S期的进程;划痕试验显示,Wnt5a表达组较阴性对照组细胞迁移速度明显减慢,当加入Wnt5a抗体阻遏信号通路时,细胞迁移速度加快.结论 Wnt5a可抑制人肝癌细胞MHCC97L的增殖和迁移能力,在肿瘤生长过程中发挥肿瘤抑制基因样作用.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2012(028)008【总页数】5页(P857-861)【关键词】肝肿瘤;肝细胞癌;Wnt5a【作者】毕利泉;刘晓红;陈英剑;曹永成;毛蕊琪;耿明【作者单位】济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,实验诊断科,济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031【正文语种】中文【中图分类】R735.7Wnt5a基因是Wnt家族中的重要成员之一，与多种肿瘤的发生、发展相关［1］。
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义简介子宫内膜腺癌是女性常见的一种恶性肿瘤，对妇女的生活和健康造成了严重的威胁。
Wnt5a和β-catenin是两个重要的信号通路蛋白，在多种癌症中具有重要的调节作用。
本文将探讨Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及其意义。
Wnt5a信号通路Wnt5a是Wnt家族中的一个成员，它在维持组织和器官正常发育过程中发挥重要作用。
研究表明，在肿瘤中Wnt5a通路的异常表达与细胞极性重建、细胞增殖和浸润能力的改变等密切相关。
Wnt5a通过与其受体Frizzled结合，进而激活蛋白激酶C （PKC）和非经典β-吲哚酮酸（β-catenin）信号通路，从而促进细胞的迁移和浸润。
因此，Wnt5a通路在子宫内膜腺癌中的表达情况可能与其浸润和转移能力密切相关。
β-catenin信号通路β-catenin是一种在维持细胞黏附和极性方面起重要作用的蛋白。
在正常细胞中，β-catenin存在于细胞膜的细胞间连接位置。
然而，在致癌过程中，β-catenin的异常表达和功能失调导致其进入胞浆并进一步进入细胞核，在转录因子Tcf/Lef的结合下激活其下游靶基因的转录。
研究表明，β-catenin信号通路在调控细胞生长、增殖、分化和凋亡过程中发挥关键作用。
因此，β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达情况也可能与肿瘤的发展和转移有关。
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义多项研究发现，Wnt5a在子宫内膜腺癌中的表达显著上调。
具体来说，Wnt5a的高表达与肿瘤的侵袭性和转移能力增强密切相关。
实验发现，Wnt5a能够促进细胞的迁移和侵袭，与肿瘤的浸润能力正相关，这可能是通过激活PKC和β-吲哚酮酸通路，从而增加细胞的浸润能力。
此外，研究发现Wnt5a还能够激活β-catenin信号通路，进一步促进肿瘤细胞的生长和分化。
棕榈酸通过上调Wnt5a基因表达抑制胰岛 β 细胞瘤INS-1细胞增殖
棕榈酸通过上调Wnt5a基因表达抑制胰岛β 细胞瘤INS-1细胞增殖吴杏儿;孙世珺;郑磊【摘要】目的探索棕榈酸(PA)抑制胰岛β 细胞瘤INS-1细胞增殖的机制.方法使用PA刺激INS-1细胞进行时间及浓度梯度实验,采用EdU标记染色法检测细胞增殖率,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt5a mRNA及蛋白的表达.使用脂质体转染siRNA干扰Wnt5a表达,通过EdU 标记法检测PA对细胞增殖率的影响.结果与溶剂对照组相比,各PA刺激组的细胞增殖率均明显下降(P<0.05).时间梯度实验中,自PA刺激细胞6 h后Wnt5a mRNA及蛋白表达水平较溶剂对照组上升(P<0.05);浓度梯度实验中,不同浓度PA 刺激组Wnt5a mRNA及蛋白表达水平较溶剂对照组明显上升(P<0.05).与转染无意义siRNA+PA组相比,转染siRNA-Wnt5a+PA组的细胞增殖率上升(P<0.05).结论 PA 在mRNA 及蛋白水平均能上调Wnt5a 基因表达,Wnt5a 可能参与介导PA 抑制INS-1细胞增殖.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2018(047)036【总页数】5页(P4575-4579)【关键词】脂毒性;Wnt5a;胰岛β细胞;细胞增殖【作者】吴杏儿;孙世珺;郑磊【作者单位】广东省中山市人民医院分子诊断中心 528403;南方医科大学南方医院检验科 ,广州 510515;广东省中山市人民医院分子诊断中心 528403;南方医科大学南方医院检验科 ,广州 510515【正文语种】中文【中图分类】R363.2+1胰岛β细胞受损是2型糖尿病(T2DM)的特征之一[1]。
血循环中游离脂肪酸(FFAs)升高可引起胰岛β细胞数量明显减少[2]。
体外实验发现，FFAs对啮齿类动物及人的胰岛β细胞同时产生诱导凋亡及抑制增殖的效应[2-3]。
Wnt5a在肺相关疾病发生发展过程中作用的研究进展
第47卷第1期2021年1月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.47No.1Jan.2021DOI：10.13481/j.1671⁃587Ⅹ．20210133Wnt5a在肺相关疾病发生发展过程中作用的研究进展Research progress in roles of Wnt5a in occurrence anddevelopment of lung-related diseases陈琪1,2,李勇1,2,徐金瑞1,2,杨易1,2（1.宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，宁夏银川750021；2.宁夏大学生命科学学院微生物与分子生物学系，宁夏银川750021）［摘要］Wnt5a是Wnt蛋白家族成员之一，通过与膜受体或共受体复合物结合激活细胞中磷酸化蛋白传递信号，既作用于经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路，又活化非经典Wnt信号通路。
Wnt5a的表达调控及其信号转导与炎症应答有密切关联，因而在炎症性疾病的发生发展中发挥着重要作用。
近年来，由肺部炎症引发的肺相关疾病严重威胁着人类健康，肺部感染性疾病已成为一大公共卫生安全问题。
Wnt5a对肺毛细血管模式化、肺泡上皮细胞的分化、平滑肌细胞功能和肺成纤维细胞的增殖起重要作用，其在肺相关疾病发生发展过程中的作用也逐渐被揭示。
现以Wnt5a蛋白及其介导的信号通路为主，概述Wnt5a在慢性阻塞性肺病、肺炎、肺肿瘤和肺纤维化等肺相关疾病发生发展过程中的最新研究进展，并展望Wnt5a在肺相关疾病研究的主要方向及预期进展，旨在为靶向Wnt5a进行肺相关疾病的防治提供理论依据。
［关键词］Wnt5a；慢性阻塞性肺病；肺炎；肺肿瘤；肺纤维化［中图分类号］R563［文献标志码］Ａ肺相关疾病是肺脏本身或其他全身性疾病在肺部的表现。
随着环境污染问题的不断出现，肺部感染性疾病发病率随之升高。
真核细胞翻译起始因子5A与人类疾病关系的研究进展论文
的氨基酸序列具有８４％的一致性¨０Ｉ，两者的氨基酸
序列差异主要位于Ｃ一末端，两蛋白之问无免疫学交 叉反应，且这两者的活化状态均是含有Ｈｙ． ｐｕｓｉｎｅ。ｉｌ－１２ｊ。ｅｌＦ５Ａ表达的主要形式是ｅｌＦ５Ａ１，在大 部分的细胞和组织中，其含量非常丰富，而且几乎所 有的正常细胞生物化学研究都进行了ｅＩＦ５Ａ１的研 究。与ｅＩＦ５Ａ１相反的是，定位在人类基因组３号染 色体３ｑ２６．２上的ｅＩＦ５Ａ２在正常细胞和组织中含量 极少，但是在许多恶性肿瘤中则高表达，所以近年来 对于ｅｌＦ５Ａ２与恶性肿瘤的研究越来越多的得到了人
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍｓ：Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ
Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｅｅ（２０１ ＩＺＤＡ０３０，２０１５ＫＹｔＭ５４）
在过去的四十多年里，真核翻译起始因子５Ａ
（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ．５Ａ，ｅＩＦ５Ａ）在生物化学、
・综
真核细胞翻译起始因子５Ａ与人类疾病关系的研究进展
周擎云
汪午轲邵初晓＋ 涂朝勇
述・
【摘要】
真核生物体内普遍存在一种蛋白质翻译起始因子叫真核细胞翻译起始因子５Ａ
（ｅｌＦ５Ａ），它是已知的唯一含有翻译后修饰赖氨酸Ｈｙｐｕｓｉｎｅ的蛋白质。有证据表明，在真核细胞内， ｅｌＦ５Ａ参与翻译、肽链延长和刺激肽键形成的过程，同时，ｅＩＦ５Ａ也参与许多人类疾病发生、发展的关 键步骤。ｅｌＦＳＡ的活化对于ｅｌＦ５Ａ产生相关生物作用必不可少，活化状态的ｅＩＦ５Ａ能参与疟原虫的 生长，同时对于人类恶性肿瘤也有促进其增殖的作用。而在艾滋病和糖尿病中，ｅｌＦ５Ａ可以结合特殊 序列的ｍＲＮＡ作为一个核输出蛋白穿梭于细胞核和细胞质之间。基于以上这些发现，越来越多的研 究开始关注ｅＩＦ５Ａ，并把抑制ｅｌＦ５Ａ活化视为一个治疗相关人类疾病的方向。
Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达及意义的开题报告
Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达及意义的开
题报告
一、研究背景
胃腺癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。
目前对于胃腺癌的研究主要集中在其发病机制和相关信号通路的发现上。
其中，Wnt信号通路被认为是一个重要的信号通路，它在胃腺癌的发生
和发展中起着重要作用。
Wnt信号通路是一条能够调控细胞增殖、分化和生存的重要信号通路。
Wnt5a和β-catenin是Wnt信号通路中的两个重要基因。
Wnt5a是一种胡萝卜素蛋白，它参与了多种生物学过程，包括细胞增殖、胚胎发育
和肿瘤形成等。
β-catenin是一种粘附分子，它在Wnt信号通路中充当重要的调节因子，其异常表达会导致多种肿瘤的发生和发展。
二、研究目的
本研究旨在探究Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达及其意义，为胃腺癌发生和发展的机制研究提供新的思路。
三、研究内容
1. 收集胃腺癌患者组织样本，采用免疫组化技术检测Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达情况，比较其在癌组织和正常组织中的差异，
并分析其与临床病理学参数的关系。
2. 对Wnt5a和β-catenin在胃腺癌发生和发展中的生物学功能进行
研究，包括细胞增殖、迁移与侵袭等。
3. 探究Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的相互作用及对其他信号通
路的影响。
四、研究意义
本研究将深入探究Wnt5a和β-catenin在胃腺癌中的表达和作用机制，有望为胃腺癌的治疗和预防提供新的思路。
同时，本研究还将为深入研
究Wnt信号通路的作用及调控机制提供借鉴。
wnt信号通路相关因子
wnt信号通路相关因子
wnt信号通路是一种对胚胎和成年人体内的许多细胞和组织发挥重要功能的信号传导系统。
它与胚胎的建立和成长、干细胞的调控、细胞增殖、分化、再生和肿瘤发生密切相关。
wnt信号通路相关因子包括：
1.β-catenin：是wnt信号通路中一个重要的调节因子，调节细胞的增殖、分化和存活。
2.Wnt：是一类转化生长因子，通过与受体Fzd结合，激活wnt信号通路，参与各种生物学过程，包括胚胎发育、干细胞分化和再生。
3.LRP5和LRP6：是共受体分子，与Fzd受体结合后，激活wnt信号通路。
4.Axin：是反转录核酸酶，对wnt信号通路进行负调节。
5.DKK和SFRP：是wnt信号通路的负调节因子，抑制wnt的介导作用。
6.TCF/LEF转录因子：是wnt信号通路的真核配体，介导wnt信号的下游效应。
总之，wnt信号通路相关因子在调节细胞命运、胚胎发育和多种生理和病理状态中都发挥着重要作用。
细胞因子(IL-6、IL-10、TNF-α)在华支睾吸虫病肝功能损伤中作用的研究
ＨＡＮ Ｘｕ ，ＸＵ Ｊ ｕ ｎ — ｑ ｕ ａ ｎ ，Ｗ ＡＮ Ｇ Ｂ ａ ｏ — ｌ ａ ｉ ，Ｓ ＵＮ Ｔ ｉ ｎ ｇ — ｔ ｉ ｎ ｇ ，
Ｓ ＵＮ Ｚｈ ｅ ｎ — ｖ ｕ ，ＤＡＩ Ｙｕ ｅ ，ＣＨ Ｅ Ｓ ｈ ｉ — ｗｅ ｉ 。ＣＡＩ Ｌ ｉ ａ ｎ — ｓ ｈ ｕ ｎ
韩 旭 ，徐骏 权。 ，王 宝来 ，孙 婷婷 ，孙振 宇 ，代 月 ，车世伟 ，蔡 连顺
１ ．佳 木 斯大 学 ２ ０ １ １级 临床 医 学专业 ，黑龙江 佳 木斯
２ ．佳 木 斯大 学 ２ ０ １ ０级 临床 医 学专业 ，黑龙江 佳 木斯
１ ５ ４ ０ ０ ７ ；
１ ５ ４ ０ ０ ７ ；
中国微生态学杂志 ２ ０ １ ５年 ３月第 ２ ７卷第 ３期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｅ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｍａ ｒ ． ２ ０ １ ５ ， Ｖ ｏ １ ． ２ ７ Ｎ ｏ ． ３
２ ６ ３
・
论 著 ・
细 胞 因子 （ Ｉ Ｌ 一 ６ 、 Ｉ Ｌ 一 １ ０ 、 Ｔ Ｎ Ｆ 一 ） 在 华 支 睾 吸虫 病 肝 功 能 损 伤 中作 用 的研 究
Ｒｏ ｌ ｅ ｏ ｆ ｃ ｙ ｔ ｏ ｋ ｉ ｎ ｅ ｓ （ Ｉ Ｌ 一 ６ 。Ｉ Ｌ－ ｌ ０ ， Ｔ ＮＦ － ） ｉ ｎ
ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｄ ｙ ｓ ｆ ｕ ｎｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｃ ｌ ｏ ｎｏ ｒ ｃ ｈｉ ａ ｓ ｉ ｓ ｓ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ
３ ．佳 木 斯 市妇 幼保健 院 ，黑 龙江 佳 木斯 １ ５ ４ ０ ０ ７ ； ４ ．秦 皇 岛市海 港 医院 ，河 北 秦 皇 岛 ０ ６ ６ ０ ０ ０；
Wnt5a对皮肤上皮作用的初步研究的开题报告
Wnt5a对皮肤上皮作用的初步研究的开题报告
标题：Wnt5a对皮肤上皮作用的初步研究
研究背景：Wnt5a是Wnt信号通路的一员，被证明在许多生物学过程中发挥着重要作用。
在皮肤发育和维护中，Wnt信号通路也扮演着至关重要的角色。
目前的研究表明，Wnt5a在皮肤细胞分化、增殖、迁移和损伤修复等方面具有重要的作用。
研究目的：本研究旨在探究Wnt5a对皮肤上皮细胞作用的影响，以期为皮肤上皮组织修复提供新的治疗策略。
研究方法：首先，我们将使用ELISA和PCR等方法检测Wnt5a在不同类型的皮肤上皮细胞中的表达水平，并对不同类型的皮肤上皮细胞进行分离和培养。
继而，我们将通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光技术，评估不同浓度Wnt5a对皮肤上皮细胞增殖、分化和迁移的影响。
最后，我们将使用分子生物学技术分析Wnt5a介导皮肤上皮细胞相关信号通路的变化。
预期结果：我们预期本研究将揭示Wnt5a对皮肤上皮细胞的作用机制，为皮肤损伤修复提供新的治疗策略。
同时，本研究也将为Wnt信号通路在皮肤组织工程和再生医学领域的应用提供重要的指导。
研究意义：皮肤是人体最大的器官之一，其上皮细胞在皮肤的发育和维护过程中扮演着至关重要的角色。
Wnt5a作为Wnt信号通路的重要成员，其对皮肤细胞的调控作用一直备受关注。
本研究将为揭示Wnt5a 在皮肤上皮细胞的生物学功能提供新的线索，有助于深入理解皮肤上皮细胞的生物学特性并为皮肤损伤修复提供新的治疗思路。
炎症细胞因子IL-1β、IL-6在神经型布氏杆菌病诊断中的应用价值
目录中文摘要 (1)英文摘要 (2)论文题目 (3)前言 (3)材料与方法 (4)结果 (7)讨论 (10)结论 (14)参考文献 (14)文献综述 (18)参考文献 (31)缩略语表 (35)攻读学位期间发表文章情况 (36)个人简历 (37)致谢 (38)中文摘要目的通过检测并分析神经型布氏杆菌病患者外周血清和脑脊液中IL-1β、IL-6的表达水平，来了解炎症对神经型布氏杆菌病患者中枢神经系统细胞免疫功能的影响，以期对该病的早期诊断及治疗提供思路，为今后临床进一步探索该病发病机制提供科学依据。
方法选择2018年01月至2018年12月期间在内蒙古医科大学附属医院和内蒙古自治区综合疾病预防控制中心门诊部、住院部就诊的患者，37例神经型布氏杆菌病患者为实验组，29例无神经系统损害布氏杆菌病患者、19例病毒性脑炎患者、23例未感染布氏杆菌病且全身无感染性疾病的患者为对照组。
所有患者在入院后24小时内空腹采集静脉血，并进行腰椎穿刺收集脑脊液。
采用MSD（Meso Scale Discovery）法检测血清和脑脊液中IL-1β、IL-6水平。
应用SPSS20.0进行统计分析。
结果（1）与正常对照组相比，神经型布氏杆菌病组血清和脑脊液中IL-1β、IL-6水平升高，具有显著性差异（P<0.05）。
（2）与正常对照组相比，无神经系统损害布氏杆菌病组血清IL-1β水平升高、IL-6水平下降，具有显著性差异（P<0.05）。
（3）与无神经系统损害布氏杆菌病组相比，神经型布氏杆菌病组血清、脑脊液IL-6水平升高，具有显著性差异(P<0.05)。
（4）与病毒性脑炎组相比，神经型布氏杆菌病组血清IL-1β、IL-6水平升高，具有显著性差异（P<0.05）。
（5）在神经型布氏杆菌病组中，脑脊液IL-1β与IL-6水平具有相关性，且为正相关关系(P<0.001,r=0.948)。
结论（1）炎症细胞因子IL-1β、IL-6在神经型布氏杆菌病血清和脑脊液中高表达，在神经型布氏杆菌的发生发展中扮演重要角色。
Wnt5a对HaCaT细胞的增殖、周期及血管内皮生长因子的影响
Wnt5a对HaCaT细胞的增殖、周期及血管内皮生长因子的影响刘守刚;罗光浦;曲永彬;黄莉宁;底大可;任盈盈;王天晶【摘要】目的:以HaCaT细胞为细胞模型,探讨Wnt5a能否激活非经典Wnt5a/Ca2信号传导途径,并检测其对HaCaT细胞增殖、周期和对血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨Wnt5a在银屑病发病中的作用机制.方法:采用CCK-8检测不同浓度Wnt5a重组蛋白对HaCaT细胞增殖的影响;利用流式细胞仪技术测定Wnt5a对HaCaT细胞周期和Ca2+浓度的影响;不同浓度Wnt5a和Frizzled5分别刺激HaCaT细胞后,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测HaCaT细胞内VEGF在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果:5 μg/mL、15 μg/mL和25μg/mL的Wnt5a能够不同程度的提高HaCaT细胞的增殖能力,促进细胞周期从G1期向S期分化,其中15 μg/mL和25 μg/mL组与空白组相比具有明显差异(P＜0.01).同时,15 μg,/mL和25 μg/mL的Wnt5a可增加HaCaT细胞内Ca2浓度(P＜0.05).RTPCR和Western blot结果显示,Wnt5a和Frizzled5能不同程度的促进VEGF的表达,其中Wnt5a的效果更显著(P＜0.05).结论:外源性Wnt5a能促进HaCaT细胞增殖和周期,并增加细胞内Ca2+浓度,进而激活Wnt5a/Ca2+非经典信号传导途径,从而促进VEGF的表达.【期刊名称】《皮肤性病诊疗学杂志》【年(卷),期】2016(023)005【总页数】5页(P302-306)【关键词】Wnt5a;HaCaT细胞;Ca2+浓度;VEGF【作者】刘守刚;罗光浦;曲永彬;黄莉宁;底大可;任盈盈;王天晶【作者单位】广东省皮肤病医院,广东广州 510091;广东省皮肤病医院,广东广州510091;广东省皮肤病医院,广东广州 510091;广东省皮肤病医院,广东广州510091;广东省皮肤病医院,广东广州 510091;广东省皮肤病医院,广东广州510091;广东省皮肤病医院,广东广州 510091【正文语种】中文【中图分类】R758.63银屑病是一种复杂性、慢性、炎症性皮肤疾病，易复发，难治愈，给患病人群带来了极大的痛苦。
Wnt信号通路对肝细胞肝癌的影响
Wnt信号通路对肝细胞肝癌的影响闪海霞;朱幼芙;范崇桂;张怀宏【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2016(037)004【摘要】目的：探讨Wnt信号通路Wnt5a和β－catenin的表达与肝细胞肝癌的关系及临床意义。
方法选取肝细胞肝癌患者癌组织及其癌旁组织各82例，采用免疫组织化学法检测β－catenin与Wnt5a的水平，分析两者与肝细胞肝癌患者临床病理参数间的关系及两者的相关性。
结果肝细胞肝癌组织与癌旁组织Wnt5a的阳性表达率分别为35．0％和71．7％，β－catenin的阳性表达率分别为65．9％和23．2％，两者相比差异均有统计学意义（P＜0．01）。
在肝细胞肝癌组织内Wnt5的表达与TMN分期和血清 AFP水平相关（P＜0．05），而与患者年龄、性别、肿瘤分化程度以及有无肝硬化无明显相关（P＞0．05）；β－catenin的表达与TMN分期和肿瘤分化程度及是否有肝硬化有相关性（P＜0．05），而与患者年龄、性别、血清AFP水平无明显相关（P＞0．05）。
在肝细胞肝癌组织中，Wnt5a与β－catenin的表达呈负相关（r＝－0．418，P＜0．05）。
结论Wnt信号通路Wnt5a与β－catenin的表达与肝细胞肝癌的发生、发展具有密切的关系，可为临床治疗肝细胞肝癌提供一定理论基础。
【总页数】3页(P572-574)【作者】闪海霞;朱幼芙;范崇桂;张怀宏【作者单位】河南省南阳市中心医院感染性疾病科 473000;南方医科大学南方医院感染内科广州510515;河南省南阳市中心医院感染性疾病科 473000;河南省南阳市中心医院感染性疾病科 473000【正文语种】中文【相关文献】1.非霍奇金淋巴瘤细胞株中Wnt信号通路功能检测及siRNA敲低Wnt信号通路对细胞活力的影响 [J], 杨嘉骆;周从明2.刘氏正骨方对BMSCs成骨分化中Wnt信号通路及Sclerostin基因的影响 [J], 吴毛;王建伟;冯骅;尹恒;华臻;俞云飞3.丹皮酚对去卵巢骨质疏松大鼠叉头框蛋白O3a/Wnt信号通路及椎骨密度的影响[J], 张富财;郑峰;王福荣;陈刚4.丹酚酸A对心肌成纤维细胞在高浓度葡萄糖刺激下Wnt信号通路的影响 [J], 韩路拓;关瑜;任钧国;刘建勋;郭宏伟;杨佳妹;王攀5.补肾活血方对DKK1阻断Wnt信号通路后薄型子宫内膜容受性相关蛋白表达的影响 [J], 尹晓丹;杨维;辛明蔚;武颖;何军琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Wnt5a在脑血管相关疾病中的研究现状
Wnt5a在脑血管相关疾病中的研究现状发布时间：2021-12-28T08:07:40.554Z 来源：《医师在线》2021年32期作者：牛宁1，侯丽淳[导读] 许多研究都证明,Wnt5a在动脉粥样硬化（As）中高表达,并参与了动脉粥样硬化斑块生成的几个阶段。
不过,具体牛宁1，侯丽淳1.佳木斯大学附属第一医院神经内科）摘要：许多研究都证明,Wnt5a在动脉粥样硬化（As）中高表达,并参与了动脉粥样硬化斑块生成的几个阶段。
不过,具体机制尚不明确。
本文的目的是回顾当前有关 Wnt5a及其信号传导机制和Wnt5a在As及脑血管相关疾病中作用的文献。
探究 Wnt5a作为脑梗死诊断、预测标志物和潜在治疗靶点的可能性。
关键词：Wnt5a,炎症,胆固醇稳态,AS,脑血管Wnt5a是Wnt蛋白家族中高度被研究的成员,参与调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、炎症、脂质运输和代谢[1]。
已证实Wnt5a在许多炎症性病变中有重要功能,如关节炎、肺结核、As。
然而,它参与As的机制尚不清楚。
本文回顾当前有关 Wnt5a 在As中的信号传导机制及作用的文献,探究 Wnt5a作为脑梗死诊断、预测标志物和潜在治疗靶点的可能性。
Wnt5a与动脉粥样硬化动脉粥样硬化(As)是一种高度流行的慢性全身炎症性疾病,机理相当复杂,与先天生的免疫学应答相关,其中Toll样受体(TLRs)和炎症因子表达尤为重要。
研究证实Wnt5a、TLR2和TLR4在晚期人类动脉粥样硬化病变中升高。
另外，Wnt5a直接作用于真核转录因子NF-κB上,NF-κB 在炎症转录调节过程中起着主要功能。
在进展的动脉粥样硬化疾病中,NF-κB激活促进了COX-2、趋化因子和黏附分子。
之前研究证明,Wnt5a诱导内皮细胞中 COX-2的表达,在人与小鼠的As中均有显著表现,还能促使ApoE-/-小鼠的早期As形成。
杨L[2]等人报告,Wnt5a的沉默减少了COX-2和MCP-1的表达,从而降低了ApoE-/-在小鼠主动脉根部的斑块面积。
外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的研究的开题报告
外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的研究的开题报告题目：外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的研究。
背景：慢性骨髓性白血病（CML）是一种血液系统恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势。
存在着有大量的化疗和放疗的非特异性治疗方法，但难以彻底根治抗药性强。
因此，需要开发更有效、具有较小副作用、能够唤起细胞自我分化和重建免疫机制的治疗方法。
Wnt蛋白家族是一类调控细胞增殖、分化和细胞命运定向的信号分子，具有广泛的生物学作用。
Wnt5a是Wnt蛋白家族的一个成员，已经研究证实其在多种疾病中起重要作用，例如某些肿瘤的进展和免疫调节。
过去几年来，越来越多的研究表明Wnt5a参与了CML的发生和发展。
因此，研究外源性Wnt5a对K562细胞的细胞命运定向和分化作用，不仅有望为CML的治疗提供新思路和新方向，同时也对于该信号途径的关键调控机制和生物学意义有重要的启示作用。
研究目的：本研究旨在探究外源性Wnt5a对K562细胞定向分化的影响，并初步探究其分子机制。
研究方案：1.建立K562细胞株的稳定转染cDNA-Wnt5a，同时建立空组（转染空载体）和野生型对照组。
2.向每个组培养基内添加一定浓度的外源性Wnt5a，通过RT-qPCR和西方印迹等方法比较各组细胞的表型和基因表达，评价定向分化的程度。
3.评价外源性Wnt5a诱导K562细胞的凋亡和增殖能力变化，并进行初步的信号通路和分子机理探究，包括调控和响应层面。
预期结果：1.外源性Wnt5a诱导后，K562细胞的分化程度显著提高，表型发生变化。
2. Wnt5a可能通过多种通路参与K562细胞的分化调控过程，在信号通路中发挥重要作用。
3. 象征分化控制的分子可能会在Wnt5a诱导分化期间发生明显变化。
结论：本研究有望揭示Wnt5a参与CML细胞分化的分子机制，相信对未来抗肿瘤药物的发现和治疗CML的临床诊疗都具有良好的临床应用价值。
肝硬化患者外周血细胞因子IL—1,IL—6和TNFα的分泌水平及意义
肝硬化患者外周血细胞因子IL—1,IL—6和TNFα的分泌水
平及意义
李龙;姚智
【期刊名称】《天津医药》
【年(卷),期】1998(26)7
【摘要】为探讨细胞因子与肝硬化形成的关系，对３２例肝硬化患者外周血单个核细胞分泌的ＩＬ－１，ＩＬ－６和ＴＮＦα活性水平进行了检测。
结果显示，肝硬化患者外周血单个核细胞所产生的ＩＬ－１，ＩＬ－６和ＴＮＦα活性水平较正常对照组显著增高，提示这些细胞因子可能参与了肝硬化的形成过程。
【总页数】3页(P409-411)
【作者】李龙;姚智
【作者单位】天津医科大学病理室;免疫室
【正文语种】中文
【中图分类】R575.2
【相关文献】
1.中药芪龙风湿丸对类风湿关节炎患者外周血细胞因子IL-1,IL-6,TNF-α的影响[J], 高忠恩;陈宇;王建义;华润令;刘秋红
2.脑梗塞及脑出血患者外周血单个核细胞IL—6和TNFa分泌水平及其意义 [J], 李会强;常艳敏
3.RA患者血清中细胞因子IL-6 IL-10 IL-17A TNF-α的表达及临床意义 [J], 王
蕾;倪万茂;曹顺旺;朱利芬;童向民
4.HIV/AIDS患者外周血中4种细胞因子IL-2、IL-4、IL-15和IL-21表达水平及其临床意义研究 [J], 刘琼华;刘志生;郑煜煌;陈霞;贺波;郑力文
5.细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α水平在癫痫患者外周血中的变化及其意义 [J], 李超;郭旗
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Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究
Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究袁媛;李招权;司维柯;潘静;赵宸【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2007(29)21【摘要】目的观察Wnt5a在髓细胞白血病中的表达以及外源性Wnt5a对K562细胞生长的影响。
方法RT-PCR检测5例急性髓细胞白血病、6例慢性髓细胞白血病外周血或骨髓标本及白血病细胞系中Wnt5a的表达。
用AdWnt5a和AdG-FP腺病毒转染CHO细胞制备的条件培养液分别处理K562细胞1～5d,采用细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态等方法观察Wnt5a对K562细胞生长影响。
结果6例慢性髓细胞白血病均未表达Wnt5a,5例急性髓细胞白血病中4例不表达或弱表达,仅1例完全缓解的病人高表达Wnt5a。
K562、HL-60细胞中Wnt5a也不表达,Jurkat细胞高表达。
以GFP条件培养液处理细胞为对照,Wnt5a条件培养液处理K562细胞生长明显受到抑制,但未影响细胞的存活率。
与对照相比细胞形态上出现了分化的表型。
结论Wnt5a在急慢性髓细胞白血病外周血或骨髓中以及髓系白血病细胞株中均表达缺失或降低,并且外源性的Wnt5a可抑制K562细胞生长并有诱导其分化的现象,提示Wnt5a的表达下调可能与髓细胞白血病的发生有关。
【总页数】4页(P2056-2059)【关键词】Wnt5a;白血病;K562细胞;Wnt信号;重组腺病毒【作者】袁媛;李招权;司维柯;潘静;赵宸【作者单位】第三军医大学医学检验系临床血液学教研室【正文语种】中文【中图分类】R394.3;R730.231【相关文献】1.Wnt5a与髓细胞白血病发生相关性研究 [J], 袁媛;李招权;司维柯;潘静;赵宸2.Wnt5a在髓细胞白血病中的表达及对K562细胞生长的影响 [J], 袁媛;李招权;司维柯;潘静;赵宸3.硫氧还蛋白在急性髓系白血病中的表达及其抑制剂体外对急性髓系白血病细胞促凋亡作用的初步研究 [J], 许莲蓉;冯江芳;牛勃;陈显久;常冰梅;胥显民4.髓细胞白血病β-catenin表达及与外源性Wnt5a的作用关系 [J], 李招权;袁媛;司维柯;赵宸;潘静;邓刚;李军;杨宗林5.急性髓细胞白血病树突状细胞诱导T细胞对自体白血病细胞毒性作用的研究 [J], 向兵;李胜富;周静;毛咏秋;羊裔明;刘霆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｃｅｌｌ，ＨＳＣ）活化是肝纤维化发生的
关键环节¨Ｊ，肝脏炎症在启动肝纤维化形成过程中 起核心作用。前期研究发现，Ｗｎｔ５ａ非经典信号分 子在ＨＳＣ活化及肝纤维化模型中表达显著上
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４－５１０１．２０１４．０１．００９
对ＬＸ－２分泌炎症因子的影响：将ＬＸ－２组、ｐＬＶＸ—
ＮＣ，ｓｈＲＮＡ组、ｐＬＶＸ．Ｗｎｔ５ａ．ｓｈＲＮＡ组、ＷｎｔＳａ重组
ａ
ｓｉＲＮＡ ｓｉＲＮＡ
购于Ｓｉｇｍａ公司，包括ＮＣ序列和３对Ｗｎｔ５ａ
蛋白组４组细胞于３７℃，５％ＣＯ：培养箱培养２０ ｈ 后，收集培养上清液，按照人ＩＬ一１ Ｂ、ＩＬ－６ ＥＬＩＳＡ试剂 盒说明操作。 统计学方法：所有试验重复操作３次，试验所得 数据用牙螂表示。利用ＳＰｓＳｌ７．０统计软件进行单 因素方差分析ＡＮＯＶＡ或两个独立样本ｔ检验，Ｐ＜ ０．０５为差异有统计学意义。
ＧＧＡＡ，ＩｆＩ’ＧＡＴＡＣＴｌ３３＂ＹＧ－３’；互补链为ｗｎｔ５ａＳｉＲＮＡ
ＥｃｏＲ Ｉ Ｒ：５’－ＡＡｌＴｒＣＡＡＡＡＡＧＴＡＴＣＡＡＴＩ＇ＣＣＧＡＣＡ一
７ｒＣＧＡＣ ７ｒＣＧＡＧ’ｒＣＧＡ’ｒＧ７ｒＣＧＧＡＡ７兀℃Ａ７ｒＡＣＧ一３’。
将
加，并存在量效关系。在ＬＰＳ浓度为０．０１斗ｇ／ＩＩｌｌ增 加到０．１斗∥ｍｌ时，Ｗｎｔ５ａ表达升高幅度最大；ＬＰＳ 浓度为１恤ｇ／ｍｌ时Ｗｎｔ５ａ的表达量最高；ＬＰＳ各干 预组与对照组之间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５，图
主堡邀生塑堂麴鱼痤堂盘查！Ｑ！兰生！旦筮丝鲞筮！翅垡！也』Ｍｉ！婴！丛！坐坐！趔：』塑！！翌垫！垒：ｙ尘：丝：盟！：！
・３７・
．基础免疫学．
Ｗｎｔ５ａ对人肝星状细胞促炎细胞因子
ＩＬ一１ １３及ＩＬ一６表达的影响
董爽 吴晨明
胡君伟
王芹芹
简易成
何益
钟杰
熊伍军
【摘要】
目的研究Ｗｎｔ５ａ对肝星状细胞（ＨＳＣ）促炎细胞因子ＩＬ一１Ｂ及ＩＬ－６表达的影响，探
１Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果进一步证实了，在ＬＰＳ（１
Ｗｎｔ５ａ
ｐＬＶＸ—ｓｈＲＮＡ质粒与ｐＧＣ—ＬＶ载体、ｐＨｅｌｐｅｒ
１．０载体、ｐＨｅｌｐｅｒ２．０载体在转染试剂Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００的作用下共转２９３Ｔ细胞，观察绿色荧光的表 达，收集病毒上清，进行浓缩和滴度测定。将ＬＸ－２
【关键词】Ｗｎｔ５ａ；肝星状细胞；ＩＬ．１Ｂ；ＩＬ－６；肝纤维化
Ｗｎｔ５ａ
Ｘｉｏｎｇ
ｌａｔｅ ｃｅＨｓ
Ｂ ａｎｄ几＿６ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌ－ Ｓｈａａ昭，Ｗｕ Ｃｈｅｎｍｉｎｇ，肌Ｊｕｎｗｅｉ，Ｗａｎｇ Ｑｉｎｑｉｎ，Ｊｉａｎ Ｙｉｃｈｅｎｇ，Ｈｅ Ｋ，Ｚｈｏｎｇ Ｊｉｅ， Ｗｕｊｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｅａｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｔｏｎｇｆｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ
Ｉ
Ｆ：５’一ＧＡＴ— ＣＣＧＴＡＴＣＡＡ，ＩＴＩ℃ＣＧＡＣＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＧＴＣＧＡＴＧＴＣ．
１．ＬＰＳ及ＴＮＦ－仪对ＬＸ－２细胞中Ｗｎｔ５ａ表达
水平的影响：采用ＬＰＳ（０“ｇ／ｍｌ、０．０１斗ｇ／ｍｌ、０．１ ¨ｇ／ｍｌ、１斗ｇ／ｍ１）干预ＬＸ－２细胞２４ ｈ后，ｑＲＴ—ＰＣＲ 检测表明在ＬＰＳ干预后ＷｎｔＳａ ｍＲＮＡ水平表达增
基金项目：国家自然科学基金（８１２７０５１６） 作者单位：２００１２０上海，同济大学附属东方医院肝脏病科 通信作者：熊伍军，Ｅｍａｉｌ：ｘｉｏｎｇｗｕｊｕｎ＠１２６．ｃｏｒｎ，电话：０２１－
３８８０４５１８
万方数据
生堡丝生堑堂塑筮蕉堂盘查垫！！至！旦筮丝鲞筮！翅堡！也』丛ｉ！翌！丛！望坐！！！！：』坚！！翌！Ｑ！堡：ｙ！！：丝ｚ盟！：！
ｐＬＶＸ．ＮＣ—ｓｈＲＮＡ和Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ包装获得的病
斗ｇ／ｍ１）干预时能够促进Ｗｎｔ５ａ蛋白的表达（图
２Ａ）。 在ＴＮＦ一０【（０斗ｇ／ｍｌ、０．００５¨∥ｍｌ、０．０１斗ｇ／ｍｌ、
毒，选择最佳ＭＯＩ感染ＬＸ－２细胞。分别利用ｑＲＴ－
ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对ＬＸ一２细胞Ｗｎｔ５ａ基因和蛋
（０．００５¨ｇ／ｍｌ、０．０１斗ｇ／ｍｌ、０．０２ ｗｇ／ｍ１）干预２４
ｈ，
ｓｈＲＮＡ组以１８Ｓ ｒＲＮＡ作内参基因，阴性对照
Ｓ；９５℃５ Ｓ，６０℃３４
体系中不加模板ＤＮＡ，采用灭菌双蒸水。放入７５００ ＰＣＲ仪中，反应条件９５℃３０ ４０个循环扩增。
表１各ＰＣＲ引物序列
Ｔａｂｌｅ １．Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ＰＣＲ
万方数据
生堡微生物堂塑丝瘥堂苤壶！Ｑ！璺生！旦筮丝鲞筮！趣ｇ！垫』丛ｉ！！尘型！坐坐！塑！：』塑！！翌垫！！：！尘：丝：№：１
Ｓ，
以ＰＢＳ作为对照组。Ｗｎｔ５ａ重组蛋白（０．１¨ｇ／ｍｌ、 Ｏ．２５斗ｇ／ｍ１）作用ＬＸ－２细胞４８ ｈ。收集各组细胞消
化并抽提ＲＮＡ进行鉴定，记录吸光度Ａ猁：鲫，行琼
脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察ＲＮＡ完整性。提取各 组细胞总蛋白进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ：用裂解液提取细胞总蛋白，ＢＣＡ 法测蛋白浓度并进行蛋白定量。取定量后的蛋白上 样，１０％ＳＤＳ—ＰＡＧＥ（恒压８０
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏ－
ｋｉｎｅｓ ＩＬ—ｌ １３ ａｎｄ ＩＬ－６ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｌｉｖｅｒ
ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈ－
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ５ａ ａｔ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｕ）Ｓ．ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ＴＮＦ．ｄ．ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｈｕｍａｎ
Ｖ ３０ ｍｉｎ，１１０ Ｖ １
ｈ），
并在恒流２００ ｍＡ下１２０ ｍｉｎ将蛋白从ＳＤＳ—ＰＡＧＥ 凝胶转至ＰＶＤＦ膜。转膜结束后，将膜取出，封闭
２
ｈ，分别加入人１：１０００稀释的一抗（ＧＡＰＤＨ，
ｈ
ＥＬＩＳＡ检测Ｗｎｔ５ａ重组蛋白及Ｗｎｔ５ａ
ｓｈＲＮＡ
Ｗｎｔ５ａ），４。Ｃ过夜。次日，孵育辣根酶标记二抗１ 后，采用ＥＣＬ发光试剂进行显影。 Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ慢病毒转染ＬＸ－２：Ｗｎｔ５
７５００）。
配置２０恤ｌ去除基因组ＤＮＡ的逆转录反应体系，置 于ＰＣＲ仪上，３７℃１５
ｍｉｎ，８５℃合成），如表１所示。在 Ｗｎｔ５ａ重组蛋白作用组，以ＧＡＰＤＨ作内参基因；
Ｗｎｔ５ａ
细胞培养和干预：将ＬＸ－２细胞接种于６孔板 中，２４ ｈ后待细胞贴壁完全后，分别加ＬＰＳ（终浓度 分别为Ｏ．０１斗∥Ｔ１１ｌ、Ｏ．１斗∥ｌｌｌｌ、１斗ｇ／ｍ１）和ＴＮＦ—Ｑ
讨Ｗｎｔ５ａ在肝纤维化中的作用及机制。方法采用脂多糖（ＬＰＳ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ．０【）刺激人肝 星状细胞株ＬＸ－２，以ｑＲＴ．ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测Ｗｎｔ５ａ表达水平变化；分别利用Ｗｎｔ５ａ重组蛋白体 外刺激ＬＸ－２和Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ病毒转染ＬＸ－２，以ｑＲＴ－ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ检测促炎细胞因子ＩＬ．１Ｂ、ＩＬ－６的水 平变化。结果ＬＰＳ及ＴＮＦ一仪可显著刺激ＬＸ－２ Ｗｎｔ５ａ表达增加（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｗｎｔ５ａ重组蛋白可促进 ＬＸ－２细胞ＩＬ－ｌ Ｂ、ＩＬ－６表达和分泌（Ｐ＜Ｏ．０５）；Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ转染ＬＸ－２后ＩＬ－ｌ １３、ＩＬ－６表达水平显著降 低（Ｐ＜０．０５），ＥＬＩＳＡ发现Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ转染组培养上清ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－６水平显著低于ｐＬＶＸ—ＮＣ－ｓｈＲＮＡ 组与ＬＸ－２组（Ｐ＜０．０５）。结论Ｗｎｔ５ａ可促进ＨＳＣ促炎细胞因子ＩＬ．１１３、ＩＬ－６的表达而参与肝纤维化 进程。
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｗｎｔ５ａ；Ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ；ＩＬ－１ Ｂ；ＩＬ－６；Ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ
肝纤维化是所有慢性肝病共有的病理过程，以 过度的细胞外基质（ＥＣＭ）沉积为特征，肝星状细胞
（ｈｅｐａｔｉｃ
ｓｔｅｌｌａｔｅ
升旧引，最近研究表明Ｗｎｔ５ａ信号通路参与脂肪肝 炎症Ｍ１及其他疾病的炎症调控ｂ Ｊ，我们推测Ｗｎｔ５ａ 可能促进ＨＳＣ炎症因子表达而参与肝纤维化进程。 本研究拟于体外观察脂多糖（ＬＰＳ）、肿瘤坏死因子 （ＴＮＦ一仅）对人肝星状细胞株ＬＸ－２ Ｗｎｔ５ａ表达的影 响，观察Ｗｎｔ５ａ重组蛋白和Ｗｎｔ５ａ基因沉默对ＬＸ－２ 促炎细胞因子ＩＬ．１Ｂ及ＩＬ－６表达的影响，以探讨 Ｗｎｔ５ａ在肝纤维化发生中的作用及可能机制。
ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＬＸ－２ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ．ｔｉｍｅ ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ．ＬＸ－２ ｃｅｌｌｓ
ｗｅｒｅ
ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｗｎｔ５ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｃａｒｒｙｉｎｇ Ｗｎｔ５ａ ｓｈＲＮＡ．
０．０５）．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｗｎｌ５ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｅｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ・１ Ｂ ａｎｄ ＩＬ－６ （Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔＩｌ ｐＬＶＸ．ＮＣ．ｓｈＲＮＡ ｃｅｉｌｓ ａｎｄ ＬＸ－２ ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－ｌ Ｂ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ＩＬ—ｌ Ｂ ａｎｄ ＩＬ－６ ｉｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ ＬＰＳ ａｎｄ ＴＮＦ．ｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ５ａ ｉｎ ＬＸ－２ ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜ ｑＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ ＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ