马血清蛋白在体积排阻色谱柱上的快速分离图谱
血清哇巴因多克隆抗体的纯化及Fab2片段的制备
本文缩略语Ａｂｂｒｅｖａｔｉｏｎｓ英文缩写英文全称ＥＯＢＳＡＯＶＡＦｃＡＥＬＩＳＡＨＰＬＣＨＰＳＥＣＳＰⅧＳＤＳ—ＰＡＧＥＣＤＲＦＲＳＰＡＤＡＢＡｎｇＩＩＡＣＴＨＶｅＭＷＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＯｕａｂａｉｎＢｏｙｉｎｅＳｅｒｕｍＡｌｂｕｍｉｎＯｖａｌｂｕｍｉｎＦｒｅｎｄ’ＳＣｏｍｐｌｅｔｅＡｄｊｕｖａｎｔＥｎｚｙｍｅＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＳｉｚｅＥｘｃｌｕｄｅＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ／ＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＳｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｉｃｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ—ｄｅｔｅｒｍｉｎｇＦｒａｍｅｗｏｒｋＲｅｇｉｏｎＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＤｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩＡｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎＶ０１ｕｍｅｅｌｕｔｅｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＷｅｉｇｈｔ中文译名内源性哇巴因牛血清白蛋白卵清蛋白弗氏完全佐剂酶联免疫吸附法高效液相色谱高效液相排阻色谱过氧化酶标记的链酶卵白素十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰铵凝胶电泳ｒｅｇｉｏｎ互补决定簇框架区葡萄球菌Ａ３，３－－－氨基苯联胺血管紧张索ＩＩ促肾上腺皮质激素洗脱体积分子量血清哇巴因多克隆抗体的纯化及兰ｌ盐２ｇ丘露的制备●＿＿＿＿＿＿＿－－＿＿＿一ＩＩ研究背景：内源性哇巴因是一种存在于人和动物体内的Ｎａ＋，Ｋ＊－ＡＴＰ酶抑制物，具有调节水、钠代谢，血管舒缩和心肌收缩等重要生理功能，还与高血压、心力衰竭、慢性肾功能不全等多种疾病的发生、发展密切相关。
目前，我们已经运用动物免疫的方法，制备出血清哇巴因多克隆抗体，并分别用硫酸铵盐析法、ＤＥＡＥ一纤维素柱层析法及盐析法＋ＤＥＡＥ－纤维素柱层析法对抗血清进行部分纯化，进而动物实验中发现高血压大鼠静注哇巴因多克隆抗降压效果，但降压效果持续时间较短，并且出现轻度的过敏体后反应研究目的：１．选用适宜的免疫周期和适宜的免疫剂量，免疫家兔制备出高效价的哇巴因多克隆抗体；２．用ＨＰＳＥＣ法纯化哇巴因多克隆抗体，并且制备出高纯度的哇巴因多克隆抗体；３．用胃蛋白酶酶解哇巴因多克隆抗体，制备Ｆ（ａｂ）ｚ片段；４．用ＨＰＳＥＣ法初步测定哇巴因多克隆抗体及其Ｆ（ａｂ）。
凝胶色谱柱的基本介绍
凝胶色谱柱的基本介绍凝胶色谱柱是一种广泛应用于生物化学和生物分析领域的柱层析技术。
它通过利用物质在固定在凝胶柱上的多孔材料中的分配和排除效应来实现对样品分离和纯化的目的。
凝胶柱的填料通常由交联聚合物或生物高分子构成，如琼脂糖、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等。
凝胶色谱通过控制样品溶液中的分子在柱体高度约束的情况下，根据分子大小、形状、电荷等性质的差异进行分离。
下面将对凝胶色谱柱的原理、种类和应用进行详细介绍。
凝胶色谱柱的原理基于分子在凝胶填料中的扩散速率的不同。
凝胶填料的多孔结构提供了大量的吸附位点，使得分子可以在填料内部进行扩散。
分子越大，扩散速率越慢，因此会在柱层析过程中停留更长的时间，从而迟滞分离。
与此同时，分子的外部特性也会影响到在凝胶填料中的分配。
例如，根据一个分子的电荷状态（阳离子或阴离子）以及其与填料表面之间的相互作用，分子可能会快速进入或迅速排除凝胶材料中。
根据凝胶色谱柱的填料材料的不同，凝胶色谱柱可以分为凝胶滤析柱和凝胶排阻柱两种主要类型。
凝胶滤析柱是利用分子的大小差异进行分离的。
其中，琼脂糖滤析柱是最常见的滤析柱之一、琼脂糖是一种天然生物高分子，具有多孔结构。
样品溶液在柱体中通过扩散和龋流，大分子会被限制在空隙较小的凝胶颗粒中间，分子量较小的则会通过凝胶颗粒的孔隙流出柱底。
由于分子重量的差异，样品中的分子将根据其大小被分离。
凝胶排阻柱是利用分子的大小和形状差异进行分离的。
其中最常见的是聚丙烯酰胺凝胶排阻柱。
这种柱材具有均匀的孔隙结构，使得分子可以自由扩散。
大分子由于体积大、形状复杂，会更慢地扩散，而小分子由于体积小、形状简单，会更快地穿过凝胶孔隙，从而实现了分离纯化目标。
凝胶色谱柱具有以下几个优点。
首先，它可以在温和的条件下进行分离，无需高压条件，从而保持样品的完整性。
其次，凝胶色谱柱可用于分离和纯化广泛的生物分子，如蛋白质、多肽、核酸等。
此外，凝胶色谱技术简单易行，操作方便，成本相对较低。
重组蛋白疫苗SEC-MALS分析
重组蛋白疫苗SEC-MALS分析重组蛋白疫苗是一类不包含完整病原体，并由异源表达系统中生产的特定蛋白质抗原配制而成的一类疫苗。
常见的异源表达系统有：细菌、哺乳动物细胞、植物细胞和昆虫细胞等，往往需要根据所生产的抗原种类选择合适的异源表达系统。
重组蛋白疫苗由于其具有安全性好、稳定性强以及成本较低等几大优势，近年来也受到研究者们的广泛青睐。
目前，重组蛋白疫苗已被广泛应用于多种传染病，如预防乙型病毒性肝炎（即乙肝）、破伤风、百日咳、流行性感冒等等。
疫苗研究生产过程中，分析疫苗质量和净度的步骤尤为重要，而尺寸排阻色谱联用多角度光散射（SEC-MALS）分析就是其中一种极其重要的工具。
SEC-MALS是一种能够测量蛋白质分子大小和分子量的技术。
首先，蛋白质样品通过尺寸排阻色谱柱（SEC）分离。
SEC基于分子大小实现分离，大分子因阻碍大而通过色谱柱的时间较长，而小分子则可以进入色谱柱的孔洞中，因此通过的时间较短。
然后，从色谱柱出来的蛋白质流经一个多角度光散射（MALS）检测器，利用散射光的强度和散射光的角度分布来测定蛋白质的分子量和大小。
生物药物表征SEC-MALS分析示意图。
通过SEC-MALS，我们可以得到重组蛋白疫苗的详细分子信息，包括其大小、形状和组装状态等，从而评估其质量和功效。
此外，由于SEC-MALS技术可以在无标记、无破坏的情况下进行分析，所以可以避免疫苗在分析过程中的损失或损害，确保其完整性和活性。
百泰派克生物科技（BTP）采用ISO9001认证质量控制体系管理实验室，获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务。
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百泰派克生物科技传统疫苗表征内容。
XBridge BEH C4蛋白专用色谱柱说明书
XBridge BEH C 4, 300Å, 3.5, 5和10 µm 蛋白专用色谱柱能为生物大分子提供出色的峰形、极高的效率和良好的回收率，而这类生物大分子对于较小孔径或较长链键合相的色谱柱来说太大或疏水性太强而无法实现分离。
对填料基质和键合相的选择是为了在高pH 和低pH ，以及高温下均能提供出色的稳定性。
XBridge BEH C 4, 300Å蛋白专用填料在通过cGMP 和ISO9002认证的工厂采用超纯试剂制造而成。
每批XBridge BEH C 4反相蛋白专用色谱柱填料均已使用蛋白测试混合物进行鉴定，采用窄范围的技术指标进行质量控制，确保色谱柱的重现性能。
每一根色谱柱的柱效都进行了单独测试，并且每根色谱柱随附有性能测试色谱图以及合格证书。
II. 入门指南 a. 色谱柱安装b. 色谱柱平衡c. 初始柱效测定d. 对新色谱柱进行基准检查的 实用性功能测试III. 色谱柱使用 a. 样品制备b. pH 操作限值c. 溶剂d. 压力e. 温度IV. 缩放分离V. 故障排除VI. 色谱柱清洗、再生和储存a. 清洗与再生b. 储存 VII. 将色谱柱连接到HPLCa. 色谱柱接头和系统管路注意事项b. 测量系统谱带展宽体积 VIII. 测量梯度系统体积(或驻留体积)[ 维护和使用手册 ]II. 入门指南每根XBridge BEH C4蛋白专用色谱柱均具有合格证书和性能测试色谱图。
合格证书为每批填料所特有，包括批号、未键合颗粒和键合颗粒的分析，以及色谱结果和检测条件。
性能测试色谱图为每根色谱柱特有，其中包含以下信息：批号、色谱柱序列号、USP理论塔板数、USP拖尾因子、保留因子和色谱条件。
这些数据应当保存以备将来参考。
a. 色谱柱安装注：下述步骤给出的流速用于4.6 mm内径色谱柱的典型3.5 ìm填料。
请根据将要安装的色谱柱内经，相应地按比例升高或降低流速。
高效液相色谱在多肽分离分析中的应用
高效液相色谱在多肽分离分析中的应用李文龙;张慧;汤琦;高利龙;丛海林;于冰【摘要】多肽的高生物活性和低毒副作用使其成为近来国内外生命科学研究的热点,因此多肽的分离与分析也愈发的关键.高效液相色谱(HPLC)以其极高的分离效率和良好的选择性已经成为实验室和工业分离分析生物大分子最常用和有效的方法.本文主要介绍了HPLC以及一些新型色谱在多肽分析分离中的应用.%Polypeptide has become the focus of life science research at home and abroad because of its high bioactivity and low toxicity. High performance liquid chromatography(HPLC)with high separation efficiency and good selectivity has become the commonly used and the most effective method in laboratory and industrial separation and analysis of biological macromolecules. T his review mainly summarized the ap-plication of HPLC and some new chromatography techniques in the separation and analysis of polypep-tides.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2018(000)001【总页数】5页(P63-67)【关键词】高效液相色谱;多肽;分离;分析【作者】李文龙;张慧;汤琦;高利龙;丛海林;于冰【作者单位】青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;纤维新材料与现代纺织国家重点实验室培育基地,青岛大学材料科学与工程学院,青岛266071;青岛大学生物医用材料与工程研究院,青岛大学化学化工学院,青岛266071;纤维新材料与现代纺织国家重点实验室培育基地,青岛大学材料科学与工程学院,青岛266071【正文语种】中文随着生物化学技术的不断发展，多肽因其独特而又高效的吸收机制和非常强的生物活性，而成为生化专家们所关注和研究的热门材料。
排阻色谱法
六、应 用
（大分子）分子量的测定 （大分子）分子量分布的测定
（中小分子）有机物的定量分析
生物大分子纯化 指纹图谱（原油及其重质组分的评价） 样品净化（预处理）
（一）分子量的测定方法
凝胶柱的标定：
用一系列已知相对分子质 量M的标准品（最好与样品 化学组成相同），测定它 们在该凝胶柱上的保留体 积Ve（或保留时间），绘 制lgM-Ve曲线。
（溶胀处理平衡后重量 干燥重量） 溶胀率 100% 干燥重量
（4）凝胶粒径：
一般为球形，其粒径大小对分离度有重要影响。粒径越小， 分离效率越高。软凝胶粒径较大，一般为50～150m，硬凝胶粒 径较小，一般为5～50m。
（5）床体积（bed volume） 即1g干燥凝胶溶胀后所占的体积。
排阻色谱法
一、简
介
（一）定义：排阻色谱法(size exclusion chromatography， SEC)是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。又称 为凝胶色谱法、分子排阻色谱法、尺寸排阻色谱法等，是液 相色谱的一种。
一般用于分离水溶性的大分子，凝 胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂 主要是水。 （二）分类： 主要用于有机溶剂中可溶的高聚物相对分子质量 分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝 凝胶过滤色谱法-GFC胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。
2、直径比最小孔隙直径小的分子能全部进入凝胶颗粒 内部，这样的两种或两种以上的分子也不能达到分离 效果。
两种排阻色谱类型比较
凝胶渗透色谱（GPC）
流动相 采用水溶液或缓冲液作为流动 相
凝胶过滤色谱（GFC）
采用有机溶剂作为流动相
常用分析物质
分析高聚物的摩尔质量，如： 聚乙烯、聚氯乙烯等 交联聚苯乙烯凝胶
体积排阻色谱 (sec)柱用的仪器
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的色谱技术，也称为凝胶过滤色谱，它基于分子在流体中的尺寸和形状的差异，从而实现对分子的分离和分析。
而在SEC技术中，柱是至关重要的部分，体积排阻色谱柱是SEC技术中使用的一种特殊类型的柱，下面将详细介绍体积排阻色谱柱用的仪器。
1. 体积排阻色谱柱的特点体积排阻色谱柱是一种工程化的柱，与常规液相色谱柱有所不同。
它具有以下特点：（1）外围设计：体积排阻色谱柱通常采用不锈钢或者玻璃材质制成，外围设计均匀、结构合理，能够有效支持柱内填料，确保填料不会受到外力破坏。
（2）填料选择：体积排阻色谱柱的填料通常是粒径均匀的多孔球形颗粒，具有一定的孔径范围，能够较好地分离分子。
（3）稳定性：体积排阻色谱柱能够在一定的操作条件下保持较好的稳定性，不易受到外界影响而发生变形或损坏。
（4）易于连接：体积排阻色谱柱通常设计成易于连接的结构，可以与其他色谱设备灵活组装，便于操作和维护。
在体积排阻色谱实验中，除了色谱柱外，还需要配备一系列的仪器，以确保实验顺利进行。
主要的仪器包括：（1）色谱系统：用于将样品注入到色谱柱中，并控制流速、温度等操作参数。
色谱系统通常包括进样器、泵、检测器等部件。
（2）检测器：用于监测样品在色谱柱中的运动轨迹并进行信号采集和处理。
常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、光散射检测器等。
（3）设备连接：用于连接色谱柱和其他仪器，包括管道、接头、密封件等。
这些连接件需要具有良好的密封性能，以避免样品泄漏。
（4）温控设备：用于控制色谱柱和样品的温度，以确保实验在恒定的温度条件下进行。
在选择和使用体积排阻色谱柱时，需要注意以下几点：（1）填料选择：根据待分离的目标分子的分子量范围，选择合适的填料颗粒大小和孔径范围。
（2）流速控制：流速对于色谱分离效果至关重要，需要根据实验要求合理设置流速。
赛分科技-SRT体积排阻色谱柱
体积排阻色谱柱体积排阻色谱柱体积排阻色谱柱—水溶性体积排阻色谱柱水溶性体积排阻色谱柱概述SRT 、Zenix 、SRT-C 和Zenix-C 系列体积排阻色谱柱均采用经特殊表面修饰的高纯硅胶作为填料，其修饰方式为在硅胶表面化学键合一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜。
SRT 、Zenix 和SRT-C 、Zenix-C 键合方式的不同之处在于：前两者固定相表面键合的是一层“站立”着的单分子层，而后两者则是一层“平躺”着的单分子层。
同时Zenix 和Zenix-C 为3 um 粒径，SRT 和SRT-C 为5 um 粒径，这四款体积排阻柱相互配合，可满足客户对分辨率及柱效的不同要求。
赛分科技完整的产品线为生物分子体积排阻分离提供了稳定、重现和最高分辨率的最优选择。
固定相的差异图1. 固定相修饰的差异：SRT 和Zenix 在硅胶表面修饰了一层“站立”着的亲水中性单分子层，SRT-C 和Zenix-C 在硅胶表面修饰了一层“平躺”的亲水中性单分子层。
粒径差异图2. Zenix 和Zenix-C 以3 µm 多孔硅胶为基质； SRT 和 SRT-C 以5 µm多孔硅胶为基质Zenix 和Zenix-C 的独特优点Zenix 和Zenix-C 色谱柱采用3 µm 粒径的填料，为生物分子的分离提供最高的柱效。
表1. Sepax SEC 色谱柱的主要特点SRT体积排阻色谱柱SRT SEC键合固定相采用专利的表面修饰技术，通过在高纯度具有良好机械稳定性的硅胶基质上，键合一层均匀的纳米厚度中性亲水薄膜而制备得到。
工艺采用可控的化学修饰技术，因此能确保柱与柱之间有着可靠的重现性。
SEC填料采用化学键合技术，表面亲水涂层覆盖完全，因此不仅具有优异的稳定性，而且对蛋白等生物样品的非特异性吸附作用也非常小。
精心设计的大孔体积可保证高的分离容量以及优异的分辨率。
广泛应用于生物分子及水溶性聚合物的分离和检测。
TSKgelSuperSW系列色谱柱的综合介绍
表1
TSKgel 色谱柱
TSKgel SuperSW 系 列 色 谱 柱 和 TSKgel
20,000 20,000
表2
聚乙二醇 葡聚糖 蛋白质
TSKgel SuperSW 系列色谱柱的分子量分离 范围
分子量分离范围
SuperSW2000
SuperSW3000
500- 15,000
1,000- 35,000
1,000- 30,000
2,000- 70,000
5,000-100,000
10,000- 500,000
1. 简介
由于分析速度快，易于使用以及灵敏度高，高效液相色 谱被广泛用作生物大分子领域的分离/纯化方法。尤其是， 基于分子尺寸的分离模式，即大家熟知的尺寸排阻色谱 （SEC），由于高效且对蛋白的流动相条件温和，已经用作 蛋白质分离/纯化的首选方法。在具有网状结构的软填料（如 葡聚糖、琼脂糖等）被用作早期的尺寸排阻色谱的填料之后， 刚性更好的硅胶型填料也开始应用于高效液相色谱的尺寸 排阻色谱中。
–3–
图3
色谱柱：
流动相： 流速：
检测： 样品：
TSKgel SuperSW2000 和 TSKgel G2000SWXL 色谱柱的对比 TSKgel SuperSW2000（4.6mm ID × 30cm） TSKgel G2000SWXL（7.8mm ID × 30cm） 0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（pH6.7） 0.35mL/min（TSKgel SupperSW2000） 1.0mL/min（TSKgel G2000SWXL） UV@280nm, 微流通池 蛋白质标准溶液（5μL） 1. 甲状腺球蛋白（0.5g/L） 2. γ-球蛋白（1g/L） 3. 卵白蛋白（1g/L） 4. 核糖核酸酶 A（1g/L） 5. 对氨基苯甲酸（0.01g/L）
体积排阻色谱_(sec)柱用的仪器_概述说明以及解释
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器概述说明以及解释1. 引言1.1 概述体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的分离和测定高聚物、生物大分子以及纳米材料的方法。
它基于溶剂流动时样品在柱填充物中的渗透性，通过这种渗透性差异来实现对不同大小分子的分离。
SEC在生命科学、化工、材料科学等领域具有广泛的应用前景。
本文旨在对体积排阻色谱所使用的仪器进行概述说明，并解释其工作原理和关键组件。
同时，我们将介绍体积排阻色谱柱的结构、选择和优化方法，以及对样品准备、流动相选择和优化、参数设置和调整等方面给出操作注意事项。
1.2 文章结构本文包括引言、体积排阻色谱(SEC)柱介绍、体积排阻色谱仪器装置及关键组件说明、体积排阻色谱分析方法和操作注意事项以及结论部分。
在引言中，我们将对文章内容进行概述说明，并明确文章结构。
接下来，我们将详细介绍SEC柱的原理、结构以及选择和优化方法。
然后，我们将对体积排阻色谱仪器装置中的压力控制系统、流速控制系统和柱温控制系统进行说明。
在接下来的部分，我们将介绍体积排阻色谱分析方法所涉及的样品准备与预处理要点、流动相选择和优化方法以及参数设置和调整技巧。
最后，我们通过结论对整篇文章进行总结。
1.3 目的本文的目标是全面介绍体积排阻色谱所使用的仪器，帮助读者了解仪器的工作原理和关键组件，并提供一些操作须知。
通过阅读本文，读者将对体积排阻色谱有更深入的了解，并能够在实验中正确选择和使用相关设备，从而更好地开展SEC 柱分析工作。
2. 体积排阻色谱(SEC)柱介绍:2.1 SEC柱原理:体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，简称SEC）是一种基于分子尺寸差异的色谱技术。
该技术利用特殊设计的SEC柱实现对溶液中分子的分离和纯化。
其原理是根据样品中溶质分子在柱填料孔隙中的扩散速度而进行分离。
大尺寸分子由于无法进入较小的孔隙而沿柱床快速流过，而小尺寸的分子则能进入较小孔隙并在其中被滞留更长时间，因此产生了不同尺寸分子之间的强迫排阻现象。
体积排阻色谱 (sec)柱用的仪器
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：体积排阻色谱（size exclusion chromatography，SEC）是一种分离技术，通过固定在柱内的多孔分子筛来分离溶液中的大分子和小分子。
SEC技术在生物化学、药物研究和生物医学领域中得到广泛应用，因此对SEC柱用的仪器也要求越来越高。
SEC柱用的仪器主要包括色谱柱、色谱柱箱、流动相系统、检测器和数据处理系统等部分。
色谱柱是SEC技术的核心组成部分，它通过分子筛效应来分离目标分子。
色谱柱的选型会直接影响到分离效率和分辨率，因此选择合适的色谱柱对于SEC柱用的仪器至关重要。
常见的色谱柱材质有硅胶、聚碳酸酯、聚乙烯醇等，不同的材质适用于不同的分析范围和分子量范围。
色谱柱箱是SEC柱用的仪器中的另一个重要组成部分，它负责将溶液以流动相的形式送入色谱柱，并确保色谱柱稳定地运行。
色谱柱箱通常需要具备一定的自动化功能，如流速控制、温度控制和压力控制等，以确保分析的精确度和重复性。
一些先进的色谱柱箱还具备多柱并联的功能，可以同时进行多种样品的分析，提高实验效率。
流动相系统是SEC柱用的仪器中的另一个关键部分，它负责将溶液从样品进样口送入色谱柱中，以进行分析。
流动相系统通常需要具备高精度的流速控制功能，以确保色谱柱内的流速稳定，并通过机械泵、梯度泵等方式来实现不同流速的控制。
一些先进的流动相系统还具备多通道进样功能，可以同时进行多个样品的分析，提高实验的效率。
检测器是SEC柱用的仪器中的另一个重要组成部分，它负责检测色谱柱中流出的溶液成分，并将检测到的信号转化为电信号输出。
常见的检测器有紫外检测器、荧光检测器、光散射检测器等，不同的检测器适用于不同的分析目标。
在SEC技术中，光散射检测器特别适用于大分子的分析，因为它可以直接测定分子的分子量分布和聚集度等参数。
数据处理系统是SEC柱用的仪器中的最后一个重要组成部分，它负责对检测器输出的信号进行数据处理和分析，并对结果进行显示和记录。
排阻色谱蛋白分子量测定 20分钟左右的峰
排阻色谱蛋白分子量测定 20分钟左右的峰使用排阻色谱法（Size Exclusion Chromatography，SEC）测定蛋白分子量时，20分钟左右的峰可能代表该蛋白的聚合体或二聚体形式。
排阻色谱法是一种常用的蛋白质分子量测定方法，通过在色谱柱中分离不同大小的蛋白质分子，并根据其洗脱时间进行分子量测定。
一般来说，洗脱时间越长，分子量越大。
因此，20分钟左右的峰可能对应着较小的蛋白分子，如聚合体或二聚体形式。
然而，请注意，这种方法的结果可能受到多种因素的影响，如缓冲液pH值、离子强度、温度等。
此外，不同蛋白在色谱柱上的保留时间也会有所差异。
因此，如果需要更准确的分子量测定结果，建议使用其他方法，如SDS-PAGE或质谱等。
排阻色谱法
由于分子内含有大量羟基而具有极性，在水和其他极性 溶剂如乙二醇、二甲亚砜等中溶胀成凝胶颗粒，因醚键的不 活泼性，故具有较高的稳定性。
交联度大的孔隙小，吸液膨胀也少，可用于小分子物质 的分离。交联度小的孔隙大，吸液膨胀也大，适用于大分子 物质的分离。
（二）聚丙烯酰胺凝胶
聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰 胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，干燥粉碎或加 工成形制成粒状。适合蛋白和多糖的纯化。
分类：
1、按机械强度可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。
2、按化学性质分为有机凝胶（均匀凝胶、半均匀凝胶、 非均匀凝胶）；无机凝胶（非均匀凝胶）。
四、凝胶过滤介质
常用的是葡聚糖、聚丙烯酰胺、琼脂糖以及亲脂性凝胶。
（一）葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶是常用凝胶，由葡聚糖和交联剂甘油 通过醚桥相互交联而形成的多孔性网状结构。
排阻色谱法
一、简 介
（一）定义：排阻色谱法(size exclusion chromatography， SEC)是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。又称 为凝胶色谱法、分子排阻色谱法、尺寸排阻色谱法等，是液 相色谱的一种。
一般用于分离水溶性的大分子，凝
胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂
（二）分类：
3、流速
流速是影响分离的重要因素。一般流速低，分离效果好。 如流速在小于0.1ml/min时，蛋白质的分离度好；在 0.51.0ml/min时，对于7.5mm直径的柱子，分离效率较高。
4、样品容量
进样体积和样品浓度将明显影响到分离度。高浓度、小 体积对分离有利。合适的蛋白质样品浓度范围一般在0.010.5%，样品体积是柱体积的1-3%。
主主要要是用水于。有机溶剂中可溶的高聚物相对分子质量
体积排阻色谱和蛋白分离纯化
体积排阻色谱和蛋白分离纯化在生物科学领域，蛋白质的分离纯化是至关重要的研究环节。
体积排阻色谱法作为一种常用的蛋白质分离技术，具有广泛的应用前景。
本文将深入探讨体积排阻色谱法的原理、应用以及面临的挑战。
一、体积排阻色谱法的原理体积排阻色谱法，也称为凝胶过滤色谱法，其基本原理是利用固定相的孔径大小对样品进行分离。
在色谱柱中，大分子蛋白质无法进入凝胶颗粒的内部，而小分子蛋白质则可以进入凝胶颗粒内部。
随着流动相的流动，大分子蛋白质将比小分子蛋白质更早地流出色谱柱，从而实现样品的分离。
二、体积排阻色谱法的应用体积排阻色谱法在蛋白质分离纯化中具有广泛的应用。
首先，该方法可以用于分离和纯化各种生物分子，如蛋白质、多糖和核酸等。
其次，体积排阻色谱法可以用于蛋白质的分子量测定和分子量分布研究。
此外，该方法还可以用于蛋白质的脱盐、脱水和脱磷等预处理过程。
三、面临的挑战尽管体积排阻色谱法在蛋白质分离纯化中具有广泛的应用，但仍面临一些挑战。
首先，对于一些具有相似分子量或性质的蛋白质，分离效果可能不佳。
其次，对于一些具有较大分子量的蛋白质，可能会在凝胶颗粒内部形成聚集物，影响分离效果。
此外，对于一些具有不稳定性质的蛋白质，可能会在色谱柱中发生变性或降解。
四、未来展望为了克服体积排阻色谱法面临的挑战，未来的研究可以关注以下几个方面。
首先，开发新型的固定相材料，以提高对相似分子量或性质的蛋白质的分离效果。
其次，优化色谱柱的制备工艺，以提高对大分子量蛋白质的分离效果。
此外，研究蛋白质在色谱柱中的行为，以了解其变性和降解机制，为提高蛋白质的稳定性提供理论支持。
总之，体积排阻色谱法作为一种常用的蛋白质分离技术，具有广泛的应用前景。
尽管面临一些挑战，但通过不断的研究和改进，相信该方法在未来的蛋白质分离纯化中将发挥更加重要的作用。
血清蛋白柱层析法洗脱峰曲线
血清蛋白柱层析法洗脱峰曲线
血清蛋白柱层析法是一种常用的分离和纯化血清蛋白的方法。
洗脱峰曲线描述了在柱层析过程中，不同成分在不同时间点从柱上洗脱出来的曲线。
血清蛋白柱层析法通常包括以下步骤：样品加载、洗脱、等温浓缩和洗脱物分析。
在样品加载步骤中，血清样品经过预处理后被加载到层析柱上。
然后通过洗脱步骤，使用不同的洗脱缓冲液，逐渐改变柱中的溶质浓度，从而将不同成分分离出来。
洗脱峰曲线就是描述不同成分在洗脱过程中的相对峰高和峰面积随时间的变化情况。
洗脱峰曲线可以提供以下信息：
1. 成分分离情况：通过观察不同的峰出现时间和高度，可以确定样品中的不同成分是否被成功分离。
2. 成分纯度：洗脱峰的峰形和峰宽可以反映样品中所含成分的纯度，峰形对称和峰宽窄表示样品的纯度较高。
3. 柱效和柱使用寿命：洗脱峰曲线的对称性和峰宽的变化反映了柱性能和使用寿命，当峰形变得不对称且峰宽变宽时，可能意味着柱效已经下降，需要更换柱子。
血清蛋白柱层析法洗脱峰曲线的分析可以帮助确定最佳的洗脱条件和柱子使用寿命，提高血清蛋白的分离纯化效果。
凝胶层析分离血红蛋白与鱼精蛋白
亲和层析是利用生物分子间所具有的专一性亲和力的层析技术。
层析法分类
按层析过程的机理分类：
层析法分类
按两相所处的状态分类： 流动相有两种状态：液体作为流动相 气体作为流动相 固定相也有两种状态：固体吸附剂作为固定相 以吸附在固体上的液体作为固定相 按两相所处的状态分为： 液相层析和气相层析
凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部分）
外水体积（V0）
内水体积（Vi）
基质体积（Vg）
柱床体积（Vt）
当分子的Kd＝0时，Ve＝Vo即该分子被完全排阻于凝胶颗粒之外，全部分布于流动相里，固定相里分布为零（A)； 当分子的Kd＝1时，Ve＝Vo+Vi即该分子完全不被排阻，均匀的分布在流动相和固定相里，两相比值为1(C)； 当0 < Kd <1时， Ve = Vo + Kd*Vi即表明分子受到部分排阻(B)。
层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，即各组分所受的固定相的阻力和流动相的推力影响不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。
01
03
02
层析的两种相
亲和层析纯化过程简单、迅速，且分离效率高。对分离含量极少又不稳定的活性物质尤为有效。缺点是针对某一分离对象，制备专一的配基和寻求层析的稳定条件限制了其使用。
亲和层析法
亲和层析示意图
离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化。
离子交换层析的固定相是离子交换剂，它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。
蛋白纯化方法—凝胶过滤色谱
活性蛋白整体方案凝胶过滤色谱摘要：本文主要讲解了凝胶过滤色谱法（分子筛）在蛋白纯化实验中的应用，包括纯化原理、实验方案设计、技术操作以及相关案例介绍和问题分析。
基本原理凝胶过滤色谱蛋白纯化法，又称为空间排阻色谱，分子筛等。
其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。
当样品从色谱柱的顶端向下运动时，大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱；而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中，且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同，分子量越大，流出时间就越早，最终分离分子大小不同的蛋白质。
凝胶过滤色谱原理通常，多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的，交联程度决定凝胶颗粒的孔径。
常用的色谱基质有：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、聚丙烯酰氨凝胶（Bio-Gel P）等。
高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子，或是除去低分子量缓冲液成分和盐，而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。
选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。
实验方案设计1.凝胶介质的选择凝胶介质的选择主要是根据待分离的蛋白和杂蛋白的分子量选择具有相应分离范围的凝胶，同时还需要考虑到分辨率和稳定性的因素。
比如，如果是要将目的蛋白和小分子物质分开，可以根据他们分配系数的差异，选用Sephadex G-25和G-50；对于小肽和低分子量物质的脱盐，则可以选用Sephadex G-10、G-15以及Bio-Gel P-2或P-4；如果活性蛋白整体方案是分子量相近的蛋白质，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。
具体凝胶过滤色谱介质应用如下：常用凝胶过滤色谱介质的分离范围凝胶介质蛋白质的分离范围/103凝胶介质蛋白质的分离范围/103Sephadex G25 Sephadex G50 Sephadex G100 Sephadex G200 Sepharose6B Sepharose4B1~51.5~304~1505~60010~400060~20000Sepharose2BBio-Gel P-4Bio-Gel P-10Bio-Gel P-60Bio-Gel P-150Bio-Gel P-30070~400000.5~45~1730~7050~150100~4002.凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。
sd200尺寸排阻色谱100kd蛋白出峰体积
sd200尺寸排阻色谱100kd蛋白出峰体积SD200尺寸排阻色谱是一种常用的蛋白质分离技术，它根据蛋白质的大小和形状进行分离。
使用SD200尺寸排阻色谱分离100kd蛋白时，出峰体积是一个重要的参数，它决定了蛋白质的分离效果和检测灵敏度。
在SD200尺寸排阻色谱中，100kd蛋白的出峰体积受到多种因素的影响，如色谱柱的填料、流动相的组成和流速等。
一般来说，较小的填料粒径和较高的流速会导致较小的出峰体积，而较长的色谱柱和较低的流速会导致较大的出峰体积。
为了获得最佳的分离效果，需要仔细选择色谱柱填料、流动相组成和流速等参数。
在实验过程中，可以通过优化这些参数来减小100kd蛋白的出峰体积，提高分离效果和检测灵敏度。
除了SD200尺寸排阻色谱外，还有其他蛋白质分离技术如凝胶电泳、反相色谱等。
这些技术也可以用于分离100kd蛋白，但每种技术都有其优缺点。
SD200尺寸排阻色谱的优点是分离效果好、分辨率高、可用于大量样品处理等。
总之，SD200尺寸排阻色谱是一种有效的蛋白质分离技术，可用于分离100kd蛋白。
通过优化实验参数，可以减小100kd蛋白的出峰体积，提高分离效果和检测灵敏度。
在实际应用中，应根据具体需求选择合适的蛋白质分离技术，以达到最佳的分离效果。
药物与血浆蛋白结合的药理学基础及其研究进展
Hale Waihona Puke ◇综述 ◇中国临床药理学与治疗学 中国药理学会主办
CN 3421206ΠR , ISSN 100922501 http :ΠΠwww. DrugChina. net 2005 Mar ;10 (3) :241 - 253
药物与血浆蛋白结合的药理学基础及其研究进展
郭 宾 ,李 川
中国科学院上海生命科学研究院药物研究所 ,上海 201203
法来估算表观结合容量和结合常数[5] ,进而可计算
任一药物浓度下的蛋白结合率 。
1. 2 药物与血浆蛋白的结合位点 以上假设认为
药物在蛋白上的结合位点是相互独立的 ,结合作用
时互不干扰 ,不存在时序和空间效应 。尽管多数的
药物与血浆蛋白的结合不是特异性的 ,不像与特定
受体作用那样专一 ,但蛋白大分子与药物相互作用
型 (bound) 药物 ,而未被结合 (unbound) 的部分则称为
游离型药物 (free drug) 。药物的结合主要通过离子
键 、氢键 、疏水性结合及范德华力结合 ,一般是可逆
的 ,结合型药物分子变大不易透膜而“储存”于血液
中 ,经血液运输通过游离药物分布到机体各组织部
位[1] 。多数药物在血液中与血浆蛋白结合 ,还可以
白结合与药物代谢动力学 ,以及与药效相关性之间 的相互关系的理论阐述 ,总结在常规的药物实践中 如何考虑这些重要因素 ,以明确哪些药物在什么情 况 ,才有必要进行药物的游离浓度监测 ,以及血浆蛋 白结合的药效和临床相关性研究 。
1 药物与血浆蛋白的结合
药物进入循环后 ,因结构上的差异或多或少会
与血液中的成分 (如血细胞 、血浆蛋白等) 形成结合
因此在多位点或多药物分子结合时可能产生药物之间的抑制诱导协同效应等相互作用幢6jhsa的分子量为66248其一级结构序列分析很早就完成了由585个氨基酸残基组成的一条多肽链牛血清白蛋白bsa的氨基酸残基数为582含有35个半胱氨酸残基cys除cys34夕b其余形成17对二硫键怛jhsa的二级结构包括iiiiii三个a一螺旋的结构域domain其中每个结构域又分为a和b两个亚结构域subdomain1011