高效液相色谱法检测玉米浆中的氨基酸

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高效液相色谱法测定氨基酸

高效液相色谱法测定氨基酸

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪(美国Waters公司);Waters1525型泵,Waters2487型检测器,Waters5CH 型柱温箱,WatersBREEZE数据处理软件,水浴恒温器(精度±0.1℃),旋涡器,微量移液器,衍生专用管;CP225D型分析天平(德国);4umNora-Pak TM C18(3.9mm×150mm,5μm)色谱柱(美国)1.2 药品与试剂16种氨基酸(门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)由中国药品生物制品检定所提供。

脑蛋白水解物注射液,云南盟生药业有限公司生产,规格10ml/支。

批号:2013、2013、2013.乙腈(HPLC级);EDTA(分析纯);磷酸(分析纯);二乙胺(分析纯);三水合乙酸钠(分析纯)。

2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液;由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍(或按以下方法配制:称19.04g三水合乙酸钠,加1000ml纯化水,搅拌,溶解,用50%H3PO4将pH调至5.2,加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液,加入2.37ml二乙胺,用50%H3PO4滴定至pH4.95,用水溶性过滤器过滤,超声,脱气,备用。

);流动相B为60% HPLC级乙腈,按梯度表梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长为254nm;进样量5μl;柱温38℃。

2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品,用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。

取上述溶液0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为对照品溶液;取脑蛋白水解物注射液,加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液,取0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为供试品溶液。

高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究

高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究

[检验医学]高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究仲岳桐,何彩,陈春晓摘要:目的 应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。

方法 使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生,梯度分离,利用二极管阵列-荧光检测器串联分析。

结果 在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差,双检测器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。

结论 研究的方法测定重复性好,灵敏度高,定性定量准确,结果满意。

关键词:高效液相色谱;氨基酸;食品中图分类号:TQ460.7 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2008)1-132-03Determination of amino acids in foods by high performance liquid chromatography.ZHONG Yue-tong,HE Cai,C HEN Chun-xiao.(Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen518020,Guangdong,P R China) Abstract:Objective To determine amino acids from foods by high performance liquid chromatography Methods Food samples were collected and determined by using autoinjector with online derivati on function,gradient elution program and tandem de tectin g technicque Results The online derivation technicque overcame the deviation arised from manual operating and serial de tectin g technicque could enhance both reliabili ty and accuracy of determinati on Conclusion The method is accurate,quati tativelyand qualitatively as well as a reproductive and satisfactory resultsKey w ords:High performance liquid chromatography;Amino acids;Foods氨基酸分析是食品成份分析的重要组成部分,其研究对象可分为生理体液和食品两大部分,检测方法一般可分为氨基酸分析仪法、离子色谱法、高效液相色谱法等。

玉米种子中赖氨酸含量测定实验报告

玉米种子中赖氨酸含量测定实验报告

玉米种子中赖氨酸含量测定实验报告玉米是世界上最重要的粮食作物之一,被广泛种植和消费。

赖氨酸是一种重要的氨基酸,对于人体和动物的生长发育至关重要。

因此,测定玉米种子中赖氨酸的含量具有重要的意义。

为了测定玉米种子中赖氨酸的含量,我们采用了高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)进行分析。

首先,我们将玉米种子样品进行研磨,得到粉末状样品。

然后,将粉末样品与适量的溶剂进行混合,使得样品中的赖氨酸溶解。

接下来,我们使用HPLC-MS仪器对样品进行分析。

在HPLC-MS分析中,我们采用了C18色谱柱,以乙腈和水为流动相,在梯度洗脱条件下进行分离。

赖氨酸在HPLC柱上具有特定的保留时间和特征峰形,通过质谱仪器可以准确地识别和定量赖氨酸的含量。

经过测定和计算,我们得到了玉米种子中赖氨酸的含量为XX mg/g。

这个结果表明,玉米种子中富含赖氨酸,具有很高的营养价值。

赖氨酸是人体和动物体内合成蛋白质的重要组成部分,对于维持正常的生理功能和生长发育至关重要。

赖氨酸在人体内具有多种功能。

首先,赖氨酸参与合成肌肉组织和骨骼,对于增强肌肉力量和骨骼健康具有重要作用。

其次,赖氨酸对于神经系统的正常运作至关重要,可以提高记忆力和学习能力。

此外,赖氨酸还可以增强免疫力,减少感染和疾病的风险。

玉米作为一种常见的粮食作物,其种子中富含赖氨酸,对于人体和动物的健康具有积极的影响。

因此,适当增加玉米的摄入量可以提供足够的赖氨酸,有助于维持人体的正常生理功能和健康发育。

除了玉米种子,赖氨酸还存在于其他食物中,如肉类、鱼类、奶制品和大豆制品等。

然而,对于某些人群来说,如素食者或特殊疾病患者,很难通过日常饮食获得足够的赖氨酸。

因此,可以考虑通过食物补充或膳食补充剂来增加赖氨酸的摄入量。

本实验通过HPLC-MS技术成功测定了玉米种子中赖氨酸的含量。

玉米种子富含赖氨酸,具有重要的营养价值和健康益处。

通过适当增加玉米的摄入量,可以提供足够的赖氨酸,有助于维持人体的正常生理功能和健康发育。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定玉米浆中游离L-精氨酸

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定玉米浆中游离L-精氨酸

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高效液相色谱法测定氨基酸

高效液相色谱法测定氨基酸

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪(美国Waters公司);Waters1525型泵,Waters2487型检测器,Waters5CH 型柱温箱,WatersBREEZE数据处理软件,水浴恒温器(精度±0.1℃),旋涡器,微量移液器,衍生专用管;CP225D型分析天平(德国);4umNora-Pak TM C18(3.9mm×150mm,5μm)色谱柱(美国)1.2 药品与试剂16种氨基酸(门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)由中国药品生物制品检定所提供。

脑蛋白水解物注射液,云南盟生药业有限公司生产,规格10ml/支。

批号:2013、2013、2013.乙腈(HPLC级);EDTA(分析纯);磷酸(分析纯);二乙胺(分析纯);三水合乙酸钠(分析纯)。

2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液;由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍(或按以下方法配制:称19.04g三水合乙酸钠,加1000ml纯化水,搅拌,溶解,用50%H3PO4将pH调至5.2,加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液,加入2.37ml二乙胺,用50%H3PO4滴定至pH4.95,用水溶性过滤器过滤,超声,脱气,备用。

);流动相B为60% HPLC级乙腈,按梯度表梯度洗脱;流速1.0ml/min;检测波长为254nm;进样量5μl;柱温38℃。

2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品,用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。

取上述溶液0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为对照品溶液;取脑蛋白水解物注射液,加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液,取0.1ml,加纯化水0.9ml,旋涡器混匀,作为供试品溶液。

高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸

高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸

高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物,也是人体代谢过程中不可或缺的物质,具有重要的生理功能,人们发现它对人体健康有重要作用。

氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸,它们可以通过液相色谱(HPLC)和其他技术进行测定。

2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法,是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。

它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势,得到了广泛应用。

在研究氨基酸中,HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸,从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。

3工作原理HPLC-FLD工作过程是:在分析柱内,将水,乙腈,乙醇等溶剂混合,氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。

当氨基酸离开柱时,经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号,可以计算出它们的相对浓度,从而判断氨基酸含量。

4检测步骤(1)样品准备:样品中含有氨基酸的各种溶液,需经过提取,稀释或洗脱处理等,以便于之后的检测。

(2)色谱层析:把样品按照一定的色谱层析方式,分离不同的成分,从而使不同的成分分离出来。

(3)发光测定:在这一步,人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。

首先,样品将通过有机溶剂组合作用,激活发光反应,然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来,并计算概率密度,最终得出样品中氨基酸的含量和比例。

5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势:(1)可以快速准确地检测氨基酸;(2)可实现高灵敏度和高分离度;(3)化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势;(4)可克服外界因素对分析结果的影响;(5)可以长时间连续检测,勤奋节约成本。

6结论HPLC-FLD是一种高效的技术,在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率,它不但能够用于氨基酸的检测,还可用于其他有机物分离和测定,在生物和药物领域都有广泛应用。

高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量

高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量

河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17 No .3 1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳 许新民 王永利药理教研室(050017) 摘 要 本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。

该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。

关键词 HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。

玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的测定

玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的测定

玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的测定玉米籽粒蛋白质是一种重要的植物蛋白质来源,对人体健康具有重要意义。

其中的赖氨酸是一种必需氨基酸,对人体的生长发育和免疫功能起着重要的作用。

因此,准确测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量对于评估其营养价值和应用价值具有重要意义。

测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的方法有多种,其中比较常用的是高效液相色谱法(HPLC)。

该方法利用色谱柱对样品进行分离,再通过紫外光检测器测定赖氨酸的峰面积,最终计算出样品中赖氨酸的含量。

在进行测定之前,需要对玉米籽粒进行样品制备。

首先,将玉米籽粒磨碎成粉末状,然后利用溶剂提取蛋白质。

提取过程中需要注意选择合适的溶剂,以确保蛋白质的完整性和提取率。

提取得到的蛋白质溶液经过过滤等处理后即可进行后续的色谱分析。

在色谱分析过程中,首先需要准备好色谱柱,并根据实验要求选择合适的色谱柱。

常用的色谱柱有反相色谱柱和离子交换色谱柱。

在进行色谱柱选择时,需要考虑样品的特性和分离要求。

接下来,将提取得到的玉米籽粒蛋白质溶液注入色谱柱,通过流动相的洗脱,使样品中的赖氨酸与色谱柱发生相互作用,从而实现赖氨酸的分离。

在进行色谱分析的过程中,需要注意流动相的选择和梯度条件的设定。

流动相的选择应根据赖氨酸的特性和色谱柱的要求,常用的流动相有甲醇、乙腈和磷酸盐缓冲液等。

梯度条件的设定则可以通过改变流动相的组成及流速来实现。

在测定赖氨酸含量时,需要根据标准曲线进行定量。

标准曲线的制备是通过测定一系列已知浓度的赖氨酸溶液,并绘制出浓度与峰面积之间的关系曲线。

通过测定待测样品的峰面积,并根据标准曲线进行计算,即可得到赖氨酸的含量。

除了HPLC法,还有其他方法可以测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量,如氨基酸分析仪和酶法等。

每种方法都有其优点和局限性,需要根据实际需求选择合适的方法进行测定。

准确测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量对于评估其营养价值和应用价值具有重要意义。

通过选择合适的样品制备方法和测定方法,可以获得可靠的测定结果,为玉米籽粒蛋白质的研究和应用提供科学依据。

高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量

高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量

高效液相色谱仪测定氨基酸的含量1 L--色氨酸含量的测定1.1实验仪器与试剂色氨酸样品,甲醇,高效液相色谱仪,0.03%KH2PO4溶液1.2 HPLC色谱分析条件流动相为0.03%KH2PO4溶液(A)-甲醇(B),线性梯度淋洗,流速1.0mL/min,柱温35℃,检测波长276nm。

1.2标准溶液的配制精密称取色氨酸标准标准品50mg,置100ml容量瓶中,振摇,用流动相溶解到刻度,作为供试品溶液,另取色氨酸样品适量,同法操作。

1.3标准直线的制作精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液,注入液相色谱仪,以色氨酸峰面积A为纵坐标,浓度C为横坐标,制作回归标准直线。

1.4发酵液中样品中色氨酸含量的测定取发酵液,稀释配制成约500μg/ ml 的溶液,摇匀,过滤,取25μl进样,在高效液相色谱仪下测量,记录峰值面积,作图。

2L-精氨酸含量的测定2.1实验仪器与试剂L-精氨酸标准样品,乙腈,高效液相色谱仪,磷酸二氢铵。

PH计,磷酸,2.2HPLC色谱分析条件流动相: 以磷酸二氢铵溶液( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m 溶解后, 用磷酸调节pH 值至2.0±0.1, 加水稀释至1000ml ) - 乙腈为流动相,线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm;进样量:25μl。

2.2标准直线的制作精密称取精氨酸标准标准品50mg,置100ml 容量瓶中,振摇,用流动相溶解到刻度,作为供试品溶液,另取色氨酸样品适量,同法操作。

精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液,注入液相色谱仪,以精氨酸峰面积A为纵坐标,浓度C为横坐标,制作回归标准直线。

2.3发酵液中样品中精氨酸含量的测定取发酵液,稀释配制成约500μg/ ml 的溶液,摇匀,过滤,取25μl 进样,在高效液相色谱仪下测量,记录峰值面积,作图。

高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中3_种氨基甲酸酯类农药残留

高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中3_种氨基甲酸酯类农药残留

Food Science And Technology And Economy粮食科技与经济2023 年4月第48卷 第2期Apr.2023Vol.48, No.2氨基甲酸酯类农药具有广谱、高效、低毒、选择性高、易分解和残毒少等特点,被广泛应用于粮食、蔬菜和水果等农产品种植中[1-2]。

涕灭威、灭多威、克百威是谷物中常用的氨基甲酸酯类农药。

灭多威和克百威具有内吸、触杀、胃毒作用,涕灭威有剧毒,主要用作农用杀虫剂。

它们中毒的症状表现为昏迷、恶心、呕吐、腹泻、流涎、流泪、视力模糊、震颤、惊厥、精神错乱。

国际癌症研究机构在2007年将氨基甲酸酯类列为2A 类致癌物。

含酒精的农作物,往往含有低浓度的氨基甲酸酯类农药。

联合国粮食及农业组织、世界卫生组织与联合食品添加剂专家委员会(专家委员会)曾在2005年进行有关氨基甲酸酯类农药评估,认为经食物(不包括酒精饮品)摄入的氨基甲酸酯类农药分量,对健康的影响并不大,但经食物和酒精饮品摄入的氨基甲酸酯类总量,则可能对健康构成潜在风险,专高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中3种氨基甲酸酯类农药残留赵越超,石家源,杨会宁,张 月,徐振斌(吉林省粮油卫生检验监测站,吉林 长春 130033)摘要:采用高效液相色谱柱后衍生法,即将谷物样品粉碎后,经乙腈提取、氮吹、甲醇复溶、固相萃取柱净化、甲醇-二氯甲烷溶液洗脱、氮吹、甲醇定容后,经带有柱后衍生系统和荧光检测器的高效液相色谱仪检测,对谷物中灭多威、涕灭威、克百威3种氨基甲酸酯类农药的残留量进行测定外标法定量。

该方法的灭多威、涕灭威、克百威检出限均为0.008 mg/kg;相对标准偏差(RSD)均小于7.5%,加标回收率为80.6%~109.0%,3种农药混合标准曲线最佳线性范围0.01~2.0 μg/mL,线性相关系数(R )均大于0.999 5。

结果表明,该方法具有良好的线性关系,准确性和精密度高,操作简单,适用于谷物中涕灭威、灭多威、克百威农药残留量的同时检测。

高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 北京液相色谱仪分析案例

高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 北京液相色谱仪分析案例

食物中氨基酸含量的高效液相色谱法测定一、简介测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪,柱后衍生测定,但氨基酸分析仪价格昂贵,分析时间长,且只能用于分析氨基酸,限制了氨基酸分析技术的广泛应用。

七十年代以来,柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定。

液相色谱通用性强,检测灵敏度高,可用于多种物质的分析。

南京科捷应用研究所采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16种氨基酸进行了测定。

二、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵:2台SPD-10Tvp紫外检测器:1台SCL-10Tvp 系统控制器:1台7725i手动进样阀: 1套色谱工作站:1套(VI2010、N2000、N3000选用)液相色谱柱:1支(C18 4.6*250mn,5um)微量进样器:1支(50ul/100ul)进样支架:1只(进样阀用)三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求,在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化,利用美国先进技术开发设计,国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。

LC-10Tvp等度高效液相色谱仪实现了人机对话,可实时对仪器的运行状态进行监控,并可对潜在和已出现的故障做出判断,同时提供在线解决方案。

该仪器也全面实现了远程的准无人操作,大大提高了仪器的使用效率,同时通过高精度的AS1000自动进样系统,实现自动化进样,最大程度抑制了样品的交叉污染,提供样品分析精度。

LC-10Tvp等度高效液相色谱仪可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。

主要特点丰富的功能——符合客户对分析的不同需求硬件具有VP功能,记录维护信息和操作记录,符合GLP/GMP要求;系统控制器增具有时钟、温度计、湿度计等人性化设计的功能。

卓越的性能——满足客户对仪器的严格要求检测器采用进口氘灯、光电池以及1200条/mm凹面光栅组成的双光束单色器;精密加工的双透镜流通池,控制波长调节的高精度微处理器以及双路高速的采样频率,确保了低噪声、低漂移及超高灵敏度等特点。

AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量

AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量

AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量韩粉丽1,2,韩 飞2,李爱科2,陈曦2,宋歌2,范柳萍1,*,余治权3(1.江南大学食品学院,江苏无锡 214122;2.国家粮食局科学研究院,北京 100037;3.内蒙古燕谷坊生态农业发展(集团)有限公司,内蒙古呼和浩特 010000)摘 要:用AccQ-Tag法测定不同谷物及食糜中氨基酸的含量,并优化原料与酸解剂的比例。

采用内标法定量,6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生剂,用反相高效液相色谱仪,2475荧光检测器(激发波长250 nm、发射波长395 nm),Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18柱(3.9 mm×150 mm,4 μm),柱温37 ℃,以醋酸钠(pH 4.95)缓冲液为流动相A,纯乙腈为流动相B,水为流动相C进行梯度洗脱,进样量为10 μL。

结果发现,5 mg原料的最优酸解剂为500 μL;17 种氨基酸线性回归方程在25~500 μmol/L范围内线性良好(胱氨酸(Cys)浓度在12.5~250 μmol/L之间),相关系数r为0.999 6~0.999 9,测定的平均回收率为97.56%~103.92%(n=3),相对标准偏差为0.31%~2.75%(n=3)。

本法快速简便,能够适用于谷物及食糜中氨基酸含量的测定。

关键词:反相高效液相色谱法;AccQ-Tag柱前衍生;谷物;食糜;氨基酸Determination of Amino Acid Contents in Cereals and Ileal Digesta by Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography with AccQ-Tag Pre-column Derivatization MethodHAN Fenli1,2, HAN Fei2, LI Aike2, CHEN Xi2, SONG Ge2, FAN Liuping1,*, YU Zhiquan3(1. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China;2. Academy of State Administration of Grain, Beijing 100037, China;3. Inner Mongolia Oats House Ecological Agriculture Development (Group) Co. Ltd., Hohhot 010000, China)Abstract: The contents of amino acids in different cereals and ileal digesta were determined by reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) according to the AccQ-Tag method. The ratio of material to acidolysis agent was optimized in this paper. Quantification was performed using an internal standard method after pre-column derivatization with 6-aminoquinolinyl-N-hydroxysuccinimidate (AQC). The analysis procedure was carried out using a Waters 2695 HPLC system fitted with a Waters AccQ-Tag Nova-Pak TM C18 column (3.9 mm × 150 mm, 4 μm) and a Waters 2475 fluorescence detector (Waters Corp., USA) at an excitation wavelength of 250 nm and emission wavelength of 395 nm at 37 ℃. Sodium acetate (pH 4.95), acetonitrile and water were used respectively as mobile phases A, B and C for gradient elution and the injection volume was 10 μL. The results showed that the optimum ratio of material to acidolysis agent was 1:100 (mg/μL).The calibration curves of 17 amino acids were linear within the range of 25‒500 μmol/L (12.5–250 μmol/L for cystine) with correlation coefficients (r) of 0.999 6‒0.999 9. The average recoveries were in the range of 97.56%–103.92% with relative standard deviation (RSD) of 0.31%‒2.75% (n = 3). This method is rapid, simple and accurate for the determination of amino acids in cereals and ileal digesta.Keywords: reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC); AccQ-Tag pre-column derivatization;cereals; ileal digesta; amino acidsDOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025中图分类号:TS201.4 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2018)04-0165-06引文格式:韩粉丽, 韩飞, 李爱科, 等. AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量[J]. 食品科学, 2018, 39(4): 165-170. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201804025. 收稿日期:2017-01-04基金项目:公益性行业(粮食)科研专项(201513003-8)第一作者简介:韩粉丽(1989—),女,硕士研究生,研究方向为粮油营养。

甜玉米中游离糖及游离氨基酸的HPLC测定

甜玉米中游离糖及游离氨基酸的HPLC测定

甜玉米中游离糖及游离氨基酸的HPLC测定作者:马玉玲牛丽影李大婧刘春泉陈计峦来源:《江苏农业科学》2016年第03期摘要:采用高效液相色谱法(HPLC)对乳熟期甜玉米晶甜5号中的游离糖、氨基酸进行测定,检测到4种游离糖、18种游离氨基酸。

游离糖为果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,含量分别为18.54、28.36、56.13、0.09 mg/g。

游离氨基酸中,甜味氨基酸丙氨酸的含量(9.70 mg/g)最高,其次为鲜味氨基酸谷氨酸(3.19 mg/g)、天冬酰胺(2.62 mg/g),功能性氨基酸γ-氨基丁酸的含量为0.18 mg/g。

本研究结果将为甜玉米的风味及营养评价提供依据。

关键词:甜玉米;游离糖;游离氨基酸;测定中图分类号: TS201.2 文献标志码: A 文章编号:1002-1302(2016)03-0300-03甜玉米因其味甜、口感鲜嫩、营养丰富而深受消费者喜爱,被称为果蔬玉米[1]。

游离糖、游离氨基酸是果蔬中重要的呈味成分和风味前体物[2],也是贮藏加工过程中易损失变化的成分。

目前,我国对玉米中糖的研究大多关于还原糖或总糖量计[3];对氨基酸的测定多为水解氨基酸,即总氨基酸或蛋白氨基酸[4],尚无游离氨基酸的报道。

本研究以超甜玉米晶甜5号[5]为材料,采用高效液相色谱法(HPLC)定性定量测定玉米籽粒中游离糖、游离氨基酸的含量,为鲜食玉米的风味及营养评价提供依据。

1 材料与方法1.1 材料晶甜5号甜玉米采自江苏省南京市六合区农业科学院种植基地,于吐丝后22 d采摘。

采收当日手工去苞皮,分离籽粒,混合后于液氮中速冻,置于-20 ℃冰箱中冻藏待测。

1.2 试剂氨基酸混合标样、3-巯基丙酸、邻苯二甲醛(OPA)购自美国Sigma公司。

考马斯亮蓝-G250、氯仿、甲醇、硼酸、磷酸二氢钠、氢氧化钠、无水乙醇、磷酸均为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司。

色谱级乙腈、甲醇购自美国天地公司。

1.3 仪器与设备HPLC1200型高效液相色谱仪(美国Agilent科技有限公司),主要包括在线真空脱气机、四元梯度洗脱泵、柱温箱、二级管阵列检测器(diode array detector,DAD)、示差折光检测器(refractive index detector,RID)。

高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析

高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析

高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种现代化分析仪器,广泛应用于生化分析、药物分析、环境监测等领域。

HPLC相比传统色谱具有分离速度快、分离效果好、选择性高、灵敏度高等特点,可对复杂的混合物进行快速、准确的定性和定量分析。

氨基酸是构成蛋白质的基本单位,HPLC可以快速、准确分析氨基酸,具有重要的科研和实际应用价值。

HPLC的使用可分为以下几个步骤:1.样品制备:样品制备是HPLC分析的重要步骤,包括样品的提取、纯化、前处理等。

而对于氨基酸的分析,通常需要先将样品中的氨基酸转化为荧光染料或二硫醇衍生物,以提高检测灵敏度。

2.柱的选择:根据分析目标和样品性质,选择适合的色谱柱。

常见的色谱柱有反相柱、离子交换柱、大小分子排阻柱等。

对于氨基酸的分析,通常选择反相柱进行分离。

3.流动相:选择合适的流动相是HPLC分析的关键,流动相的组成对分离效果有很大的影响。

对于氨基酸的分析,常用的流动相是缓冲溶液,如甲醛-磷酸盐缓冲液、醋酸-磷酸缓冲液等。

4.梯度洗脱:丰富样品之间的分离效果,可以采用梯度洗脱。

梯度洗脱是通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率来实现样品的高效分离。

5.检测方法选择:根据不同的分析目标,选择合适的检测方法。

常见的检测方法有紫外检测、荧光检测、电化学检测等。

对于氨基酸的分析,常用的检测方法是荧光检测,因为部分氨基酸具有固有的荧光性质。

6.数据分析:使用专业的色谱软件进行数据分析和结果解读,如峰面积积分、峰高度积分、峰形比较等。

氨基酸的分析常常使用HPLC进行,具体步骤如下:1.样品制备:将氨基酸标样依次溶解在适量的溶剂中。

2.色谱柱选择:根据需要选择合适的色谱柱,如反相柱。

3.流动相制备:根据需要选择合适的缓冲溶液作为流动相。

4.进样:使用自动进样器或手工进样器将样品注入进样口。

5.梯度洗脱:通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率,进行梯度洗脱。

高效液相色谱法测定玉米蛋白粉中游离氨基酸含量

高效液相色谱法测定玉米蛋白粉中游离氨基酸含量

高效液相色谱法测定玉米蛋白粉中游离氨基酸含量刘跃芹;吴延东;赵雪松;刘艳波;吴杰;闫寒【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2016(031)007【摘要】建立高效液相色谱法同时测定玉米蛋白粉中17种游离氨基酸含量的方法.样品用盐酸溶液(0.1 mol/L)提取,采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂衍生.应用No-va-PakTM C18柱,以10 mmol/L醋酸铵缓冲液、乙腈和超纯水为流动相进行梯度洗脱,柱温为37℃,检测波长为248 nm,外标法定量.结果表明,17种游离氨基酸线性关系良好,其中16种游离氨基酸在0.002 5~0.5μmol/mL范围内具有良好的线性关系,胱氨酸浓度在0.006 3~1.25 μmol/mL 范围内线性关系良好,相关系数在0.999 1~0.999 9之间,回收率为95.10%~105.21%,RSD为1.36%~4.39%.该方法灵敏度高、重现性好、操作简单,可用于检测玉米蛋白粉中游离氨基酸含量.【总页数】4页(P153-156)【作者】刘跃芹;吴延东;赵雪松;刘艳波;吴杰;闫寒【作者单位】玉米深加工国家工程研究中心,长春130033;玉米深加工国家工程研究中心,长春130033;玉米深加工国家工程研究中心,长春130033;玉米深加工国家工程研究中心,长春130033;玉米深加工国家工程研究中心,长春130033;玉米深加工国家工程研究中心,长春130033【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量 [J], 王丽;宋志峰;纪锋;黄璜2.超临界流体萃取-反相高效液相色谱法测定玉米蛋白粉中叶黄质和玉米黄质的含量 [J], 綦丹华;卢怀宝;姚双;马玲玲;杨杰;程晓凤;姚渭溪3.PITC柱前衍生HPLC法测定黄精红曲酒中游离氨基酸含量 [J], 张孟; 吕启梅; 苏晓岚; 洒荣波4.柱前衍生高效液相色谱法测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量 [J], 孔浩;郭庆梅;郭新苗;王晓;周凤琴;徐翠翠5.高效液相色谱法分析霉菌干酪中游离氨基酸含量 [J], 郑小平;陈有容;郭本恒因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

高效液相色谱法检测玉米浆中的氨基酸

高效液相色谱法检测玉米浆中的氨基酸

样品中氨基酸含量的计算方法 本法采用外标标准曲线法计算样品中氨基酸含
, 国内也开展了这
R$S
, 但未见有玉米中氨基酸检测方法的报 ,
告。作者参考了国家关于饲料中氨基酸检测标准
摸索出玉米中氨基酸的检测方法。本方法具有检测灵 敏度高、样品处理简单、 分析时间短、分析结果稳定、 重复性好等特点,而且本方法还具有经济实用的优 点。 以前外检一批样品约需 ! ### 多元人民币, 应用本 法后, 检测一批样品只需不到 $## 元, 既提高了效率,
样品色谱图
8 !。流速为 $ 1- Q 1(),检测波长为 !8K )1,柱温为 #P X 。梯度程序为:
时间 D&J7& "B "$ " $PB " #K $PB "$ $"" !"B " $"" !"B "$ " !PB " @HJA
作者简介: 王绍萍 ( , 女, 实验师。 $=P! L ) 作 者 单 位 : $B 哈 尔 滨 医 科 大 学 大 骨 节 病 研 究 所 ( 哈尔滨 ; $8""%P ) !B 哈尔滨药业集团制药厂总厂质量保证部
标准品色谱图
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中国地方病防治杂志
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第 %& 卷
第 % 期 ’()* + ’,-. /*012 3)4 56.7 %& 867 % !##$
样品中可检出 %! 种氨基酸,分别是:94:、;.<、 分离效 =1-、 9-@、 A>-、 5B.、 D1,、 ’>4、 E.1、 F1<、 C(1 和 F>4。

高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析

高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析

(4)梯度洗脱程序: • TIME(min) FUNC • 0.01 BCONC • 3 BCONC • 21 BCONC • 21.01 BCONC • 25 BCONC • 25.01 BCONC • 35 STOP
VALUE 10 10 39 80 80 10 STOP
3、数据采集 打开real-time CS analysis软件采集数据并对数 据进行分析。
高效液相色谱的使用及氨基酸标样的 分析
高效液相色谱的使用及氨基酸标样 的分析
一、高效液相色谱的基础知识
二、LC-10AVP液相色谱仪键盘操作 三、氨基酸标样的分析
一、高效液相色谱的基础知识
高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)以前也称为高压(high pressure)液相色谱法、高速(high speed)液 相色谱法。HPLC是在经典的液相色谱法的基础上, 在20世纪70年代后快速发展起来的一项高效、快 速的分离分析技术。它是以经典的液相色谱为基 础,以高压下的液体为流动相的色谱过程,具有 高压、高效、高速和高灵敏度的特点。广泛应用 于医药、生化、石油、化工、环境卫生和食品等 领域。
三、流动相的选择
• • • • • 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配
四、高效液相色谱仪的基本结构 高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离 系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成,其 基本结构如下图:高效液相色谱的特点与基本结 构.ppt
六、思考题 1、试述反相离子对色谱的分离机理。 2、试述本实验氨基酸分析的基本原理和方法, 除了本方法外,还有那些氨基酸分析方法?

液相色谱仪测氨基酸

液相色谱仪测氨基酸

(二)试剂: 乙腈(重蒸馏); 丙酮(重蒸馏); 丹磺酰氯丙酮溶液:称取1.0克丹磺酰氯溶于10毫升丙 酮中。使用时吸取0.1毫升此溶液用8毫升丙酮制备而 成。贮存于冰箱中,工作液当天配制; 缓冲溶液(pH=0.5): 称取 8.4 克碳酸氢钠溶解于 1000毫升水中后使用; 0.5mol/L氢氧化钠溶液; 0.01mol/L盐酸溶液及6mol/L盐酸溶液; 6mol/L氢氧化钡溶液;
( 2 )衍生物制备及其测定:将上述干燥制备的样 品加入 40 微升 pH=10.5 缓冲溶液,接着加入 100 微升丹磺酰氯工作试剂,紧密封住管口,充分 振摇 15 分钟,将样品管在 100℃ 水浴中加热 2 分 钟,取出冷却。吸取 1 毫升以 1 : 1的比例相混合 的甲、乙两种流动相的混合溶液于样品管中, 充分振摇15秒,吸取10微升左右的此样品溶液注 入液相色谱柱内,记录色谱图。
四、分析步骤 1、样品处理与测定 (1)蛋白质的水解:称取1毫克的蛋白质样品或相 当于1毫克蛋白质的样品于玻璃管中,加入1毫升 6mol/L盐酸后用磨口封口或烧结封口,移入 110℃恒温箱中加热16小时,取出冷却。用微量注 射器取20微升水解样液于小玻璃管中,加入10微 升正亮氨酸作为内标溶液,并在水浴中蒸发干 燥。
五、结果处理
1. 2. fi=Ais标/Ai标 W氨基酸(%)=[(fi*Ai)/Ais]*[mis/m]*100
3.式中Ais标—氨基酸混合标准样品中内标物的峰面积; 4.Ai标—氨基酸混合标准样品中每种氨基酸i标准物的峰面 积; 5.fi—为某氨基酸i标样的峰面积相对于内标样品的峰面积 的校正因子; 6.Ais、Ai—分别为内标及氨基酸组分i的峰面积; 7.mis—进入色谱内样液中内标物重量(微克); 8.m—进入色谱内样液中样品重量(微克)。
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样品中可检出 %! 种氨基酸,分别是:94:、;.<、 分离效 =1-、 9-@、 A>-、 5B.、 D1,、 ’>4、 E.1、 F1<、 C(1 和 F>4。
样品中氨基酸含量的计算方法 本法采用外标标准曲线法计算样品中氨基酸含
, 国内也开展了这
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, 但未见有玉米中氨基酸检测方法的报 ,
告。作者参考了国家关于饲料中氨基酸检测标准
摸索出玉米中氨基酸的检测方法。本方法具有检测灵 敏度高、样品处理简单、 分析时间短、分析结果稳定、 重复性好等特点,而且本方法还具有经济实用的优 点。 以前外检一批样品约需 ! ### 多元人民币, 应用本 法后, 检测一批样品只需不到 $## 元, 既提高了效率,
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样品处理
MB 样品水解:精密吸取 "B $" 1-
样品, 置于安瓶中, 加入 $" 1-、 P 15- Q C 的盐酸溶液, 抽真空,然后用酒精喷灯封口,$$" X 干燥箱中水解 !! ’。 TB 水解后处理:将水解的样品过滤,取滤液 $B " 1- 于蒸发试管中, $"" X 以下干燥,然后加入 充分混合, 密封, !B " 1- 超纯水, K X 冰箱保存待测。 !" $" $ 标准品及样品衍生步骤 取样品 > 标准品 ? 加入 !"" !- 异硫氢酸苯酯乙氰 K"" !- 于衍生试管中, 溶液和 !"" !- 三乙胺乙氰溶液,充分混合,室温下衍 然后加入 %"" !- 己烷, 待测。 生 $ ’, # #" ! 结果 标准品及样品图谱如下。
样品色谱图
8 !。流速为 $ 1- Q 1(),检测波长为 !8K )1,柱温为 #P X 。梯度程序为:
时间 D&J7& "B "$ " $PB " #K $PB "$ $"" !"B " $"" !"B "$ " !PB " @HJA
作者简介: 王绍萍 ( , 女, 实验师。 $=P! L ) 作 者 单 位 : $B 哈 尔 滨 医 科 大 学 大 骨 节 病 研 究 所 ( 哈尔滨 ; $8""%P ) !B 哈尔滨药业集团制药厂总厂质量保证部
作者单位: 吉林 %K 北华大学医学院 ( 院; $K 吉林大学南岭校区
; %$!##% ) !K 吉林市中心医
( 编辑
翟峻民)
大骨节病对股骨头软骨蠕变特性影响的实验研究
冯正昕 % , 褚丽娟 ! , 马洪顺 $
中图分类号: L "&GK % 文献标识码: 9 文章编号: %##%M%&&J ( !##$ ) #%M##!"M#$
大骨节病的病理改变主要为关节软骨和骺板软 骨深层软骨细胞坏死,导致骨软骨发育障碍,继发性 变形骨关节病,是骨关节病和软骨疾患的一个较为特 殊的类型。 骨关节病 N 亦称骨关节炎 O4,16B-,(-),)4P O9 Q 是一系列导致 O9 征象疾病的总称,其以关节软骨退 化为特点,导致软骨基质降解、软骨细胞死亡和关节 完整性破坏 R % S 。
%#7 $H %#7 II %#7 J! %G7 !J %H7 %" %"7 ## %"7 HG %I7 "" %I7 J% %&7 GH %J7 $H
本 方 法 回 收 率 为 JHK !W T %%GK IW 。 配 制 #K !H !26. X 2. 的标准液,测得本方法的线性范围是 #K #!H T %K !H !26. X 2.。取此标准液 %K # 2. 重复进样 " 次 , 计 算 其 精 密 度 及 重 复 性 , 其 定 量 L=3 小 于 %K &W 。 !" $ 量。 $ 讨论 氨基酸的分析在医疗、制药、动植物代谢样品检 测、制酒等方面应用非常广泛,国外早已开展了高效 液相色谱的检测方法的建立工作 方面的探索
# #" #
材料与方法 材料 实验所用正常对照组 & 个标本,均为男性,年龄
病态组 ! 个标本, 男性, 年龄 !# 岁。 两组标 %J T !& 岁, 本均取自急性头部外伤致死的新鲜尸体,死亡后 ! ( 之内解剖,取下股骨头,用生理盐水浸湿的纱布包裹 标本, 置于 U !# V 冰箱内保存 $ T H 0 备用。 #" ! 试样加工 实验前取出试样,在常温下解冻后用骨刀沿股骨
玉米是生产青霉素的主要原料,玉米种氨基酸含 量的分析是不可或缺的步骤,对于控制发酵参数有重 要意义。传统的氨基酸分析多采用化学比色法或电泳 法, 耗时较长, 步骤繁琐, 影响因素多且灵敏度较差。 作者在查阅文献的基础上,利用现有高效液相色谱 仪, 建立了玉米浆中氨基酸的分析方法, 经实际应用, 证明该方法简单、 灵敏, 影响因素少, 分析条件易于控 制、 掌握, 是适合分析氨基酸的较好方法。现将结果报 告如下。 ! !" ! 材料与方法 仪器 日 本 岛 津 产 高 效 液 相 色 谱 仪 > 型 号 @A2 — $";B 4A ? , 超 声 波 清 洗 器 > 型 号 C;D — CE7. ;9F;G;4. FCHI;@J7E& &C.;7.I@B =#$K L $ ? 以 及电热恒温干燥箱, 漩涡混合器等小型仪器设备。 !" # !" #" ! 试剂 均为市售分析纯试剂。 流动相的配制 MB 流动相配制:甲液为 NO 值为 PB 8、 乙氰 R =#S :; "B $ 15- Q C 醋酸钠: TB 乙液为 乙氰: 水 R KS $; 使用时甲乙两液进行梯度混合, 梯度 程序如下。 !" #" # 衍生剂的配制 MB 取 "B $! 1- 异硫氢酸苯 即为 "B $ 15- Q C 的异硫氢酸苯酯乙 酯加乙氰至 $" 1-, 氰溶液;TB 取 "B $#= 1- 三乙胺加乙氰至 $" 1-,即为 $B " 15- Q C 的三乙胺乙氰溶液 U P 15- Q C 的盐酸。 !" #" $ 氨基酸标样购自北京 @EVW; 生物公司 > 含有 $: 种氨基酸,其中胱氨酸为 $B !8 115- Q C,其余为 使用前稀释 $" 倍即成标准样品。 !B 8 115- Q C ? , !" #" % !" $ !" $" ! 玉米浆由供货单位提供。 分析步骤 色谱条件 色谱柱为 &$% 柱, $8" % K6 P 11,
R%S R!S Y<-14() ;9P 1, B.7 31,1-2)*B,)6* 6Z Z-11 B2)*6 B[)04 )* \)6M .6@)[B. 4B2:.14 R + S 7 + ’(-62B,6@-B2P %J&JP GJ%] !&% T !&JK 袁倚盛,等 K 反相高效液相色谱法测定体液中氨基酸的 初步报道 R + S K 中华医学检验杂志, %JJ#P %$ N H Q : !"$ T !""K R$S 国家技术监督局出版 K 饲料中氨基酸的测定 R = S K 国家 标准 ;^ X A%&!G" U !###K 北京: !###K ( 收稿日期: !##! U %% U !H )
R!S R%S
又节约了资金。 在方法的建立过程中,我们对影响检测结果的几 个关键步骤分, 否则就会造 "样品的水解: 成不出峰的现象;#样品的衍生:衍生时需注意衍生 的时间应足够,另外温度不可过低,否则将造成衍生 不完全; 不可过低, $必须保持分析室温度相对恒定, 过低将易导致流动相中出现结晶,堵塞色谱柱,产生 柱压过高等现象。只要注意了这几方面,氨基酸的分 析还是比较简单和准确的。 参考文献
表%
氨基酸名称 保留时间 94: !7 GH ;.< $7 $! =1I7 #% ;.> &7 $# ?)4 &7 && 9-@ J7 HG
果较好。各组分的保留时间见表 %。 !" ! 回收率及变异系数
标准品中氨基酸保留时间
A(9.B C-> A>5B. D1, ’>4 E.1 F1< C(1 F>4
中国地方病防治杂志
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第 $% 卷
第 $ 期 &’() * &+,- .)/01 2(3 45-6 $% 756 $ !""#
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高效液相色谱法检测玉米浆中的氨基酸
王绍萍 $ , 惠洋 $ , 桑春燕 !
中图分类号: 9 8$: 文献标识码: ; 文章编号: $""$<$%%= > !""# ? "$<""!8<"!
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