实验二 性染色质观察新版14

13
四、操作步骤：
2. 口腔粘膜细胞观察:
要想制备一个适合的口腔粘膜涂片将会遇到两个问题。 如果你的装片不是绝对的干净，在染色的环节你将会失 去上皮细胞。所以，玻片必须用去垢剂洗，而且在流水 中冲洗，然后最终用 70% 的酒精冲洗，用火烤干他们。 第二个问题较难克服，就是上皮细胞能被口腔细菌所污 染。细菌特别麻烦，因为他们容易被硫槿溶液染色并且 和性染色质混淆。如果碰巧他们会遮盖在上皮细胞核上 面，因此，细胞提供者需要严格地用水龙头的水漱口， 以便去掉松动的上皮细胞和细菌。这样的漱口应该重复 两三次才能达到最好效果。
二、实验原理：
相当多的证据已经证明性染色质是没有活性的X染色 体。正常的男性，只有一个X染色体，没有性染色质（见 图2.1 上）。正常女性，拥有2个X染色体，每个细胞核有 一个染色质小体（图2.1下），但是一个雌性三倍体的X染 色体有两个性染色质体（图2.2）。几乎没有雌性的动物 的4个X染色体的每个核内有3个巴氏小体。 Barr小体数 = 细胞内X染色体数 – 1 Barr小体特征及位置：它是处于失活状态的X染色体， 一般位于细胞核膜内侧边缘的一个深染区（较细胞核 要小），形状多样。
三毛猫组图
jgyj 9
三毛猫
三毛猫
jgyj 10
三色公猫（上） 土耳其三色猫（左）
jgyj 11
三、实验材料：
带有油镜的显微镜 压舌板 二甲苯 1%水溶性硫槿染液 酒精（浓度：50%，70%，95%，100%） 5或6当量（N）盐酸（HCl）于滴瓶中 镊子 盖玻片 香柏油 载玻片
广口瓶或平皿
jgyj
12
四、操作步骤：
1. 毛发根部细胞的观察:
拔取一根带有毛根的头发，自基部截取20m左右置载玻 片上，小心剔下毛囊细胞 ( 注意千万不要触及毛发干 ), 拔 去毛发干,将细胞团块散开,加一滴改良酚红染液，覆以盖 片，在酒精灯上轻微加热后，静置 1―5 分钟，隔一片吸 水纸用手指轻度加压后镜检。
jgyj
jgyj 8
二、实验原理：
三色猫
三毛猫，又称三色猫，指黑色、橘色与白色参杂在身上的猫， 亦称为玳瑁色。
成因：因决定黑色和橘色的基因是位于X染色体上(白色基因在 体染色体上)， 若是猫的基因在分化的时候随机去活性化， 可能 毛色细胞内黑色基因被去活性而表现出橘色， 反之则呈现黑色， 因此绝大部分三毛猫都是雌性。在少数的例子里， 因多出一个X 染色体(en:Klinefelter's syndrome)或嵌合体的情况会出现三色公猫。 在日本因为雄性三色猫的稀少的缘故，而被视为一种幸运的象征。
jgyj 15
四、操作步骤：
2. 口腔粘膜细胞观察:
方案2: 用清洁灭菌的载片或适当的刮片，从女性口腔两侧 颊部刮取上皮粘膜细胞，在原位刮取2-3次，分别涂抹在 干净载片上，每次可涂1-3片，涂抹范围约1-2张盖片大 小。待稍干后， 用95%乙醇浸泡每片玻片2分钟，然后 用70%乙醇泡2分钟，然后是50%乙醇2分钟，最后用蒸 馏水洗2分钟。从蒸馏水中拿出玻片后，滴几滴5或 6NHcl在细胞上静置5秒钟。这是准备染色的十分关键的 一步。酸水解细胞核中的RNA并因此消灭了富RNA小体， 这些小体也可被硫槿染液染色。过度的水解会破坏RNA 也会破坏富DNA的性染色质体，然而水解不足会留下象 jgyj 16 核仁那样完整的富 RNA小体。
jgyj 5
图2.1
图2.2
jgyj
6
二、实验原理：
jgyj
7
二、实验原理：
由于两个 X 染色体中的一个失活 ( 小资料：三色猫 ) ，性 染色质小体可以在间期细胞核中见到。这些活包括特殊X 染色体的异质化。利用放射性标记技术， Morishima 等 （1962）发现了无活性的X染色体，像其他的异质染色体， 他们在细胞核中较其他染色体晚些复制。另外，这些晚复 制X特点是位于核的边缘，性染色质小体大多在这里被观 察到。总的来说，所有的细胞都包含着一个X染色体。带 有遗传上具有活性的染色质叫做常染色质，所有额外的X 染色体成为异染色质的性染色质体。 证明人的口腔粘膜鳞状上皮细胞存在性染色质的方法是 Ludwing 和 Klinger （ 1958 ）发明的，本实验使用 1960 年经 Reynolds修改的方法。
jgyj 14
四、操作步骤：
2. 口腔粘膜细胞察:
方案1:
用清洁灭菌的载片或适当的刮片，从女性口腔两侧颊 部刮取上皮粘膜细胞，在原位刮取2-3次，分别涂抹在干 净载片上，每次可涂1-3片，涂抹范围约1-2张盖片大小。 待稍干后，滴加1-2滴改良酚红，在室温下染色1-5分钟， 勿使干燥，然后再加盖片复以吸水纸，用手指轻度加压 后进行镜检。 涂片后如不立即检查，应在稍干时立即放入 95% 酒精 中固定30分钟以上（也可达1-2天），取出干后编号，放 置冰箱内保存。
硫槿染液对核酸是特异性的，能将DNA染成深蓝黑色， 而将RNA染为紫色。然而当研究细胞中核仁及性染色质这 样小的物体时，，最好避免按照颜色的不同来区分他们。 适当的水解将会消除富 RNA 小体并防止与富 DNA 性染色 质小体的混淆。 接下来，把玻片放到蒸馏水中10—15秒钟以去掉Hcl。 然后用1%硫槿染液染色 10—15分钟，之后用蒸馏水洗 ,再 按照下面步骤脱水：50%乙醇 30秒，70%乙醇 30秒，95% 乙醇 30秒，纯乙醇 30秒。 现在，把玻片放到二甲苯中分色1分钟。拿出玻片后， 立即滴上一滴香柏油并且盖上洁净的盖玻片。在放盖玻片 时要小心不要留有气泡。 这样制备的粘膜细胞可以识别无色的细胞质和一个浅 兰色的核。用低倍镜对细胞进行观察；然后用油镜对性染 色质进行检测。 jgyj 17
说明人体细胞核中X染色体数目和性染色质体数目的关 系。
jgyj
3
二、实验原理：
巴尔和伯特伦（1949）注意到一个深着色小体，并且 不是和核仁就是跟核膜接近，绝大部分存在于雌猫的神 经细胞和中，这种小体几乎不会出现在雄猫类似的细胞 中。进一步研究表明性的二态现象出现在像有袋动物， 偶蹄目动物，翼手目，食肉动物和灵长目这些有代表性 的动物的大多数细胞中。然而，一些兔形动物，性别差 异只在很少一些组织中观察得到。 这个染色质体，是雌性细胞区别于雄性细胞的标志。 现在它通常叫做性染色质或叫做巴尔氏小体。除神经 细胞外的其他细胞中的巴氏小体（直径为 1μm ）具有 典型的平凸的外形，靠近于核膜内侧处。细胞化学上 看，性染色质的福尔根反应阳性并具有用甲基绿派若 jgyj 4 宁染色很深，表示有 DNA的存在。
实验二 性染色质观察
jgyj
1
一、实验目的：
二、实验原理：
三、实验材料： 四、操作步骤： 五、结果分析：
jgyj 2
一、实验目的：
通过实验初步掌握观察与鉴别 X- 染色质的简易方法， 识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的 畸变与疾病，提供参考条件。 简述用以说明性染色质而制备人体口腔粘膜鳞状上皮细 胞装片的步骤。