PEI 转染法
pei质粒转染的原理
pei质粒转染的原理pei质粒转染是一种常用的基因转染方法，用于将外源基因导入到目标细胞中。
本文将从pei质粒转染的原理、优势和应用等方面进行详细介绍。
一、pei质粒转染的原理pei质粒转染是通过聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）作为转染剂，将外源基因导入到目标细胞中的一种方法。
PEI是一种阳离子聚合物，具有良好的DNA结合能力和细胞膜穿透性，能够有效地介导基因转染。
pei质粒转染的原理主要可以分为以下几个步骤：1. 形成PEI-DNA复合物：将DNA质粒与PEI按照一定的比例混合，形成PEI-DNA复合物。
PEI能够与DNA形成稳定的复合物，使DNA得到保护并提高其稳定性。
2. 细胞摄取复合物：将PEI-DNA复合物添加到目标细胞培养基中，复合物通过电荷相互作用和细胞表面受体的介导，被目标细胞摄取。
3. 转染效率：PEI-DNA复合物进入细胞后，通过内吞作用进入细胞质，进而释放出DNA。
DNA在细胞质中能够被细胞核摄取，从而实现外源基因的导入。
4. 基因表达：外源基因在细胞核中被转录和翻译，从而使目标细胞表达外源蛋白。
二、pei质粒转染的优势pei质粒转染具有以下几个优势：1. 高效性：pei质粒转染能够实现较高的转染效率，使外源基因能够快速稳定地导入目标细胞。
2. 适用性广：pei质粒转染适用于多种细胞类型，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞和植物细胞等，具有较强的通用性。
3. 无毒性：PEI是一种天然聚合物，相比其他转染剂如病毒载体和化学试剂，具有较低的毒性和免疫原性，对细胞生存和功能影响较小。
4. 稳定性好：PEI-DNA复合物能够保护DNA不受酶降解和环境因素的影响，提高外源基因的稳定性。
三、pei质粒转染的应用pei质粒转染在生物学研究和基因治疗等领域具有广泛的应用。
1. 功能基因研究：pei质粒转染可以用于外源基因的过表达、沉默或敲除等功能研究，帮助研究人员揭示基因在细胞生理和病理过程中的作用机制。
PEI转染技术
PEI法瞬时转染HEK-293F悬浮培养物细胞于37℃，150rpm下，CO2恒温箱中的振荡器平台上悬浮生长。
在进行转染之前，请保持5-7代的培养物，以确保稳定的生长模式。
HEK293悬浮细胞（Freestyle™293-F细胞，Life Technologies，目录号R790-07）于Freestyle™293表达培养基（Life Technologies，货号12338026）中培养。
细胞量应维持在4 x 105和3 x 106细胞/ml之间，体积不超过培养瓶总体积的20％。
最佳旋转速率由每种培养瓶类型和培养量确定。
Life Technologies的Freestyle™293-F细胞在更高的密度和体积下容易结块。
聚乙烯亚胺（PEI）（25 kDa线性PEI，Polysciences，Inc.，目录号23966）在含有25mM HEPES和150mM NaCl（pH 7.5）的缓冲液中以1 mg/ml的浓度制备成母液。
PEI添加到缓冲液，并涡旋振荡，直至完全溶解（这可能需要花费数分钟的涡旋时间）。
一旦完全溶解的PEI可以使用0.22 µM注射器过滤器进行无菌过滤，分装后在-20℃冷冻直至需要。
为了获得最佳的转染效率，细胞在转染时应具有> 95％的活力。
转染前24小时，使细胞分裂增殖至约1 x 106细胞/ml的密度，并在37°C CO2培养箱中振荡过夜。
转染时细胞密度应为约2 x 106细胞/ml。
转染应以2.5 x 106至3.0 x 106细胞/ml的细胞密度进行。
使用血球计数器对细胞计数，并调低足够的体积，以2.5 x 106细胞/ml的密度将细胞重悬在新鲜的293F Freestyle Media中，并以所需的体积进行转染。
转染前将细胞重悬于新鲜培养基至关重要。
条件培养基含有抑制转染的代谢产物。
细胞应在室温下以1200 rpm旋转10分钟。
转染24小时后，将转染产物以1：1稀释，即转染的初始体积是所需最终体积的一半。
pei质粒转染的原理
pei质粒转染的原理
PEI（聚乙烯亚胺）质粒转染的原理主要包括以下几个步骤：
1. PEI与质粒DNA的结合：PEI是一种阳离子聚合物，通过
静电相互作用，可以与质粒DNA形成PEI/DNA复合物。
PEI
的阳离子部分与DNA的阴离子部分结合，形成稳定的复合物。
2. 复合物与细胞的结合：PEI/DNA复合物通过静电相互作用
与细胞表面的负电荷结合。
复合物的阳离子部分与细胞表面的阴离子部分相互吸引，从而使质粒DNA能够与细胞紧密结合。
3. 质粒DNA进入细胞：由于PEI/DNA复合物与细胞膜结合，并且细胞膜是由磷脂双层组成，磷脂双层中的磷脂分子有一部分是带负电荷的。
PEI/DNA复合物与细胞膜结合后，可以引
发细胞膜的变性和破裂，从而使质粒DNA能够进入细胞质。
4. 质粒DNA的释放：一旦质粒DNA进入细胞质，PEI的作用就会逐渐减弱，质粒DNA会被释放出来。
质粒DNA可以进
入细胞核，与细胞的核酸进行相互作用，从而实现外源基因的表达和功能。
需要注意的是，PEI质粒转染虽然简单易行，但由于PEI会引
发细胞毒性反应，因此在实验过程中需要控制PEI的浓度和转染时间，以最小化对细胞的伤害。
此外，PEI转染的转染效率
一般较低，因此在许多情况下，需要通过如改变PEI与DNA
的比例、优化细胞培养条件等方法来提高转染效率。
转染实际PEI(Polyethylenimine)的配置
配制1mg/ml的PEI储液
1.PEI(Polyethylenimine)来自于Polyscience.
2.用水溶解粉末，用氢氧化钠NaOH调节pH至7.0（待溶液变澄清后才能进行调节，最后
10ul的加，由于PEI缓冲能力比较弱，此步需要特别谨慎，切不可调过）。
溶解可能需要用几小时（实际却是很容易溶解），建议每次配100ml，这样可能比较好溶解。
3.定容，使的终浓度为1mg/ml。
4.0.22um滤膜过滤。
必不可少：除菌，除去不溶解的PEI
5.分装成0.2-1ml，储存于-80℃，一旦溶解，工作液存放在4℃，可以保存数月，两个月
之后，需要密切注意转染效率，如果转染效率下降，弃去并拿一管新的。
6.为进一步优化PEI的转染效率，可以初期经行探索，建议DNA/PEI（1:1,1:2,1:3），选择最
佳比例进行后期实验。
线性 PEI MAX 40K 转染说明书
线性PEI MAX40K转染说明书化学名：线性聚乙烯亚胺，线性PEI，聚乙烯亚胺，线性，MW40000，转染级订货号＃：49553-93-7规格：1g品牌：BIOHUB CAS＃：49553-93-7分子量：40,000（~22,000自由基）溶于：水不溶于：常用有机溶剂（乙醇，丙酮，四氢呋喃）外观：白色至灰白色自由流动的固体处理：手套和通风橱储存：在室温下避光干燥储存PEI MAX40K（在游离碱中也称为PEI22K）是一种功能强大，值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。
在HEK293和CHO大多数表达系统中，PEI MAX都能提供稳定的高表达（96孔板至100L生物反应器）。
现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEI MAX进行细胞转染，因为相对于大多数转染试剂而言PEI MAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低最少40%。
PEI MAX比更PEI25K易于使用，并且比PEI25K有更高的转染效率，通常PEI25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备，而PEI MAX40K可在两小时内完成整个转染过程。
另外，PEI25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，而PEI MAX40K的丙酰基完全脱落，意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。
PEI25K（KE1075）和PEI MAX40K（KE1098）的比较配置：1：称取100mg PEI MAX，加新鲜的细胞级别的水90ml，搅拌溶解。
2：调整pH值至7.0，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。
转染操作流程：◆瞬时转染方法1.接种细胞：转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。
调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。
2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。
PEI细胞转染液使用方法(标准版)
PEI细胞转染液是一种广泛应用于实验室的转染试剂，用于将外源DNA或RNA 转染到细胞中。
以下为PEI细胞转染液的标准使用方法：一、准备工作1. 细胞：选择合适的细胞类型，如HEK293、CHO等。
确保细胞状态良好，密度适中。
2. 转染试剂：PEI细胞转染液。
3. 外源DNA或RNA：需转染的基因或表达载体。
4. 实验器材：离心机、显微镜、培养皿、移液器等。
二、操作步骤1. 细胞培养：将细胞接种于适当的培养皿中，用含适当抗生素的培养基培养细胞。
将培养皿放入37℃、5% CO₂的培养箱中，进行细胞培养。
2. 转染液制备：根据实验要求，将PEI细胞转染液按照一定比例稀释。
一般情况下，可以使用10倍稀释的PEI细胞转染液。
3. 转染操作：（1）将稀释后的PEI细胞转染液与外源DNA或RNA混合均匀。
（2）用移液器将混合液滴加到细胞培养皿中，注意不要直接将液体倒在细胞上，以免破坏细胞。
（3）将培养皿轻轻摇晃，使转染液与细胞充分接触。
然后将培养皿放入培养箱中，继续培养。
4. 转染后处理：转染后的细胞需要继续培养，观察转染效果。
根据实验要求，可使用荧光显微镜、实时定量PCR等方法检测转染效果。
三、注意事项1. 操作过程中，应确保实验器材干净无菌，避免污染。
2. 转染过程中，应控制转染液的浓度和滴加速度，避免对细胞造成过度刺激。
3. 转染后，注意观察细胞状态，如出现异常情况，应立即处理。
4. 实验过程中，应遵循实验室安全规定，确保人身安全。
以上为PEI细胞转染液的标准使用方法。
实际操作过程中，可能因实验条件、细胞类型等因素而有所调整。
在实际应用中，请根据具体情况进行操作。
聚乙烯亚胺转染剂的制备
聚乙烯亚胺转染剂的制备一、前言聚乙烯亚胺（PEI）是一种常用的转染剂，被广泛应用于基因转染、蛋白质转染等领域。
其优点包括高效、可逆性强、不毒性等。
本文将详细介绍聚乙烯亚胺转染剂的制备方法。
二、材料与设备1. 聚乙烯亚胺（PEI）2. 无水乙醇3. 磷酸盐缓冲液（PBS）4. 甲酸5. N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS）6. 1-乙氧羰基-3-(3-二甲氨基丙基)卡巴泊烷（EDC）7. 离心管8. 磁力搅拌器9. 紫外可见分光光度计三、制备方法1. PEI的溶解将PEI加入无水乙醇中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌至完全溶解。
此时可以根据需要调整浓度。
2. 活化NHS与EDC将NHS和EDC加入PBS中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌至完全溶解。
此时可以根据需要调整浓度。
3. 聚合反应将活化的NHS和EDC缓慢加入PEI溶液中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌反应2小时。
反应结束后，离心沉淀，用PBS洗涤去除未反应的NHS和EDC。
4. 甲酸处理将沉淀物加入甲酸中，使用磁力搅拌器在室温下搅拌30分钟。
此步骤可以去除PEI中的杂质。
5. 洗涤与干燥将沉淀物用PBS洗涤3次，离心干燥即可得到PEI转染剂。
四、注意事项1. PEI转染剂制备过程中要注意无菌操作。
2. 制备过程中要避免暴露于光线下，以免影响反应结果。
3. 制备过程中要注意安全，避免接触到有毒或刺激性物质。
4. 制备完成后要储存在冰箱内保存。
五、结论本文详细介绍了聚乙烯亚胺转染剂的制备方法。
通过以上步骤，可以得到高纯度、高效的PEI转染剂，为基因转染、蛋白质转染等领域的研究提供了重要的支持。
PEI纳米颗粒基因转染技术方法
PEI纳米颗粒基因转染技术方法首先是PEI纳米颗粒的制备。
PEI是一种有机阳离子聚合物，在水中具有较高的阳电荷密度。
PEI纳米颗粒的制备可以通过简单的混合PEI和DNA溶液的方法进行。
其中，PEI溶液需要调节pH值和浓度以实现最佳的转染效率。
制备好的PEI纳米颗粒通常具有较小的粒径和正电荷表面。
接下来是DNA载体的包裹。
将需要转染的基因载体DNA与PEI纳米颗粒进行混合，使DNA能够被PEI包裹。
这样可以保护DNA不被降解，同时也可以提高基因的转染效率。
包裹过程主要是通过静电相互作用和疏水相互作用完成。
较小的PEI纳米颗粒和较长的PEI链段在包裹DNA过程中起到了减缓荷电面间排斥和增加静电相互作用的作用，提高了包裹效率。
然后是转染细胞。
将包裹好的DNA-PEI纳米颗粒复合物加入到目标细胞中，使得基因能够进入目标细胞内。
PEI纳米颗粒具有阳离子表面电荷，可以与细胞膜上的阴离子磷酸基团结合。
这种吸附作用使得DNA-PEI纳米颗粒能够与细胞膜紧密结合，并进入细胞内。
最后是基因转染效率的评价。
基因转染效率的评价可以通过检测转染细胞中的报告基因表达水平来进行。
常用的方法包括荧光显微镜观察、流式细胞术和蛋白质检测。
通过定量分析报告基因的表达水平，可以评估PEI纳米颗粒基因转染技术的转染效果。
PEI纳米颗粒基因转染技术的原理主要是通过PEI纳米颗粒与DNA的静电相互作用和疏水相互作用来包裹DNA，并利用PEI纳米颗粒的阳电荷与细胞膜的阴电荷结合，使得DNA能够进入细胞内。
PEI纳米颗粒具有较小的粒径、高正电荷密度、良好的生物相容性和易于制备的优点，被广泛应用于基因转染研究和生物医学领域。
综上所述，PEI纳米颗粒基因转染技术是一种重要的基因传递方法，具有较高的转染效率和良好的生物相容性，可应用于基因治疗和基因功能研究等领域。
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PEI转染法
材料：
质粒DNA
指数生长的真核细胞
PEI（聚乙烯亚胺）
1×HBS（pH7.4）
配方：
PEI储存液（100μM）：称取125mg PEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm滤膜过滤，储存于4℃备用。
1×HBS（pH7.4）：将8.76g NaCl溶解于900ml超纯水，加入20ml1M的HEPES，调pH值到7.4，定容至1L，过滤（0.2μm滤膜）后储存于4℃备用。
方法：
1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。
根据细胞贴壁情况于的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。
转染含5％CO
2
前换入2mL预热的无血清培养基。
2.制备PEI-DNA混合物：以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。
准备两支1.5mL离心管，一管将质粒DNA（总量2-8μg为佳）加入240μL HBS 中，混匀。
另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM，充分混合。
然后取180μL10μM PEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混匀后室温静置20-30min。
最后将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀，置于含5％～7％CO
的37℃温箱
2
孵育。
注：每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀，保证所取的浓度一致。
3.培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基，继续培养，16h左右
可以观测到报告基因的表达。