牛黄解毒片中蒽醌类成分的鉴别ppt课件
牛黄解毒片的鉴别方法
实验二牛黄解毒片的鉴别一、实验目的1.掌握中药制剂理化定性鉴别的方法和原理。
2.熟悉牛黄解毒片的理化定性分析和薄层定性检识。
二、仪器与试药1.仪器微量升华装置 TLC装置恒温水浴锅显微镜滤斗定性滤纸乳钵酒精灯2.试药牛黄解毒片规格：0.3g/片胆酸对照品乙醇镁粉盐酸氢氧化钠过氧化氢 1％香草醛硫酸溶液二氯甲烷过氧化氢三、实验原理根据中药制剂中某些有效成分的理化性质不同而进行鉴别；利用对照品作为对照进行TLC检识，以鉴别中成药的真伪。
四、实验内容1.牛黄解毒片显微鉴别取本品片芯，研成粉末，取少许，置显微镜下观察：(1)草酸钙簇晶大，直径60～140 m。
(2)不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。
2.牛黄解毒片定性鉴别（1）理化鉴别：取本品6片，(除去包衣)，研细，加乙醇10mL，温热10分钟，滤过，滤液作如下反应：①取滤液5mL，加镁粉少量与盐酸0.5mL，加热，即显红色。
②另取滤液4mL，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸成酸性，则红色变成黄色。
（2）微量升华定性鉴别：取牛黄解毒片1片，研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新制的1％香草醛硫酸溶液2滴。
液滴边缘渐显玫瑰红色。
（3）牛黄解毒片的TLC鉴别：薄层板制备：硅胶G板(手工铺板或预制板)。
牛黄的TLC定性鉴别：①供试品溶液制备：取本品2片，研细，加二氯甲烷15mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，加乙醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。
②对照品溶液制备：取胆酸对照品，加乙醇制成每mL含2mg的溶液，即得。
③点样与展开：分别吸取上述溶液各5mL，点于同一硅胶G板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇(20:25:2:3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
大黄的鉴别：①供试品溶液的制备取本品1片，研细，加甲醇20mL,超声处理15min,滤过，取滤液10mL,蒸干，残渣加水10mL 使溶解，加盐酸1mL,加热回流30min,放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20mL,合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2mL使溶解，作为供试品溶液。
牛黄解毒片的鉴别
天然药物分析技术课程实验牛黄解毒片的鉴别一、实验目的1、掌握天然药物制剂理化鉴别方法；2、熟悉天然药物制剂的性状鉴别方法。
二、实验原理牛黄解毒片由人工牛黄、石膏、大黄、桔梗、冰片、甘草等组成。
首先观察其外观形态、颜色、气味、利用升华法课鉴别冰片，利用薄层色谱法看分别鉴别制剂中的人工牛黄（胆酸）、大黄（大黄素）、黄芩（黄芩苷）。
三、仪器与试药1、仪器层析缸、薄层用玻璃板、紫外线分析仪、分析天平。
2、试药硅胶G，硅胶GF254、胆酸、大黄素、黄芩苷对照品和大黄对照药材（中国药物生物制品检定所）、牛黄解毒片（市售）、双蒸水、其他试剂均为分析纯。
四、实验内容与步骤1、性状本品为素片或包衣片，素片或包衣片去除包衣后显棕黄色。
2、鉴别2.1 冰片（升华法）取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴，溶液边缘渐显玫瑰红色。
2.2 牛黄（TLC法）2.2.1 供试品溶液制备取本品2片，研细，加三氯甲烷10mL研磨，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。
2.2.2. 对照品溶液制备取胆酸对照品适量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.3 薄层层析吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20:25:3:2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热约10min，置紫外光灯下检视。
2.3 大黄的鉴别（TLC法）2.3.1 供试品溶液制备去本品1片，研细，加甲醇20mL，超声处理10min，滤过，取滤液10mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，加盐酸1mL，加热回流30min，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2mL，作为供试品溶液。
2.3.2 对照品溶液制备取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液。
再取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
第八章-蒽醌类化合物课件
30
规律如下： 1．含有羧基的醌类化合物的酸性强于不含羧基者 。 2. 醌类化合物母核上β-羟基的酸性强于α-羟基。 3. 酚羟基数目增多，酸性增强。
以游离蒽醌类衍生物为例，酸性强弱将按下列顺序排列：
含-COOH > 2个以上β-OH > 1个β-OH > 2个α-OH > 1个α-OH
5%NaHCO3
• 四、酸碱性 （一）酸性：醌类化合物多具有酚羟基、羧基，故具
有一定的酸性。醌类化合物因分子中羧基的有无和 酚羟基的数目以及位置的不同，酸性强弱表现出显 著的差异。
29
β-OH蒽醌中，受羰基吸电子作用的影响， βOH上氧原子的电子密度降低，质子解离度增高， 故酸性较强。
β-OH
α-OH： 与羰基形成分子内氢键
4
天然药物如大黄、虎杖、何首乌、决明子、丹参、 番泻叶、芦荟、紫草中的有效成分都是醌类化合物。
虎杖
何首乌
芦荟
5
天然醌类主要有四种类型 苯醌 benzoquinones 萘醌 naphthoquinones 菲醌 phenanthraquinones 蒽醌 anthraquinones
6
苯醌类(benzoquinones)化合物分为邻苯醌 和对苯醌两大类。邻苯醌结构不稳定，故天然 存在的苯醌化合物多数为对苯醌的衍生物。
（三）蒽醌苷类的分离 蒽醌苷类因其分子中含有糖，故极性较大，水
溶性较强，分离和纯化都比较困难，主要采用色 谱方法。在进行色谱分离之前，往往用经典方法 分离提取物，除去大部分杂质，如用正丁醇、醋 酸乙酯等极性较大的亲脂性有机溶剂，将蒽醌苷 类从水溶液中萃取出来，使其与水溶性杂质相互 分离，制得较纯的蒽醌苷后再用色谱分离。
[课件]第五章蒽醌PPT
![[课件]第五章蒽醌PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/a73c0ed4ba0d4a7302763af3.png)
３、大黄中还原型蒽醌类化合物的测定 可将还原型蒽醌用适当浓度（10%）FeCl3 溶液先氧化成蒽醌类化合物，再加酸水解， 然后同操作２测定含量。 ４、大黄酸类化合物测定 将２的氯仿提取液用５％NaHCO3溶液分次 振摇提取至无色，提取液酸化后用乙醚提 取，加 5% 氢氧化钠 -2% 氢氧化铵混合碱液 比色。
>2个以上α-酚羟基>1个以上α-酚羟基
（1%NaOH） （5% NaOH）
蒽醌类成分的定Leabharlann 分析 化学显色、薄层色谱、升华显色 （一）
化学显色反应 1、 Borntrager反应：蒽醌类成分常 具有酚羟基，遇碱显红---紫红色
羟基蒽醌及具有游离酚羟基的蒽醌
苷均可呈色，显色特点①蒽酚、蒽 酮、二蒽酮类化合物需经过氧化形 成蒽醌后才呈色。②游离蒽醌羟基 位置不同，产生的颜色不同 常用碱液（显色剂）：氨气、 10%氢氧化钾甲醇溶液、3%氢氧化 钠溶液或碳酸钠溶液、 50% 哌啶的 苯溶液、饱和碳酸锂溶液
3、显色剂 喷碱性试剂或醋酸镁甲醇液，氨气熏 及紫外灯下看荧光 ，可见光下直接观察色 斑
4、对照品的选择 单体化合物、混合提取物、标准药材
（三） 升华法 游离的蒽醌及其他醌类衍生物可用升华 法得到升华物，可见光下观察或加碱液 显色 尤以大黄、含大黄制剂如牛黄解毒丸等 较常用
蒽醌类成分的定量分析
比色法、薄层色谱法、高效液相色谱法、 重量法、紫外分光光度法、荧光分光光 度法、极谱法、容量法
（一）、比色法 1、 直接测定 蒽醌类化合物随着酚羟基等助色团的引 入表现出一定的颜色，在可见光区比色 直接测定
2、 Borntrager反应 利用羟基蒽醌类遇碱呈色在 500~550nm 处有最大吸收 常用碱液有NaOH、KOH、 NaOH-NH4OH
《蒽醌类化合物》PPT课件
OH
(四)C-糖基衍生物: 是蒽醌的碳苷，即糖作为侧链通过C-C键直 接与蒽环相连。例如芦荟致泻的主要有效成分芦荟苷 (barbaloin)即属此类化合物。
小知识：芦荟简介
芦荟的起源与发展
芦荟（Aloe），原产于非洲或地中海干燥地区，性寒味苦，
二、结构类型 —苯醌
(一) 苯醌类（benzoquinones) 有邻苯醌和对苯醌两种 天然的多为对苯醌
对苯醌 O
常见的取代基为OH，OMe和烷基等 O 简单的对苯醌多为黄色或橙黄色结 晶，能随水蒸气蒸馏，常有令人不 适的臭味，对皮肤和粘膜有刺激性， 易被还原成相应的对苯二酚。
邻苯醌
O O
二、结构类型 —苯醌
大黄 酚葡 萄糖苷
glu H
大黄 酚-1-O-β
H glu
-D-葡 萄糖苷
MeO
CH3
O
大黄 素 甲 醚 -8-O-β -D-龙 胆双 糖
二、结构类型 —蒽醌
(2) 茜草素型：羟基分布于一侧苯环上，颜色较深， 多呈橙黄色至橙红色。种类较少，最重要的中药 是茜草。茜草的根能止血、活血，主治咳嗽、痰 中带痰以及风湿性关节炎。从茜草根分离得到茜 草素及其冬绿糖苷—茜草苷、羟基茜草素、伪羟 基茜草素等多种蒽衍生物，其中茜草素是重要的 天然染料之一。在低年生茜草根中多以苷的形式 存在，而在多年生的茜草根中主要以游离苷元的 形式存在。
位多有一个甲基、羟甲基、甲氧基、醛基或羧基取
代，个别蒽醌化合物还有两个碳原子以上的侧链取
代。可呈游离形式或与糖结合成苷的形式存在于植
物体内。
二、结构类型 —蒽醌
蒽醌的结构类型有一定的规律性，根据羟基在蒽醌母核上的分布状况不同， 将羟基蒽醌分为两类：大黄素型和茜草素型。 （1）大黄素型：羟基分布于两侧苯环上，多呈黄色。许多重要的中药如大黄、 决明中有致泻作用的1,8-二羟基蒽醌衍生物均属于这一类型。以下五种大黄素型 羟基蒽醌在中药中分布比较广泛。
实验九牛黄解毒片的分析PPT课件
实验步骤：
取本品1片，研细，置于瓷坩埚中，在坩埚上覆盖一块载 玻片，用酒精等加热，进行微量升华，当白色蒸汽上升，得到 的白色升华物，在载玻片上滴加新配制的1%香草醛硫酸溶液 1~2滴，液滴边缘渐呈玫瑰红色。
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/30
3．牛黄解毒片中黄芩和大黄的显色反应鉴别 黄酮类成分在镁粉与盐酸作用下易被还原，迅速生成红 色；蒽醌类成分遇碱液显红色，在酸性溶液中被还原则显黄 色。本实验利用黄酮类成分和蒽醌类成分的上述显色反应鉴 别处方中的黄芩和大黄。
大黄和雄黄的显微鉴别
取本品1片，研细，取 少许置载玻片上，滴加适量 水合氯醛试液，透化后加稀 甘油1滴，盖上盖玻片，用吸 水纸吸干周围透出液，置显 微镜下观察。大黄薄壁细胞 含大型草酸钙簇晶，直径 60~140μm。雄黄则形成金黄 色或橙黄色不规则有光泽的 碎块。
2、微量升华法 微量升华法可用于鉴别中药制剂中具有升华性质的化学成 分。处方中冰片易气化，本实验采用微量升华法鉴别冰片。冰 片的升华物与1%香草醛硫酸溶液反应，显玫瑰红色。
黄酮：
蒽醌类：
实验步骤： 取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10min,滤过，取滤
液5 ml，加少量镁粉与盐酸0.5 ml,加热，即显红色(黄芩)；另取 滤液4 ml，加氢氧化钠溶液，即显红色，再加浓过氧化氢(30%)， 加热，红色不消失，加酸成酸性后，则红色变为黄色(大黄)。
4、薄层色谱法 薄层色谱法是中药专属鉴别试验中应用最多的方法。
牛黄的薄层色谱图
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/30
薄层色谱法将中药样品和对照品在同一条件下进行分 离分析，观察样品在对照品相同斑点位置处是否有同一 颜色（或荧光）的斑点，来确定样品中有无要检出的成 分。
牛黄解毒片的鉴别
题目：牛黄解毒片的鉴别一、实验目的1. 熟悉中药制剂的形状鉴别。
2. 掌握中药制剂微量升华的基本操作。
3. 熟悉中药制剂牛黄解毒片的理化鉴别方法。
二、实验原理牛黄解毒片为人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草制成的片剂；三、实验材料1. 仪器天平；烧杯；烧瓶；试管；锥形瓶；吸管；量筒；蒸发皿；恒温水浴锅；分液漏斗；回流装置；坩埚；微量升华装置；紫外分析仪等。
2. 材料牛黄解毒片3. 试剂氢氧化钠试液；镁粉；盐酸；乙醇；三氯甲烷；甲醇；正丁醇；活性炭。
1%香草醛-硫酸溶液；30%过氧化氢试液。
四、实验步骤1.性状鉴别分别描述素片、糖衣片2.牛黄解毒片中冰片的鉴别取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的1%香草醛-硫酸溶液1～2滴，液滴边缘渐显玫瑰红色。
3.大黄、黄芩的鉴别（化学反应法）取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，滤过，取滤液3ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml ，水浴加热，即显红色；另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加过氧化氢试液，红色不消失，加酸成酸性时，则红色变为黄色。
五、实验结果1.记录牛黄解毒片素片及糖衣片的性状描述。
2.记录冰片鉴别的实验现象。
3.记录化学反应法鉴别大黄中蒽醌的实验现象、黄芩中黄芩苷鉴别的实验现象。
六、注意事项1.在进行微量升华实验时，粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。
操作时，可在载玻片上部中央放少许冷水，以加强冷凝作用；若样品粉末含水量较大，应先用干燥剂吸水干燥，以免水蒸气影响升华物的晶型。
2. 如果反应需要加热，试管内容物不得超过容积的2/3，用试管夹夹持试管，倾斜450；水浴中加热时，试管口不得闭塞，并不得朝向人；不得用明火加热有机溶液。
第5章--蒽醌类化合物PPT课件
蒽醌结构上不同位置，可采用两种方法标记
*
*
*
*
1,4,5,8位为α位 2,3,6,7位为β位
11
.
1、大黄素型（Emodin）： 羟基分布于苯环两侧上，多呈黄色。
如中药大黄中的主要蒽醌衍生物多属于大黄素型。
1,4,5,8位为α位 2,3,6,7位为β位
25
.
比较下列化合物的酸性强弱： D﹥C ﹥ B、A
A
B
C
26
D
.
学以致用
单项选择题
1、大黄素型蒽醌母核上的羟基分布情况是（ D ）
A.在一个苯环的β位
B.在二个苯环的β位
C.在一个苯环的α位β位 D.在二个苯环的α位β位
2、具有升华性的化合物是（ C ）
A. 两个苯环的β-位 B. 两个苯环的-α位 C.在两个苯 环的α或β位 D. 一个苯环的α或β位 E. 在醌环上
7. 番泻苷A属于 C
A.大黄素型蒽醌衍生物 B.茜草素型蒽醌衍生物
C.二蒽酮衍生物 D.二蒽醌衍生物
E.蒽酮衍生物
29
.
Contents
第五章 蒽醌类化合物
1 2
3
概述 理化性质 提取、分离与检识
O
思考：分别写出以上四种情况的标记
42
.
3、对亚硝基-二甲苯胺反应：蒽醌的专属反应
酮基对位的亚甲基上的H很活泼，可与0.1%对亚硝基-二甲
苯胺吡啶溶液反应缩合而产生各种颜色，因结构不同颜色有差
异，一般为紫、绿、蓝色。
OH O
OH
中药制剂定性鉴别-牛黄解毒片的定性鉴别(课件类)优秀文档
薄层鉴别
3、对照品-黄芩苷 供试品-样品提取液 固定相-硅胶G板 展开剂-乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1） 显色剂-1%三氯化铁溶液
点样，展开缸预饱和
展开剂展开
取出，喷显色剂
结果判断：同一个硅胶板上，在 与标准品溶液同样的高度，供试 品溶液是否也有同样的黄色斑点。
谢 谢 / THANKS
理化鉴别
3、黄芩和大黄的显色反应鉴别： 取本品6片，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，滤过。
取滤液5ml氧化钠试液，即显红色，再加 30％过氧化氢溶液，红色不消失，加酸成酸性时， 则红色变为黄色（大黄）。
问题：1、如何判别牛黄解毒片的真假和质量优劣？ 和气味，并与药典标准比较，评判该项是否合格。 1、性状鉴别：本品为素片或包衣片，若为包衣片，除去包衣后，显棕黄色。 3一、次对3照片品，-一黄日芩2苷-3次。 显一色次剂 3片-1，%一三日氯2化-3铁次溶。液 取分本子品 式6：片C，27研H3细0O，16加·3乙H2醇O 10ml，温热10分钟，滤过。 项结目果十 判/断中：药同活一性个成硅分胶研板究上方，法在与标准品溶液同样的高度，供试品溶液是否也有同样的黄色斑点。 1另、取性滤状液鉴4m别l：，本加品氢为氧素化片钠或试包液衣，片即，显若红为色包，衣再片加，30除％去过包氧衣化后氢，溶显液棕，黄红色。不消失，加酸成酸性时，则红色变为黄色（大黄）。 项供目试十 品/-样中品药提活取性液成分研究方法 取3、本对品照6片品，-黄研芩细苷，加乙醇10ml，温热10分钟，滤过。 和供气试味 品，-样并品与提药取典液标准比较，评判该项是否合格。 分取子滤式 液：5mCl2，7加H3镁0O粉16少·3量H2与O 盐酸，加热，即显红色（黄芩）； 显分色子剂 式-：1%C三27氯H3化0O铁16溶·3液H2O 1结、果性判状断鉴：别同：一本个品硅为胶素板片上或，包在衣与片标，准若品为溶包液衣同片样，的除高去度包，衣供后试，品显溶棕液黄是色否。也有同样的黄色斑点。 和项气目味 十，/ 中并药与活药性典成标分准研比究较方，法评判该项是否合格。 显色剂-1%三氯化铁溶液 另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30％过氧化氢溶液，红色不消失，加酸成酸性时，则红色变为黄色（大黄）。 项目十/ 中药活性成分研究方法
牛黄解毒片
牛黄解毒片Niuhuang Jiedu Pian【检查】异性有机物本品为部分浸膏片,除雄黄、大黄原药材组织外，不得检出其它植物组织。
取本品2片，除去包衣，研细，称取细粉0.1g,，加水10ml使溶解，离心，弃去上清液，沉淀加水2ml使溶解，摇匀，吸取混悬液1滴于载玻片上，加水合氯醛1滴，加热透化，置显微镜100倍下，在盖玻片上按下图位置选取9个检查点检视，视野中除雄黄、大黄原药材显微特征外，不得检出其它植物组织。
如仅有1个检查点检视中检出，再依法制片复试1次，初、复试检出含其他植物组织检查点不得超过1个。
图：盖玻片上检查点示意图土大黄苷（1）取本品大片2片（小片3片），除去糖衣，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。
另取土大黄苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5～10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－甲酸－水（10：3.5：0.2：0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，不应显相同颜色的荧光斑点，若出现相同颜色的荧光斑点，则用下列高效液相色谱法验证。
（2）照高效液相色谱法验证（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。
色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂;以乙腈－水（20：80）为流动相；采用二级管阵列检测器；检测波长为328nm。
理论板数按土大黄苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备取土大黄苷对照品适量，加甲醇制成每1ml 含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取上述（1）项下的供应品溶液1ml，稀释至10ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
测定法吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。