反相高效液相色谱法同时测定藏药广枣中没食子酸和原儿茶酸的含量

（ $ * 电子科技大学生命科学与技术学院，四川 成都 #$""&% ；! * 成都中医药大学民族医药研究所，四川 成都 #$""-& ） 关键词： 反相高效液相色 谱 法 （ 89+:9;< ） ； 没食子酸 （ 2.))/7 .7/0 ） ； 原儿茶酸 （ =’"6"7.6$7>5/7 .7/0 ） ； 藏药 （ ,/&$6.1 %$0/7/1$ ） ； 广枣 （ !"#$%#&’#()*+& +,*--+%*$& ） 中图分类号： ?#&* , , 文献标识码： @ , , 文章编号： $""" +*-$( （ !""# ） "# +"#&! +"! , , 栏目类别： 技术与应用
! ! 结果表明， 上述藏医院所用广枣 中 没 食 子 酸 和 原 儿 茶 酸 的含量差异较 大， 质 量 参 差 不 齐。 其 中， 青海省碌曲县藏医 院所用广枣中没食子酸和原儿茶酸 的 含 量 相 差 最 大， 比值达 /* / ， 而青海省雄化县藏医院所用广枣中没有检测出原儿茶
表 & # 各地藏医院所用广枣中没食子酸和 原儿茶酸含量的测定结果 （ ’ ( /） 样品来源 青海省西宁市藏医院 青海省雄化县藏医院 青海省碌曲县藏医院 甘孜州藏医院 甘孜州德格县藏医院 阿坝州藏医院 甘肃省南州卓尼县藏医院 西藏昌都藏医院 # ：未检出 * 没食子酸 ( （ )! ( ! ） %) ," %) +%) $/ %) $, %) $. %) ,, %) ,+ %) ,, 原儿茶酸 ( 没食子酸与原 （ )! ( ! ） 儿茶酸的含量比 %) // # %) %’ %) +. %) +/ %) $& %) $$ %) /. +) , # /) / +) " +) & +) . +) . +) /
, , 藏药广枣 （ 藏文名： 娘肖夏） 为漆树科南酸枣属植物 南 酸 枣 !"#$%#&’#()*+& +,*--+%*$&（ 8"A&* ） @5’66 $6 :/))* 的 干 燥成熟果实， 具 有 行 气 活 血、 养 心 安 神 之 功， 常用于气滞血 瘀、 心区作痛、 心跳气短、 心神不安等的 治 疗［ $ ］。 广 枣 常 配 成 方用， 在 《 藏药部颁 标 准 》 中， 含有广枣的成方制剂约占总数 的 -. & B ， 是藏蒙医的常用药之 一。现 代 药 理 研 究 表 明， 酚酸 类成分如没食子酸和原儿茶酸具有 明 显 的 抗 氧 化、 清除自由 基、 抑制血小板聚集作用和抗缺氧活性［ ! / # ］。 , , 历版 《 中国药典》 均未收载本品中没食子酸和原儿茶酸 的含量测定方法， 文 献 对 其 他 药 材 中 的 没 食 子 酸、 原儿茶酸 的含量测定多有报道［ - / $! ］， 但未见有在广枣中同时测定二者 含 量 的 研 究 报 道。 为 此， 用 反 相 高 效 液 相 色 谱 法（ 89+ :9;< ） 同时测定了广枣中没食子酸和原儿茶 酸 的 含 量， 此法 简便、 快 速、 准 确， 结 果 令 人 满 意， 可用于藏药广枣及其制剂 的质量控制。
!" 实验部分
! ! !" 仪器和材料 , , 日本岛津 ;<+$" C 高 效 液 相 色 谱 仪， D9E+$" C#= 紫 外 检 测器， C,+((" 恒温箱， 浙江大学 !!""" 色谱数据 工 作 站， <F+ !&" 型超声 波 清 洗 器 （ 上海必能信超声有限公司） ， @9!$$ E 电子天平 （ 德国 D.’6"’/5G 公司） 。没食子酸 和 原 儿 茶 酸 对 照 品 （ 供 含 量 测 定 用， 批 号 分 别 为 $$"*($ +!""("! 、 $$"*") + !""$"! ， 由中国药 品 生 物 制 品 检 定 所 提 供 ） ， 乙 腈 为 色 谱 纯， 其他试剂均 为 分 析 纯， 水 为 重 蒸 水。 广 枣 （ !"#$%#&’#()*+& +,*--+%*$& ） 药材收集于各地藏医院。 ! ! #" 色谱条件 , , 色谱柱： H’"%.G/) < $* （ !&" %% 0 %. # %% /* 0* ， & !% ） ； 流动相： 乙腈 +". "( %") I ; 十六烷基溴化铵 + . ， .+ 二 甲 基 甲 酰 胺 + 磷酸 （ 体积比 *1 *!1 -. & 1 ". $ ） ； 流 速： $. " %; I %/1 ； 检测波 长： !-" 1% ； 柱温： (" J ； 灵敏度： ". "* CKLD 。 ! ! $" 供试品溶液的制备和测定 , , 取药材细粉 $. " 2 ， 精 密 称 定， 置 于 &" %; 圆 底 烧 瓶 中， 精密加入体积分数为 &" B 的 甲 醇 水 溶 液 !" %; ， 称 其 质 量。 加热回流 #" %/1 ， 放 冷 至 室 温 后， 再 称 其 质 量， 用 &" B 甲 醇 溶液补足损失 的 质 量。 摇 匀， 滤 过， 取续滤液作为供试品溶 液。吸取供试品溶液 $" ! ; 注入液相 色 谱 仪， 用外标法分别 计算没食子酸和， 等： 反相高效液相色谱法同时测定藏药广枣中没食子酸和原儿茶酸的含量
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# $% &"’ （ ! ( %) &&& $ ） ， 在 %) %$& $ * %) +," ! ! 范围内， 其浓度 与 峰 面 积 的 线 性 关 系 良 好； 原 儿 茶 酸 的 回 归 方 程 为： " ( （ ! ( %) &&& $ ） ， 在 %) $%, * +) %$ ! ! 范 围 -%- ,+- # # - ,,%) & 内， 其浓度与峰面积的线性关系良好。 ! ! "# 精密度试验和回收率试验 ! ! 取混合对照品标准溶液 +% ! " ， 连续进样 . 次， 记录峰面 积， 经计 算 没 食 子 酸 峰 面 积 的 相 对 标 准 偏 差（ #$% ）为 %) &+ & ， 原儿茶酸峰面积的 #$% 为 %) $’ & 。 ! ! 取已知含量的样品， 精密加入一 定 量 的 没 食 子 酸 和 原 儿 茶酸标准溶液进行回收率试验， 测得 没 食 子 酸 的 平 均 回 收 率 为 &’) /% & ，#$% 为 +) .& & ，原 儿 茶 酸 的 平 均 回 收 率 为 &&) // & ， #$% 为 +) ’& & 。 ! ! $# 最低检出限测定 ! ! 分别取没食子酸和原儿茶酸对 照 品 溶 液， 适当稀释后进 样分析， 在 $ % & 为 / 时， 测 得 二 者 的 最 低 检 出 限 分 别 为 .) " ’! 和 &) ’ ’! 。 ! ! %# 实际样品测定 ! ! 取不同藏医院的广枣药材， 按上 述 供 试 品 溶 液 制 备 方 法 制得供试品溶液， 依法测定， 结果见表 + 。
收稿日期： !""& +$! +$) 第一作者： 邓科君， 女， 硕士， 从事民族药物的品质评价研究， ,$) ： （ "!* ） *(!"#&&# ， -+%./) ： 0$123$451( + 6"%* 7"%* 通讯联系人： 张 , 艺， 男， 教授， 从事民族药物的品质评价研究， ,$) ： （ "!* ） *-*!&)(% * 图 ! " （ "） 混合对照品和 （ #） 供试品的色谱图 $ * 没食子酸；! * 原儿茶酸 *
# ! #" 工作曲线的制备 , , 精确称取没食子酸和原儿茶酸 对 照 品 适 量， 用甲醇分别 配 制成 -( %2 I ; 和 &$ %2 I ; 贮备液， 稀释后得到一系列不同 浓度的混合对照品溶液。以对 照 品 的 进 样 量 （ ,， 为横坐 !2） 标、 对应的峰面积 （ /） 为纵坐标作图， 经直线回归处理分别得 / 2 $" # , 到二者的工作 曲 线 方 程。 没 食 子 酸 的 回 归 方 程 为：
酸， 其他几个藏医院所用广枣中没食 子 酸 和 原 儿 茶 酸 含 量 的 比值基本在 +) / * +) & 之间。
"# 讨论
! ! 在色谱条件的筛选中， 曾考察过乙腈 + 水和甲 醇 + 水 系 统， 但均未达到二者同时分离的效果； 考虑到没食子酸和原儿茶 酸都属于酚酸类物质， 具有酸性， 因 此 加 入 离 子 对 试 剂， 用乙 腈 +%) %/ ),- ( " 十 六 烷 基 溴 化 铵 + & ， &+二 甲 基 甲 酰 胺 +磷 酸 （ -0 -$0 ’) .0 %) + ） 作流动相， 达到了同时 分 离 这 两 种 酚 酸 类 物 质的效果， 且没食子酸和原儿茶酸 的 色 谱 峰 形 尖 锐、 对 称， 与 其他色谱峰的分离度均大于 +) . 。 ! ! 本研究建立了 同 时 测 定 藏 药 广 枣 中 没 食 子 酸 和 原 儿 茶 酸含量的方法， 该法简便、 准确， 适宜作为广枣及其制剂的质 量控制方法之一； 不同藏医院所用广 枣 药 材 中 两 个 成 分 含 量 相差较大， 说明加强对其所含的有效 成 分 没 食 子 酸 和 原 儿 茶 酸含量测定的重 要 性； 此 外， 广枣的酚酸类成分中没食子酸 和原儿茶酸含量的 相 关 性 进 而 表 现 在 药 效 学 上 是 否 也 有 所 不同还需进一步研究。 参考文献：