利用BACTEC 960分枝杆菌分析系统对分枝杆菌进行快速菌型鉴定方法的研究
结核病的实验室诊断方法及评价
结核病的实验室诊断方法及评价耐多药结核病的实验室诊断条件：因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性，1）需P2及以上实验室，目前我院实验室条件基本具备即将投入运行，2）日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限，工作人员生物安全得不到保障，应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养，只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准，是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准，是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化，其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多，抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR 为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变，作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括：主要是DNA序列分析法，聚合链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP），另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明，检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变，但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷，检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
BACTEC MGIT 960快速培养及药敏在肺结核诊治中的应用评价
BACTEC MGIT 960快速培养及药敏在肺结核诊治中的应用评价彭亦平;谭彩萍;熊国亮【摘要】目的：探讨BACTEC MGIT-960全自动分枝杆菌检测技术在结核病诊断中的应用价值。
方法用BACTEC MGIT-960对1538例肺结核患者的痰标本进行分离培养及药敏实验，并与痰涂片抗酸染色及罗氏培养法对比。
结果 BACTEC MGIT-960培养阳性率为42.85%，显著高于涂片阳性率25.42%；BACTEC MGIT-960培养及药敏时间分别为12.5d和8.3d，显著短于罗氏培养法的34.6d和31.2d；BACTEC MGIT-960法与罗氏培养法总的培养及药敏符合率分别为91.02%（kappa=0.82）和96.02%（kappa=0.82），两者具有高度的一致性。
结论BACTEC MGIT-960培养及药敏技术是一种比较理想的快速结核菌检测方法，在肺结核诊治中具有良好的应用价值。
%Objective To evaluate the application of the BACTEC MGIT 960 system for mycobacterial culture and drug sus-ceptibility test in patients with pulmonary tuberculosis. Methods 1538 sputum samples from patients with pulmonary tuberculosis were collected for mycobacterial culture and drug susceptibility testing by BACTEC MGIT 960 system ,and compare with the result by L-J (Lowenstein-Jensen) culture method and sputum smear for acid-fast staining method. Results The positive rate of culture by BACTEC MGIT 960 system was42.847%,significantly higher than that of 25.42%by sputum smear method. The report time of culture and drug susceptibility testing by BACTEC MGIT 960 system were 12.5d and 8.3d,significantly less than that of 34.6d and 31.2d by L-J method. The results of culture and drug susceptibility testingby BACTEC MGIT 960 system and L-J method showed high coincidence (kappa=0.82). Conclusions BACTEC MGIT 960 system is a ideal rapid method for mycobacterial culture and drug susceptibility test and has good application value.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2016(000)001【总页数】3页(P21-22,30)【关键词】BACTEC MGIT 960;结核分枝杆菌;肺结核【作者】彭亦平;谭彩萍;熊国亮【作者单位】江西省胸科医院内三科，南昌 330000;江西省胸科医院内三科，南昌 330000;江西省胸科医院检验科，南昌 330000【正文语种】中文【中图分类】R521目前临床用于结核分枝杆菌检测的主要方法是痰涂片抗酸染色、L-J培养（慢培）及药敏试验。
综合医院 BD BACTECTMMGITTM 960仪快速分枝杆菌培养与医院感染控制
培养分枝杆 菌， 除 传 染科 外其 他 科 室执 行 危 急 值 报 告 制 度 确 保 医 疗 安 全 。方 法 收 集 临床 标 本 共 ５ ９ ６ 份， 根据不 同 的标本 ， 进 行 标 本 预 处理 后 ， 分别接种 于 Ｂ Ｂ Ｌ Ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ Ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ａ分枝 杆 菌 培 养 管 ， 放 入 全 自动 快 速 分 枝 杆 菌 培养仪（ Ｂ Ｄ ９ ６ ０ ） 培养 ， 并 将 标 本 同步 进 行 抗 酸 染 色及 接 种 血 平 板 。 经 培 养 ， 如仪 器报 警阳性 ， 且培 养物抗酸 染 色阳 性， 将培 养物 用 荧 光 聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ Ｃ Ｒ） 方 法 进 行 菌株 鉴 定 ， 鉴 定 分 为 结 核 分 枝 杆 菌 与 非 结 核 分 枝 杆 菌。 结 果 ５ ９ ６ 份Ｉ 】 盘 床标 本 中， 共培 养出 ６ １株 分 枝 杆 菌 ， 阳性 率 为 １ ０ ． ２ （ ６ １ ／ ５ ９ ６ ） ， 其 中结 核 分 枝 杆 菌 占 ８ ２ ． ０ ％（ ５ ０ ／ ６ １ ） ； 非 结 核 分 枝 杆 菌 占１ ８ ． ｏ （ １ １ ／ ６ １ ） 。全 自动 快 速 分 枝 杆 菌培 养仪 （ Ｂ Ｄ９ ６ ０ ） 阳性 标 本检 出 时 间较 快 ， 阳 性 标 本 最 早４ ｄ ， 平 均 检 出 时 间为 １ ０ ｄ 。结 论 综 合 医 院使 用 全 自动 快 速 分 枝 杆 菌 培 养 仪 （ Ｂ Ｄ９ ６ ０ ） 能快 速培养 分枝杆 茵， 做
ｔ ｈ ｅ ｎ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｉ ｎ ＢＤ９ ６ ０ ｉ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｍｅ ｎ ｔ ． Ａｌ ｌ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｙ ｎ ｃ ｈ ｒ ｏ ｎ ｏ ｕ ｓ １ ｙ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ａ ｃ ｉ ｄ — ｆ ａ ｓ ｔ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｉ ｎ ｏ ｃ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
痰液BACTECMGIT960快速结核菌培养对菌阴肺结核的临床诊断价值
痰液BACTEC-MGIT960快速结核菌培养对菌阴肺结核的临床诊断价值郭新枝 陈裕 于永敏 王志刚 陈永芳 冯悦静 杜兰霞 程俊伟 马铮李峰摘 要:目的 探讨痰液BACTEC-MGIT960快速结核菌培养对菌阴肺结核的临床诊断价值。
方法 采用BACTEC-MGIT960方法，对痰液进行快速培养，并与改良罗氏培养基进行比较，改良罗氏培养基进行药敏实验。
结果 BACTEC-MGIT960法快速培养对肺结核病人分支杆菌初代分离阳性率达65.3%,高于改良罗氏培养基57.7%(P<0.01)，差异有非常显著性。
平均阳性报告时间13.1天，明显短于改良氏培养基（30.15 天）。
对于常用的抗结核一线药物S、H、R单耐药菌株分别为22.5%（18/80）、12.5%（10/80）、3.8%（3/80），耐多药率（同时耐HR）达8.8%（7/80)。
结论 BACTEC-MGIT 960对菌阴肺结核痰液的检测具有高敏感性，有助于肺结核的诊断和治疗。
我市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重，在结核病防治工作中应给予充分重视。
关键词：结核，分支杆菌；痰，BACTEC-MGIT960；结核，肺目前，结核病临床诊断主要靠结核菌检测和胸部X线检查以及其他辅助检查。
由于胸部X线特异性不强，常给结核病的诊断和鉴别诊断带来很多误点。
结核菌的细菌学检测主要包括痰涂片和痰结核菌培养、药物敏感性实验及菌型鉴定。
优先控制传染源的现代结核病防治策略已将结核病的细菌学检测提到了一个新的高度。
痰涂片抗酸染色查找抗酸杆菌作为细菌学检测的常规手段之一，简便快捷是其优点，但检出率低而且标本的选取、涂片的质量以及显微镜检测速度等人为因素都会较大的影响痰检质量，阳性率仅30％左右［1］。
结核菌培养阳性是诊断结核病的金标准，然而改良罗氏培养基培养时间长，且工作量大。
为提高对肺结核病的早期诊断，BACTEC-MGIT960系统作为新一代产品，具有快速分离结核分支杆菌和其它分支杆菌的优势。
结核菌快速检测技术进展
1.前言从目前来看，结核病的发病率在最近几年内呈现出较为明显的上升趋势。
据世界卫生组织的统计数据来看，全球有超过20亿人不同程度感染了结核，并且每年还会出现890万新发结核菌病例，还有160万结核菌患者死亡[1]。
我国也是结核病高发国，发病人数居于全球第二，仅次于印度，每年会出现145万新发结核菌病例，还有20万结核菌患者死亡[2]。
通常而言，结核菌都是利用传统涂片镜检方法来予以检测，存在着较大的问题：培养时间需要60~90d ，且检出率不到35%[3]，给结核菌的诊断与治疗带来了较大的困难。
国外内医学界已经越来越重视结核菌快速检测技术，希望能够通过结核菌快速检测技术来提高结核菌的诊断率，以此达到尽快治疗的效果。
本文就结核菌快速检测技术进行进展。
2.液体培养技术在液体培养基中，结核杆菌的生长速度较快，且液体培养仅需要简单的操作设备即可，方法原理简单，世界卫生组织大量鼓励全球中低收入国家采用液体培养方法。
（1）分枝杆菌快速手工培养技术将荧光指示器镶嵌在肉汤培养基试管底部，若指示器发出橙色荧光，那么就说明存在着结核菌，通过对比含抗结核药管与生长对照管的荧光情况就可获得细菌药敏情况与生长情况。
分枝杆菌快速手工培养技术检测精确（检出率高于90%），方法有效、简单，只需7~14d 就可得到检测结果[4]。
（2）The BACTEC MGIT960自动培养技术The BACTEC MGIT960自动培养技术的检测原理与分枝杆菌快速手工培养技术相似，但需要由仪器来自动控制荧光信号的读取，但是其最大的问题在于：一次性设备投入较大，应用面较窄[5]。
（3）The Bac T/Alert 3D 系统技术The Bac T/Alert 3D 系统技术采用改良7H9 Middlebrook 肉汤培养基，将比色传感器镶嵌在试管底部，试管对二氧化碳（由细菌代谢产生）的检测灵敏度较高，试管颜色的变化可通过The Bac T/Alert 3D 系统技术来予以24h 实时持续检测，待试管的颜色变为黄色之后，那么说明确实存在着结核菌。
结核分枝杆菌实验室检测方法
结核分枝杆菌群
• 结核分枝杆菌，是人和动物结核病的病原体，包 括人结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）、牛分支杆菌（M.bovis）、非洲 分支杆菌（M.africanum）和田鼠分枝杆菌 （M.microti），前三种对人类治病，其中人型结 核分枝杆菌感染发病率最高。
6
生物学形状
结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有时可见 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的 作用可出现多形态，如球状、串珠状或丝状， 大小为1～4X0.4μm。
细胞壁中含有大量脂质而不易着色，特别是有 大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，一般 用抗酸染色。萋尼染色呈红色，背景为蓝色； 荧光染料金胺“O”染色，荧光显微镜下为橘黄色
培养特性
培养基
• 营养要求高，必须在含血清，卵黄，马铃薯，
甘油及无机盐类的特殊培养基上生长，常用的 有罗氏固体培养基
• 专性需氧，3%-5%CO2能促进其生长最适温 培养条 度为35-37℃，最适pH为6.5-6.8
件
• 菌落粗糙型，表面干燥成颗粒状，不透明，乳
菌落特 点
白色或淡黄色，菜花样
8
实验室检测方法
基于rpoB（利福平）和katG/inhA（异烟肼）的基因突变，对
耐多药结核病做出快速诊断。
➢ 通 量：两个一线抗结核药（MDR） ➢ 速 度：8周（药敏） 6 小时 ➢ 灵敏度：103 个菌/反应
24
五种结核检测方法效果评价
涂片法
MGIT 960 快速培养
斑点层析法
结核组：1260例
非结核组：100例
分子生物学检测方法
实时荧光PCR与BACTEC MGIT960快速培养在初治痰涂片阴性未受抗结核治疗的肺结核诊断中的应用
结果 ， 有客观 、 确、 作简单 和廉价等 优点 ， 具 精 操 具有较好 的 临床应用前景 ， 血常 规分析 中同时提供 Ｖ Ｓ相关参数 ， Ｃ 可帮
助 了解疾病的进展 ， 将有助 于疾病 的正确 、 及时诊治 。
［ 金艳 慧， ９］ 王明 山， 丽红 ， 中性粒细胞体 积 、 杨 等． 浆核 复杂性在
［ ］ 王晓冰 ， ７ 朱小春． 细胞凋亡在 系统性红斑狼疮 发病机制 中的作 用 ［ ］ 国际内科学杂志 ，０ ７ ３ １ ）７ ０７ ３ Ｊ． ２ ０ ，４（２ ：２ －２ ． ［ ］ 龚非力 ， ８ 主编． 医学 免疫 学 ［ ． ２版 ． 京 ： 学 出版社 ， Ｍ］ 第 北 科
参 考文 献
［ ］ 林 向阳， １ 朱小春． 风湿免疫性疾病 的检 验诊断 ［ ． Ｍｊ 北京 ： 民 人
出版 社 ，０ ６ １ ５１０ ２ ０ ：２ —４ ．
感染和应激性疾病 中的变化及意义 ［］ 中华检验 医学 杂志 ，０ ９，２ Ｊ． ２０ ３
（ ）３ ６３ ２ ３ ：２ －３ ． （ ０ １１－１收 稿 ） ２ １ —０２
ｎ ｅａ ｌ ｎ ｉ ｏ ｒａｕｅ ａｔ ｉ ｉ ｃｉ Ｊ ． ｍ ｌ Ｐ ｔ ａ ｄｒｌ ｂｅｉｄｃｔ ｓ ｏ ｃ ｔ ｂ ｃ ｒ ｎｅｔｎ［ ］ Ａ ＪＣｉ ａ ， ｉ ａ ｒｆ ｅａ ｆ ｏ ｌ ｎ ｈ
２０ ，１４（ ） ４ ０ ４ ０ ５ ２ ３ ： ４ ４４ ．
会 引起 淋 巴细胞 形 态学 改变 。
［ ］ Ｃ ａｅ ，Ｔｅ ３ ｈｖｓＦ ｉｍｏＢ，Ｘ ． ｕｎｉ ｔ ｅｄｔｒ ｎｔ ｎｏ ｅｌ — ｕＤＳ Ｑ ａｔａｉ ｅ ｍｉａｏ ｆ ｕｘ ｔｖ ｅ ｉ ｕ ｏ
结核病实验室快速诊断方法的研究
738
55. 5
25
75
100
75
荧光定量 PCR
358
380
738
48. 6
0
100
100
1 00
P P < 0. 01
3 讨论
分枝杆菌快速培养检测技术[2 ] :可早期报告结 果。
59
2 结果
用 3 种方法检测对 738 例结核病患者及 100 例 非结核呼吸系统疾病患者临床标本的结果见表 1。 结果显示 ,738 例结核病患者的检测结果经χ2 检验 ,
结核抗体检测 法阳 性率 明显高于荧光定量 PCR 检 测法 ; 荧 光 定 量 PCR 检 测 法 阳 性 率 明 显 高 于 BACTEC TB 960 快速培养法 。100 例非结核呼吸系 统疾病患者的检测结果经χ2 检验 ,结核抗体检测法 特异性明显低于荧光定量 PCR 检测法 。
[ 关键词 ] 结核分枝杆菌 ;实验诊断 ;快速培养 ;结核抗体 ;荧光定量 PCR [ 中图分类号 ] R378. 91+ 1 [ 文献标识码 ] A [文 章编 号 ] 16732016x(2007) 0220058202
结核病 (tuberculosis ,TB) 主要是由结核分支杆菌 感染引起的疾病 ,全球现有结核病人 2 000 万人 ,每 年约有 900 万新增患者 ,而且有 300 万人死于这种 疾病 ,是单一病因死亡最多的传染病 。根据最近一 次卫生部组 织的结核病流行病学 抽样调查结 果显 示 :日前我国有 4 亿人感染过结核杆菌 ,现有的传染 性结核病人达到 200 万人 。结核病人数居世界第 2 位。
长期以来 ,结核病的实验室诊断方法主要依赖 : 涂片抗酸染色镜检 、结核菌培养法 。结核菌培养法 是病原体检测的“金标准”,精确可靠 ,特异性高 ,可 同时做药敏试验和菌群鉴定 。但所需时间长 ,一般 为 4～8 周 ,且对早期感染者不易检出 ,失去了早发 现早治疗的良机 ,严重的影响了结核病的及时诊断 。 因此. 结核的快速 、准确诊断尤为重要[ 1] 。
三种检测结核分枝杆菌方法的应用评价
三种检测结核分枝杆菌方法的应用评价摘要目的评估荧光二极管（LED）直接涂片法、酸性罗氏培养法、Bactec MGIT 960培养法检测结核分枝杆菌临床应用价值。
方法317例临床确诊结核病患者痰样本，每例痰样本均分为3份，分别采用LED直接涂片法、酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960培养法进行检测，比较三种方法培养阳性率，以及阳性率较高的两种检测方法培养所需时间、污染率。
结果317例痰液标本中，Bactec MGIT 960培养法、酸性罗氏培养法阳性率均高于LED直接涂片法阳性率，差异具有统计学意义（χ2=97.71、44.69，P＜0.01）；Bactec MGIT 960培养法阳性率显著高于酸性罗氏培养法，差异具有统计学意义（χ2=11.80，P＜0.01）。
酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960培养法的检出时间分别为33.0 d（25.0～40.0 d）、14.0 d（9.0～18.0 d），比较差异有统计学意义（Z=-19.601，P＜0.01）。
317例痰液标本中，酸性罗氏培养法污染率为4.7%（15/317），Bactec MGIT 960培养法污染率为5.0%（16/317），比较差异无统计学意义（χ2=0.03，P>0.05）。
结论Bactec MGIT 960培养法可以显著提高培养阳性率、缩短培养时间。
关键词结核分枝杆菌快速培养；Bactec MGIT 960系统；酸性罗氏培养据世界卫生组织报告2014年全球共有150万人因结核病死亡。
我国传染病监测信息系统肺结核报告发病数近几年均位居甲、乙类传染病的第二位。
结核病细菌学检查是结核病诊断和治疗方案的主要依据。
然而现有的结核病实验室诊断方法远不能满足临床诊治的需要，建立快速、敏感、特异的诊断方法，对于结核病防治工作具有重要意义[1]。
Bactec MGIT 960系统培养是结核杆菌快速培养的新技术，采用荧光二极管直接涂片（简称LED直接涂片法）及酸性罗氏培养法和Bactec MGIT 960快速培养三种检测方法对确诊的结核患者的痰液标本进行检测，比较评价三种检测方法的应用价值。
三种检测方法诊断分枝杆菌感染的效果分析
结核病是由结核分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒ⁃
杆菌（ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ，ＮＴＭ） 引起的疾病
最多的单一病原体所致的传染病，也是全球十大死因
果不能及时准确鉴定极易造成误诊［２］ ，并且大多数
ｃｕｌｏｓｉｓ，ＭＴＢ）引起的一种慢性疾病，是全球死亡人数
素（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ，ＦＡＭ） 和六氯荧光素（ ｈｅｘａｃｈｌｏ⁃
ｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ，ＨＥＸ）通道，荧光采集点选择 ６０ ℃ ３０ ｓ。
样本扩增曲线呈 Ｓ 型，且循环阈值（ Ｃｔ 值） ＜ ４０ 判定
为阳性，扩增曲线不呈 Ｓ 型或 Ｃｔ 值≥４０（或无任何数
值）判定为阴性。 ＦＡＭ 通道阳性，ＨＥＸ 通道阳性或阴
ＰＢＳ） 至约 ５０ ｍｌ，盖紧盖子，混合后以 ３ ０００ ｇ 离心
１５ ｍｉｎ，去上清液，加 １ ～ ３ ｍｌ ＰＢＳ 悬浮沉淀，加 ０ ５ ｍｌ
悬浮液至提前加入 ０ ８ ｍｌ 分枝杆菌培养添加剂的分
枝杆菌培养管中，使用 ＢＡＣＴＥＣ ＴＭ ＭＧＩＴ ＴＭ ９６０ 全自
动分枝杆菌培养监测仪进行检测。 仪器报阳后用萋
１ ４ ２ ＰＣＲ⁃荧光探针法 严格按照试剂说明书进
行操作，首先在无菌杯内加入等量的 ４％ ＮａＯＨ 溶
ｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｏｆ ｔｈｅ １０４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ
ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ， ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＢＤ９６０ ｌｉｑｕｉｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ
利用960系统快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的可行性研究
利用960系统快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的可行性研究陈小蓉;张侠;施旭东;范群【期刊名称】《中国防痨杂志》【年(卷),期】2008(030)001【摘要】目的探讨应用BACTEC MGIT 960系统的分枝杆菌生长指示管(Mycobacter Growth Indicator Tube,MGIT)加入对硝基苯甲酸(ρ-Nitro benzoic Acid,PNB)区分结核分枝杆菌复合群(MTBC)与非结核分枝杆菌(NTM)的可行性.方法用含PNB MGIT检测5株标准分枝杆菌菌株的体外抑菌浓度,并对111株临床分离菌株与传统改良罗氏(L wenstein-Jensen,L-J)PNB鉴定进行比较.结果以PNB300 μg/ml为界,111株临床分离菌株PNB MGIT法与L-J PNB的菌群鉴定相比较符合率为90.09%;鉴定结果报告平均7.72 d,与L-J PNB法比较有显著性差异,检测时间明显缩短(P＜ 0.001).结论应用960系统PNB MGIT法鉴定分枝杆菌菌群的方法快速、准确、实用.【总页数】3页(P40-42)【作者】陈小蓉;张侠;施旭东;范群【作者单位】江苏省南京市胸科医院,南京,210029;江苏省南京市胸科医院,南京,210029;江苏省南京市胸科医院,南京,210029;江苏职工医科大学,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.应用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的研究 [J], 王桂荣;付育红;梁倩;尚媛媛;姜广路;赵立平;于霞;陈素婷;黄海荣2.分子杂交法快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的初步评价 [J], 于霞;尚媛媛;赵立平;董玲玲;马异峰;王晓波;黄海荣3.分子杂交法快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的初步评价 [J], 于霞;尚媛媛;赵立平;董玲玲;马异峰;王晓波;黄海荣;4.应用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌 [J], 孟祥红;匡铁吉;董梅5.应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分枝杆菌 [J], 李敏;吕淑陶;赵源;谢琴;胡忠义;尹俊;王玉炯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
痰涂片法与BACTEC MGIT 960 痰培养法检测分枝杆菌结果比较
痰涂片法与BACTEC MGIT 960 痰培养法检测分枝杆菌结果比较摘要】目的对临床样本制备涂片进行抗酸染色可对结核病进行预期诊断，同时经培养分离的分枝杆菌也可以提供是肺结核还是由除结核分枝杆菌之外的分枝杆菌（MOTT 杆菌）或非结核分枝杆菌（NTM) 导致的疾病进行确定诊断。
高达50-60% 的临床样本制备的涂片显示阴性，而AFB 培养为阳性。
因此，培养技术在分枝杆菌疾病诊断中起到关键作用。
结果痰涂片阳性率为35%，960 培养阳性率为58%（290/500），960 污染率为2.8% 结论 960 分枝杆菌培养对分枝杆菌的检出优于痰涂片法【关键词】痰涂片分枝杆菌【中图分类号】R730.43 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）38-0109-01结核病至今仍为重要的传染病。
估计世界人口中1/3 感染结核分枝杆菌。
据WH O 报道，每年约有800 万新病例发生，至少有300 万人死于该病。
我国建国前死亡率达200-300 人/10 万，居各种疾病死亡原因之首。
实验室在探讨应用简便可靠的方法快速检出结核菌方面取得了很大成绩，加强快速培养方法的广泛普及已成为实验室提高阳性率，为结核病的早期诊断、治疗和预防提供可靠依据的重要一环。
［1］1 资料与方法1.1 一般资料500 例痰标本来自2013 年1 月～ 2013 年 6 月我院肺结核就诊患者。
初诊时取患者夜间痰、清晨痰和即时痰3 份痰标本，治疗或随访患者应按期留取2 份标本（晨痰、夜间痰）。
痰标本采集方法：夜间痰—痰检前一晚患者咳出的痰液；清晨痰—患者晨起立即清水漱口，而后咳出的第2、3 口痰液；即时痰—深呼吸后咳出的痰；采集标本的容器：螺旋盖痰盒，容器上贴有条形码。
标本的性状：多为干酪状、血痰、黏液痰。
1.2 痰检方法实验方法首先进行抗酸染色镜检，然后进行960 培养。
1.2.1 涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10 mm 以上的距离；加热固定( 在5 秒钟内将玻片经过火焰加热4 次)。
MGIT960分枝杆菌液体快速培养前处理方式的临床评价
MGIT960分枝杆菌液体快速培养前处理方式的临床评价吕纯芳;张涛;卢留珠;郑文斌【摘要】目的探讨原装进口配套试剂、传统常用的4%氢氧化钠前处理液与手工配制的NaOH-NALC前处理液对分枝杆菌液体快速培养指标的影响,建立一种适合国内现状的分枝杆菌液体快速培养前处理方法.方法通过原装进口样本前处理液、4%氢氧化钠样本前处理液、手工配制的NAOH-NALC对五类抗酸染色级别不同的痰标本进行培养前平行处理,观察不同前处理方法分枝杆菌培养阳性率、平均报阳天数及污染率并进行试剂成本核算.结果三种前处理方法阳性率一致.原装进口试剂组和NAOH-NALC手工配制组平均报阳时间为8天,两组没有明显区别,而4%氢氧化钠样本处理组较另两组平均报阳天数要长,统计学差异显著(P<0.01).三种处理方式的污染率差别不具有统计学意义.平均每例耗材花费情况原装进口试剂组86.00元、4%氢氧化钠样本处理组73.50元、NAOH-NALC手工配制组77.30元.结论 NAOH-NALC手工配制组相较4%氢氧化钠组明显缩短了分枝杆菌快速培养的报阳天数,污染率无差别,而相比原装进口试剂组耗材花费经济便宜.因此NAOH-NALC手工配制前处理方式适合成为MGIT960分枝杆菌液体快速培养前处理首选方式.%Objective To establish a pretreatment method for mycobacterium tuberculosis rapid culture in the domestic situation and to discuss the effect on indicators of the rapid culture for mycobacterium tuberculosis com-paring the pretreatment methods which include original imported kit, traditional 4% sodium hydroxide pretreatment solution and handcrafted NaOH-NALC pretreatment liquid. Methods Parallel pretreatment culture of the five level of acid fast staining sputum were through original imported kit, traditional 4% sodium hydroxide pretreatment solution andhandcrafted NaOH-NALC pretreatment liquid. The positive reporting days, positive rate, contamination rate and reagent cost were analyzed. Results The positive rate of the three methods were consistent. There was no significant difference between the original import reagent group and the NAOH-NALC preparation group. The average positive re-port time was 8 days. The average positive report days of the 4% sodium hydroxide group was longer, which was sta-tistically significant difference with the other two groups ( P<0. 01 ) . The pollution rate of the three treatments was not statistically significant. The average cost of each case was 86. 00 Yuan in the original import reagent group, 73. 50 Yuan in the 4% sodium hydroxide group, and 77. 30 Yuan in the handcrafted NaOH-NALC group. Conclu-sion Compared with the 4% sodium hydroxide group, the positive report days of rapid culture of mycobacterium in the handcrafted NaOH-NALC group is significantly reduced and the pollution rate has no difference, but the average cost in the handcrafted NaOH-NALC group is cheaper than the original import reagents group. Therefore, the hand-crafted NaOH-NALC pretreatment method is suitable to become the preferred pretreatment method of MGIT960 Myco-bacterium liquid rapid culture.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2017(022)003【总页数】4页(P520-523)【关键词】分枝杆菌;快速培养;前处理;MGIT960系统【作者】吕纯芳;张涛;卢留珠;郑文斌【作者单位】518054 广东深圳,深圳市南山区慢性病防治院;518054 广东深圳,深圳市南山区慢性病防治院;518054 广东深圳,深圳市南山区慢性病防治院;518054 广东深圳,深圳市南山区慢性病防治院【正文语种】中文结核分枝杆菌的培养技术一直以来都作为结核病诊断的“金标准”。
BACTEC MGIT 960分枝杆菌分析系统结果分析
BACTEC MGIT 960分枝杆菌分析系统结果分析易松林;谭云洪;欧阳晖【期刊名称】《实用预防医学》【年(卷),期】2008(15)3【摘要】目的评价美国BD公司生产的BACTEC MGIT960分枝杆菌分析系统(960)快速分离分枝杆菌效果。
方法采用BACTEC MGIT960分枝杆菌分析系统对临床标本进行分析,同时用《结核病诊断细菌学检验规程》[1]规定的中性改良罗氏培养基法(L-J法)进行平行对照,比较其对不同来源的样本中分枝杆菌的分离率、阳性报告时间。
结果对1449份标本用960和传统的中性改良罗氏培养基进行平行接种,960培养的阳性率为32.9%(482/1449),传统的L-J法培养的阳性率为25.5%(370/1449),前者明显高于后者(χ2=61.65,P<0.005)。
960的污染率为2.3%,L-J法的污染率为6.5%,前者明显小于后者(χ2=29.42,P<0.005)。
阳性报告时间方面,14d内支纤镜提取物(BF液)晚于其它标本;而对链霉素(STR)、异烟肼(INH)、利福平(RIF)和乙胺丁醇(EMB)全耐药菌株早于其它耐药菌株。
结论应用BACTECMGIT960系统分离培养分枝杆菌可以明显提高分离分枝杆菌的阳性率和减少污染。
【总页数】3页(P877-879)【关键词】BACTEC;MGIT;960系统;分枝杆菌;阳性率;污染率【作者】易松林;谭云洪;欧阳晖【作者单位】湖南省结核病防治所【正文语种】中文【中图分类】R378.91【相关文献】1.BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养鉴定药敏仪的动物实验模型分析 [J], 李洪敏;吴雪琼;金光莆;郑忠国;阿布杜;解放军第2.BACTEC MGIT960系统快速培养分枝杆菌的效果评价 [J], 张涛;吕纯芳;卢留珠;刘守江;黄映东;赵锦3.Bactec MGIT960系统与改良罗氏培养基法用于培养分枝杆菌的比较 [J], 陈晓;杨青;徐根云;孔海深4.BACTEC MGIT 960系统与改良罗氏培养基抗酸分枝杆菌药敏结果的评估 [J], 陈小蓉;张侠;茅惠娟5.BACTEC MGIT960系统结核分枝杆菌药物敏感测定功能评价 [J], 卿克勤;秦进;周小平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
用BACTEC 460 TB系统快速检测分枝杆菌
用BACTEC460TB系统快速检测分枝杆菌
叶惠芬;陈蕃
【期刊名称】《上海医学检验杂志》
【年(卷),期】1993(008)001
【摘要】本文报道用BACTEC 460 TB系统检测402份疑为结核患者的痰、尿等标本，同时用改良罗（Lowenstein)氏培养基作常规培养，籍以比较两法检出分枝杆菌的阳性率和检出时间。
BACTEC系统检出率（17．9％）明显高于常规培养法（6．7％）。
结核杆菌检出时间平均为10天，非典型分枝杆菌为6．1天；而用改良罗氏培养基分别为21天和17天。
因此，用BACTEC 460 TB系统具有敏感性高，检出时间较快速的优点。
【总页数】3页(P29-31)
【作者】叶惠芬;陈蕃
【作者单位】广州市第一人民医院，510180;广州市第一人民医院，510180【正文语种】中文
【中图分类】R446.5
【相关文献】
1.应用BACTEC 460 TB系统区分出的非结核分支杆菌进一步菌种鉴定意义的探讨[J], 赵亭;潘欣
2.Bactec—460—TB系统7H12B培养基再利用可行性的观察 [J], 潘欣;郭丽萍
3.Bactec TB-460系统7H12B培养基再利用可行性实验观察 [J], 廖光付;李世立;蓝红;蒋翠荣
4.BACTEC460—TB自动快速检测结核菌的临床应用及评价 [J], 林健雄;郑崇辉
5.用Bactec TB460快速培养阳性的菌液直接进行分枝杆菌菌种鉴定 [J], 张滢蓉;吴小珍;景玲杰
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分枝杆菌快速检测方法及其应用
分枝杆菌快速检测方法及其应用翁绳凤;刘威【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2012(017)001【摘要】目的本研究旨在探讨MGITTM荧光判读器快速检测分枝杆菌方法；探讨其应用价值.方法对104例初治肺结核患者和30例健康对照痰标本进行常规涂片后,无论涂阴或涂阳,分别采用传统罗氏法(以下简称LJ),荧光判读器法(以下简称MMGIT)及MGITM960自动培养系统(以下简称AMGIT)进行培养与检测,并对结果进行比较和评价.结果 104例结核患者中,涂片阳性55例(阳性检出率52.88％),三种培养方法检测结果分别为MMGIT阳性65例(阳性检出率62.50％),AMGIT 阳性67例(阳性检出率64.42％),LJ阳性62例(阳性检出率59.62％).30例健康对照涂片和培养均为阴性.MMGIT比LJ平均报阳时间早9.47天；其最短报阳时间比LJ快5天.与AMGIT相比,平均阳性时间晚1.56天.结论荧光判读仪检测法是一个快速敏感的分枝杆菌检测方法；与MGITM960快速培养法功效一致,且经济实用,简单方便.值得基层结防机构临床应用.【总页数】2页(P73-74)【作者】翁绳凤;刘威【作者单位】100095北京,北京老年医院检验科;100095北京,北京老年医院检验科【正文语种】中文【相关文献】1.结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值 [J], 康丽军;洪峰;冯建兵;刘威;吴华;易俊莉;王甦民2.结核分枝杆菌噬菌体快速检测方法的临床应用评价 [J], 卿克勤;韩敏;乐军3.一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用 [J], 叶魏;方筠;韩晓辉;阎俊;章琪;曾艺雄;徐剑;张跃建;孟成艳4.海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌二重PCR检测方法的建立及应用 [J], 武迪;陈世玖;王成;龙航;杨军;刘珑玲5.牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌三重PCR快速检测方法的建立[J], 杨莉;唐远江;余国富;邹茂华;吴位珩;余波;张涛;姜玲玲;刘镜;杨丽娟;孙启跃;徐景峨;龙玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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虽然我们国家正在实施结核病控制策略 ,但分 枝杆菌 (包括结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌 )的 感染率和发病率仍居高不下 。临床迫切要求实验室 提供快速 、准确的实验报告 。而目前 960系统只能 进行分枝杆菌的快速分离培养和药敏试验 ,无法同 时进行快速菌型鉴定 ,如果采用 L2J 培养基法 ,一般 耗时 4周 , 无法及时满足临床要求 。本 文根据《结 核病 诊 断 细 菌 学 检 验 规 程 》[ 1 ] 利 用 噻 吩 22 2羧 酸 ( TCH) 、对硝基苯甲酸 ( PNB )对分枝杆菌快速菌型 鉴定的方法作了初步的研究 。可以将分枝杆菌药敏 试验与菌型鉴定同时进行 ,菌型鉴定报告结果的时 间与药敏试验相近 ,较好的解决了临床上面临的问 题。
[关键词 ] 分枝杆菌 ;菌型鉴定 ; BACTEC MGIT 960系统 [中图分类号 ]R 378191 [文献标识码 ]A [文章编号 ]1673 - 016x (2008) 01 - 0042 - 03
Stud y on Id en t if ica t ion of G r ou p in M ycoba cter ia
[摘要 ] 目的 :探索一种快速的分枝杆菌菌型鉴 定方法 。方 法 :用 BACTEC 960分枝 杆菌系 统 ( 960)和 传统的 改良罗 氏 培养基法 (L 2J法 ) ,对分枝杆菌标准菌株及临床分离菌株 ,同时进行菌型鉴定的对照研究 ,确定本法进行菌型鉴 定的最佳药 物 浓度及具体优势 。结 果 : 本 法进 行快 速 菌型 鉴定 所 需药 物浓 度 为 : 噻 吩 222羧 基肼 ( TCH ) 510μg/mL ,对硝 基 苯甲 酸 ( PNB ) 500μg/mL。进行快速菌型鉴定所需时间平均为 617天 ,较 L 2J法平均提前 2313天 。结论 :本法明显缩短了分枝杆菌进行菌型 鉴定的时间 ,为临床对 分枝 杆菌感染的菌型提供快速的诊断依据 ,并及时 指导 临床 用药 。
湖南师范大学学报 (医学版 ) 2008, 5 ( 1)
42
J Hunan Norm al Univ(M ed Sci)
利 用 BACTEC 960分 枝 杆 菌 分 析 系 统 对 分 枝
3
杆菌进行快速菌型鉴定方法的研究
易松林 ,谭云洪 ,欧阳辉
(湖南省结核病防治所 ,湖南 长沙 410013)
Y I Song2lin, TAN Yun2hong, OUYANG Hui
( Hun an P rovincia l Ins ititu te of TB, Cha ngsh a 410013, Ch ina )
[ Abstra ct] O bject ive To propose a rapid m ethod to culture and identify m ycobacteria from clinic positive sample s. M ethods The op tim al drug concentration for the identification of m ycobacte ria was investigated using BACTEC M GIT 960 system. For comparison, the L 2J m ethod was carried out at the same tim e. R esults The op ti2 m al drug concentration: PNB (500μg/mL) and TCH ( 250μg/mL). The tim e for identifying m ycobacte ria wa s 617 days using BACTEC M G IT 9601 It is quicker 2313 days than L2J m ethod. C onc lusion The proposed m ethod shortened the tim e for the identification of m ycobacte ria and for antituberculous drug suscep tibility te sting.
2 实验方法
211 称取一定量的 TCH,用无菌水将 TCH 配制成 浓度为 62215、500、415、20715、83μg/mL的溶液 。 212 称取一定量的 PNB ,用 4N, N 2二甲基甲酰胺将 PNB 配 制 成 浓 度 为 62250、50000、41500、20750、 8300μg/mL的溶液 。 213 按《结核病诊断细菌学检验规程 》[ 1 ] 制作最终 含 TCH510μg/mL和含 PNB500μg/mL的 L2J 培养基。 214 将新鲜的 L2J 培养基上的 H37 RV 菌株和临床 分离菌株制作成相当 015 麦氏单位的菌悬液 ,并将 此菌液作 1∶100稀释 ,此菌液和 960系统分离阳性 菌株菌液作为 A液 ,将 A 液按 1∶10稀释作为 B 液 。 215 将 OADC营养液 018mL加入到 M GIT培养管中 。 216 将浓度为 83、20715、415、62215μg/mL的 TCH 溶液分别加 入到 M GIT培养 管中 , 每管 011mL, 使 TCH最终浓度分别为 1、215、510、715μg/mL。将浓 度为 8300、20750、41500、62250μg/mL 的 PNB 溶液 分别加入到 M GIT培养管中 ,管 011mL,使 PNB 最终 浓度分别为 100、250、500、750μg/mL。最终浓度分 别为 500、750μg/mL的 PNB 加入到 M GIT培养管的 过程中会产生少许沉淀 ,过后会溶解 ,不影响试验 。 217 将 A液分别加入到含 TCH1、215、510、715μg/ mL 的 M GIT培养管和含 PNB 浓度为 100、250、500、 750μg/mL的 M GIT培养管中 ,每管 015mL; 将 B 液
3 收稿日期 : 2007 - 12 - 28 作者简介 : 易松林 ( 1965 —) ,男 ,湖南长沙人 ,主管技师 ,主要从事临床检验工作 。
利用 BACTEC 960分枝杆菌分析系统对分枝杆菌进行快速菌型鉴定方法的研究 易松林等
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菌菌株 ,为湖南省结核病防治所门诊和住院病人经 L2J 培养或 960系统快速培养分离的菌株 。 117 L2J 法菌型鉴定培养基 ,实验室自配 。
1 试验材料
111 M GIT 培 养 管 , 含 7mL7H11 液 体 培 养 基 及 OADC营养液 ,美国 BD公司产品 。 112 药敏试管架 ,美国 BD公司产品 。 113 TCH (噻吩 222羧酸肼 )、PNB (对硝基苯甲酸 ) , 中国疾病预防控制中心结核病临床中心国家参比室 提供。 11பைடு நூலகம் N , N2二甲基甲酰胺 , 分析纯 (AR ) 级 ,国药集 团化学试剂有限公司产品 。 11 5 H37 RV 标准菌株 ,中国疾病预防控制中心结核 病临床中心国家参比室提供 。 116 临床分离的结核 、牛结核菌株和非结核分枝杆