金龟子绿僵菌MicroRNA在蝉蜕和蚕血淋巴诱导下的差异表达分析

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金龟子绿僵菌致病的分子机理研究进展

金龟子绿僵菌致病的分子机理研究进展刘颖;殷从松【摘要】金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一类重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中起着重要作用.与化学农药相比,昆虫病原真菌开发的真菌杀虫剂作用时间持久、无环境污染、对非靶标生物安全,但存在致死时间长,杀虫效率低,防效不稳定等缺点,严重阻碍了真菌杀虫剂的广泛应用,为解决这一问题,从分子水平揭示昆虫病原真菌的致病机理尤为重要.从分子水平阐述了金龟子绿僵菌对寄主的识别与粘附、绿僵菌侵染寄主过程中附着胞的形成、绿僵菌对寄主体壁的穿透机制和绿僵菌进入寄主血淋巴后的适应机制.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2010(038)010【总页数】5页(P96-100)【关键词】金龟子绿僵菌;致病分子机理;基因工程【作者】刘颖;殷从松【作者单位】重庆大学,生物工程学院,重庆,400000;重庆大学,生物工程学院,重庆,400000【正文语种】中文【中图分类】S476.12绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一种应用广泛的杀虫真菌，其系统分类地位争议较多，目前大家认可的是半知菌亚门(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomycetes)绿僵菌属(Metarhizium)[1]。

金龟子绿僵菌侵染过程主要分为4个阶段：绿僵菌对寄主的识别与粘附，附着胞形成，分泌水解酶类穿透寄主表皮，适应寄主血淋巴环境并在多重机制下致死昆虫。

由于金龟子绿僵菌对寄主昆虫的致病力较强，田间防治效果好，对人畜和环境安全，人们对其寄予厚望。

多年来，国内外学者对绿僵菌在分子水平上进行了大量研究，取得了许多重大成果。

但另一方面,同细菌、病毒杀虫剂相似,金龟子绿僵菌也存在杀虫效果慢、受环境影响较大和效果不稳定等弱点，因而一定程度上限制了真菌杀虫剂的大规模应用。

因此,有必要弄清昆虫病原真菌侵染寄主过程中的分子机制,从而有目的地通过基因工程手段对生产菌株进行遗传改良,获得高效工程菌,加速真菌杀虫剂的产业化步伐。

金龟子绿僵菌MaECM33基因的克隆及分析的开题报告

金龟子绿僵菌MaECM33基因的克隆及分析的开题报告一、选题背景和意义金龟子绿僵菌是一种重要的拟南芥拟南孢菌，具有重要的生物学意义。

绿僵菌MaECM33基因是一种编码酵母菌膜蛋白的基因，已被证明在细胞膜形成和维护中起重要作用。

然而，目前关于绿僵菌MaECM33基因的研究仍然有限。

因此，对绿僵菌MaECM33基因的克隆、表达及功能分析具有重要的研究意义。

二、研究内容1. 绿僵菌MaECM33基因的克隆和序列分析。

2. 绿僵菌MaECM33基因的表达检测和基因功能研究。

三、研究方法1. PCR扩增：使用绿僵菌Aspergillus nidulans的基因组DNA为模板，设计MaECM33基因的特异性引物，采用PCR技术进行扩增。

2. 克隆与构建表达载体：将PCR扩增产物进行酶切，使用T4 DNA连接酶将酶切产物与pET-28a(+)质粒酶切后进行连接，构建MaECM33基因表达载体。

3. 表达重组蛋白：将载体转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中，使用IPTG诱导表达重组蛋白。

4. 纯化重组蛋白：采用Ni2+亲和层析法对目的蛋白进行纯化。

5. 纯化蛋白的SDS-PAGE分析：使用SDS-PAGE技术对纯化后的重组蛋白进行分析。

6. 绿僵菌MaECM33基因的功能研究：通过体外蛋白功能实验和基因敲除实验研究MaECM33基因的生物学功能。

四、预期结果1. 成功克隆绿僵菌MaECM33基因。

2. 成功表达和纯化绿僵菌MaECM33重组蛋白。

3. 研究绿僵菌MaECM33基因的功能。

五、研究意义绿僵菌是一种重要的拟南芥拟南孢菌，其研究对于理解真菌的生长发育及繁殖机理具有重要意义，也可为绿僵菌的应用与开发提供理论基础和实验基础。

同时，本研究对酵母菌膜蛋白基因的研究也可为酵母菌细胞膜形成和维护的研究提供参考。

[3]绿僵菌的研究现状及进展

自从1879年梅契尼柯夫最先从奥地利金龟上分离到金龟子绿僵菌以来，已有100多年的历史。

近20年来，随着巴西和澳大利亚广泛使用金龟子绿僵菌防治甘蔗和牧草害虫取得较大进展，以及在非洲用黄绿绿僵菌（Metarhizium flavoviride ）防治蝗虫实验的初步成功，借助于分子生物学技术和基因工程技术的大规模使用，人们在关注绿僵菌的同时，对它的研究领域也在不断深入。

1绿僵菌属的系统分类现状自Sorokin 于1883年建立绿僵菌属Metarhizium 以来，先后发表10余个种，由于不同作者采用的标准不一致，故分类状况比较混乱，目前国际上广泛接受的分类观点是Tulloch 建立的，他将绿僵菌属定为2个种，包括金龟子绿僵菌和黄绿绿僵菌，金龟子绿僵菌包括小孢变种和大孢变种［1］。

近年来，国内相继发表多个新种，但由于对其特征描述不尽完善收稿日期：2009－04－20基金项目：国家科技支撑计划项目（2007BAD30B03）；广西科学研究与技术开发计划项目（桂科基0778006－8）；广西农业科学院科技发展基金项目［2006004（Z ）］作者简介：丁苗苗（1984－），女，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事农业昆虫与害虫防治研究工作。

绿僵菌的研究现状及进展丁苗苗1，于永浩2，3，曾涛2（1广西大学农学院，南宁530005；2广西农业科学院植物保护研究所，南宁530007；3华南农业大学资源环境学院昆虫学系，广州510640）摘要：介绍了近年来国内外在绿僵菌的分类、分离与鉴定方法、生物学特性和应用等方面的研究进展，指出绿僵菌在分子系统学研究、基因遗传育种、剂型的改进和扩大防治对象上已取得较大的进展，但与Bt 等杀虫微生物的研究相比还有较大差距。

提出应加强对高毒力绿僵菌菌株的筛选；在防治害虫时尽量减少湿度、紫外线以及土壤微生物和土壤物理、化学性质等对绿僵菌防效的影响，以提高绿僵菌对靶标害虫的防治效果。

关键词：绿僵菌；分类；分离鉴定；生物学特性；应用；研究进展中图分类号：S476+.12文献标识码：A文章编号：1002－8161（2009）11－1443－05Current situation and development research onMetarhizium spp．DING Miao－miao 1，YU Yong－hao 2，3，ZENG Tao 3（1Agricultural College ，Guangxi University ，Nanning 530005，China ；2Plant Protection Institute ，Guangxi Academy ofAgricultural Sciences ，Nanning 530007，China ；3Department of Entomology ，College of Resources and Environment ，South China Agricultural University ，Guangzhou ，Guangdong 510640，China ）Abstract ：The present study summarizes the researches on classification ，separation and identification method ，bio-logical characteristics and applications of Metarhizium spp．，at China and abroad during recent years．Recently ，the molec-ular systemic research ，genic inheritance breeding ，improving dosage formulation and enlarging control objects in Metarhizium spp．made a great progress ，but there is still a large gap compared to that of insecticidal microorganism such as Bt ．Therefore ，the screening of highly toxic strain of Metarhizium spp．should be explored ，and the influence of humidi-ty ，ultra－violet radiations ，soil microorganism ，and soil physical and chemical characteristics affecting Metarhizium spp．should be studied to enhance the controlling effects of Metarhizium spp．on target insect pests．Key words ：Metarhizium spp．；classification ；separation ；identification ；biological characteristics ；application广西农业科学2009年第40卷第11期1443··广西农业科学2009年第40卷第11期和各自所依据分种标准不一，因此也出现了对本属的鉴别性状和颜色变化幅度等特征的描述不够明确具体的现象。

不同微生物诱导家蚕蛹血淋巴抑菌活性分析

第57卷第10期广东蚕业 V ol.57,No.10 2023年10月GUANGDONG CANYE Oct . 2023·1·DOI ：10.3969/j .issn .2095-1205.2023.10.01不同微生物诱导家蚕蛹血淋巴抑菌活性分析李庆荣肖阳邢东旭张伟龙杨琼（广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所广东广州 510610）摘要蚕蛹不仅是优质蛋白原料，还富含黄酮、抗菌肽、诱食肽等功能性活性物质。

其中抗菌肽是存在于蚕蛹血淋巴内具有抑菌活性的多肽物质，但正常情况下，蚕蛹血淋巴内抗菌肽含量相对较低，抑菌效果不显著。

文章通过对诱导方式、微生物类型及诱导时间开展试验与分析，明确了体外诱导家蚕蛹提高其体内血淋巴抑菌活性的方法。

研究结果显示：对蚕蛹喷洒一定浓度的白僵菌孢子，诱导2 d ～3 d 后，蚕蛹体内血淋巴的抑菌活性相对较高。

该结果可为后期家蚕蛹的高值化利用提供参考。

关键词微生物诱导；蚕蛹；血淋巴；抑菌活性中图分类号:S884文献标识码:A文章编号:2095-1205(2023)10-01-03我国蚕桑资源极为丰富，桑园种植面积超过1 300万亩，蚕蛹年产量30万t 以上。

蚕蛹中蛋白质含量较高，占其干物质重的45%～50%，蚕蛹蛋白是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源。

近几年蚕蛹肽蛋白在大口黑鲈、鳊鱼、草鱼、鸭嘴鱼、南美白对虾、罗氏沼虾等养殖上的应用研究表明，蚕蛹肽蛋白能明显降低饲料成本，提高水产养殖生物生长速度，降低饵料系数等[1-3]。

蚕蛹不仅是优质蛋白原料，还富含黄酮、抗菌肽、诱食肽等功能性活性物质。

其中，抗菌肽是家蚕蛹血淋巴内重要的抑菌物质，具有提高动物生产性能、增强动物免疫力、促进机体的新陈代谢等生物学功能[4]。

在水产养殖方面，小型生态系统生物繁多，抗生素饲料添加剂容易在诸多生物体内残留，不利于生态环境良性循环，而抗菌肽替代抗生素可增强水产养殖生物对病原微生物的抵抗力。

金龟子绿僵菌(Metarhizium_anisopliae_HN1)几丁质酶与谷胱甘肽S-转移酶GS

金龟子绿僵菌(M etar hiziu m anisopliae HN 1)几丁质酶与谷胱甘肽S -转移酶GST 在大肠杆菌中的高效融合表达任文彬1,2,张世清1,黄俊生1(1.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南儋州571101;2.仲恺农业工程学院,广东广州510225)摘要使用RT -P CR 方法,从高毒力金龟子绿僵菌M etar h izium anisop liae H N 1中,克隆得到一个全长为1275bp 的几丁质酶基因,经B la st 分析此基因序列与M.anisop liae E 6的chi 1基因(AF 02749)同源率为96%。

将此基因克隆到pG EX -6p-1载体上,使之与载体上一个约26kD 大小的谷胱甘肽S -转移酶(G ST )相连,构建pG EX -ch i 融合表达载体,转化到大肠杆菌(E sche rich ia co li )B L 21中,经SD S -PAG E 结果分析显示:表达出的融合蛋白大小为68kD,此目的蛋白占表达总量的64.5%。

经破碎处理后可检测到几丁质酶活性。

关键词金龟子绿僵菌;几丁质酶基因;融合蛋白;大肠杆菌中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)17-07900-03H ig h -e ffic ie n t F u s io n E xp re ss ion o f Ch it in a s e an d G STfrom M etar h iz i u m an isop liae HN 1in Escheich ia co li R EN W en -b in e t a l (E n v ironm en t an d P lan t P ro tection In s titu te ,C h i n e se A cade m y o f T rop ica l A g ricu ltu ra l S cien ces ,D an zh ou,H a in an 571101)A b s tra c t C h itin a se gen e s from M etarh iz ium an isop liae th a t is a n i m po r tan t en tom opa th o gen ic fu n gu s w e re co n s ide red on e o f th e k ey fac to rs to in va de th e ir h o sts .T o ta l RN A w a s e x trac ted from M etarh iz ium an isop liae H N 1s tra inan d ch itin a se gen e w a s am p li fied by R T -P CR.T h e w h o le len g tho f th is gen e w a s 1275bp ,an d th e nu cle o tide sequ en ce o f th e g en e w a s 96%si m ila r ity to th a t o f th e M.an isop liae E 6(A F 02749).T h enth e g en e w as su bclon e d in to prok an yo e x-p re ssion vec to r pG E X -6p -1an d con n ected w ith G S T.T h e clon e s w e re iden tif ied by en zym e d ig es tionan d sequ e n ced.T h is ex pre ssion p la sm id w a s tran s fo rm ed in -to E.co li s tra in B L 21an d e ffec tive fu s ion w a s e xp ressed.SD S -P AG Ean a ly sis in d ica tedth a t th e re com b in an t fu sio n pro te in w a s 68kD.T h e leve l o f exp re s-s ionfu sion p ro te in w a s a bou t 64.5%o f to ta l e xpre ssed pro te in s.T h e activ ity o f ch itin a se cou ld b e d e tec ted a fte r fragm en ta tiontrea tm en t .K e y w o rd s M e tarh iz iu m an isop liae ;C h iti n a se g en e ;F u s ion p ro te in ; E.co li基金项目国家科技支撑计划(2007BAD 48B 00)。

不同来源金龟子绿僵菌菌株生物学特性

不同来源金龟子绿僵菌菌株生物学特性苏文晶【摘要】选择不同地理、寄主来源的15株金龟子绿僵菌(Metarhizium ankopliae)菌株,对各菌株菌落形态、生长速度、产孢量等生物学性状进行比较.结果表明:(1)根据菌丝质地和颜色、产孢能力、孢子颜色等将15株菌株分为6类,其中A、B、C类菌株分别有3、3、6株,D、E、F各有1株.(2)不同金龟子绿僵菌菌株的生长速度在初期(10 d以内)差异显著,MaQZ-01、MaJGZ-01和MaFZ-0,菌株10 d时菌落直径均超过6 cm,显著快于其他菌株;到生长后期(15 d),由于进入了产孢阶段,除Ma-20、MaJGSTR-01菌落直径较小外,其他菌株差异不显著.(3)不同菌株产孢量差异显著,MaQZ-01、MaZPTR-04和MaSHTR-05菌株产孢量显著高于其他菌株,分别达到0.147×109、0.145×109和0.137×109个·cm-2.综合生长速度与产孢量两项指标,MaQZ-01菌株具备生长迅速、产孢量大等优良生产性能,可作为优良菌株进一步在害虫防治中加以利用.【期刊名称】《亚热带农业研究》【年(卷),期】2015(011)002【总页数】5页(P123-127)【关键词】金龟子绿僵菌;生物学特性;菌落形态;生长速度;产孢量【作者】苏文晶【作者单位】泉州市森林病虫防治检疫站,福建泉州362000【正文语种】中文【中图分类】S476.12Key words:Metarhiziumanisopliae; biological characteristics; colonial morphology; growth speed; sporulation绿僵菌[Metarhizium (Metsch.) Sorokin]是虫生真菌的重要类群之一，寄主范围广，能寄生8个目30个科约200种昆虫、螨类及线虫[1]。

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae) tetraspanin基因的克隆与序列分析

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae) tetraspanin基因的克隆与序列分析贺闽1，夏玉先1*1重庆大学生物工程学院基因工程研究中心，重庆（400044）摘要：Tetraspanin蛋白是一类跨膜四次的膜蛋白，本文测序分析金龟子绿僵菌侵染蝗虫表皮阶段的cDNA文库，获得了金龟子绿僵菌的tetraspanin cDNA序列，以cDNA为探针从金龟子绿僵菌的DNA文库中克隆到了tetraspanin基因，并对tetraspanin蛋白进行了结构与进化分析, Soutern-blot分析表明tetraspanin基因在金龟子绿僵菌基因组中以单拷贝形式存在。

关键词：金龟子绿僵菌；tetraspanin；cDNA；DNA；进化分析。

中图分类号：1. 引言昆虫病原真菌是昆虫主要的自然致死因子，真菌生防剂具有触杀性、流行性、对环境安全和不易产生抗药性等特点，因此利用虫生真菌防治害虫越来越受到重视。

金龟子绿僵菌作为一种重要的昆虫病原真菌，国内外对其致病机理进行了大量研究，鉴定出了一些重要毒力基因，涉及真菌粘附并穿透宿主体壁、利用宿主营养、合成毒素以及逃避宿主免疫反应等[1,2,3,4,5,6]。

附着胞是虫生真菌入侵寄主过程中形成的重要侵染结构，能够分泌体壁降解酶和提供机械压力帮助侵染钉穿透昆虫体壁，附着胞的产生对于建立病原真菌与寄主关系是至关重要的。

因此，阐明附着胞形成分化的分子机制，能够为开发安全高效的真菌杀虫剂、挖掘昆虫病原真菌应用潜力提供科学依据。

Tetraspanin广泛表达于真核生物，是一类含204-344个氨基酸的细胞表面糖蛋白。

哺乳动物中已发现的tetraspanin家族蛋白有32个，果蝇中有37个，秀丽隐杆线虫中有20个，真菌中有4个。

在这众多的家族成员中，来自不同物种的tetraspanin很少存在同源性，但这些家族成员蛋白二级结构具有一定保守性，都由四个疏水跨膜区、胞外区的小环（EC1）和大环（EC2）,以及两个短的胞内末端组成[7]。

土壤中金龟子绿僵菌菌落宏观特征与DNA多态性的RAPD分析

韩小勇李会平苏筱雨黄大庄
（河北农业大学，保定，１０）００１７
张国伟
（河北省林业示范场）
项亚飞
同地区土壤中金龟子绿僵菌菌株间的亲缘关系，以及不同菌株亲缘关系的远近与菌株的茵落形态和地理来源是否存在相关关系，分离自河北省８个地区土壤中的１对２株金龟子绿僵茵进行形态观察及ＤＡ多态性的ＲＰＮＡＤ分析。结果表明，不同地理来源菌株间的茵落形态和ＤＡ图谱均存在明显差异；据菌落Ｎ依孢子的分布形态、基质色泽、孢子颜色以及珠状渗出液的有无等特征能实现与ＲＰＡＤ聚类结果相同的茵株类型划分结果，实了利用菌株培养特征对菌株亲缘关系远近进行类型划分的可行性；证同时，ＡＰＲＤ聚类结果也表明菌株问差异与地理来源有一定的相关性。
ＴｅｍｏｐｏｏｉａｂｅｖｔｎａｄＲＤａａｙｉｏｈｒｈｌｇｃｌｓｒａｉｎＡＰｎｌｓｓｆＤＮＡｐｌｍｏｐｉｍｆ１ｔｒｉｕａｉｐｉｅｓｒｉｓｓｌ — ｏｏｏｙｒｈｓｏ２Ｍｅａｈｚｍｎｓｌｔａｎ，ｉａｉｏａｏｔｄｆｍｏｌｎｅｇｔｅｉｎｆｂｉＰｏｉｃ．ｗｒｔｄｅｎｏｄｒｔｎｅｔｎｈｅｅｉｅａｉｎｈｐｍｏｇｓｒｉｓｅｏｓｉｉｉｈｇｏｓｏｒｒＨｅｅｒｖｎｅｅｅｓｉｄｉｒｅｕｄｒａｄｔｅｇｎｔｒｌｔｓｉｓａｎｔａｎｕｏｓｃｏａｄｔｅｃｌｎｒｈｌｇｆｔｅｓａｎｎｄｆｒｎｒａ．ＲｅｕｔｈｗｔａｈｒｒｉｎｆａｔｄｆｒｎｅｎｃｌｎｎｈｏｏｙｍｏｐｏｏｙｏｔｉｓｉｉｅｅｔａｅｓｈｒｓｌｓｏｈｔｔｅｅａｅｓｇｉｃｎｉｅｅｃｓｉｏｏｙｓｉｍｏｐｏｏｙａｄＤＮＡｐｔｒｅｗｅｉｅｅｔｓａｎ．Ｔｅｓｒｉｓｃｕｄｂａｅｏｚｄｉｔｉｅｅｔｔｐｓａｃｒｉｇｔｒｈｌｇｎａｔｎｂｔｅｎｄｆｒｎｔｉｓｈｔａｎｏｃｔｇｒｅｎｏｄｆｒｎｙｅｃｏｄｎｏｅｒｌｅｉｓｏｅｄｓｉｕｉｎｐｔｒ，ｍｅｉｍｏｏ，ｓｏｅｃｌｒｎｅｄｓａｅｘｄｔ，ａｄｔｅｒｓｌｏｌｔｌｏｒｓｏｄｄｐｒｉｔｂｔａｔｎｒｏｅｄｕｃｌｒｐｒｏｏ，ａｄｂａ —ｈｐｄｅｕａｅｎｈｅｕｔｃｍｐｅｅｙｃｒｐｎｅｓｅ

金龟子绿僵菌CQMa421防治茶小绿叶蝉的效果评价

immn蜊比机條2021年第2期总第185期金龟子绿僵菌CQMa 421防治茶小绿叶蝉的效果评价段巧枝1胡义元2高庆兵3段礼4杨双齐5(1.英山县植物保护站湖北英山438700;2.英山县农业技术推广中心湖北英山438700;3.英山县农业农村局湖北英山438700;4.英山县经作站湖北英山438700;5.英山县杨柳农技服务中心湖北英山438700)中图分类号:S 435.711文献识别码：B 文献编号：10055-6114(2021) 02-020-003摘要：采用不同剂量的80亿孢子/mL 金龟子绿僵菌CQM a 421可分散油悬浮剂单剂及其分别与植物源杀虫剂和化学杀虫剂混配防治茶小绿叶蝉，田间药效试验表明：80亿孢子/niL 金龟子绿僵菌CQM a 421可分散油悬浮剂防治茶小绿叶蝉的防效较好，推荐使用剂量80 mL /667 m 2。

关键词：金龟子绿僵菌；茶小绿叶蛘；防治效果为验证杀虫真菌药剂80亿孢子/mL 金龟子绿僵菌CQM a 421可分散油悬浮剂对茶叶上主要害虫茶小绿叶蝉（优势种为小贯小绿叶蝉£ mpoasca onuH )的防治效果，开发田间应用技术，明确该药剂的施用方法、最佳使用剂量，为大面积推广应用提供科学依据。

按全国农技中心和省植物保护总站安排，我们于2020年承担并实施了由重庆聚立信生物工程有限公司委托的关于金龟子绿僵菌CQMa 421防治茶小绿叶蝉效果田间试验，现将试验情况报告如下：1材料与方法1.1试验地基本情况该试验设在英山县红山镇乌云山村三组茶农张有存家中茶园进行。

该试验茶园地形较密闭，与其它地块隔离较好，茶树为多年生，树龄12 年，茶树品种为鄂茶一号。

茶叶长势良好，茶小收稿日期：2021-02-26作者简介:段巧枝（1970-)，女，高级农艺师，一直从事植保病虫与防治工作。

绿叶蝉危害较重，地势为平地，土壤类型为黄棕壤，pH 值为6.6,土壤有机质含量26.8 g /kg ,肥水条件较好，栽培管理一致。

金龟子绿僵菌对果蝇的生防效果

金龟子绿僵菌对果蝇的生防效果陈自宏;徐玲;杨晓娜;杨凤连【摘要】Pathogenicity of M.anisopliae strains from different habitats in Yunnan against Drosophila melanogaste was determined by single-factor test to screen M.anisopliae resources with a strong pathogenicity.The results showed that six M.anisopliae strains from different habitats all have the pathogenicity against D.melanogaste but there is obvious difference in pathogenicity among six M. anisopliae strains.The lethal time of 50% (LT50 )is 3~6 d.The pathogenicity of M.anisopliae strains from Shangrila,Lanping and Chuxiong is strong.MAX-2 strain with the strongest pathogenicity (LT50=3 d)is of greater popularization and application potential.The screening model of M.anisopliae resources with a strong pathogenicity against D.melanogaster is established successfully.%为了筛选出强致病力的绿僵菌资源，采用单因素试验测定了云南不同生境来源金龟子绿僵菌菌株对黑腹果蝇的致病力。

绿僵菌素A对家蚕cecropin B和gloverin 4基因表达的影响

绿僵菌素A对家蚕cecropin B和gloverin 4基因表达的影响胡维娜;何广位;李福霞;胡琼波【摘要】绿僵菌素A (DA)是由金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae产生的一种环缩羧肽类次生化合物,具有抗昆虫免疫作用,但是人们对其影响免疫相关基因调控的机理缺乏了解.本实验以家蚕Bm12细胞为材料,采用RNAi技术沉默相关转录因子,结合荧光定量PCR (qPCR)技术,明确DA处理或沉默TOLL和IMD信号通路相关转录因子后抗菌肽cecropin B和gloverin 4基因表达的变化.实验发现,DA 能引起抗菌肽cecropin B基因表达上调和gloverin 4基因表达下调.利用特异性siRNA分别沉默转录因子BmRelish1、BmRelish2、BmRel、BmFOXg1后,发现只有沉默转录因子BmRelish时,cecropin B和gloverin 4基因表达才下调,说明这两种抗菌肽的合成均通过IMD信号通路调控.当沉默BmRelish1或BmRel基因及DA处理联合作用时,cecropin B基因显著下调,说明在抑制cecropin B合成时,DA 与转录因子BmRelish1或者BmRel之间存在密切的协同效应;同样,在促进gloverin 4合成时,DA与转录因子BmRelish2之间也存在着协同效应.【期刊名称】《环境昆虫学报》【年(卷),期】2016(038)005【总页数】6页(P984-989)【关键词】绿僵菌素A;Bm12细胞;cecropin;gloverin【作者】胡维娜;何广位;李福霞;胡琼波【作者单位】华南农业大学农学院,广州510642;华南农业大学农学院,广州510642;华南农业大学农学院,广州510642;华南农业大学农学院,广州510642【正文语种】中文【中图分类】Q965;S476绿僵菌素(destruxins)是由金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae产生的一类环缩羧肽类次生代谢物质，具有杀虫活性，也是绿僵菌的关键致病因子(Kershaw et al., 1999; Pedras et al., 2002)。

金龟子绿僵菌的液固双相发酵研究

河南农业科学，２０１３，４２（２）：９３－９７
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
金龟子绿僵菌的液固双相发酵研究
许天委，张世清，黄俊生。
的优点，先生产大量的菌丝或芽生孢子，缩短了菌
子产量和菌丝生长量，试验设计３个重复，以筛选最
优的液体发酵培养基。
１．２．２固体培养基的筛选将菌块移接到最优的
ｓｈａｌｌｏｗｔｒａｙｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｗｈｅｎｓｏｌｉｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍＦ（ｒｉｃｅ３００ｇ，ｂｒｏｋｅｎｒｉｃｅ６００ｇ，Ｈ２Ｏ５０９，６，
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｅｓｔ — ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｕｓ．Ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｃａｒ－
ＫＨ２ＰＯ４－Ｋ２ＨＰＯ４ｂｕｆｆｅｒ０．０５，ｓｕｃｒｏｓｅ０．５）ｗｉｔｈｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆ１．３ｃｍｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄ，ｔｈｅ
生孢子产量和菌丝生长量均最高，分别达到４．３ ×１Ｏ。个／Ｌ、５．９９ｇ／Ｌ。固体发酵时，浅盘发酵方法优

金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗翅膀和血淋巴时期基因的鉴定的开题报告

金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗翅膀和血淋巴时期基因
的鉴定的开题报告
题目：金龟子绿僵菌侵染东亚飞蝗翅膀和血淋巴时期基因的鉴定
研究背景：
飞蝗是一种广泛分布于非洲、亚洲、中东等地区的昆虫害虫，因其
数量庞大、成群出现，可对农业生产造成严重损害。

近年来，蝗灾在非
洲和亚洲等地频繁发生，对当地的农业生产和经济发展带来了重大影响。

为了防治蝗灾，很多国家采用了化学农药喷洒的方式。

但是这种方
式会对环境和人类健康造成严重危害。

因此，开发环境友好、无毒害的
生物农药是当务之急。

金龟子绿僵菌作为一种天然的寄生真菌，在侵染
飞蝗等害虫时具有高效、低毒性的特点，是一种很有潜力的生物农药。

研究内容：
本研究旨在探讨金龟子绿僵菌感染东亚飞蝗时翅膀和血淋巴阶段的
基因鉴定情况，为进一步研究它对飞蝗的生物学效应提供基础数据。

具
体内容如下：
1.分离并纯化金龟子绿僵菌，制备感染液。

2.采集东亚飞蝗翅膀和血淋巴样本，提取RNA。

3.构建RNA文库，高通量测序。

4.比对基因组数据库，分析差异表达基因。

5.通过KEGG Pathway分析，分析不同时期的基因功能和生物过程。

预期研究结果：
通过分析东亚飞蝗翅膀和血淋巴时期基因差异表达，预计可以鉴定
到一批与金龟子绿僵菌侵染有关的基因，为进一步研究金龟子绿僵菌对
东亚飞蝗的生物学效应提供基础数据，为开发环境友好、高效的生物农药提供理论依据。

关键词：金龟子绿僵菌；东亚飞蝗；基因鉴定；生物农药。

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安徽科技学院学报，２０１３，２７（５）：３１～３７
ＪｏｕｎａｒｌｏｆＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
金龟子绿僵菌ＭｉｃｒｏＲＮＡ在蝉蜕和蚕血淋巴诱导下的差异表达分析
方法，对１５个绿僵茵ｍｉＲＮＡ进行不同诱导条件下的差异表达分析；结果表明，在蝉蜕诱导过程中，ｌ５个绿僵茵ｍｉＲＮＡ的表达水平呈现下降趋势；在血淋巴诱导过程中，１５个绿僵茵ｍｉＲＮＡ的表达量差异存在
ＷＡＮＧＺｈａｎｇ— ｘｕｎ，ＺＨＯＵＱｕａｎ，ＭＥＮＧＨｕｉ — ｍｉｎｇ２，ＺＨＡＮＧＪｕｎ，ＨＵＡＮＧＢｏ（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３６，Ｃｈｉｎａ；
ｆｅｒｅｎｔｉｌａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ１５Ｍ．ａｎｉｓｏｐｌｉａｅｍｉＲＮＡａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｓｐｅｃｉｆｉｃｓｔｅｍ— ｌｏｏｐＲＴ— ｑＰＣＲｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔ：ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｉＲＮＡｓｈｏｗａｄｏｗｎｗａｒｄｔｒｅｎｄｉｎｃｉｃａｄａｓｌｏｕｇｈｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ，ｗｈｉｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆ１５ＭｅｔａｒｈｉｚｉｕｍｍｉＲＮＡｅｘｉｓｔ
以下２种情况：即ｍａｎ— ｍｉＲ一２等表达水平显著升高或者ｍａｎ — ｍｉＲ一６等显著下降。这些显著差异表达的ｍｉＲＮＡ可能在绿僵茵侵染昆虫的过程与定殖于昆虫体内发挥相应重要的作用。关键词：金龟子绿僵菌；ｍｉｃｒｏＲＮＡ；差异表达；ＲＴ—ｑＰＣＲ
汪章勋，周权，孟慧敏，张军，黄勃
，
安徽合吧２３Ｚ８６）
摘要：金龟子绿僵茵是一类应用广泛的昆虫病原真菌，在害虫的防治中起着重要作用。研究发现Ｍｉ —
ｅｒｏＲＮＡ能调控基因表达，继而调控生物体生长发育的各个重要环节。本研究采用特异的茎环ＲＴ— ｑＰＣＲ
ｒｅｇｕｌａｔｅｈｅｔｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｒｔｏｆｇｒｏｗｈｔａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆｏｒｇａｎｉｓｍｓ．Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｄｉｆ－
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ，ａｓａｃｌａｓｓｏｆｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ，ｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎｔｈｅｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃｌａｃｏｎ— ｔｒｏｌｏｆｓｅｖｅｒａｌｉｎｓｅｃｔｐｅｓｔｓ．ＭａｎｙｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｆｏｕｎｄｔｈａｔｍｉｃｒｏＲＮＡｃａｎｒｅｇｕｌａｔｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｉｎｔｕｒｎ
２．ＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉｌａＰｅｓｔＣｏｎｔｒｏｌ，ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３６）
中图分类号：Ｓ４７６．１２文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—８７７２（２０１３）０５— ００３１— ０７
ＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＭｉｃｒｏＲＮＡｉｎＣｉｃａｄａＳｌｏｕｇｈａｎｄＨｅｍｏｌｙｍｐｈＩｎｄｕｃｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｒｏｍＭｅｔａｒｈｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ