人牙龈成纤维细胞原代培养

成纤维细胞原代培养

利用组织块可以成功地培养得到原代培养的人皮肤真皮成纤维细胞。

培养中应该注意以下事项：①一般皮肤主要取白手术过程中切除的部分组织，方法似外科取断层皮片手术操作，但组织一般2—3cm 即可，注意取材时不要用碘酒消毒．此外，不要切取太厚，要尽量去除皮下组织，如果皮下脂肪太厚会影响组织块的贴壁，不易于日后细胞的游出．②尽量去除表皮，如有表皮未被完全剔除，则可能造成表皮细胞竞争生长，最为常见的为角质形成细胞的污染，它可以和成纤维细胞共同生长．虽说在今后的传代培养时可通过细胞纯化方法适当去除，但这种混和生长状态会对后续实验产生影响．所以，一旦发现细胞污染，应立即停止实验，重新培养．③在剪切组织块时要注意保持组织块湿润，可向其表面滴加几滴培养液，要始终保持其成湿润状态，这一点要特别注意而且十分重要．剪切时要掌握好时间，尽量在短时间内完成．④组织块在最初贴壁时不是很牢固，所以开始加液不应太多，以刚刚浸没组织块为易，特别要注意，在最初几天时要减少移动培养瓶次数，避免过多晃动而造成组织块脱壁，最好在开始3 d内不换液．⑤文献报告成纤维细胞培养多在CO 培养箱内进行，培养箱内环境为CO 浓度50 ml／L，湿度95％，培养瓶为开放式．因其湿度，温度及氧气与人体内实际情况较为接近，所以适合成纤维细胞的成长．但开放式培养的同时也增加了细胞培养污染的机率，所以，可以根据自己实验室的条件选用合适的培养方法，如半开放式和充气后密闭瓶口，其效果也十分理想．但同时要密切观察培养液的pH变化，以保持适宜的酸碱度．⑥细胞培养失败的最常见原因是污染，其中以微生物污染最常见，污染一旦明确，多数将无法救治，应尽快弃之，以防止污染扩大，影响其他细胞．因此，应在各个阶段严格遵守无菌操作原则，把好每一关口，尽可能禁止其他污染的物品进入操作环节，以避免造成时间、人力、物力的浪费．。

人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａ】ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｔｈｅｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｇｒｏｗｔｈｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓｊｕｓｔｉｆｉｅｄｔｈｅｉｒｕｓｅｉｎ
ｖｉｔｒｏｆｏｒｆｕｔｕｒｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎＨＰＬＦｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｅｙｔｏｋｉｎｅｓ．
【关键词】牙周膜；成纤维细胞；细胞培养技术
ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓＲＥＮＪｕａｎ，ＬＩＸｉａ，ＳＵＮＫｅ—
ｑｉｎ，ＣＨＥＮＧＪｕｅ，ＷＡＮＧＸｉａｎｇ－ｙｕ．ＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ
研究牙周组织疾病的重要手段。日前关于牙周膜细医科大学口腔医院口外科因正畸而拔除的双尖牙．
胞的原代培养有酶消化法和组织块培养法【１，２１两种，年龄１２～２６岁，所选牙齿均无龋坏、根尖周疾病及牙
本实验采用组织块法培养牙周膜细胞，并对其进行周炎。拔牙前嘱患者用３％双氧水含漱，碘伏消毒术
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔ；Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；ＣｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａ— ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；ＣＯ２培养箱（ＡｓｈｅｖｉｌｌｅＮＣ，ＵＳＡ）；ＧＢ一 Ⅱ

人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定

１材料和方法１．１主要试剂和仪器ＤＭＥＭ培养液（Ｇｉｂｃｏ，美国），胰蛋白酶（Ｇｉｂｃｏ，美国），胎牛血清ＦＢＳ（天津灏洋生物公司），超净工作台（上海力申科学仪器有限公司），ＣＯ。孵箱（Ｈｅｒａｅｕｓ，德国），倒置相差显微镜（广州光学仪器厂），Ｍｒ几（Ｓｉｇｍａ，美国），酶联免疫检测仪（Ｈｕｍａｎ德国）１Ｉ２方法１．２．１原代培养选取本院需行阻生牙拔除的患者．在征得患者同意后在术中切取小块牙龈组织。要求患者没有牙龈增生、炎症及使用过导致牙龈增生的药物。术前将拔牙器械及术区周围消毒灭菌．无菌条件下获取小块牙龈组织（约３ｍｍｘ３ｍｍ）￣１．立即放人装有无血清ＤＭＥＭ培养液的小瓶中．在超净工作台内用含有抗生素ｆ青霉素１００ｕ／ｍｌ，链霉素１００￣ｇ／ｍ１）的ＰＢＳ反复冲洗．用锐利小剪刀尽量去除牙龈上皮，在玻璃皿上剪成１ｎｍｌ３左右的碎块．均匀铺于六孔培养板底面，其上覆盖２０ｘ２０ｍｍ盖玻片。沿盖玻片边缘缓慢加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养液４ｍ１．在饱和湿度、５％ＣＯ：、３７℃标准环境下孵育。倒置显微镜下严密观察细胞生长情况，培养最初３天避免过多观察细胞，待细胞爬满培养板底７０％后进行传代。１．２．２传代培养在倒置显微镜下观察，当从组织块游出的原代细胞爬满培养板底７０％后，揭开覆盖的盖玻片，用２．５ｇ／Ｌ胰蛋白酶＋１Ｌ乙二胺四乙酸混合消化液进行传代。将待传代的细胞培养孔中的旧培养液吸掉，ＰＢＳ冲洗两遍后，加入２ｍｌ消化液，１Ｏ分钟左右，在倒置相差显微镜下观察见胞质回缩．细胞由细长变为圆形，立即加入含１０％ＦＢＳ培养液终止消化．反复吹打孔底细胞，使之脱离，并形成细胞悬液，首次传代比例为１：１，待细胞长满后，以１：４传代。再继续传代并扩传。１．２．３形态观察

人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定

人牙龈成纤维细胞的体外培养及生长曲线测定作者：王文瑜闫福华姚丽艳陈小玲来源：《海峡科学》2007年第08期【摘要】目的：体外培养正常人牙龈成纤维细胞并测定其生长曲线，初步了解该细胞生物学特性。

方法：用改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞，通过MTT比色法研究细胞的生长曲线。

结果：改良组织块法原代培养细胞成活率达80％，培养细胞呈梭形，从第3天呈对数生长，第4－5天进入平台期。

结论：改良组织块法能简便快速地获得人牙龈成纤维细胞，初步了解其生物学特性。

【关键词】人牙龈成纤维细胞组织培养生长曲线人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts, HGFs）是牙龈固有层结缔组织的主要组成细胞，不仅具有活跃的自身更新能力，而且具有合成和降解胶原、弹力纤维、糖蛋白等细胞外基质的功能[1]。

本实验采用改良组织块培养法进行人GFs的原代培养，研究其生物学特性，为进一步研究做好准备。

1 材料和方法1.1主要试剂和仪器DMEM培养液(Gibco，美国)，胰蛋白酶(Gibco，美国)，胎牛血清FBS(天津灏洋生物公司)，超净工作台(上海力申科学仪器有限公司)，CO2孵箱( Heraeus，德国)，倒置相差显微镜(广州光学仪器厂)，MTT (Sigma,美国)，酶联免疫检测仪(Human 德国)1.2方法1.2.1 原代培养选取本院需行阻生牙拔除的患者，在征得患者同意后在术中切取小块牙龈组织。

要求患者没有牙龈增生、炎症及使用过导致牙龈增生的药物。

术前将拔牙器械及术区周围消毒灭菌，无菌条件下获取小块牙龈组织（约3mm×3mm）[2]，立即放入装有无血清DMEM培养液的小瓶中，在超净工作台内用含有抗生素(青霉素100u/ml，链霉素100μg/ml)的PBS反复冲洗，用锐利小剪刀尽量去除牙龈上皮，在玻璃皿上剪成1mm3左右的碎块，均匀铺于六孔培养板底面，其上覆盖20×20mm盖玻片。

沿盖玻片边缘缓慢加入含10％FBS的DMEM培养液4m1，在饱和湿度、5%CO2、37℃标准环境下孵育。

不同烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞毒性和炎性损伤的影响

不同烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞毒性和炎性损伤的影响目的：本实验通过研究4种非贵金属烤瓷合金(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)浸提液对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)活性及不同时间下(1h、2h、3h、6h)细胞产生炎性因子TNF-a水平的影响,比较4种非贵金属烤瓷合金的生物相容性,为临床选择良好的烤瓷修复体提供理论依据。

方法：实验1、牙龈成纤维细胞原代培养。

采用组织块法原代培养人牙龈成纤维细胞,倒置纤维镜下观察细胞形态并对第三代细胞进行免疫学鉴定,采用血球计数法绘制细胞生长曲线。

实验2、MTT 法检测烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞活性的影响。

将4种非贵金属烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别浸透在含体积分数为10% FBS的DMEM液中。

浸提7天后分别作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞48h,空白对照组为含体积分数为10%FBS的DMEM液,MTT比色法测定各组细胞的吸光度值,并计算其相对增殖率。

实验3.ELISA法检测不同时间下烤瓷合金浸提液对牙龈成纤维细胞中炎性因子TNF-a水平的影响。

将4种烤瓷合金试件(镍铬合金、钴铬合金、钛合金、纯钛)分别在含体积分数为10% FBS的DMEM中浸提7天。

用ELISA法测定人牙龈成纤维细胞与烤瓷合金浸提液作用1n、2h、3h、6h 后各组烤瓷合金浸提液中牙龈成纤维细胞分泌的TNF-a的含量。

结果：1、原代培养出牙龈成纤维细胞,镜下观察细胞呈梭形,具有长短不等的数个突起,核为卵圆形并靠近胞质中央,细胞成螺旋状、放射状或栅栏状。

免疫组化鉴定Anti-Vimentin染色阳性,Anti-Cytokeratin染色阴性,为来源于中胚层的成纤维细胞。

2、MTT结果显示,烤瓷合金浸提液与牙龈成纤维细胞作用48h后,各组细胞的相对增殖率从小到大依次为镍铬组77.78%、钛合金组79.01%、钴铬组85.19%和纯钛组98.77%,而且各组烤瓷金属的细胞毒性均为0级或1级。

原代成纤维细胞培养基配方

原代成纤维细胞培养基配方1.引言1.1 概述成纤维细胞是一类常见的细胞，广泛存在于人体各个组织中，包括皮肤、血管、肌肉和内脏等。

在细胞培养技术的发展过程中，原代成纤维细胞培养基的配方变得越来越重要。

原代成纤维细胞培养基是一种提供养分和适宜环境的培养液，可以维持原代成纤维细胞的生长和增殖。

原代成纤维细胞培养基的配方包括多种关键成分，如培养基基础成分、生长因子、附加物等。

不同的组分可以提供细胞所需的营养和信号物质，使细胞能够在体外环境下继续生长和繁殖。

原代成纤维细胞培养基配方的研究对于细胞生物学、组织工程和再生医学等领域具有重要意义。

通过优化培养基的配方，可以提高原代成纤维细胞的增殖速度和存活率，同时改善其功能和特性，为细胞研究和临床应用提供更好的工具和基础。

然而，目前关于原代成纤维细胞培养基的配方研究还比较有限。

不同实验室和研究者之间存在着很大的差异，配方的选择和调整仍然依赖经验和试错。

因此，进一步的研究和探索仍然是十分必要和迫切的。

本文将深入探讨原代成纤维细胞培养基配方的概念和重要性。

我们将详细介绍培养基的组成、各种成分的作用机制，并总结现有研究的进展和局限性。

最后，我们将展望未来的研究方向，希望通过进一步的研究和探索，为原代成纤维细胞培养基的配方优化和应用提供更好的指导和支持。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分的主要目的是为读者提供对整篇文章的摘要和框架。

通过描述文章的组织结构，读者可以更好地理解文章的内容和逻辑顺序。

首先，本文将介绍原代成纤维细胞培养基的概念和重要性。

这一部分将讨论成纤维细胞在生物医学和生命科学研究中的重要作用，以及为什么培养基对于细胞培养的成功和细胞功能的研究是至关重要的。

其次，本文将详细介绍原代成纤维细胞培养基的组成。

这一部分将讨论培养基中各种组分的作用和功能，如营养物质、生长因子、酶和血清的添加等。

读者将了解到培养基中各种组分的重要性和对细胞生长和功能的影响。

人眼Tenon's囊成纤维细胞原代培养的研究

人眼Tenon's囊成纤维细胞原代培养的研究陈珺;李宁;廖荣丰【摘要】目的探讨体外培养原代人眼Tenon's囊成纤维细胞的方法及其生长特性,为抗纤维化研究提供靶细胞模型.方法取翼状胬肉及斜视手术患者的Tenon's囊组织,用组织块法培养原代成纤维细胞.用免疫荧光方法鉴定细胞.对细胞进行传代、冻存和复苏的观察.对复苏后的细胞行MTT法检测其活力并绘制生长曲线.结果入眼Tenon's囊成纤维细胞可以在体外用组织块方法培养出来,呈典型的长梭形.免疫荧光鉴定细胞波形蛋白染色阳性.细胞多次传代后依然生长迅速,3d即可长满瓶底.复苏后细胞2～6d处生长对数期,增殖能力良好.结论人眼Tenon's囊成纤维细胞体外生长状态良好,可以液氮冻存,复苏后细胞活力较强,可以用于抗纤维化增生的基础研究.【期刊名称】《临床眼科杂志》【年(卷),期】2016(024)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】人Tenon囊;成纤维细胞;细胞培养技术【作者】陈珺;李宁;廖荣丰【作者单位】230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科;230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科;230022 合肥,安徽医科大学第一附属医院眼科【正文语种】中文纤维增生性疾病在多个医学领域(包括眼部、皮肤、整形和肿瘤等)中尚属治疗难点，对其发生发展和机制还有待进一步研究[1，2]。

瘢痕化的形成是其共同的表现，瘢痕化的产生主要是与多种细胞因子的产生、细胞及细胞外基质活动有关的生物学过程[3-7]。

其中人眼Tenon's囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)的过度增殖是纤维瘢痕化的主要原因，所以探索简单快速地培养出大量HTFs，观察其生长特性，研究细胞经过数次传代、液氮冻存及复苏后的活力如何，为抗瘢痕化的研究提供理想细胞模型。

一、取材本实验已经安徽医科大学第一附属医院伦理委员会审核批准，人眼Tenon's囊组织均取材于本院斜视及翼状胬肉手术患者，患者均签署知情同意书，无既往眼部手术史，术中打开结膜囊暴露Tenon's组织，取材约5 mm×5 mm大小并放入含DMEM培养液的无菌离心管中，装入无菌冰盒带回实验室。

人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定-最新文档

人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定-最新文档人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定The primary culture and identification of human gingival fibroblastsCUI Juan1, SUN Keqin1, LI Xia1, ZHANG Huaping2(1.Oral Medicine Department of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2.Central Laboratory of Oral Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)[] Objective: T o isolate and culture human gingival fibroblasts (HGFs) in vitro, and provide the experimental condition for further research on the HGFs regulation by cytokines. Methods: HGFs were primary cultured by tissue explant culture technique and identified by morphological analysis and immunocytochemical analysis. Results: The HGFs were cultured and passaged successfully. The cells showed long spindle or star appearance. By immunocytochemical analysis, these cells tested positive to anti-vimentin antibody and negative to anti-keratin antibody, indicating the cells were mesoderm derived fibroblasts. Conclusion: The cells cultured by tissue explant culture technique are consistent with typicalHGFs' characteristics of morphology and immunocytochemical observation. The HGFs are used as cell model in vitro for future research on HGFs regulation by cytokines.人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)是牙龈结缔组织中的主体细胞,在牙周组织的保护和修复中起重要作用[1]。

人牙周膜成纤维细胞原代培养的研究

【ｙｗｒ￣Ｐｍａｙｅ［ｒＫｅｏｄ】ｒｒｔｅｉｕｕ
Ｐｒｄｎａｌａｅｔｉｒｂｓｅｉｏｔｌｉｍｎｂｏｌｔｏｇｆａ
Ｔｉｕｕｕｅｓｅｃｌｒｓｔ
中图分类号：７０１Ｒ８．
文献标识码：Ｂ不增隙也不使用牙挺，拔除后，消毒刮匙刮取拔牙用
１ｎ左右的小块，加人少量培养基，吸管吹打ｍｒ再用
倒置相差显微镜（Ｘ０ＳＦＩ７Ｉ２型，ＹＵＳＯＬＭＰ
ｏＦｒＬＣ１Ｄ）隔水式电热恒温培养箱ｒｌＯ．．Ｔ。
使组织小块分离，送人１ｒｌ养皿中，再５ｎ培加适量培养基，置于３ ℃恒温箱中静止密闭培养４Ｊ￣７８／ａ后，放在倒置显微镜下观察细胞游出情况，～７天后５天
率曲２％。结论０
通过对取材和培养方击的政良，以显著提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率可
【关键词】原代培养
ｇ，膜成纤维细胞－ｔ￣
组织块培养法
Ｈｓａｍｔ｜。
ＰｉｒｕｔｏｕｎｐｒｄｎａｌａｎｉｒｂａｔＨＵ３ｎＨＮｉｍｉｒｍａｙｃｌ￣ｆｈｍａｅｉｏｔｉｍｅｔｆｏｌｏｌｇｂｓｕＣＥＸｎｎＭＡＪａｇｅｇｉｎ￣ｎＳｏａ｛ｇ，￣ｅａｇＵｅｓｙＨｎｚｏ１０６ｔｍｃｏ２．ｊｎｍｚ，ｉ，ｏｇｈｕ３００ｄ，ｆ＇ｔ

全牙酶消化法原代培养人牙周膜成纤维细胞及鉴定

全牙酶消化法原代培养人牙周膜成纤维细胞及鉴定姬晓炜;葛菲;钟良军【摘要】目的探讨一种快速简便、原代培养成功率高、可重复性高的人牙周膜成纤维细胞培养方法.方法将处理后的牙齿整个用酶进行消化,原代培养人牙周膜成纤维细胞,对培养出的细胞进行形态学观察,免疫组化方法鉴定其来源,通过生长曲线研究其生物学特性.结果 8～14 d内可获得实验用成纤维细胞,原代培养成功率为90%,细胞形态呈长梭形.波形丝蛋白染色呈阳性,角蛋白染色呈阴性,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性.结论采用全牙酶消化法可以快速、成功地培养出人牙周膜成纤维细胞,且简单易行,可重复性高.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2011(034)006【总页数】4页(P609-612)【关键词】人牙周膜成纤维细胞;原代培养;免疫组化【作者】姬晓炜;葛菲;钟良军【作者单位】新疆医科大学第一附属医院口腔修复科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院口腔修复科,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学第一附属医院口腔修复科,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R34牙周膜是牙周组织中具有自我更新和修复能力的致密组织，牙周膜细胞是牙周膜内的主要细胞，具有多种功能，在牙周组织的修复及再生中起着重要作用。

早在20世纪八十年代，就有学者报道过体外牙周膜细胞培养的模型，总的说来有2种技术：组织块法和酶消化法[1-3]，这是最经典的牙周膜细胞体外培养的方法。

近年来又有学者对这2种技术进行了不同程度的改良与结合使用，旨在提高牙周膜细胞培养的成功率。

本研究通过改变传统的酶消化方式，探求一种快速、可靠、重复性高的牙周膜成纤维细胞体外培养方法，为牙周组织工程的研究奠定基础。

1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器 DMEM培养基(Gibco，USA)，Ⅰ型胶原酶(Sigma，USA)，胎牛血清(FBS，Hyclone，USA)，青霉素、链霉素(华北制药厂)，鼠抗人角蛋白抗体(Dako，DEN)，鼠抗人波丝蛋白抗体(Dako，DEN)，CO2培养箱(Forma，USA)，超净工作台(苏州净化器厂)，倒置相差显微镜(Olympus，JAP)，流式细胞仪(Epics，USA)。

人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定

ｆ．ｒｌｄｃｎｅａｔｎｆｒｌｏｐｔｌｆｈｎｉｅｉａｎｖｒｔ，ａｙａ０００，ｈｎ；．ｅｔａｏａｏｙ１ａｉｅＤｐｒＯＭｅｉｍｅｔａＨｓｉａｘｄｃＵｉｓｙＴｉｕｎ３０１Ｃｉａ２ＣｎｒＬｂｒｔｒｏＯａｏＳＭｌｅｉｌａ

对其功能的调控作用奠定基础。【关键词】牙龈成纤维细胞；细胞培养；鉴定【图分类号】３９２８中Ｒ２．＋【献标识码】Ａ文【章编号】１７ — ２０２１０（卜０６０文６３７１（００）１ｃ２ — ２
ＴｈｅｐｒｍａｙｃｔｅａｄｉｅｔｆｃｔｏＯｕｍａｇｎｇｖｌｆｂｏａｔｉｒ￣ｕｒｎｄｎｉａｉｎｆｈｉｎｉｉａｒｂｌｓｓｉ
ＣＩｕｎＵｅｉ１Ｉ．ＨＮｕｐｎＵａ；ＳＮＫｑｎＬｚＡＧＨａｉＪ，ｘｆ
ｆＯｒｌＨｏｐｔｆＳａｘｄｃｌＵｎｖｒｔｏａｓｉｌｏｈｎｉＭｅｉａｉｅｉ，ａｓｙｙａ０Ｏｏ１Ｃｈｎ１ｕｎ３０。ｉａ
［ｓｒｃ］ｊｃｉｅＴｏａｅａｄｃｌｒｕｎｉｇｖｌｂｏｌｓＨＧｓｉｉｏａｄｐｏｉｅｔｅｅｐｒｅｔｏ－ＡｂｔａｔＯｂｅｔ：ｏｉｌｎｕｔｅｈｍａｇｉａｆｒｂａｔｖｓｔｕｎｉｓ（Ｆ）ｎｖｔ，ｎｒｖｄｘｅｉｎａｃｎｒｈｍｌ
【要】目的：摘分离培养人牙龈成纤维细胞，为进一步研究细胞因子对牙龈成纤维细胞的调控作用提供实验条件。方

全牙酶消化法原代培养人牙周膜成纤维细胞及鉴定

ｊａ — ｉＩＸｉｏｗｅ，ＧＥＦｉｅ，ＺＨＯＮＧｉｎ－ｕＬａｇｊｎ
（ｐｒｍｅｔｆｓｏｔｌｇＦｉｓＡｆｌａｅｓｔｌＤｅａｔｎｔｍａｏｏｙ，ｒｔｆｉｉｔｄＨｏｐｉａ，ＸｉｊａｇＭｅｃｌＵｎｖｒｉｙ，ｏｎｉｎｄｉａｉｅｓｔ
ｃｌｓｗａｅｏｄｒｗｒｗｔｕｖｖａｕｔｎｇｔｅｂｏｏｃｌｆａｕｒｓｏｆｈｅｌｓｕｓｄｔａｇｏｈｃｒｅｅｌａｉｈｉｌｇｉａｅｔｅＰＬＦ．ＲｅｕｔＷｅｃｕｌｔｉｓｌｓｏｄｏｂａｎｆｂｏａｔｎ８－１ｏｒｅｐｅｉｅｔａｈｕｃｓａｅｏｆｐｒｍａｙｃｌｕｒｆｈＰＬＦｗａ０．Ｔｈｅｃｌｓｉｒｂｌｓｓｉ－ｄｆｘｒｍｎｎｄｔｅｓｃｅｓｒｔｉｒｕｔｅｏ４ｓ９ｅｌｗｅｅｓｎｅｓｐｄａｄｔｓｅｓｔｖｏａｉｄｉｓａａｎｓｉｅｉｈｉｅｎｅａｉｏａｔｂｄｉｓａｉｔｒｐｉｄｌ— ｈａｅｎｅｔｄｐｏｉｉｅｔｎｔｂｏｅｇｉｔｖｍｎｔｎｗｌｇｔｖｅｔｎｉｏｅｇａｎｓｃｔｋｅａｉ．ＴｈｓｈａａｔｒｓｉｓｗｅｅｓｍｉｒｔｈｅｏｙｃｌｈＰＬＦ．ＣｏｌｓｏＴｏｈｅｚｍａｉｙｏｒｔｎｅｅｃｒｃｅｉｔｃｒｉｌｏｔｏｓｆｔｐｉａａｎｃｕｉｎｏｔｎｙｔｃｄｉ

烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E_2及环氧合酶-2的实验研究

烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E_2及环氧合酶-2的实验研究目的观察镍铬合金、钴铬合金、纯钛、金钯合金等四种烤瓷冠基底合金对体外培养的人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2及环氧合酶-2的影响，初步探讨烤瓷冠基底合金影响牙龈组织健康的机制，为临床烤瓷合金的选择提供实验依据。

方法1、在临床上取得健康牙龈组织，采用改良组织块法对人牙龈成纤维细胞进行原代培养，并用免疫荧光染色技术通过波形丝蛋白、角蛋白染色来鉴定细胞来源。

2、将镍铬合金、钴铬合金、纯钛、金钯合金放入DMEM培养液中制备金属浸提液，用金属浸提液培养人牙龈成纤维细胞，以未处理的DMEM培养液为阴性对照，用酶联免疫吸附法测定细胞中前列腺素E2的表达水平，用免疫荧光法观察环氧合酶-2的表达。

结果1、人牙龈成纤维细胞经免疫荧光染色显示，波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性，证实细胞为中胚层来源的成纤维细胞。

2、经酶联免疫吸附试验检测，人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2的水平，在镍铬合金组、钴铬合金组与阴性对照组之间差异有统计学意义（p＜0.05）,在纯钛组、金钯合金组与阴性对照组之间差异无统计学意义（p＞0.05）。

经免疫荧光染色显示，环氧合酶-2在镍铬合金组、钴铬合金组中细胞胞浆绿染，染色深，分布均匀，在纯钛、金钯合金以及阴性对照组中细胞染色浅，分布不均匀。

结论1、体外培养人牙龈成纤维细胞的实验方法中，改良组织块法优于单纯组织块法。

2、镍铬合金、钴铬合金浸提液影响人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2及环氧合酶-2，使其表达增加，有引起牙龈组织炎症的可能，对牙龈组织健康有潜在危害。

3、纯钛、金钯合金浸提液对人牙龈成纤维细胞分泌前列腺素E2及环氧合酶-2的影响不明显，说明在本实验条件下纯钛、金钯合金对牙龈组织健康没有不利影响。

人Tenon's囊成纤维细胞的培养和鉴定

高剂量组，ＮＡ为常规饲料加抗生素纽，ＦＡ为高脂饲料加抗生素组。
表４各组样品的相似性指数（Ｃｓ）值
ｃｓ
常规饲高脂饲常规饲料加高脂饲料加中药低中药高料组料组抗生素组抗生素组剂量组剂量组
定与否。因此，这三组虽然改变了小鼠肠道微生态，但建立的新的肠
Ｔｅｎｏｎ囊组织块进行５～７ｄ的贴壁培养后，观察细有梭形ＨＴＦ长出，再经过１：２的传代增值后，大约３ｄ后培养器皿整个瓶底便会长满，大约５ｄ时间ＨｒＦ可实现汇合状态。ＨｒＦ放置２４ｈ之后（ＴＧＶ — ｆ５ｌ为０ｇ／Ｌ）也没有着色反应，即为阴性。采用浓度分别为２ｅＣ＇Ｌ、５ｇ／Ｌ、１０ｇ／Ｌ、
坛，２０００，１５（２）：３８ — ３９．
化，由图１Ａ聚类分析结果可知常规饲料组聚为一簇；常规饲料加抗生素组聚为一簇。由图１Ｂ聚类分析结果可知，高脂饲料组聚为一簇；高脂饲料加抗生素组聚为一簇。由图ｌｃ聚类分析结果可知，中药高低剂量组之间比较接近。由图１Ｄ聚类分析结果可知，常规饲料组聚为一
虱眶｜臣曩圈同
２０１３年３月第１１卷第９期
・
实验研究・８７
聚为一簇，中药低剂量组与常规饲料组和高脂饲料组都比较接近。
３讨论本研究用聚类分析发现，常规饲料组、中药高剂量组、高脂饲料组、常规饲料加抗生素组、高脂饲料抗生素组小鼠肠道菌群大都各自

人牙龈上皮细胞的原代和传代培养

人牙龈上皮细胞的原代和传代培养人牙龈上皮细胞的原代和传代培养*潘宣1 周健1 曾融生21广州铁路( 集团) 公司广州铁路中心医院口腔科( 510080) ; 2中山大学光华口腔医学院( 广州510060)广东医学 2003 年 11 月第 24 卷第 11 期1 材料与方法111 细胞分离与原代培养拟行阻生牙拔除术患者, 术前检查排除系统性疾病, 无口腔黏膜疾病, 冠周龈组织无炎症表现, 术前征得患者同意, 术中无菌状态下切取颊侧或远中龈组织一块, 约3 mm @ 5 mm, 在手术显微镜下尽可能去除黏膜下结缔组织, 放入盛有无血清DMEM 培养液( 美国Gibco 公司) 的青霉素小瓶, 置于低温保温瓶中尽快带回实验室。

在实验室超净工作台内取出组织块, PBS漂洗3 次, 除去血凝块, 放入含青霉素100 u/ ml、链霉素100 u/ml 的无血清培养液中浸泡漂洗10 min; 含10% 氟康唑无血清DMEM 培养液冲洗3 次, 剪成1 mm @ 1 mm 小块后置于消毒的青霉素小瓶中, 加入1 ml 0125%分离酶( dispase, 美国Gibco 公司) , 密封置于4 e 冰箱, 16 h 后取出。

在实验室超净工作台内取出组织块, 在解剖显微镜下使用两把眼科镊把上皮组织与其下的结缔组织完全分离, 无血清DMEM 培养液轻轻冲洗上皮组织块3 次, 置于消毒的5 ml 离心管, 加入01125%胰酶( 上海生工公司) 1ml, 37 e , 轻轻震荡2 min 后, 加含10%胎牛血清(FCS, 美国HYCLONE 公司) 的培养液2 ml 终止胰酶消化, 吹管轻轻吹打至形成单细胞悬液。

转数800 r/min 离心3 min,弃上液, 加培养液, 倒置显微镜下计数, 调整细胞浓度为1 @ 106/ml, 接种于培养瓶中。

于37 e , 湿度100%, 5%CO2, 95%空气的培养箱( 美国SHEL- LAB 公司) 中培养,每2 天换液一次。

两种树脂基质复合材料对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响

两种树脂基质复合材料对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响目的：研究ENAMIC弹性瓷、Ceramage聚合瓷两种修复材料对人牙龈成纤维细胞黏附、增殖、蛋白合成以及基因表达等生物学行为的影响,了解它们的生物相容性,为种植冠修复材料选择提供实验依据。

方法：1、实验分组将ENAMIC、Ceramage、纯钛片三种材料分为EN、Ce、Ti三组；将含10% FBS的DMEM培养液作为阴性对照组(Nc组)；将含0.64%苯酚、10% FBS的DMEM培养液作为阳性对照组(Pc组)。

Ceramage经堆朔光照固化制作成12x10x1.5mm大小试件30枚。

将ENAMIC 和纯钛片切割、打磨为12x10x1.5mm大小试件各30枚。

90枚试件依次用不同粒度耐水砂纸打磨,使试件最终大小为10x8xlmm。

将EN、Ce、Ti三组试件超声清洗、干燥、灭菌,各组取3枚试件用于观察人牙龈成纤维细胞黏附,剩余27枚试件用于制备浸提液,按照表面积/浸提液体积为3cm2/mL的标准,将试件置于含有10% FBS的DMEM培养基中,(37士1)℃浸提(72士2)h,并用0.22μM的过滤器将浸提液过滤备用。

2、人牙龈成纤维细胞的培养及鉴定通过牙龈组织块培养的方法获取并纯化人牙龈成纤维细胞(human gingival fabroblasts, HGFs);通过免疫细胞化学染色(波形丝蛋白、角蛋白染色)的方法鉴别HGFs的来源,结合取材部位及细胞形态学观察确定细胞是否为HGFs;通过原代细胞传代培养获取实验所需细胞；通过细胞计数的方法,绘制HGFs生长曲线,了解HGFs的增殖规律。

3、EN、Ce、Ti三组试件周围HGFs黏附情况观察EN、Ce、Ti组分别取3枚试件与第4代HGFs共培养3天,显微镜下观察三组试件周围细胞黏附情况,以Nc组培养液培养细胞为对照,比较细胞黏附情况。

4、EN、 Ce、Ti三组材料浸提液对HGFs增殖的影响将HGFs接种在EN、Ti、Ce三组材料浸提液、Pc组及Nc组培养液中,培养1、3、5、7天,通过噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞增殖情况。

人牙龈成纤维细胞系的建立及其生物学特性　

人牙龈成纤维细胞系的建立及其生物学特性
刘斌;吴军正;司徒镇强
【期刊名称】《牙体牙髓牙周病学杂志》
【年(卷),期】1999(9)1
【摘要】目的：建立人牙龈成纤维细胞系并观察其生物学特性。

方法：用组织块法培养细胞，用形态学、免疫组化染色、染色体分析等方法鉴定细胞，通过活细胞观察、生长曲线测定及ＭＴＴ比色实验研究细胞体外生长特性。

结果：２０例原代培养，成活率９０％。

培养细胞呈梭形，胞浆波形丝蛋白阳性，能合成Ｉ型和Ⅲ型胶原及纤维粘连蛋白，具有正常二倍体核型，体外贴壁快，生长迅速，细胞寿命为（２５０．７±１１３．３）ｄ。

结论：本实验建立的细
【总页数】1页(P34)
【作者】刘斌;吴军正;司徒镇强
【作者单位】第四军医大学口腔医学院;第四军医大学口腔医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R329.28
【相关文献】
1.人肺腺癌细胞系Ch-Huang-1的建立和生物学特性研究 [J], 李白翎;钟铿;金磊;袁扬;龚德军;刘晓红;黄盛东
2.敲除 DNA聚合酶β基因的人食管癌 Eca9706细胞系的建立及其细胞生物学特性分析 [J], 冯龙;郭文涛;路武豪;孙萨迦;董子明
3.人成骨肉瘤MG63紫杉醇耐药细胞系建立及生物学特性研究 [J], 吴文欣;李维
4.人宫颈鳞状上皮细胞癌克隆细胞系的研究Ⅱ.HGPRT-突变型细胞系的建立及其生物学特性 [J], 王瑞瑜;田尔明
5.人类黑色素细胞瘤永生化细胞系的建立及生物学特性鉴定 [J], 曾先捷;蔡捷;姚洁民;黄英华;郭春雨;马赫;李小平;邝晓聪
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人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究的开题报告

人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的研究的开题报告一、选题背景近年来，牙周炎、牙周病等口腔疾病的发病率呈不断上升趋势，已成为全球公共卫生领域的一大难题。

在口腔疾病中，牙龈成纤维细胞的作用被越来越重视。

牙龈成纤维细胞是牙龈组织中最常见的细胞，具有多种生物学功能，可促进伤口愈合、抑制炎症反应和促进牙周再生等。

然而，随着人们对牙龈成纤维细胞的研究深入，发现它们还具有间充质干细胞的潜能，可分化为多种细胞类型。

血管内皮细胞是血管组织中的主要细胞类型，具有维持血管功能、维持微循环血流、维持免疫平衡等重要职能。

因此，将牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞，对于口腔组织工程以及心脑血管疾病的治疗等领域具有广阔的应用前景。

二、研究目的本研究旨在通过细胞培养技术，探索人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的可行性及其生物学特性，为口腔组织工程及心脑血管疾病治疗等领域提供技术支持。

三、研究内容和方法1. 实验材料：本研究将采用人牙龈成纤维细胞作为实验材料，细胞系由国内知名生物公司提供。

2. 实验方法（1）牙龈成纤维细胞的培养及验证通过贴壁法将人牙龈成纤维细胞子培养瓶扩增至一定的细胞数目，并从形态学、酶标测定（ALP、COL-I、OST），Flow cytometry等角度验证细胞的纯度及生物学特性。

（2）诱导分化采用NGF、VEGF、EGF等因子对牙龈成纤维细胞进行诱导分化，定期采用形态学、实时荧光定量PCR及免疫荧光等技术对细胞分化特征进行验证和分析，从而得出最佳诱导方案。

（3）生物学特性分析通过细胞增殖、迁移、管腔形成、化学刺激等体外实验及小鼠皮下移植体静止及活物成像免疫组化等研究动物实验，验证诱导分化产物的生物学特性。

四、预期成果通过本研究，预期得出人牙龈成纤维细胞诱导分化为血管内皮样细胞的可行性及其生物学特性。

同时，本研究还有望探索该细胞在口腔组织工程及心脑血管疾病治疗等领域的应用潜力，并为相关领域的研究提供参考依据。