东北枸杞多糖分离纯化及鉴定
枸杞多糖提取纯化和生物活性研究进展
和酶解辅助提取法等。 李 丹丹 等 采用 热 水提 取法 提取 枸杞 多糖 ， 确 定 最 佳工艺条件为 ： 料 液 比 １： ２ ７ ， 提取温度 ８ １℃ ， 提 取 时间 ２ ． ５ ｈ ， 得率可达 ５ ． ０ ３ ％。 汪琢等优化的最佳水提 醇沉提取枸杞 多糖工艺为 ：料液 比 １ ： ３ ５ ，温度 ９ ０ ｏ 【 ＝ ， ｐ Ｈ １ １ ， 浸提 ３ ｈ ， 提取 ２ 次， 合并提取液 ， 加３ 倍体 积９ ５ ％乙醇沉淀 ６ ｈ 时， 提取率为 １ ８ ． ５ ６ ％。 刘腾子等的研究结果表明： 影响枸杞多糖提取因 素 的主次顺序为超声 时间＞ 超声温度＞ 料液 比 ；最佳 工 艺 为超 声 温 度 ７ ０ ｃ Ｉ ＝ 、 超声时间 ５ ０ ｍｉ ｎ 、 料 液 比 １： ３ Ｏ ， 多糖 提取 率 ５ ． Ｏ ２ ％。 王月 囡等优 化 的微波 提取 最佳 条件 为 ： 微 波功 率 ４ ８ ０ Ｗ， 微波时间 ２ ０ ｍ ｉ ｎ ， 料液 比 １ ： ３ ０ ， 提 取 ２次 ， 微 波法提取多糖 提取率提高近 ４ ０ ％。王杉杉等以枸杞 多糖得率为评 价指标 ， 采用 （ 脂肪酶／ 蛋 白酶／ 纤维素 酶／ 果 胶 酶＝ １： １：１： １ ） 通 过正 交试 验确 定最 佳提 取 条件为 ： 料 液 比 １： ４ ０ ， 提取 温 度 ５ ０℃ ， 超声时间 ５ Ｏ ｍ ｉ ｎ ，复 合 酶 添 加 量 ０ ． ５ ％ ，枸 杞 多 糖 平 均 得 率
第１ １期 总 第 ２ ６ ９ 期
２ ０ １ ６年 １ １月
农 业科技 与装备
ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎｃ ｅ ＆Ｔｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｗ￣ ａ ｎｄ Ｅｑ ｕｉ ｐ ｍｅ ｎ ｔ
Ｎｏ ． １ １ Ｔ ｏ ｔ ａ ｌ Ｎｏ ． ２ ６ ９
枸杞多糖的提取与含量测定
注意事项
■ 在Sevag法中，可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效 果。
在进行枸杞多糖的定量测量的时候，一定要注意葡萄糖标准溶液 以及样品的用量，否则会造成较大误差，标准曲线的绘制中要用线 性回归进行拟合。
实验原理
易溶于水的多糖的提取 水提取多糖中的多糖大多是中性多糖。用水作溶剂来
提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
结合多糖的提取 结合多糖主要指黏多糖。以新鲜组织或丙酮脱水的组
织为原料，可用水或盐溶液提取部分多糖。但是，以为大 多数的黏多糖是与蛋白质结合的，需要用酶降解蛋白质部 分或用碱使多糖和蛋白质之间的糖肽键断裂，以促进黏多 糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织， 可将提取过程简化。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白 质沉淀剂沉淀，也可用其他方法进行多糖的提纯。
理是利用蛋白质变性沉淀而多糖不沉淀出去蛋白质。将样 品提取液与Sevag试剂按照5:1的比例混合，剧烈震荡后离 心除去变性的蛋白质，反复多次至蛋白质除尽为止。该方 法较为温和，配合蛋白质水解酶消化法使用效果更佳。
实验原理
蒽酮-硫酸比色法进行多糖的含量测定 糖类在较高温度下可被硫酸作用而脱水生成糠醛
实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
枸杞多糖的提取工艺流程
枸杞多糖的提取工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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枸杞多糖提取工艺的研究
枸杞多糖提取工艺的研究
枸杞多糖是一种天然的多糖物质，具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
因此，枸杞多糖的提取工艺研究备受关注。
首先，枸杞多糖的提取方法有很多种，如水提法、酸提法、碱提法、超声波提法等。
其中，水提法是最常用的方法之一。
其具体流程为：将枸杞浸泡在水中，然后将其加热至一定温度，过滤后得到浸提液，再用醇沉、离子交换层析等方法纯化得到枸杞多糖。
其次，影响枸杞多糖提取的因素有很多，如浸提温度、浸提时间、浸提液比、pH值等。
其中，浸提温度是影响提取率的关键因素之一。
一般来说，温度越高，提取率越高。
但是，过高的温度会导致多糖分解，从而影响其生物活性。
因此，在选择浸提温度时需要权衡提取率和生物活性。
最后，枸杞多糖的应用前景非常广阔。
它可以用于保健品、医药、食品等领域。
例如，在保健品中，枸杞多糖可以作为一种天然的抗氧化剂，对人体具有很好的保健作用。
在医药领域，枸杞多糖可以用于治疗肿瘤、心血管疾病等。
在食品领域，枸杞多糖可以作为一种天然的添加剂，增强食品的营养价值。
综上所述，枸杞多糖的提取工艺研究对于发掘其生物活性、拓展其应用领域具有重要意义。
未来，我们还需要进一步深入研究其提取工艺和生物活性，并探索其在更广泛领域的应用前景。
枸杞多糖的纯化及相对分子质量研究
Ｓ ｕ ｙ Ｏ ｕ ｉｃ ｔ ｎ ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｌｃ ｌｒ ｔ ｄ ｎ ｐ ｒ ｉａ ｉ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ａ ｄ ｍｏ ｅ ｕａ ｉｈ ｆ ｆ ｏ ｗｅｇ ｔＯ
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枸杞中多糖成分的分离和提取技术
枸杞的功效十分强大，《神农本草经》中记载，枸杞能补气益血，清肝明目。
在1981—2010年，一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷，据统计已经达到876种。
对于天然产物的分析检测而言，得率和纯度至关重要，因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时，确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。
现阶段，碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。
其中，热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。
然而，多糖中含有醛基等官能团，所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。
随着科学技术的不断进步，超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。
1 枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步，人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂，既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质，也含有离子盐等无机元素。
其中，枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。
然而，枸杞多糖多与蛋白质相结合，这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。
研究表明，枸杞多糖成分较为复杂，多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链（简单结构见图1），并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。
图1 简单多糖结构示意图2 多糖的提取分离方法2.1 多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在，对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。
现阶段，在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。
其中，粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解，最大限度的获取枸杞中的有效物质。
脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质，避免对后续处理工艺的干扰。
脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。
2.1.1 溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
其中，热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。
虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度，但是酸碱会影响多糖成分的活性，例如，溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构等，故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师：史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。
取得的主要研究成果如下：加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置一定时间（40-100min)，温度70-100摄氏度之间，功率（300-600w）。
取出过滤，取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。
枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取，提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后，为褐色絮状粉末固体。
确定最佳工艺：提取温度90 ℃；料水比1∶10(W∶V)，提取时间2h，功率600。
得出多糖再进行Sevage法脱蛋白，冷冻干燥后，为乳白色絮状粉末固体粗多糖。
在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。
枸杞粗蛋白含量6.98%关键词：微波搅拌，冷冻干燥，Sevage法脱蛋白，分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂，主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。
枸杞子中免疫活性成分的分离 纯化及物理化学性质的研究
二、蓝莓多糖的结构鉴定
二、蓝莓多糖的结构鉴定
蓝莓多糖的结构鉴定主要包括糖醛酸、鼠李糖和半乳糖醛酸的含量以及分子 量的测定。通过气相色谱法、高效液相色谱法和核磁共振法等技术可以完成这些 指标的测定。
三、蓝莓多糖的免疫活性研究
三、蓝莓多糖的免疫活性研究
蓝莓多糖具有免疫活性，可以调节机体的免疫功能。研究表明，蓝莓多糖可 以增强机体的免疫细胞活性，促进细胞因子的分泌，从而增强机体的免疫功能。 此外，蓝莓多糖还具有抗氧化作用，可以清除体内的自由基，保护细胞免受氧化 损伤。
三、蓝莓多糖的免疫活性研究
总之，蓝莓多糖具有许多生物活性，可以调节机体免疫功能和抗氧化作用， 因此对蓝莓多糖的研究具有重要的意义。未来，需要进一步研究蓝莓多糖的结构 与功能关系，以便更好地开发利用其药理作用。
参考内容二
内容摘要
枸杞子是一种常见的中药材，具有滋补肝肾、益精明目、润肺止咳等功效。 近年来，随着人们对健康的和中药材研究的深入，枸杞子的活性成分及分析方法 也得到了广泛的研究。本次演示将探讨枸杞子活性成分及分析方法的研究进展， 旨在为相关研究提供参考和启示。
内容摘要
目前，对于枸杞子活性成分的研究主要集中在枸杞多糖、甜菜碱、类黄酮等 方面。对于维生素等其他活性成分的研究相对较少。此外，尽管已经有一些研究 探讨了枸杞子的药理作用和临床应用，但仍需要更加深入的研究以进一步明确其 作用机制和效果。
内容摘要
当前枸杞子活性成分研究的创新点主要在于利用现代科学技术如基因组学、 蛋白组学等技术手段，从分子水平上探讨枸杞子的作用机制和活性成分的功能。 此外，一些研究还注重开发新型的枸杞子制剂，以满足不同人群和临床应用的需 求。然而，这些创新研究仍然面临一些挑战，如研究成本较高、实验样本量不足 等问题，需要进一步加以解决。
枸杞多糖分离纯化方法及分子机构的研究进展
紫外光谱法、毛细管电泳技术 红外光谱仪、液相色谱仪、 气相色谱仪、质谱、核磁共振 气质联用、
与蛋白质、核酸等生物大分子相似，多糖的结构也可分为一级、二级、三 级和四级结构。多糖的一级结构是指多糖的单糖残基组成、相邻糖基之间糖苷 键的连接方式、糖链的分支情况以及异头物的构型等。多糖的二级结构是指由 存在于多糖骨架各链之间的氢键作用所形成的各种聚合体，在二级结构的基础 上，通过进一步盘绕形成的空间构象，它排列有序且规则，即多糖的三级结构。 多糖的四级结构是指多聚链之间以非共价键作用力而形成的复杂结构.
（4）酶法
（5）超临界流体萃取法等。
水提醇沉法是目前最普遍使用的方法：
干燥，粉碎 枸 杞 枸杞多糖 粗粉 索氏提取 脱脂枸杞 多糖粗粉
热水浸提 枸杞多糖 提取液
过滤、旋转蒸发
真空干燥 粗枸杞 多糖 枸杞多糖 离心液
离心 枸杞多糖 层析液
醇沉 枸杞多糖 浓缩液
枸杞多糖提取工艺流程图
四、枸杞多糖的分离纯化方法
理化性质（一）
性状
白色略带棕色 絮状，纤维状 无味 吸湿性
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5
王建华通过SDS-不连续体系凝胶电泳法 测得LBP2a分子量为77482
王建华等用凝胶柱层析法和SDS-凝胶电泳法研 究表明所得各亚级分为分子量均一体，经检索5个 亚级分为新的枸杞多糖缀合物。
表1 5个亚级组分的特性 枸杞多糖 分子量 LBP1a LBP2a LBP3a 32399 77482 38385 中性糖含 半乳糖醛酸 蛋白质 量 所占比例 含量 89.6 69.3 56.2 6.4 23.8 35.4 3.1 5.3 4.8
枸杞多糖的提取与鉴定
枸杞多糖的提取与鉴定1242818杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。
生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
颜色的深浅可以作为定量的标准。
这一方法具有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定，所以可以作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适]1[。
实验试剂1.标准葡萄糖试剂：将葡萄糖105℃烘干至恒重（2h），准确称取50mg,无离子水定容至500mL,终浓度为0.1mg/mL.2.蒽酮-浓硫酸试剂：称取0.1997g蒽酮，溶于100mL浓硫酸，现用现配。
3.葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖]3[],2[4.硫代硫酸钠溶液，活性炭，正丁醇，无水乙醇，丙酮。
三氯甲烷，甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计，超速离心机，电炉，烧杯，试管，干燥器，滤纸，层析缸以及其他相关玻璃仪器实验流程(一) 提取枸杞干果粉碎，氯仿- 甲醇（2∶1）回流脱脂8~10 h 近无色，挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中，分3次加15、12、10 倍量的蒸馏水于90 ℃水浴提取，每次2 h；收集3 次的滤液减压浓缩至约200 mL，转移到大烧杯中，加4 倍量的95%乙醇，沉淀12 h 后抽滤，并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。
]4[（二）纯化多糖粗品加水溶解，4 000 r/min 离心10 min 后取上清液，加30%双氧水适量，40 ℃保温4～6 h 后，加三氯甲烷-正丁醇（4∶1，Sevag 法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步骤反复多次，直到无白色絮状沉淀出现。
将除去蛋白的多糖溶液浓缩后，转移到分子排阻为8 000～10 000 Da 的透析袋中，流水透析24 h 后，蒸馏水透析过夜，溶液颜色变淡，浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。
]4[(三) 理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。
另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用，于界面处观察颜色变化。
枸杞多糖的提取分离纯化
枸杞多糖的分离
酸性亚组分的分离 取WLBP4.0g溶于75mL蒸 馏水中，加入50mL十六烷基三甲基溴化铵，过 夜沉淀12h，然后以4000r/min、4℃离心 20min，收集沉淀。沉淀用10%NaCl溶解后， 加入3倍体积95%乙醇，产生沉淀，4000r/min、 4℃离心20min收集沉淀，蒸馏水溶解并透析3天， 冻干得WLBP。
ห้องสมุดไป่ตู้
材料预处理及提取方法 Sevage法脱蛋白 枸杞多糖的分离 枸杞多糖的纯化 成分分析结果
材料预处理
(1)粉碎 将枸杞子洗净晾干，再放入烘箱供至干透(烘箱温 度50℃，避免温度过高使之焦糊)。烘干后取出，冷却至 室温，然后用粉碎机将干燥的枸杞子粉碎，备用。 (2)脱脂 将粉碎的枸杞粉末置于大烧杯中，加入4倍体积 95%的乙醇，60℃水浴加热搅拌脱脂2小时，滤去乙醇， 重复脱脂3次，收集滤渣，晾干，装袋备用。
…
枸杞多糖的纯化 枸杞多糖的纯化釆用SephadexG-150色 谱柱层析法纯化多糖样品。填料为 SephadexG-150葡聚糖凝胶，层析柱规 格为2.5×50cm，用蒸馏水洗脱。选取冻 干后的WLBP组分40mg溶于5mL蒸馏水中， 上SephadexG-150色谱柱，用蒸馏水洗 脱，自动收集每管3mL。用苯酚-硫酸法检 测多糖含量，合并出峰管，浓缩，冻干， 得纯化多糖WLBP-I、WLBP-II
同学们好
枸杞多糖的提取、分离纯化及其 构成
枸杞
果实含枸杞多糖，甜菜碱、阿托品、天仙子 胺；另含玉蜀黍黄素、酸浆红素、隐黄质、 东莨菪、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生 素B1、 B2及C． 有增强非特异性免疫作用 、延缓衰老作用 、 抗肝损伤 、降血糖 、补肾功能 、保肝功 能 、抗脂肪肝作用 、对血压的作用 、抗 疲劳作用 、抗肿瘤作用 。
枸杞多糖的分离纯化及结构研究
枸杞多糖的分离纯化及结构研究张倩;张民;王超;杨帅;梁辰;吕晓玲【摘要】构杞子经提取,醇沉,得到枸杞水溶性多糖粗品(LBP).最佳乙醇沉淀添加量为50 mL浓缩液中添加80 mL体积分数95％乙醇;最佳乙醇醇沉时间为12h;Sevag法除蛋白次数为6次,脱除率为83.45％.枸杞粗多糖经DEAE-52纤维素(OH-)色谱柱、Sephedex G-50柱层析纯化后,得到LBP1和LBP2.采用紫外光谱扫描和Sephedex G-100柱层析鉴定LBP1和LBP2均为分子质量相对均一的组分.高效液相色谱检测LBP1和LBP2的相对分子质量分别为367和358.苯酚-硫酸法测得:LBP1和LBP2的中性糖含量分别为82.20％和74.50％;咔唑-硫酸法测得LBP1和LBP2的半乳糖醛酸含量为7.50％和14.30％.气相色谱测得LBP1的单糖组成摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.79∶1.00∶3.08;LBP2的单糖组成的摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.32∶ 1.00∶7.38.红外光谱测定结果显示,LBP1和LBP2均由吡喃糖构成.β消去反应检测得LBP1和LBP2与氨基酸是通过O-糖苷键相连.刚果红实验证明LBP1和LBP2均不存在三股螺旋结构.粒度实验表明,溶液酸碱度会影响构杞多糖的粒度分布.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)012【总页数】7页(P41-47)【关键词】枸杞多糖;分离纯化;结构分析【作者】张倩;张民;王超;杨帅;梁辰;吕晓玲【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457【正文语种】中文枸杞是我国的传统中药材，具有补肾养肝、清热凉血及益精明目等功能［1］。
枸杞多糖测定实验报告
一、实验目的1. 掌握枸杞多糖提取的基本原理和方法；2. 学习使用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量的操作步骤；3. 分析实验数据，评估枸杞多糖的含量。
二、实验原理枸杞多糖是一种生物活性物质，具有多种生物功能，如抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等。
本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，其原理是：在酸性条件下，多糖与苯酚反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与多糖含量成正比。
三、实验材料1. 材料与试剂：枸杞子、苯酚、硫酸、葡萄糖标准品、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、离心机、研钵等。
四、实验方法1. 枸杞多糖提取（1）将枸杞子洗净，晾干，研磨成粉末；（2）称取一定量的枸杞子粉末，加入适量蒸馏水，煮沸提取；（3）提取液过滤，取滤液备用。
2. 标准曲线制备（1）精密称取一定量的葡萄糖标准品，配制成不同浓度的溶液；（2）按照苯酚-硫酸法测定吸光度，以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 枸杞多糖含量测定（1）取一定量的枸杞多糖提取液，按照苯酚-硫酸法测定吸光度；（2）根据标准曲线，计算枸杞多糖的含量。
五、实验结果1. 标准曲线制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出回归方程为：y = 0.0018x + 0.0016，相关系数R² = 0.9988。
2. 枸杞多糖含量测定取一定量的枸杞多糖提取液，测定吸光度为0.521，根据标准曲线计算枸杞多糖含量为1.24mg/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用苯酚-硫酸法测定枸杞多糖含量，操作简便，结果准确可靠。
2. 在实验过程中，要注意控制提取条件，以确保提取液的纯度和含量。
3. 标准曲线的绘制是本实验的关键环节，应严格控制实验条件，保证标准曲线的准确性和可靠性。
4. 本实验结果初步表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有一定的生物活性。
七、实验结论本实验成功提取了枸杞多糖，并采用苯酚-硫酸法测定了枸杞多糖含量。
实验结果表明，枸杞中含有较高的多糖含量，具有潜在的开发价值。
枸杞多糖的分离纯化及其抗疲劳作用_罗琼
第29卷 第2期2000年 3月卫 生 研 究JO U RN AL O F HYG IEN E RESEA RCH V o l.29 N o.2M a r. 2000 115基金项目:湖北省自然科学基金(No.95J 25)作者简介:罗琼,女,博士,教授1 华中农业大学食品科学文章编号:1000-8020(2000)02-0115-03枸杞多糖的分离纯化及其抗疲劳作用罗 琼 阎 俊 张声华1湖北医科大学卫生学教研室,武汉 430071摘要:采用萃取、离子交换层析及凝胶层析从枸杞中获得枸杞多糖;将纯化的枸杞多糖(L BP -X )按5、10、20、50及100mg kg -1 d -1分别灌喂小鼠,进行抗疲劳实验。
结果表明,L BP-X 能显著地增加小鼠肌糖原、肝糖原储备量,提高运动前、后血液乳酸脱氢酶总活力;降低小鼠剧烈运动后血尿素氮增加量,加快运动后血尿素氮的清除速率,以L BP-X 10mg kg -1 d -1剂量组效果最佳。
提示L BP-X 对提高负荷运动的适应能力,抗疲劳和加速消除疲劳具有十分明显的作用。
但有其最适剂量,并非剂量越大效果越好。
关键词:纯化的枸杞多糖 抗疲劳中图分类号:Q 591.5 Q 949.777.7 文献标识码:AIsolation and purification of lycium barbarumpolysaccharides and its antifatigue effectLuo Qiong ,Yan Jun ,Zhang ShenghuaDepar tment of Hyg iene,Hubei M edical U niv e rsity ,W uha n 430071,ChinaAbstract :A purified co mponent o f ly cium bar ba rum polysaccha ride (LBP-X )was iso la ted fro m ly cium barbarum L .by DE AE ion-ex chang e cellulo se a nd sephacry l g el chro mato g raph y.LBP-X was tested o n fiv ediffer ent do ses (5,10,20,50and 100mg kg -1 d -1)in mice.The r esults sho w ed tha t L BP-X induced a re-mar ka ble a daptability to ex ercise lo ad,enha nced r esistance and accele rated eliminatio n o f fa tig ue.L BP-X could e nhance the stora ge o f muscle a nd liv er g lycog en,incr ea se the activity of LD H befo re and af ter swim-ming ,decrease the incr ease o f blood urea nitr og en (BUN )afte r strenuous ex ercise ,a nd accelera te the clea r-ance of BU N af ter exe rcise.The do sag e o f L BP-X 10mg kg -1 d -1wa s the best a mount a mong the fiv e test-ed do ses.Key words :purified lycium bar ba rum polysaccha ride,a ntifatig ue 近代医学及药理学研究证明,枸杞有免疫促进作用,枸杞多糖(lycium bar ba rum poly saccharides ,L BP )是枸杞促进免疫功能的有效成份[1,2]。
三相萃取法纯化枸杞多糖
三相萃取法纯化枸杞多糖文沛瑶;杜梦扬;吉文丽【摘要】利用三相萃取法可避开多糖的醇沉过程,达到短时间内分离多糖的同时,也可一定程度的分离子水提液中的蛋白质和黄酮的原理,本文采用此法分离枸杞多糖,考察了叔丁醇-(NH4)2SO4-水提液体系的三相萃取性质,研究了提取液中(NH4)2S04的添加量、叔丁醇添加量、萃取液pH、温度对枸杞提取液多糖、蛋白质、黄酮的萃取率的影响,并通过正交试验优化了多糖的萃取条件,研究发现:多糖最佳萃取条件是:10 mL提取液中(NH4)2SO4添加量为30％ (w/v)、叔丁醇添加量为10 mL、温度为35℃、pH为6,此时多糖的萃取率可达95.31％,蛋白质萃取率可达83.45％,黄酮萃取率可达50.66％.通过多糖的红外光谱、抗氧化活性实验可发现三相萃取法所得多糖与乙醇沉淀法所得多糖的化学结构,抗氧化活性均无太大差异.因此,该体系是一种可行的高效分离纯化枸杞多糖的绿色方法.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)008【总页数】6页(P131-135,144)【关键词】枸杞多糖;三相萃取法;抗氧化活性【作者】文沛瑶;杜梦扬;吉文丽【作者单位】西北农林科技大学林学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学风景园林艺术学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学风景园林艺术学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】TS201.1枸杞是一种传统的名贵药材,富含多糖、蛋白质、维生素等多种活性成分,枸杞多糖是枸杞中的主要活性成分,具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤,调剂免疫等功效[1]。
枸杞多糖的提取纯化过程是其开发利用的一个关键步骤,高效的多糖提取纯化方法可提高枸杞资源的利用率。
多糖的传统纯化方法为乙醇沉淀法,此法虽能提取出大量的多糖,但是往往存在醇沉不彻底的缺点,致使原料利用率降低,其次醇沉过程也存在耗时长、乙醇使用量大等问题[2]。
因此,寻求一种高效分离多糖的纯化方法显得十分必要。
枸杞多糖的测定
枸杞多糖的测定一、实验原理：用80%乙醇溶液提取以除去单糖，低聚糖等干扰成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分，多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度计法于适当波长处测其多糖。
二、仪器设备:可见光分光光度计，电炉，烘箱，回流装置，蒸馏装置等三、试剂配制：1.葡萄糖标准溶液:称取0.1g(精确到0.1000)105度混干恒重的样品，溶解后转移到1000ml容量瓶中，定容。
2.苯酚液：称取苯酚100g,铝片0.1g 碳酸氢钠0.05g与蒸馏瓶中，收集172度六份，称取溜出液10g 加入150ml蒸馏水。
四、实验步骤：1.样品的制备：称取0.4g样品用80%乙醇回流反应一个小时后，过滤，用热乙醇冲洗后用收集残渣，加蒸馏水100ml回流一小时后过滤收集滤液，转移至250ml 容量瓶中定容。
2.标准曲线的绘制：吸取配置好的葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml于试管中，加蒸馏水至2ml，加入苯酚液1ml，迅速加入硫酸5m后水浴锅煮沸15min。
等冷却后495纳米处测定吸光度。
另吸取2ml蒸馏水做空白试验。
3.试样的测定：吸取一定量的样品溶液，按标准曲线溶液方法配制后测吸光度。
五、测定结果的记录及计算：1.标准曲线的制定：葡萄糖标准液吸光度2.试样的检测：样品吸光光度值代入公式得x=59.6计算公式：W=(ρ×250×∫(3.19)/m×v×106)×100=19.8% (ρ:显色中葡萄糖的含量，单位为μg。
)检测结果：粗多糖含量为19.8%。
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沈阳农业大学学报，2009－10，40(5)：616-619Journal of Shenyang Agricultural University，2009－10，40(5)：616-619东北枸杞多糖分离纯化及鉴定常建红1，刘延吉1*，田晓艳2，王玉新3，王晓东3（1.沈阳农业大学生物科技学院，沈阳110161；2.辽宁石油化工大学环境与生物工程学院，辽宁抚顺113001；3.辽宁省分析科学研究院，沈阳110015）摘要：研究了东北枸杞多糖的提取、分离纯化及其组分和结构的鉴定，结果表明：枸杞多糖水提的最佳条件为提取温度100℃，pH 值11,料液比1:20，浸提2h；通过DEAE-SephadexA-50柱层析得到纯度较高的LBP-4，薄层分析LBP-4主要是由鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成。
红外光谱和刚果红实验分析LBP-4具有糖类的特征吸收峰，是多种单糖通过α糖苷键及β糖苷键连接组成的杂多糖，不具有三股螺旋结构。
关键词：东北枸杞；多糖；分离；纯化；鉴定中图分类号：G43；TP3文献标识码：A文章编号：1000-1700（2009）05-0616-04Isolation,Purification and Identification of Lycium barbarumPolysaccharide in Northeast AreaCHANG Jian-hong1,LIU Yan-ji1*,TIAN Xiao-yan2,WANG Yu-xin3,WANG Xiao-dong3(1.College of Bioscience and Technology,Shenyang Agricultural University,Shenyang110161,China; 2.Environmental Technology and Biotechnology College,Liaoning University of Petroleum and Chemical Technology,Fushun Liaoning113001,China;3.Liaoning Analytic ScientificAcademe,Shenyang110015,China)Abstract：Isolation,purification and identification of Lycium barbarum polysaccharide in northeasarea were studied in this paper. The result showed that the optimum extraction technology of LBP was the extraction temperature100℃，pH=11,ratio of material to water1:20,the extraction time2h.DEAE-SephadexA-50purification could obtain high purity LBP-4.The analysis of TLC indicated that LBP-4was mainly made up of Xyl.,Man.,Glu.and galactose acid.IR spectrum and Congo red analysis showed that LBP-4possessed the characteristics of carbohydrate absorption peak,which is a complex polysaccharides composed of sugars linking throughα-glucoside lindage andβglucoside without three spiral structure.Key words：Lycium barbarum in northeast；polysaccharide；Isolation；purification;identification枸杞具有滋补肝肾，益精明目的作用。
现代药理学认为枸杞多糖是枸杞中主要有效成分之一。
枸杞多糖是一种非特异性免疫增强剂，具有增强免疫力、抗癌、抗氧化、防衰老、增加造血功能、防止遗传损伤等作用[1，2]。
因此枸杞多糖可作为第三代功能性食品的功能因子，有很好的开发前景[3]。
东北枸杞有丰富的资源，但目前研究主要集中于宁夏枸杞，东北枸杞研究较少，尤其是对多糖组分及结构的鉴定还未见报道，本试验对东北枸杞多糖的提取、纯化及多糖组分和结构进行研究，以期为东北枸杞功能性开发提供参考。
1材料与方法1.1材料供试枸杞（Fructus Lycii）采自吉林长白山；供试DEAE-SephadexA-50（15cm×60cm）和SephadexG-100（15cm×60cm）购于Pharmacia公司；供试单糖标样、苯酚、石油醚（30～60℃）均为国产分析纯。
试验采用的仪器有：旋转蒸发仪N-1001型、循环水真空泵SHZ-D（Ⅲ）型、手持pH计、紫外可见分光光度计U-3010型、DHL-A 电脑恒流泵、SBS-100数控记滴自动部分收集器、冷冻干燥机、傅立叶红外光谱仪。
1.2方法枸杞多糖水提工艺流程为：枸杞干果→粉碎→石油醚脱脂2h→95%乙醇回流1h→80%乙醇回流1h→沸水收稿日期：2009-04-10作者简介：常建红（1980-），女，沈阳农业大学硕士研究生，从事植物次生物质研究。
*通讯作者Corresponding author:刘延吉（1957-），沈阳农业大学副教授，从事植物次生物质、细胞信号转导研究。
第5期浸提→抽滤→浓缩→醇沉→95%乙醇、无水乙醇、丙酮淋洗→50℃烘干→粗多糖。
枸杞粗多糖脱蛋白工艺为：采用Sevag 法与酶法联用的方法，先添加0.1%的木瓜蛋白酶，在pH 值6.5、50℃条件下酶解2h ，然后Sevag 法脱蛋白1次，测定蛋白质含量，醇沉烘干得脱蛋白枸杞多糖。
1.2.1粗多糖提取条件的优化采用热水浸提法，以多糖得率为指标，采用L 9（34）正交表考察料水比、浸提温度、提取时间和pH 值4因素对得率的影响，明确多糖提取较优试验条件。
1.2.2粗多糖的分离纯化采用DEAE-SephadexA-50柱层析分离，将脱蛋白枸杞多糖配成10mg ·mL -1溶液，上样10mL ，按任大明等的方法梯度洗脱、检测，透析后[5]，收集透析袋内的多糖溶液，真空浓缩，冷冻干燥得各亚组分纯品多糖。
将纯品多糖配制成1mg ·mL -1溶液，于200～400nm 进行全波长扫描的紫外光谱分析。
采用SephadexG-100凝胶柱层析法，将纯品多糖配成0.5mg ·mL -1上样，以苯酚—硫酸法检测多糖洗脱情况。
1.2.3枸杞多糖理化性质的鉴定考察枸杞多糖的理化性质，测定其溶解性，观察其碘反应、三氯化铁反应、硫酸咔唑反应、菲林试剂反应和考马斯亮蓝反应结果[4]。
1.2.4枸杞多糖组分分析准确称取纯品多糖10mg ，放入安瓿管中，加入2mol ·L -1的三氟乙酸(TFA)4mL ，封管，110℃水解6h ，40℃蒸干TFA ，加3mL 甲醇，蒸干，重复操作3次，除去TFA ，加1mL 蒸馏水复溶[5，6]，取10μL 水解液进行TLC 分析，展开剂为氯仿:冰乙酸:水（v/v/v ）=30:35:5，展开30min ，显色剂为苯胺一二苯胺一磷酸（2g二苯胺加2mL 苯胺,10mL85%磷酸，1mL 浓盐酸，100mL 丙酮溶解后摇匀置于棕色瓶中备用）。
枸杞多糖水解出的单糖组分即可显出不同的颜色，与鼠李糖等7种单糖标样的颜色和Rf 值对比，判断枸杞多糖组分。
1.2.5枸杞纯品多糖结构分析称取1mg 纯品LBP-4，加入100mgKBr 晶体研磨压片，于4000～400cm -1进行红外扫描。
称5mg 纯品LBP-4加入2mL 蒸馏水和2mL80μmol ·L -1的刚果红试剂，逐渐加入1mo1·L -1的NaOH ，使溶液中的NaOH 浓度由0mo1·L -1等梯度递增到0.5mo1·L -1，并进行紫外扫描，测得各NaOH 浓度下的最大吸收波长。
以NaOH 浓度为横坐标，最大吸收波长为纵坐标做图，考察三股螺旋结构。
2结果与分析2.1枸杞粗多糖脱蛋白结果及粗多糖提取条件的优化采用Sevag 法与酶法联用的方法脱蛋白效果很理想，脱蛋白率达86.8%。
由表1可以看出，pH 值对枸杞多糖得率影响最大，温度、料液比次之，提取时间的影响最小。
最佳提取工艺为A 1B 2C 3D 3，即在100℃下料液比1:20，pH 值11，提取2h ，多糖得率最高。
表1枸杞多糖提取条件L 9（34）正交试验结果Table 1The L 9（34）orthogonal experiment results of LBP extraction试管号Tube 123456789k 1k 2k 3RA 温度/℃Temperature 1（100）112（90）223（80）333.0943.0591.9371.157B 时间/h Time 1（1）2（2）3（3）1231232.6262.9682.4970.471C 料液比Material-water ratio1（1:10）2（1:15）3（1:20）2313122.2612.7353.0940.833D pH 值pH value 1（7）2（9）3（11）3122312.0292.4333.6291.600多糖得率/%Polysaccharide yield1.9203.1404.2243.9583.0602.1602.0002.7041.1062.2枸杞粗多糖的分离与纯化由图1可以看出，DEAE-SephadexA-50柱层析洗脱得到5个单一对称的洗脱峰，依次为水洗及各梯度NaCl 洗脱峰，分别命名为LBP-1、LBP-2、LBP-3、LBP-4、LBP-5，其中用0.25mol ·L -1NaCl 洗脱得到的多糖LBP-常建红等：东北枸杞多糖分离纯化及鉴定617··第40卷沈阳农业大学学报图1枸杞多糖DEAE-SephadexA-50凝胶柱层析洗脱曲线Figure 1Elution curve of LBP on DEAE-SephadexA-50column 图2LBP-4紫外扫描光谱Figure 2UV Spectrum of LBP-4图3LBP-4的SephadexG-100凝胶柱层析洗脱曲线Figure 3Elution curve of LBP-4onSephadex G-100column图4标准单糖及LBP-4薄层色谱图1.鼠李糖；2.果糖；3.半乳糖；4.半乳糖醛酸；5.甘露糖；6.葡萄糖；7.木糖；8.LBP-4Figure 4Thin-layer chromatograms of standardmonosaccharides and LBP-41.Rhamnose ；2.Fructose ；3.Galactose ；4.Galaturonic acid ；5.Mannose ；6.Glu ；7.Xylose ；8.LBP-44最多，占77.6%，其余较少，因此只对LBP-4做进一步研究。