溶血实验

溶血实验

1.浓度

2.溶液配制

D-PBS：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline

3.方法

⑴新鲜血液2ml至用抗凝剂肝素预处理的采血管中。

⑵加入4ml D-PBS，10000g离心5min。

⑶弃上清，补加D-PBS至10ml，混匀后10000g离心5min。

⑷重复⑶4次，至上清澄清透明。

⑸加入20ml D-PBS重悬红细胞。

⑹将0.2ml红细胞悬液与0.8ml材料工作液混合。以加0.8ml水作为阳性对照组，0.8ml D-PBS为阴性对照组。

⑺各组设4个平行，4h后，10016g离心5min，各取样品100ul至96孔板测定577nm吸光度，以655nm吸光度为参考。

溶血率% =[(OD样品-OD阴性)/(OD阳性–OD阴性)]×100%

取健康非吸烟男性志愿者静脉血3 ml。取2 ml血液，加入4 ml PBS，

涡旋混匀。4 ℃，10020 g离心10 min。小心移除上清，补加PBS至10 ml，混匀后离心，PBS重复处理5次至上清澄清透明。最后将红细胞用PBS定容至20 ml重悬混匀。用PBS配制三种HAP纳米粒子的梯度工作液：100 µg/ml，50 µg/ml，25 µg/ml，12.5 µg/ml，6.25 µg/ml。用0.2 ml上述红细胞重悬液与0.8 ml纳米粒子工作液混合，得到纳米粒子的终浓度为80 µg/ml，40 µg/ml，20 µg/ml，10 µg/ml，5 µg/ml。

0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml PBS混匀为阴性对照，0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml无菌三次水混匀为阳性对照，各组设3个平行。涡旋混匀后，于37 ℃孵育3 h，10020 g离心10 min，各样取100 µl上清，于570 nm 处测吸光度值。溶血率计算方法如下：溶血率% = [(OD样品-OD阴性)/ (OD阳性–OD阴性)] ×100%。