TAF固定液 - 360文档中心

常用的组织固定液及配制

常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。

1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。

易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。

用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。

10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。

对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。

2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。

固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。

3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。

此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。

4 AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。

也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。

此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。

以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。

yzbai wrote:（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。

对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。

能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。

经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。

（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。

固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。

几种细胞固定方法选择最佳固定液标准是：（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。

线虫

⑴线虫的淘洗过筛称取鲜土100 g，用淘洗—过筛—蔗糖梯度密度离心方法分离线虫（Lianget al., 2002）。

将称好的土倒入水盆中，加水搅匀，静置1 min。

将水倒入一组网筛，即上层为60 目，下层为400 目，边倒边震荡分样筛，防止水充满下层的400 目筛而从筛中溢出。

然后，再在盆中加入水后混匀，静置1 min，倒入网筛中，如此重复三次。

将400 目的分样筛取下，用喷头把400 目网筛中的线虫悬液中的泥浆冲洗干净，倒入烧杯中，静置。

⑵蔗糖梯度离心将静置烧杯中的上层水轻轻倒掉，只保留下层大约30 ml 水、线虫和泥浆的混合物。

将混合物轻轻摇匀，倒入离心管中，在天平上调平衡，把平衡后的离心管放入离心机中，第一次离心（离心机的转速2000 r·min-1，离心时间为4 min）。

倒掉第一次离心后的离心管内的上层液，保留土层。

在离心管中分别注入比重为1.18 g·ml-1的蔗糖溶液约10 ml，在天平上调平衡后，摇匀，放入离心机中进行第二次离心。

离心后，迅速取出离心管，把离心管内的上层液倒入500 目筛中，用水把蔗糖液冲掉，以防线虫在蔗糖液中脱水变形。

然后把线虫液冲入烧杯中，随后再转入试管中。

将其静置24 h 以上，以使线虫沉淀，并进行饥饿处理，以得到虫体各器官清楚的线虫标本。

⑶线虫的杀死和固定线虫的杀死采用温和热杀死法（Gentle Heating）。

先将水浴锅温度设定为60℃；把静置6 h 以上的试管中的上层水小心抽出，只保留大约2～3加热3 min杀死线虫，取出，稍静置冷却，加入等量的2倍TAF固定液，摇匀，倒入青霉素小瓶中，写好标签和序号，放入标本盒中。

⑷线虫的科属鉴定在解剖镜下观察计数，然后依据测得的土壤水分将土壤线虫种群折算成100 g干土中含有的线虫条数。

土壤线虫群落生态指数计算土壤线虫的生态指数有优势度指数、香农—威纳指数、均匀度指数、丰富度指数。

（1）优势度指数（Dom）：公式Dom=∑pi2，pi—第i个线虫属个体所占的比例。

一些固定液及方法介绍

一些固定液及方法介绍前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。

在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。

另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。

2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4•2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。

注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。

B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。

该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。

该固定剂较温和，适于组织的长期保存。

组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

3．Bouin's液及改良Bouin's液试剂：饱和苦味酸40%甲醛250ml冰醋酸50ml配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。

植物病原线虫的分离方法及形态观察实验

植物病原线虫的分离一、目的要求了解从土壤和植物组织中分离线虫的基本原理，掌握从土壤和植物组织中分离线虫的常用方法。

学习在解剖镜或扩大镜下用镊子、竹针、毛针、毛笔等工具从水中和滤纸上挑取线虫的方法。

二、基本原理植物寄生线虫主要存在于土壤和植物组织中，分离线虫的方法有许多，要根据线虫的种类、研究目的等来选择适宜的方法。

植物寄生线虫的个体很小，除极少数可从植物组织中直接挑出以外，绝大多数需借助特定的工具和方法才能完成。

线虫的分离主要是利用它的趋水性、大小、比重以及与其他杂质的差异，采用过筛、离心、漂浮等措施，将线虫从植物组织、土壤中分离出来。

三、材料、试剂与仪器1．实验材料感染根结线虫病的植物病根、病土、感染大豆孢囊线虫或其它孢囊线虫的病土、感染甘薯茎线虫的病薯块等。

2．仪器或实验用具解剖镜、漏斗分离装置、漂浮分离装置、浅盘分离装置、纱布或铜纱、记数皿或平皿、小烧杯、小玻管、旋盖玻璃瓶、40目和325目网筛、线虫滤纸、餐巾纸、挑针、竹针、毛针、毛笔等。

3．试剂线虫固定液。

四、实验操作1．直接观察分离对于个体较大的线虫如根结线虫、孢囊线虫、粒线虫的雌虫等，可直接用挑针从植物组织中挑取，也可在解剖镜或扩大镜观察下直接挑取，对于虫体稍小的线虫如茎线虫、粒线虫的雄虫和幼虫等，需在解剖镜下，用竹针或毛针直接挑取。

取感染根结线虫的植物病根材料（若是干材料需用水浸泡过夜），剥开皮层，观察里面是否有针头大小、乳白色发亮的颗粒状物。

用挑针挑取，置凹玻片上水滴中，在解剖镜或显微镜下观察是否为根结线虫雌虫。

2．漏斗分离法该方法操作简单，是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。

其装置是将直径10~ 15cm 的玻璃漏斗架在铁架上，下面接一段约 10 cm 的橡皮管，橡皮管上装一个弹簧夹。

（1）将植物材料切碎用双层纱布包好，浸在盛满清水的漏斗中，或在漏斗内衬放一个用细铜纱制成的漏斗状网筛，将植物材料直接放在网筛中，分离土壤线虫时需在网筛上放一层纱布或多孔疏松的纸，上面加一层土样。

一些固定液及方法介绍

一些固定液及方法介绍前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。

在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。

另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。

2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4•2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。

注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。

B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。

该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。

该固定剂较温和，适于组织的长期保存。

组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。

3．Bouin's液及改良Bouin's液试剂：饱和苦味酸40%甲醛250ml冰醋酸50ml配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。

广西水稻线虫的分离鉴定

广西水稻线虫的分离鉴定黄金玲;陆秀红;万宇力;刘志明【摘要】[目的]明确广西部分稻区水稻长势差、叶尖端扭曲成灰白色干尖的原因,为生产上该病害的治理提供理论依据.[方法]通过直接浸泡分离法和改良贝曼漏斗法分离线虫,应用形态学和分子生物学手段相结合的方法对线虫进行鉴定.[结果]从水稻稻穗和稻秆中分离到一种线虫,形态鉴定显示,热杀死后雌虫唇区扩张,缢缩明显,口针较细,口针基部球稍膨大,中食道球长圆形,约占体宽的3/4,峡部细,食道腺背面覆盖肠,雌虫阴门位于虫体中后部,卵巢1个;用特异引物对其进行基因序列扩增,得到一条约300 bp的片段,确定造成广西部分水稻叶尖端干尖症状的病原为水稻干尖线虫.[结论]水稻干尖线虫在广西有分布和危害,应采取措施避免其扩散蔓延.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2014(045)002【总页数】4页(P218-221)【关键词】水稻;线虫;鉴定;形态特征;广西【作者】黄金玲;陆秀红;万宇力;刘志明【作者单位】广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西大学农学院,南宁530005;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007;广西大学农学院,南宁530005;广西农业科学院植物保护研究所,南宁530007;广西大学农学院,南宁530005;广西作物病虫害生物学重点实验室,南宁530007【正文语种】中文【中图分类】S435.11【研究意义】水稻干尖线虫（Aphelenchoides besseyiChristie）是一类严重制约水稻生产的危险性病原线虫，主要为害水稻地上部分，引起水稻叶尖干枯、“小穗头”等典型症状，水稻整个生育期均可受害。

水稻生产上连续大面积发生严重的“小穗头”现象，可直接造成稻谷产量大幅下降，一般减产10%～30%，为害严重的减产在50%以上（王子明等，2003）。

第九章植物线虫的基本研究

（4）贝曼漏斗分离（5）浅盘分离法
贝曼漏斗，过筛，离心这三种是最基本的分离方法。
植物线虫玻片标本的制作
1、线虫的杀死和固定（1）热杀死：60-65℃ 约3min；线虫悬浮液
内加沸水使温度为56-58℃， 3min后防入冰箱或室温自然降温。（2）固定：线虫杀死后应马上固定，防止变形和变质。
（2）漏斗分离
适用于分离植物材料和土壤中较活跃的线虫，方法简便，容易操作，缺乏氧气，但不利于活动线虫的存活，分离效率低。
（3）浅盘分离
原理与漏斗法相同，但通气状况更好，线虫容易活动，存活率高，分离效率比漏斗法高，然而分离时间较长，所获线虫悬浮液较脏。
2.从土壤中分离线虫
（1）直接过筛分离
取固定24h以上的线虫放进盛有甲溶液的小皿内ห้องสมุดไป่ตู้将小皿放进干燥器隔板上，干燥器底部放95%酒精，加盖后置35-40℃温箱内12-24h，取出小皿，换进乙溶液，将小皿放进密闭的大器皿内，40℃保存3h 或更长，直至酒精完全蒸发。
3、玻片的制作
蜡圈制作法：直径1.5cm的打孔器，端部烧热，迅速插到低熔点的石蜡（熔点54℃）中，将熔化的蜡尽快黏附在载玻片中央，做成蜡圈；在蜡圈中央加一小滴甘油；将已脱水的线虫挑入其中；加盖玻片；加热使蜡熔化；封片。
1ml
蒸馏水
40ml
优点：可保持线虫的刻线和环纹清晰
缺点：可能会使虫体洲缩变形
• FA固定液（福尔马林-冰醋酸固定液）
4:1用量 4:10用量
福尔马林（40%甲醛） 10ml 10ml
冰醋酸
1ml 10ml
蒸馏水
89ml 80ml
优点：可长时间保存线虫原形
缺点：可能使虫体颜色变暗，会使垫刃线虫的口针变透明

常用固定液的配制

常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12~24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1h。

固定液的分类和选择原则

固定液的分类和选择原则以固定液的分类和选择原则为标题，我们来探讨一下固定液的相关知识。

一、固定液的分类固定液是一种用于固定生物组织或细胞的溶液，根据不同的固定目的和化学成分，可以将固定液分为以下几类：1. 醇类固定液：如乙醇、甲醇等。

这类固定液常用于快速固定和保存细胞和组织的形态结构，同时具有很好的保护作用，适用于常规组织学检查。

2. 酸类固定液：如酸性酒精、酸性硫酸铜等。

这类固定液主要用于固定某些特定的细胞或组织结构，例如染色体或胶原纤维等。

酸类固定液对脂质物质的固定效果较差，因此不适用于脂质含量较高的样本。

3. 中性缓冲液：如PBS（磷酸盐缓冲液）、Hank's液等。

这类固定液主要用于固定细胞和组织的生物学活性，能够较好地保持细胞和组织的形态和功能，适用于免疫组化和分子生物学实验。

4. 有机溶剂固定液：如乙酸、乙酸乙酯等。

这类固定液在固定过程中对细胞和组织的脂质物质和溶胀性物质具有较好的固定效果，适用于脂质或溶胀性物质含量较高的样本。

二、固定液的选择原则在选择固定液时，我们需要考虑以下几个原则：1. 根据固定目的选择：不同的实验目的需要选择不同的固定液。

例如，要观察细胞形态结构，可以选择醇类固定液；要进行免疫组化实验，可以选择中性缓冲液。

2. 根据样本性质选择：不同的样本性质对固定液的选择有所差异。

例如，脂质含量较高的样本适合选择有机溶剂固定液；而含有胶原纤维的样本可以选择酸类固定液。

3. 考虑固定液的渗透性：固定液的渗透性对于固定效果至关重要。

一般来说，较强的渗透性可以提高固定效果，但同时也可能对细胞或组织的形态和功能产生一定影响。

因此，需要根据具体实验要求选择合适的固定液。

4. 考虑固定液的毒性和安全性：固定液中可能含有一些有毒物质，因此在选择固定液时，需要考虑其对实验人员和环境的安全性。

同时，在实验过程中也要注意安全操作，避免接触到固定液。

总结：固定液的分类和选择原则是进行组织学和细胞学研究中非常重要的一环。

组织固定液

组织固定液组织固定液北京华越洋生物------------------------------------------------------AAF固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月组织化学中细胞或组织切片的固定。

主要由乙醇、冰乙酸、甲醛等组成。

常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

AAF固定液5L 固定液40% 室温,避光,12个月组织化学中细胞或组织切片的固定。

主要由乙醇、冰乙酸、甲醛等组成。

常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

Davidson's fixative 100ml 固定液40% 室温,避光,12个月Davidson's fixative 500ml 固定液40% 室温,避光,12个月Bouin's固定液100ml 固定液40% 室温,避光,6个月活检标本的固定、媒染剂、适用于脂肪较多的组织标本。

主要由PA溶液、甲醛、乙酸组成。

Bouin's固定液500ml 固定液40% 室温,避光,6个月活检标本的固定、媒染剂、适用于脂肪较多的组织标本。

主要由PA溶液、甲醛、乙酸组成。

改良乙醇Bouin固定液100ml 固定液40% 室温,避光,12个月固定肾活检组织,组织学制备固定液,亦可以很好的保存糖原主要由乙醇、甲醛、乙酸乙酯等组成。

改良乙醇Bouin固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月固定肾活检组织,组织学制备固定液,亦可以很好的保存糖原主要由乙醇、甲醛、乙酸乙酯等组成。

Carnoy固定液100ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液500ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液Ⅱ100ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定Carnoy固定液Ⅱ500ml 固定液40% 室温,避光,12个月又称卡诺氏固定液,RNA\DNA染色的固定,糖原的固定,能清除血性标本,可以用于细胞学固定BS固定液500ml 固定液40% 室温,6个月细胞核染色固定,尤其适用于DNA染色。

实验室中固定液

实验室中固定液、缓冲液配置一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。

但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。

某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。

因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。

目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。

在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。

1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。

该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。

另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。

2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4·2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。

注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。

B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。

该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。

常用的组织固定液及配制

常用固定液‎及其配制固定液分单‎纯固定液和‎混合固定液‎。

1甲醛（forma‎l dehy‎d e）是无色气体‎，易溶于水成‎为甲醛溶液‎。

易挥发，且有强烈刺‎激气味，常用得是3‎7％～40％得甲醛溶液‎，商品名为福‎尔马林（forma‎l in）。

用作固定的‎浓度习惯为‎10％福尔马林（即1份甲醛‎溶液加9份‎水配制而成‎），实际含甲醛‎4％。

10％福尔马林渗‎透力强，固定均匀，对组织收缩‎少。

对脂肪、神经及髓鞘‎、糖等固定效‎果好，是最常用的‎固定剂。

经福尔马林‎固定时间长‎的组织，易产生黑色‎的沉淀，称福尔马林‎色素。

2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为‎固定剂外，还可作为脱‎水剂，对组织有硬‎化作用。

固定用一般‎是80%~95%浓度，乙醇渗透力‎校弱，它能溶解脂‎肪，核蛋白被沉‎淀后，仍能溶于水‎，因此核的着‎色不良。

3 中性甲醛液‎（混合固定液‎）甲醛（浓）120ml‎，加蒸馏水8‎80ml,磷酸二氢钠‎（NaH2P‎O4?H2O）4g，磷酸氢二纳‎（Na2HP‎O4）13g。

此液固定效‎果比单纯1‎0％福尔马林要‎好。

4 AF液（混合固定液‎）95％乙醇90m‎l，甲醛(浓)10ml。

也有配方是‎95％乙醇85m‎l，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5m‎l。

此液除有固‎定作用外，兼有脱水作‎用，因此，固定后可直‎接入95％乙醇脱水。

以上4种固‎定液中，以中性甲醛‎为首选，其次为10‎％福尔马林，乙醇应尽量‎不用。

yzbai‎wrote‎:（1）10%甲醛：对组织渗透‎性强，固定均匀。

对组织膨胀‎约5%，经酒精脱水‎时有较大的‎收缩。

能保存脂肪‎，不能沉淀核‎蛋白及白蛋‎白，长期用其固‎定的组织使‎组织变为酸‎性，不利于染色‎，特别是细胞‎核的着色。

经自来水冲‎洗6~24小时后‎，可以使其酸‎碱中和，并减少结晶‎。

（2）4%多聚甲醛：对组织穿透‎性好，组织收缩小‎，对大多数抗‎原物质保存‎较好，特别是对脂‎肪和各种酶‎的固定效果‎更好。

常用固定液的配制

常用固定液的配制常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。

幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。

若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。

若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。

久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。

此液又可作保存液。

固定时间最多10h。

如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。

3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。

固定时间不宜过久。

4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。

通常固定24h，亦可长久保存。

5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。

6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。

固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12~24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1h。

常用细胞固定剂及其优缺点比较

经常使用细胞固定剂及其优缺点比较宇文皓月1、95%酒精：最经常使用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有需要经过水洗。

此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色。

固定时间根据标本的分歧，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间。

经过95%酒精固定的标本，细胞核保管较好，结构清晰，颜色鲜艳。

如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳，可以呵护细胞免受空气干燥后的人工假象。

2、乙醚酒精液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应。

长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。

所以现在已经逐渐被95%酒精所代替。

3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保管较好，结构清晰，染色鲜艳。

常作为穿刺细胞涂片的固定液。

对抗原保管较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液。

缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害。

甲醇的毒性与其代谢产品甲醛和甲酸的蓄积有关。

以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不克不及合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩。

近年研究标明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关。

4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用。

不克不及沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。

渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用。

5、无水酒精：对糖原保管较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定。

6、丙酮：为易挥发的无色液体，有刺激性气体。

可使蛋白质沉淀，渗透性强，细胞收缩严重，对核的固定差。

很少用于惯例细胞学的固定。

广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定，也有人用于抗原的保管，作为细胞涂片免疫组化的固定液。

FAA固定液使用说明

FAA固定液编号名称北京派瑞金LB9429FAA固定液FAA固定液简介：固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

FAA固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液或AAF、AAF固定液，主要由乙醇(A)、乙酸(A)、甲醛(F)组成，兼有脱水作用。

AAF固定液常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。

FAA固定液操作步骤(仅供参考)：1、取新鲜组织入AFA固定液，置于冰箱内低温固定。

2、常规石蜡切片因固定不佳导致染色效果不满意时，可在染色前再用AAF固定液固定，染色效果会有明显提高。

FAA固定液注意事项：1、AAF固定液对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。

2、固定液pH最好接近用中性，pH范围6～8。

3、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。

4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

保存条件：RT避光，12个月有效。

FAA固定液相关的固定液：乙醇-甲醛固定液Altmann固定液Maximov固定液甲醛-生理盐水固定液Allen B-15固定液Lillie甲醛中性固定液铬-醋酸固定液乙醇-甲醛固定液，A-F固定液Lichent's固定液多聚甲醛-磷酸缓冲固定液Picric acid-硫酸固定液Kolmer固定液Zirkle-Erliki固定液甲醛-乙酸-乙醇固定液Kleinenberg's（克来宁堡氏）固定液Susa固定液多聚甲醛-氢氧化钠固定液Karnovsky固定液Schaudinn（绍丁）固定液对苯醌固定液Hollande固定液Marchi固定液Zetterqvist固定液Helly固定液Karnovsky改良固定液Zenker固定液Gendre固定液Houseby固定液Zamboni固定液Flemming固定液Heidenhain（海登汉）固定液Verhoeff固定液ECD-G固定液Goldsmith固定液Rossman固定液Champy固定液Gilson固定液Romeis固定液Carnoy固定液Davidson固定液PLP固定液Carnoy-LeBrun固定液Dafano固定液PLPD固定液Champy固定液，Champy’s Fluid Carl固定液，卡尔固定液PFG固定液Helly固定液，Helly SolutionCajal甲醛-溴化铵固定液（FAB）Orth固定液AAF固定液Brasil固定液Nawaschin’s固定液卡诺氏固定液，Carnoy Fluid Bouin固定液Muller固定液Bouin固定液,Bouin氏固定液B-5固定液Mirsky's固定液Zetterqvist固定液Aoyama固定液Methacarn固定液组织细胞固定液。

透射电镜固定液的选择和配方

固定液的选择和配方：1、缓冲液的配制：在配制固定液之前，应先配制缓冲液。

磷酸缓冲液的配制：磷酸二氢钠磷酸氢二钠 29g重蒸馏水加至500ml调pH至2 (灌注)固定液的配制4%多聚甲醛用磷酸缓冲液配制，重蒸馏水补足容积。

4%多聚甲醛+（%）戊二醛，以4%多聚甲醛+1%戊二醛为例，配方如下：磷酸缓冲液的配制 100ml25%戊二醛（电镜专用） 4ml重蒸馏水加到200ml多聚甲醛和戊二醛混合固定液：1.4%多聚甲醛+5%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。

冷却后加10 ml 25%戊二醛，再加15 ml PB,调pH备用。

此固定液中含多聚甲醛4%，戊二醛5%，属高渗液，但固定效果不错，尤其对细胞内的微管保存较好。

2.2%多聚甲醛+2%戊二醛：溶解1g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。

冷却后加4 ml 25%戊二醛，再加21 ml PB,调pH备用。

常规固定选用这种配方。

3.4%多聚甲醛+%戊二醛：溶解2g多聚甲醛于25 ml双蒸水中，80℃水浴，摇动使之溶化后加1-3滴1M NaOH，使溶液澄清。

冷却后加1 ml 25%戊二醛，再加24 ml PB,调pH备用。

推荐用作免疫电镜标本固定剂，对于抗原较强的标本，可将浓度降低到2%多聚甲醛+%戊二醛。

注意：多聚甲醛一瓶几十元，电镜专用戊二醛200左右，二者价格差距太大，因此，对于较大的动物要做电镜，灌注固定，则选择4%多聚甲醛+（%）戊二醛的混合固定液，这两种固定剂优缺点可以互相补充。

多聚甲醛与戊二醛相比，其渗透力强、固定迅速、价格低廉，它对细胞基质保存不如戊二醛，但对酶的活性保存好。

如果做免疫电镜或者电镜的细胞化学，则戊二醛浓度要低一些为好。

而且取材后固定的时间，方法也有讲究。

如果是个体较大的动物，也需要在具体试验中做一些处理，比如兔子，就可以只灌注头颈部。

常用细胞固定剂及其优缺点比较

常常使用细胞固定剂及其优缺点比较之袁州冬雪创作1、95%酒精：最常常使用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有需要颠末水洗.此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色.固定时间根据标本的分歧，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间.颠末95%酒精固定的标本，细胞核保管较好，布局清晰，颜色鲜艳.如果在95%酒精液内加入聚乙二醇更佳，可以呵护细胞免受空气干燥后的人工假象.2、乙醚酒精液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙醚有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应.长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂.所以现在已经逐渐被95%酒精所代替.3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保管较好，布局清晰，染色鲜艳.常作为穿刺细胞涂片的固定液.对抗原保管较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液.缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害.甲醇的毒性与其代谢产品甲醛和甲酸的蓄积有关.以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程,使膜内不克不及合成ATP,细胞发生变性,最后引起视神经萎缩.近些年研究标明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关. 4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用.不克不及沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白.渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用.5、无水酒精：对糖原保管较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定.6、丙酮：为易挥发的无色液体，有刺激性气体.可以使蛋白质沉淀，渗透性强，细胞收缩严重，对核的固定差.很少用于惯例细胞学的固定.广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定，也有人用于抗原的保管，作为细胞涂片免疫组化的固定液.丙酮具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害.7、Carnoy 固定液：配方：无水乙醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10mlCarnoy液能固定胞浆和胞核，尤其适宜于染色体等.常常使用于糖原及尼氏体的固定，由于冰醋酸能溶解红细胞并可防止细胞由酒精引起的过渡收缩，对固定有血的标本和显示DNA、RNA效果很好.缺点是每次固定后固定液内有大量的红细胞碎片和细胞脱落，必须及时过滤，否则容易造成污染.其次，氯仿具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害.8、10%中性缓冲甲醛液：配方1：40%甲醛10ml，0.01mol/L pH7.4的PBS90ml.配方2：40%甲醛120ml，蒸馏水880ml，磷酸二氢钠（NaH2PO4;H2O）4g，磷酸氢二钠（Na2HPO4）13g.10%中性缓冲甲醛液对大多数抗原保管较好，是免疫组织化学最常常使用的固定液，组织穿透性好，组织收缩较小.但此液体不适合固定湿固定的涂片，可作为干固定涂片和细胞蜡块的固定液.甲醛也具有挥发性和毒性.大量吸入会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛，也可发生支气管哮喘.常常吸入少量甲醛，能引起慢性中毒，出现粘膜充血、皮肤刺激症、过敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等.全身症状有头痛、乏力、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻以及植物神经紊乱等.。