生物化学实验课件-AKTA_prime共41页PPT资料
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《生物化学大实验》课件
了解酶催化反应的原理和酶的结构和功能，以及 如何通过酶的特定测量鉴定酶活性。
分子生物学基本概念
深入探究DNA和RNA的功能及其在遗传学中的 应用，以及基因转录和翻译的分子机制。
蛋白质的结构和功能
探究蛋白质的三级结构，以及它们在细胞代谢过 程中所扮演的角色和功能。
样本制备
1
样本收集
收集到分离它们所需要细胞结构。
2 个人在实验中的收获
分享个人在实验中收获的方面，包括技能和知识的提高以及更广泛的收获。
3 对未来实验的展望
展望未来实验中可能遇到的挑战，提供有效的解决方案。
生物化学大实验
欢迎来到《生物化学大实验》PPT课件。本课程将介绍生物化学和分子生物 学的概念，酶的作用及机制，以及蛋白质的结构和功能。我们还将深入了解 实验过程并分享实验的结果和分析。
知识点介绍
生物化学基本概念
了解生物大分子，如蛋白质、核酸等的组成和结 构，以及它们在生命活动过程中的作用。
酶的作用及机制
细胞破碎液制备
2
将细胞破碎并加入含有缓冲液的溶液中。
3
离心和裂解
使用高速离心机离心裂。
利用生物化学技术从混合物中纯化蛋白 质。
蛋白质检测
Lowry方法
利用此化学方法可测定样品中蛋 白的含量。
Bradford方法
此方法是结合了蛋白质与染料结 合的测量方法。
BCA法
BCA法是利用氢氧化物还原双烷 基四氯化钴为蓝色络合物，来测 定蛋白质的含量。
酶活性测定
酶促反应原理
明白酶对催化反应的影响以及如何准确测定酶的含量。
酶活性的测定方法
学习测量酶活性的几种标准方法，并了解如何选择最佳方法。
酶的特定测量
分子生物学基本概念
深入探究DNA和RNA的功能及其在遗传学中的 应用，以及基因转录和翻译的分子机制。
蛋白质的结构和功能
探究蛋白质的三级结构，以及它们在细胞代谢过 程中所扮演的角色和功能。
样本制备
1
样本收集
收集到分离它们所需要细胞结构。
2 个人在实验中的收获
分享个人在实验中收获的方面，包括技能和知识的提高以及更广泛的收获。
3 对未来实验的展望
展望未来实验中可能遇到的挑战，提供有效的解决方案。
生物化学大实验
欢迎来到《生物化学大实验》PPT课件。本课程将介绍生物化学和分子生物 学的概念，酶的作用及机制，以及蛋白质的结构和功能。我们还将深入了解 实验过程并分享实验的结果和分析。
知识点介绍
生物化学基本概念
了解生物大分子，如蛋白质、核酸等的组成和结 构，以及它们在生命活动过程中的作用。
酶的作用及机制
细胞破碎液制备
2
将细胞破碎并加入含有缓冲液的溶液中。
3
离心和裂解
使用高速离心机离心裂。
利用生物化学技术从混合物中纯化蛋白 质。
蛋白质检测
Lowry方法
利用此化学方法可测定样品中蛋 白的含量。
Bradford方法
此方法是结合了蛋白质与染料结 合的测量方法。
BCA法
BCA法是利用氢氧化物还原双烷 基四氯化钴为蓝色络合物，来测 定蛋白质的含量。
酶活性测定
酶促反应原理
明白酶对催化反应的影响以及如何准确测定酶的含量。
酶活性的测定方法
学习测量酶活性的几种标准方法，并了解如何选择最佳方法。
酶的特定测量
AKTA_prime
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31
32
输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
浏览曲线
X、Y轴
积分表
37
五、入门指南
-准备 (缓冲液 0.45u, 超声脱气75功率10－15min , 样品 0.45u, 柱子) -先打开 AKTA ，再开电脑，打开软件Prime View -水冲系统 (抽气) -连接柱子 -水冲柱子至少2倍柱子体积 -缓冲液A冲洗，打开紫外灯平衡柱子5倍柱子体积或紫外检测线稳定 -样品打入上样环
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡
-染菌缓冲液必须倒掉；
-保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、 有机溶剂；
-清洗管路时关闭 UV
-高压报警检查压力限制
12
5、AKTA Prime 泵
自动清洗 如何手动抽气
13
6.七通进样阀原理
三种工作状态： 1) LOAD 2) INJECT 3) WASTE
14
1）LOAD
柱子
泵
注射器
缓冲液
样品环
缓冲液：泵－7－1－柱子 样 品：注射器3－2－6－4－
15
2）INJECT
柱子 泵 注射器
样品环
样品：泵－7－6－2－1－
收集数量（每管）
限压（保护层析柱）MPa 缓冲阀位1-8 样品阀位waste、load、inject 开始
生物化学试验基础PPT课件
本次实验必须使用的仪器设备，在了解仪器性能和操作规程之前，不得冒然使用，更不可擅自拆卸或将部件带出室外。
（3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为 学习设计或验证一个试(实)验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
以λ~A作图 最常用的目视比色法是标准系列法:
5 实验须知
实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明 确实验目标，能简述实验内容及主要的操作 步骤。
实验过程中，应根据实验指导及老师的要求， 认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造 实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验 做错应要求重做，反对弄虚作假。
实验结束后，要认真书写实验报告，及时交 老师批阅。
当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光物质浓度液层厚度乘积成正比即物质浓度液层厚度乘积成正比即式中比例常数式中比例常数kk吸光系数吸光系数与吸光物质的本与吸光物质的本性入射光波长性入射光波长单色光纯度单色光纯度及温度等因素有及温度等因素有c为吸光物质浓度为吸光物质浓度ll为透光液层厚度
•测定方法 吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
值日生要负责打扫实验室的卫生，整理实验室。 去离子水不是没有离子的水，而是经过离子交换得到的没有干扰离子，PH值中性的水，干扰离子一般指钙、镁、碳酸根、硫酸根等， 但是去离子水一般含有的有机物质是不能去除的。
通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸 收曲线。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。
图示
吸收曲线的讨论：
（1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。
（3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为 学习设计或验证一个试(实)验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
以λ~A作图 最常用的目视比色法是标准系列法:
5 实验须知
实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明 确实验目标，能简述实验内容及主要的操作 步骤。
实验过程中，应根据实验指导及老师的要求， 认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造 实验数据，提倡实事求是的科学态度，实验 做错应要求重做，反对弄虚作假。
实验结束后，要认真书写实验报告，及时交 老师批阅。
当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光吸光物质的稀溶液时溶液的吸光度与吸光物质浓度液层厚度乘积成正比即物质浓度液层厚度乘积成正比即式中比例常数式中比例常数kk吸光系数吸光系数与吸光物质的本与吸光物质的本性入射光波长性入射光波长单色光纯度单色光纯度及温度等因素有及温度等因素有c为吸光物质浓度为吸光物质浓度ll为透光液层厚度
•测定方法 吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
值日生要负责打扫实验室的卫生，整理实验室。 去离子水不是没有离子的水，而是经过离子交换得到的没有干扰离子，PH值中性的水，干扰离子一般指钙、镁、碳酸根、硫酸根等， 但是去离子水一般含有的有机物质是不能去除的。
通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸 收曲线。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。
图示
吸收曲线的讨论：
（1）一种吸光物质对不同波长的光吸收程度不同。
《生物化学实验指导》课件
实验操作问题
实验设备使用不当，导致设备损 坏或实验失败。
解决方法
加强实验材料管理，确保学生正 确使用和管理实验材料。
实验操作问题
实验材料管理不善，导致实验结 果受影响。
解决方法
提供设备使用说明和注意事项， 确保学生正确使用设备。
实验结果异常分析与处理
异常分析
01 实验结果与预期不符，可能存
在误差或错误。
01
02
03
实验技术原理
介绍实验所涉及的基本原 理，包括生物学、化学和 物理学原理等。
实验步骤
详细描述实验的操作流程 ，包括实验前的准备、实 验操作步骤、实验后处理 等。
注意事项
提醒实验中需要注意的事 项，以确保实验的准确性 和安全性。
实验数据分析与处理
数据收集
说明如何收集实验数据， 包括仪器的使用和数据的 记录等。
按照指导老师的安排进行实验 操作，不得擅自更改实验步骤
或使用未经批准的试剂
爱护实验室设备和器材，保持 实验室卫生整洁
02
生物化学实验基本操作
实验器材介绍与使用
实验器材
介绍生物化学实验中常用的实验 器材，如烧杯、量筒、滴管、离 心管等，并说明其用途和特点。
使用方法
详细介绍各种实验器材的使用方 法和注意事项，确保学生正确使 用，避免因操作不当造成实验误 差或安全事故。
04
生物化学实验案例分析
案例一：DNA提取与鉴定
总结词
基础实验，了解DNA提取与鉴定的基本原理和操作步骤。
详细描述
本案例介绍了DNA提取与鉴定的基本原理、实验材料、操作步骤、注意事项和 实验结果分析，旨在让学生了解DNA提取与鉴定的基本过程，掌握相关的实验 技能。
《生物化学实验》PPT课件
完整版课件ppt
24
四.几种常见电泳的比较
类型
优点
缺点
纸电泳
设备操作简单
分辨率差，电渗现 象
醋酸纤维薄膜电 设备操作简单，样品
泳
用量少
分辨率差
琼脂糖凝胶电泳 快速，分辨率高
电渗现象严重
聚丙烯酰胺凝胶 电泳
可调节凝胶孔径，样 品用量少分辨率高，
无电渗现象
高浓度凝胶难剥离
完整版课件ppt
25
五.聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳原理
A.凝胶层的不连续性
浓缩胶T=2.8％ C=20%；分离胶T=7％ C=2.5%
B.缓冲液成分的不连续性：
凝胶缓冲液Tris-HCl,含Cl－，电极缓冲液Tris-Gly,Gly
－
C.pH的不连续性：
浓缩胶pH6.7,分离胶pH8.9，电极缓冲液pH8.3
D.电位梯度的不连续性
完整版课件ppt
30
五. 盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 （2）盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应
样品的浓缩效应
电荷效应
分子筛效应
完整版课件ppt
31
A. 样品的浓缩效应
缓冲液成分及pH的不连续性 浓缩胶pH6.7 缓冲液 浓缩胶Tris-HCl, 电极缓冲液Tris-Gly
解离度 ：Cl> 蛋> Gly mcl cl>m蛋 蛋>m Gly Gly 凝胶中Cl－为快离子， Gly－为慢离子，
蛋白质从“－”极向“＋”极移 动，从浓缩胶进入分离胶，速 度变慢，堆积浓缩。
完整版课件ppt
缓冲 液
浓缩胶 分离胶
40
B.电荷效应
蛋白质样品进入分离胶后 pH增大(pH 8.9)，Gly－解离度增 大，不存在快、慢离子之分， 蛋白质样品在均一电场强度和 pH条件下泳动。
《生物化学》全套PPT课件
目录•生物化学概述•蛋白质结构与功能•酶学原理与应用•糖代谢途径与调控机制•脂类代谢途径与调控机制•基因表达调控与疾病关系生物化学概述生物化学定义与研究对象生物化学定义研究生物体内化学分子与化学反应的科学，探讨生命现象的化学本质。
研究对象生物大分子（蛋白质、核酸、多糖等）及其相互作用；生物小分子（氨基酸、脂肪酸、糖类等）及其代谢；生物体内能量转化与传递等。
生物化学发展历史及现状发展历史从19世纪末到20世纪初，生物化学逐渐从生理学和有机化学中独立出来，成为一门独立的学科。
随着科学技术的不断发展，生物化学的研究领域和深度不断拓展。
现状生物化学已经成为生命科学领域的重要分支，与分子生物学、遗传学、细胞生物学等学科相互渗透，共同揭示生命的奥秘。
同时，生物化学在医学、农业、工业等领域的应用也越来越广泛。
ABDC疾病诊断生物化学方法可用于检测血液中特定生物分子的含量或结构异常，从而辅助疾病的诊断，如血糖、血脂检测等。
药物研发通过对生物体内代谢途径和药物作用机制的研究，有助于设计和开发新的药物，提高治疗效果和降低副作用。
营养与健康生物化学在营养学领域的应用有助于了解食物中营养成分的代谢和利用，为合理膳食和营养补充提供科学依据。
遗传性疾病研究生物化学方法可用于研究遗传性疾病的发病机制和治疗方法，如基因疗法和干细胞疗法等。
生物化学在医学领域重要性蛋白质结构与功能0102 03氨基酸种类20种常见氨基酸，包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸等。
氨基酸性质具有氨基和羧基的有机酸，呈两性，等电点下溶解度最低。
氨基酸分类根据侧链R基团的性质可分为脂肪族、芳香族、杂环族等。
氨基酸种类、性质及分类通过逐步去除N-末端氨基酸并测定其种类，推断蛋白质序列。
Edman 降解法质谱法cDNA 测序法利用蛋白质分子在电场或磁场中的运动规律进行测定。
通过测定编码蛋白质的cDNA 序列，间接推断蛋白质序列。
030201蛋白质一级结构测定方法主要依靠氢键维持的局部空间结构，包括α-螺旋、β-折叠等。
蛋白质纯化系统 AKTAprime
蛋白质纯化系统 AKTAprime蛋白质纯化系统
仪器描述
仪器说明
仪器标签
为实验室规模的蛋白质纯化而设计。和传统的手动操作比较，AKTAprime提供高速，高载量和组份收集的优点。 各式预装柱加上内置的应用模板，AKTAprime只需您按一个 键就可以进行纯化。
主要特点： * 容易使用 - 针对一般纯化的应用编程模板 - 所有层析技术的方法模板
file:///D|/webtopdf/蛋白质纯化系统 AKTAprime蛋白质纯化系统.htm[2010-1-8 22:46:38]
* 随时可用 - 所有必要部件已经整合在单一的系统中 - 精密设计使系统可被轻易移动到任何地方
* 经济和灵活 - 使用高质量的平台零件使开发成本大幅减低 - 可以用於任何纯化步骤中
技术参数： 手动控制，电脑数据采集和处理
AKபைடு நூலகம்Aprime 流速 0.1-50 ml/min 压力 0-2 MPa(292psi)
8通道程控缓冲液切换阀 UV 检测 254,280 nm 电导检测 1 μS/cm - 999.9 mS/cm 压力监控 电动混合 程控进样阀 收集器 - 95管 18 mm 试管自动收集
© 2005-2009 必和国际贸易(香港)有限公司 版权所有，并保留所有权利。 上海市长乐路989号2006室，邮编：200031，电话：021-60896520,13661956095，, info@
仪器描述
仪器说明
仪器标签
为实验室规模的蛋白质纯化而设计。和传统的手动操作比较，AKTAprime提供高速，高载量和组份收集的优点。 各式预装柱加上内置的应用模板，AKTAprime只需您按一个 键就可以进行纯化。
主要特点： * 容易使用 - 针对一般纯化的应用编程模板 - 所有层析技术的方法模板
file:///D|/webtopdf/蛋白质纯化系统 AKTAprime蛋白质纯化系统.htm[2010-1-8 22:46:38]
* 随时可用 - 所有必要部件已经整合在单一的系统中 - 精密设计使系统可被轻易移动到任何地方
* 经济和灵活 - 使用高质量的平台零件使开发成本大幅减低 - 可以用於任何纯化步骤中
技术参数： 手动控制，电脑数据采集和处理
AKபைடு நூலகம்Aprime 流速 0.1-50 ml/min 压力 0-2 MPa(292psi)
8通道程控缓冲液切换阀 UV 检测 254,280 nm 电导检测 1 μS/cm - 999.9 mS/cm 压力监控 电动混合 程控进样阀 收集器 - 95管 18 mm 试管自动收集
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生物化学实验课件-AKTA_prime
柱子 泵
注射器
样品环
缓冲液：泵－7－5－
17
三、面板操作按钮
18
1、进入菜单
按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。 按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单；
19
2、快捷键
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行 梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前 浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一 下，继续梯度运行 按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再 按一下，继续
1. 凝胶柱，凝胶颗粒
2.加样
3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 4.大分子蛋白首先流出，
分子扩散。
根据分子量大小依次流出 。
4
2.离子交换层析 (IEX)
平衡
加样和冲洗
洗脱
阴离子 交换柱
再生
电导率
根据电荷差异进行分离
5
二、AKTA Prime 配置
AKTA Prime + Prime View
AKTA Prime + Recorder
运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令
27
28
Prime View——数据采集
选择浏览曲线及 设定曲线颜色
设定X，Y轴的 坐标范围
29
2）Prime View——数据处理
30
31
32
输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制
40
38
延迟体积
39
六、AKTA PRIME PLUS日常保养
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、
注射器
样品环
缓冲液：泵－7－5－
17
三、面板操作按钮
18
1、进入菜单
按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。 按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单；
19
2、快捷键
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行 梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前 浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一 下，继续梯度运行 按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再 按一下，继续
1. 凝胶柱，凝胶颗粒
2.加样
3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 4.大分子蛋白首先流出，
分子扩散。
根据分子量大小依次流出 。
4
2.离子交换层析 (IEX)
平衡
加样和冲洗
洗脱
阴离子 交换柱
再生
电导率
根据电荷差异进行分离
5
二、AKTA Prime 配置
AKTA Prime + Prime View
AKTA Prime + Recorder
运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令
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28
Prime View——数据采集
选择浏览曲线及 设定曲线颜色
设定X，Y轴的 坐标范围
29
2）Prime View——数据处理
30
31
32
输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制
40
38
延迟体积
39
六、AKTA PRIME PLUS日常保养
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、
AKTA操作流程 PPT
出口阀
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集 峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘 架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各 种试管以及 24、48 和 96 孔深孔 板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真 实的梯度 电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度 引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正 限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外流 动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口， 可用于流穿组分的收集 多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出 口可以进行大体积组分的收集
New 创建新用户
给定权限
数据注销及激活
手动备份 系统备份
备份还原
System control
Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域 限定峰参数
在某种高浓度的盐的存在下，它们可能由于增强的疏水相互作用而 沉淀下来
离子强度的改变，有机溶剂的存在，பைடு நூலகம்度和pH（尤其在等电点， 没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集 峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘 架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各 种试管以及 24、48 和 96 孔深孔 板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真 实的梯度 电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度 引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正 限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外流 动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口， 可用于流穿组分的收集 多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出 口可以进行大体积组分的收集
New 创建新用户
给定权限
数据注销及激活
手动备份 系统备份
备份还原
System control
Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域 限定峰参数
在某种高浓度的盐的存在下，它们可能由于增强的疏水相互作用而 沉淀下来
离子强度的改变，有机溶剂的存在，பைடு நூலகம்度和pH（尤其在等电点， 没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
《生物化学实验教案》课件
《生物化学实验教案》PPT课件第一章：生物化学实验基本原理与技能1.1 生物化学实验的目的与意义解释生物化学实验在生物学和医学研究中的重要性强调实验对于理论知识的巩固和应用的作用1.2 生物化学实验的基本原则介绍实验设计的科学性和合理性强调实验操作的准确性和可重复性1.3 生物化学实验的基本技能介绍实验室安全操作规程演示实验室常用仪器的使用方法第二章：生物化学实验数据处理与分析2.1 实验数据的记录与处理讲解实验数据的记录方法和注意事项介绍数据处理的基本原则和方法2.2 实验数据的分析与解读讲解实验结果的统计分析方法强调数据分析在实验结果解释中的重要性第三章：生物化学实验操作技巧与实例3.1 生物化学实验操作技巧讲解实验操作中的注意事项和技巧强调实验操作的精确性和规范性3.2 生物化学实验实例解析介绍经典生物化学实验案例分析实验操作步骤和结果的关联性第四章：生物化学实验常用仪器与设备4.1 生物化学实验常用仪器介绍实验室常用仪器的作用和操作方法强调仪器使用中的注意事项和维护保养4.2 生物化学实验常用设备讲解实验室常用设备的结构与功能强调设备操作的安全性和正确性第五章：生物化学实验安全与环保5.1 生物化学实验安全知识讲解实验室安全的基本原则和措施强调实验操作中的安全意识和风险控制5.2 生物化学实验环保知识介绍实验室废物的分类和处理方法强调实验室环保的重要性和责任意识第六章：蛋白质实验6.1 蛋白质的提取与分离介绍蛋白质提取和分离的基本原理演示蛋白质提取和分离的实验步骤6.2 蛋白质的纯化与鉴定讲解蛋白质纯化方法和技术介绍蛋白质鉴定的方法和原理第七章：酶实验7.1 酶的提取与纯化讲解酶提取和纯化的方法和原理强调酶活性检测的重要性7.2 酶活性的测定与分析介绍酶活性测定的方法和原理讲解酶活性数据分析的方法和技巧第八章：碳水化合物实验8.1 碳水化合物的提取与分析介绍碳水化合物提取和分析的方法强调碳水化合物在生物体中的重要性8.2 碳水化合物的代谢实验讲解碳水化合物代谢的实验方法和原理介绍碳水化合物代谢产物的检测方法第九章：脂质实验9.1 脂质的提取与分析讲解脂质提取和分析的方法强调脂质在生物体中的功能和作用9.2 脂质代谢实验介绍脂质代谢的实验方法和原理讲解脂质代谢产物的检测方法第十章：核酸实验10.1 核酸的提取与纯化介绍核酸提取和纯化的方法和原理强调核酸在生物体中的重要性10.2 核酸的检测与分析讲解核酸检测和分析的方法和原理介绍核酸序列测定和分析的方法重点和难点解析1. 生物化学实验基本原理与技能：理解实验设计的原则和实验操作的准确性是进行生物化学实验的基础。
AKTA-Primer-层析系统在天然产物分离中-实验PPT课件
17
.
AKTA Primer
PrimeView——软件系统-数据采集
18
.
运行曲线图谱（Curve）：
记录系统采集到的全部数据， 系统开始运行后，自动开始记 录，结束后，自动保存。
运行日志（Logbook）：
记录系统收到的所有指令
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AKTA Primer
20
.
AKTA Primer
PrimeView——数据采集
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面板操作按钮及简要操作命令
10
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面板操作按钮
11
.
面板操作按钮
按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单； 按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。
12
.
面板操作按钮
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行
梯度运行过程中，按此键，系统将保 持当前浓度运行，而流速和分步收集 继续，再按一下，继续梯度运行
25
.
4
.
AKTA Primer
AKTA Primer 系统组成
AKTA Prime + PrimeView
5
.
AKTA Primer
AKTA Prime 主机
组分收集器
控制面板
系统泵
6
.
AKTA Primer
AKTA Prime 主机
7
.
AKTA Primer
AKTA Prime 流程图
8
.
AKTA Prime 流程图
选择浏览曲线及 设定曲线颜色
设定X，Y轴的 坐标范围
21
.
实验的基本内容
实验题目——蛋白质脱盐
实验目的 1.了解层系技术的理念，基本操作和应用 2.掌握分子筛层析的原理，了解其用途； 3.熟悉AKTA Prime 的操作。 实验原理
《生物化学技术实验》PPT课件
完整版课件ppt
33
完整版课件ppt
34
■ 亲和层析作用机理：
(1) X
B A
Sample
(2)
Washing
A
B
配体
X
完整版课件ppt
(3)
Elution
A
B
35
亲和吸附剂的制备
• 分离纯化一定数量的游离配体 • 载体活化 • 配体与载体偶联
完整版课件ppt
36
完整版课件ppt
37
■ 亲和层析图谱：
酯键＞酰胺键＞肽键
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49
胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶) 和弹性蛋白酶三种酶在理化性质和结构 上均十分接近，利用一般常用的提取分 离方法，很难将它们之间彼此彻底分开 。为了获得高纯度的胰蛋白酶制品，采 用亲和层折技术进一步纯化后，可达到 十分满意的效果。
完整版课件ppt
50
胰蛋白酶的天然抑制剂 -------鸡卵类粘蛋白(CHOM)
生物化学技术实验部分
(2010版)
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1
生物化学研究的核心任务： 阐明生命现象的分子机理。
完整版课件ppt
2
生物大分子物质制备的基本过程：
• 确定测定方法 • 材料的选择与处理 • 抽提 • 浓缩 • 纯化 • 有效成分纯度和性质的分析
完整版课件ppt
3
蛋白质的制备：
前处理
浓缩、粗分离
完整版课件ppt
59
胰蛋白酶的BAEE单位定义为： 在下列实验条件下，引起每分钟光吸收值 A253nm增加0.001的酶量。 • 底物（BAEE）浓度为1mmol/L • 反应液为0.05mol/L Tris-HCl,pH7.6 • 光程1cm • 反应温度25℃ • 波长253nm • OD值递增0.001/min
AKTA操作流程 ppt课件
利用固定载体上偶联的疏水性配基与流动相中的疏水分子发生 的可逆结合而进行分离的层析技术
疏水作用（hydrophobic interaction) 非极性分子进入水中，有聚集在一起形成
最小疏水面积的趋势，保持这些非极性分子聚 集再一起的作用成为疏水作用
疏水作用示意图
水的溶解性取决于它能够与偶极子作用并能形成氢键
检测吸收峰 190-700nm 紫外/可见光
紫外检测器
苯环共轭双键系统,在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱带, 最大光吸收分别为279、278、和259nm
肽键的强吸收峰在214nm处,214nm可测定多肽. 280nm可测定含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨 基酸的蛋白质分子. 铁蛋白是一种多聚体储铁蛋白，由于在分子中心存在大量 的铁离子，它在 340 nm显示出比其他蛋白更强的吸光值
均有空气传感器，有气泡 会自动关闭
1A 管 (从In B进泵后出来）
In A: A1 A2汇合
1B管（从In B进泵后出来）
In B：B1 B2汇合
可提供的最 大流速为 150 ml/min 的最大装柱流速。系统压力检测器连 接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速 以避免达到设定的压力上限。
可对峰命名
AKTA操作流程
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
AKTA操作流程
汇报人 部门
抗体部 2019年5月30日
疏水作用（hydrophobic interaction) 非极性分子进入水中，有聚集在一起形成
最小疏水面积的趋势，保持这些非极性分子聚 集再一起的作用成为疏水作用
疏水作用示意图
水的溶解性取决于它能够与偶极子作用并能形成氢键
检测吸收峰 190-700nm 紫外/可见光
紫外检测器
苯环共轭双键系统,在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱带, 最大光吸收分别为279、278、和259nm
肽键的强吸收峰在214nm处,214nm可测定多肽. 280nm可测定含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨 基酸的蛋白质分子. 铁蛋白是一种多聚体储铁蛋白，由于在分子中心存在大量 的铁离子，它在 340 nm显示出比其他蛋白更强的吸光值
均有空气传感器，有气泡 会自动关闭
1A 管 (从In B进泵后出来）
In A: A1 A2汇合
1B管（从In B进泵后出来）
In B：B1 B2汇合
可提供的最 大流速为 150 ml/min 的最大装柱流速。系统压力检测器连 接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速 以避免达到设定的压力上限。
可对峰命名
AKTA操作流程
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
AKTA操作流程
汇报人 部门
抗体部 2019年5月30日
AKTA--实验室层析柱装柱技术介绍PPT演示课件
ml 36.14 118.54
Area
mAU*ml 50.6325
0.7791
Area/Peak area
(volume) % 98.48 1.52
Height
mAU 16.974
0.131
4
Column packing
N/m= 5.54 (Ve/Vh)2100/L As = b/a
5
Column packing
Column packing
• 好的柱效是层析成功的关键 • 不同种类的凝胶、不同的层析柱有不同的装柱方法 • 柱效测定的方法 • 层析柱的维护
2
Column packing
mAU
Sr4FF01:1_rabies vaccine
1500
1000
500
Rabies vaccine Sepharose 4 Fast Flow 5% column vol sample
13
Column packing
➢ Sepharcyl S HR
Flow rates given below. Pack the gel in STEP 1 for 2 hours or until the gel has reached a constant height, then increase the flow rate to the value listed for STEP 2 and pack for 60 minutes.
the ➢ column was not properly equilibrated. ➢ To check that the bed is stable, run the column at 70% packing ➢ pressure for 20 hours and test it again (preferably three test runs). ➢ Note that pressure spikes may cause poor packing (cracking). If ➢ this happens, an air trap and a pressure relief valve are needed ➢ between the pump and the column. The pressure relief valve ➢ should be placed between the air trap and column.
Area
mAU*ml 50.6325
0.7791
Area/Peak area
(volume) % 98.48 1.52
Height
mAU 16.974
0.131
4
Column packing
N/m= 5.54 (Ve/Vh)2100/L As = b/a
5
Column packing
Column packing
• 好的柱效是层析成功的关键 • 不同种类的凝胶、不同的层析柱有不同的装柱方法 • 柱效测定的方法 • 层析柱的维护
2
Column packing
mAU
Sr4FF01:1_rabies vaccine
1500
1000
500
Rabies vaccine Sepharose 4 Fast Flow 5% column vol sample
13
Column packing
➢ Sepharcyl S HR
Flow rates given below. Pack the gel in STEP 1 for 2 hours or until the gel has reached a constant height, then increase the flow rate to the value listed for STEP 2 and pack for 60 minutes.
the ➢ column was not properly equilibrated. ➢ To check that the bed is stable, run the column at 70% packing ➢ pressure for 20 hours and test it again (preferably three test runs). ➢ Note that pressure spikes may cause poor packing (cracking). If ➢ this happens, an air trap and a pressure relief valve are needed ➢ between the pump and the column. The pressure relief valve ➢ should be placed between the air trap and column.
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自动清洗 如何手动抽气
13
6.七通进样阀原理
三种工作状态： 1) LOAD 2) INJECT 3) WASTE
14
1）LOAD
柱子 注射器
泵 缓冲液
样品环
缓冲液：泵－7－1－柱子 样 品：注射器3－2－6－4－
15
2）INJECT
柱子 泵
注射器
样品环
样品：泵－7－6－2－1－
16
3）WASTE
有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制
40
END
23
四、AKTA Prime 数据采集——Prime View
Recorder记录仪 Prime View 软件 电脑+软件（含数据线）
+
24
1、Prime View
数据采集 数据处理
25
1）Prime View——数据采集
26
运行曲线图谱（Curve）： 记录系统采集到的全部数据， 系统开始运行后，自动开始记 录，结束后，自动保存。
AKTA PRIME PLUS 系统
目录
一、色谱层析原理 二、AKTA Prime 硬件配置 三、面板操作按钮 四、AKTA Prime 数据采集——Prime View 五、入门指南 六、AKTA PRIME PLUS日常保养
2
一、色谱层析原理
凝胶过滤层析 离子交换层析
亲和层析
疏水层析
3
1.凝胶过滤
8
2、AKTA Prime 主要硬件组成
梯压度力混感泵合应头器
9
2、AKTA Prime 主要硬件组成
收集切换阀 收集出口
柱夹槽口 上样阀 层析柱
检测流动池： 紫外、电导
10
3、AKTA Prime 流程图
11
4、AKTA Prime 阀梯度
通过梯度阀交替泵 A/B液实现梯度
12
5、AKTA Prime 泵
运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令
27
28
Prime View——数据采集
选择浏览曲线及 设定曲线颜色
设定X，Y轴的 坐标范围
29
2）Prime View——数据处理
30
31
32
输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
20
3、操作命令简介
主菜单
预编好的方法模板 运行保存的方法 手动运行
编辑方法 将方法拷入电脑或拷回 设定系统参数
检查系统状态
21
3、操作命令简介
子菜单： 以Manual Run为例
22
设置横坐标单位是ml或min 设置B起始浓度%B 梯度（长度ml/目标浓度%B） 流速ml/min 收集单位ml、min、drop 收集数量（每管） 限压（保护层析柱）MPa 缓冲阀位1-8 样品阀位waste、load、inject 开始
•Flow rate range 0.1–50 ml/min in steps of 0.1 ml/min •Operating pressure range 0–1.0 MPa
6
1、AKTA Prime 主机
组分收集器 控制面板 系统泵
7
2、AKTA Prime 主要硬件组成
三通梯度配比阀 缓冲液阀
浏览曲线 X、5u, 超声脱气75功率10－15min , 样品 0.45u, 柱子) -先打开 AKTA ，再开电脑，打开软件Prime View -水冲系统 (抽气) -连接柱子 -水冲柱子至少2倍柱子体积 -缓冲液A冲洗，打开紫外灯平衡柱子5倍柱子体积或紫外检测线稳定 -样品打入上样环 -上样阀切换到Inject 模式将样品打入柱子 -峰收集 -结束，重命名并转移结果，用Prime View evaluation编辑结果 -水冲洗2倍体积置换缓冲液 -20% EtOH 冲洗柱子5倍体积，保存柱子。 -关闭 AKTA和Prime View
38
延迟体积
39
六、AKTA PRIME PLUS日常保养
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、
1. 凝胶柱，凝胶颗粒
2.加样
3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 4.大分子蛋白首先流出，
分子扩散。
根据分子量大小依次流出 。
4
2.离子交换层析 (IEX)
平衡
加样和冲洗
洗脱
阴离子 交换柱
再生
电导率
根据电荷差异进行分离
5
二、AKTA Prime 配置
AKTA Prime + Prime View
AKTA Prime + Recorder
柱子 泵
注射器
样品环
缓冲液：泵－7－5－
17
三、面板操作按钮
18
1、进入菜单
按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。 按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单；
19
2、快捷键
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行 梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前 浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一 下，继续梯度运行 按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再 按一下，继续
13
6.七通进样阀原理
三种工作状态： 1) LOAD 2) INJECT 3) WASTE
14
1）LOAD
柱子 注射器
泵 缓冲液
样品环
缓冲液：泵－7－1－柱子 样 品：注射器3－2－6－4－
15
2）INJECT
柱子 泵
注射器
样品环
样品：泵－7－6－2－1－
16
3）WASTE
有机溶剂； -清洗管路时关闭 UV -高压报警检查压力限制
40
END
23
四、AKTA Prime 数据采集——Prime View
Recorder记录仪 Prime View 软件 电脑+软件（含数据线）
+
24
1、Prime View
数据采集 数据处理
25
1）Prime View——数据采集
26
运行曲线图谱（Curve）： 记录系统采集到的全部数据， 系统开始运行后，自动开始记 录，结束后，自动保存。
AKTA PRIME PLUS 系统
目录
一、色谱层析原理 二、AKTA Prime 硬件配置 三、面板操作按钮 四、AKTA Prime 数据采集——Prime View 五、入门指南 六、AKTA PRIME PLUS日常保养
2
一、色谱层析原理
凝胶过滤层析 离子交换层析
亲和层析
疏水层析
3
1.凝胶过滤
8
2、AKTA Prime 主要硬件组成
梯压度力混感泵合应头器
9
2、AKTA Prime 主要硬件组成
收集切换阀 收集出口
柱夹槽口 上样阀 层析柱
检测流动池： 紫外、电导
10
3、AKTA Prime 流程图
11
4、AKTA Prime 阀梯度
通过梯度阀交替泵 A/B液实现梯度
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5、AKTA Prime 泵
运行日志（Logbook）： 记录系统收到的所有指令
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28
Prime View——数据采集
选择浏览曲线及 设定曲线颜色
设定X，Y轴的 坐标范围
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2）Prime View——数据处理
30
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输出报告内容
可按自己的要求编辑报告格式
33
34
积分结果——图谱及积分表
35
36
浏览属性
20
3、操作命令简介
主菜单
预编好的方法模板 运行保存的方法 手动运行
编辑方法 将方法拷入电脑或拷回 设定系统参数
检查系统状态
21
3、操作命令简介
子菜单： 以Manual Run为例
22
设置横坐标单位是ml或min 设置B起始浓度%B 梯度（长度ml/目标浓度%B） 流速ml/min 收集单位ml、min、drop 收集数量（每管） 限压（保护层析柱）MPa 缓冲阀位1-8 样品阀位waste、load、inject 开始
•Flow rate range 0.1–50 ml/min in steps of 0.1 ml/min •Operating pressure range 0–1.0 MPa
6
1、AKTA Prime 主机
组分收集器 控制面板 系统泵
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2、AKTA Prime 主要硬件组成
三通梯度配比阀 缓冲液阀
浏览曲线 X、5u, 超声脱气75功率10－15min , 样品 0.45u, 柱子) -先打开 AKTA ，再开电脑，打开软件Prime View -水冲系统 (抽气) -连接柱子 -水冲柱子至少2倍柱子体积 -缓冲液A冲洗，打开紫外灯平衡柱子5倍柱子体积或紫外检测线稳定 -样品打入上样环 -上样阀切换到Inject 模式将样品打入柱子 -峰收集 -结束，重命名并转移结果，用Prime View evaluation编辑结果 -水冲洗2倍体积置换缓冲液 -20% EtOH 冲洗柱子5倍体积，保存柱子。 -关闭 AKTA和Prime View
38
延迟体积
39
六、AKTA PRIME PLUS日常保养
-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）； -缓冲液温度平衡 -染菌缓冲液必须倒掉； -保证泵、柱前没有气泡； -密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）； -系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、
1. 凝胶柱，凝胶颗粒
2.加样
3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 4.大分子蛋白首先流出，
分子扩散。
根据分子量大小依次流出 。
4
2.离子交换层析 (IEX)
平衡
加样和冲洗
洗脱
阴离子 交换柱
再生
电导率
根据电荷差异进行分离
5
二、AKTA Prime 配置
AKTA Prime + Prime View
AKTA Prime + Recorder
柱子 泵
注射器
样品环
缓冲液：泵－7－5－
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三、面板操作按钮
18
1、进入菜单
按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。 按OK进入子菜单； 按ESC退到上级菜单；
19
2、快捷键
分布收集器前进一管
停止程序或方法运行 梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前 浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一 下，继续梯度运行 按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再 按一下，继续