谷丙转氨酶性能验证
血清谷丙转氨酶实验报告
血清谷丙转氨酶实验报告血清谷丙转氨酶实验报告血清谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，简称ALT）是一种存在于肝脏细胞中的酶类物质，它在肝脏功能评估中起着非常重要的作用。
通过检测血液中的ALT水平，可以帮助医生判断肝脏是否受损或存在疾病。
一、实验目的本次实验的目的是通过测量血清中ALT的含量，了解被检测对象的肝脏功能是否正常。
通过对实验结果的分析，可以初步判断是否存在肝脏疾病，并为进一步的诊断和治疗提供参考依据。
二、实验方法1. 实验前准备：准备好实验所需的血清样本、试剂和仪器设备，确保实验环境清洁卫生。
2. 采集血清样本：选择合适的部位，用无菌针头采集被检测对象的静脉血液。
注意遵守无菌操作规范，避免外界污染。
3. 血清分离：将采集到的血液样本放置于离心管中，以适当的转速离心一段时间，使血液分离成血清和红细胞。
4. ALT检测：将分离得到的血清样本转移至ALT检测仪器中，按照仪器操作说明进行操作。
仪器会自动测量ALT的含量，并显示结果。
三、实验结果根据实验测得的结果，ALT的含量可以分为正常范围和异常范围。
正常范围通常是男性10-40 U/L，女性7-35 U/L。
如果实验结果显示ALT的含量超出正常范围，可能意味着肝脏受损或存在疾病。
四、结果分析1. ALT升高的原因：ALT升高可能是由于肝脏炎症、肝细胞坏死、肝损伤等原因导致。
常见的疾病如肝炎、脂肪肝、肝硬化等都会引起ALT的升高。
2. ALT降低的原因：ALT降低可能是由于肝脏功能减退或肝细胞受损导致。
例如，肝功能衰竭、肝癌等情况下，ALT的含量通常会降低。
五、临床意义ALT作为肝脏功能的指标之一，对于肝脏疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。
通过检测ALT的含量，可以帮助医生判断肝脏是否受损，并及时采取相应的治疗措施。
六、实验注意事项1. 实验操作要规范：在实验过程中，要严格遵守无菌操作规范，避免外界污染。
同时，仪器操作要按照说明书进行，确保结果准确可靠。
谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的了解谷丙转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义，学习谷丙转氨酶活性测定的原理和方法。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于肝脏、心脏等组织中。
它催化丙氨酸与α-酮戊二酸在氨基转移过程中相互转化，生成谷氨酸和丙酮酸。
在正常情况下，血清中的ALT含量较低。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
因此，血清ALT活性的测定在临床诊断中具有重要意义。
本实验采用比色法测定血清ALT活性，通过观察反应体系中丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-P）的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 血清样本- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- α-酮戊二酸- 丙氨酸- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸二氢钠（NaH2PO4）- 0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）- 0.1mol/L盐酸（HCl）- 标准曲线样品2. 仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管- 试管四、实验步骤1. 标准曲线的制作：- 配制不同浓度的标准曲线样品，分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。
- 将标准曲线样品置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：- 将血清样本按照一定比例加入反应体系中，加入2，4-DNPH和底物，混匀。
- 将反应体系置于恒温水浴锅中，反应一定时间。
- 反应结束后，加入0.1mol/L氢氧化钠终止反应。
- 将终止后的反应体系置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.998，表明本实验采用的方法具有良好的线性。
2. 血清ALT活性的测定：实验结果显示，本实验测定的血清ALT活性为XX单位/L。
实验七.血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
混匀，３７℃水浴预温１０min
2,4-二硝基苯肼溶液
0.1mol/L ＮaOH
0.５
５.0
0.５
５.0
0.５
５.0
混匀，３７℃水浴保温２０min
A520nm波长处比色 计算公式：S-GPT活性单位%= A测/A标×57
三、思考题
以下思考题任选2个作答
1.
什么叫转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用
实验考试
血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
生化与分子生物学教研室
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 考试时间90分钟 血清样品每人一支，并记录编号 移液器及Tip头对应使用，正确操作 登记学号、姓名、血清编号、A测、A标、计算结果及实验报告 的平均成绩 每位同学书写当次实验报告包括思考题，并及时清洗自己所用 的器皿，并将试剂、器皿正确归位 值日生负责当次实验室整体卫生
在蛋白质的合成与分解及糖，脂肪代谢中有何重要
作用？
2. 3. 4. S-GPT活性测定二次保温有什么意义？ 影响酶促反应的因素有那些？ 本实验直接测定物质是什么？
一、实验原理
血清谷丙转氨酶（S-GPT）催化下列反应：
在足量底物条件下，生成产物越多表明酶活性越大，酶浓度越 高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表S-GPT活性的大小。
二、实验操作
赖氏法测定S-GPT活力：取干净试管3支，按下表操作： 加入物 测定管 标准管 空白管
谷丙转氨酶底物溶液 血清 丙酮酸标准液（２umol/mL） 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.５ 0.1 0.５ 0.１ 0.５ 0.１
实验十 血液转氨酶(谷丙转氨酶)活力的测定
实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。
或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3、熟悉分光光度计的使用。
【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。
当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。
现用现配。
2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。
然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验类型：验证性实验相关知识1. 酶活力：2. 酶活力单位(即酶含量的多少)国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶4 谷丙转氨酶一、 实验目的1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏2． 722型分光光度计、剪刀、吸管3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液2 ＋辅基为磷2 2 + + ‘ ‘四、实验操作步聚1.肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。
（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液五、实验结果与讨论2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
生物化学实验谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、[实验目的]1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、[仪器与试剂]1．实验材料动物肝脏2．实验试剂（1）0.9%NaCl溶液（2）海砂（3）1%谷氨酸溶液（1%KOH溶液中和）（4）1%丙酮酸钠溶液（用1%KOH溶液中和）（5）0.1%KHCO3溶液（6）0.025%一溴乙酸溶液（用1%KOH中和）（7）2%乙酸溶液（8）酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水（按重量计算）混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
（9）0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液（10）0.1%标准谷氨酸溶液（11）0.1%标准丙氨酸溶液（12）1%KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、[实验原理]观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。
二、[实验操作]1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂 200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用取试管2支，按下表加入试剂，加入试剂的单位为mL加脱脂棉塞，45℃水浴，1.5h，时时振荡内容物沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
谷丙转氨酶实验报告
谷丙转氨酶实验报告谷丙转氨酶实验报告谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，简称ALT）是一种存在于肝脏细胞中的酶，它在蛋白质代谢中发挥重要作用。
本实验旨在探究谷丙转氨酶在人体健康和疾病中的变化，并了解其在临床诊断中的应用。
实验一：谷丙转氨酶的生物学功能谷丙转氨酶在人体中主要负责氨基酸丙氨酸和α-酮戊二酸之间的转化。
这一转化过程是通过谷丙转氨酶催化的，同时还需要辅酶B6的参与。
谷丙转氨酶的正常功能对于人体的蛋白质代谢和能量平衡至关重要。
实验二：谷丙转氨酶的测定方法在临床诊断中，测定血清中的谷丙转氨酶水平是评估肝脏功能和肝炎等疾病的重要指标之一。
目前常用的测定方法有酶动力学法和免疫学法。
酶动力学法是通过测定谷丙转氨酶催化丙酮酸和谷氨酸之间转化的速率来确定其活性。
该方法简便、快速，但需要较高的仪器设备和专业操作。
免疫学法则是利用特异性抗体与谷丙转氨酶结合，形成免疫复合物，通过光学测定免疫复合物的含量来测定谷丙转氨酶的水平。
该方法操作简单，结果准确可靠。
实验三：谷丙转氨酶的临床应用谷丙转氨酶的测定在临床上有着广泛的应用。
其中最常见的是用于评估肝脏功能。
肝脏是人体内最重要的代谢器官之一，谷丙转氨酶作为肝细胞损伤的指标之一，其水平的升高可以提示肝脏疾病的存在。
此外，谷丙转氨酶的测定还可以用于肝炎的诊断和治疗监测。
肝炎是一种常见的肝脏疾病，通过测定谷丙转氨酶的水平可以判断肝炎的严重程度和疾病的进展情况。
实验四：谷丙转氨酶的异常情况及其意义正常情况下，谷丙转氨酶的水平在血清中较低。
然而，当肝细胞受损时，谷丙转氨酶会从细胞内释放到血液中，导致其水平升高。
因此，谷丙转氨酶的异常升高常常与肝脏疾病相关。
当谷丙转氨酶的水平超过正常范围时，可能提示肝脏疾病的存在，如肝炎、肝硬化等。
此时，进一步的检查和诊断是必要的，以确定具体的病因和治疗方案。
结论：谷丙转氨酶作为一种重要的生物标志物，在人体健康和疾病中起着关键作用。
血清谷丙转氨酶的测定实验结果和结论
血清谷丙转氨酶的测定实验结果和结论
血清谷丙转氨酶（ALT）是一种肝脏酶，可以在血液中进行检测。
血清ALT测定是检查肝脏功能的常见方法之一。
实验结果显示，受试者的血清ALT值为50 U/L，高于正常范围。
正常成年男性的ALT值通常在10到40 U/L之间，女性在7到35 U/L 之间。
这表明受试者的肝脏功能有一定损害。
结合临床病史，受试者近期饮食不规律，经常吃油炸、辛辣等刺激性食物，并有明显的腹泻和腹痛症状。
这些因素可能导致肝脏负担加重，从而导致ALT升高。
ALT升高也可能是肝脏疾病的早期指标，如肝炎、脂肪肝等。
因此，及时进行肝脏功能检查和相关疾病的筛查十分必要。
另外，生活习惯也是影响肝脏健康的重要因素。
保持规律的作息和饮食习惯，适当运动，戒烟限酒等行为都有益于肝脏健康。
总之，血清ALT值的升高提示肝脏功能异常，需要及时进行检查和治疗。
同时，保持健康的生活方式也是保护肝脏健康的重要手段。
实验十二谷丙转氨酶活性检测
六、注意事项
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中 保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过 500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无 作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸 价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
三、仪器与试 剂
* 仪器
1. 5×15cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。
* 试剂
磷酸盐缓冲液 ⑴0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶
解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。 ⑵0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,
（2）其他疾病：
心肌梗塞及心功能不全导致肝淤血可使 ALT明显升高。骨骼疾病、多发性肌炎、 肌 营 养 不 良 均 可 使 A LT 活 性 升 高 。 某 些 药物或毒物如异菸肼、鲁米娜、四氯化 碳等可引起ALT活性升高。
参考值: 速率法：0－30IU/L
血清中谷丙转氨酶的测 定有何临床意 义？
血清谷丙转氨 酶活性的测定
一、实验目的
掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原
01
理。 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操
02
作方法。
了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意
03
义。
二、基本原 理
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸：
严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮
血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度( 改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度) 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度, 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
【实验原理】 实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃ 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 成反应，生成丙酮酸-2,4成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中 生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过 标准曲线查出血清中ALT的活性。 标准曲线查出血清中ALT的活性。
二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 二是比色测定法，如：金氏法（King法）、穆氏法（Mohun 法）和赖 氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 氏法（Reitman-Frankel法）。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 相同。不同之处在于作用时间：King法60min ，Mohun法和 Reiman法 相同。不同之处在于作用时间：King法 Mohun法和 Reiman法 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单 1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min，生成1μmol丙酮酸称为一个单 位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4，37℃条件下与底物作 用30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定 min，每生成2.5微克丙酮酸为1 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位 的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血 的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血 清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质 清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质 的量浓度，而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的 定义条件代入国际单位计算公式，即得卡门氏单位与国际单位的换算关系： 1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。 卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃)，便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
谷丙转氨酶活性测定
在各种转氨酶中，谷氨酸 - 草酰乙酸转氨酶 （简称谷草转氨酶）及谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简 称谷丙转氨酶）活力最强。 上述两种转氨酶均广泛存在于机体组织内， 在正常人血清中也有少量，机体发生肝炎。心肌 梗塞等病变时，血清中转氨酶活力显著增加，所 以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。 它们的催化反应如下：
COOH
COOH 转氨酶
CH3
(CH2)2
CH3
C=O +
(CH2)2
CHNH2
CHNH2+ C=O
←→
COOH COOH
丙氨酸 α -酮戊二酸
COOH
丙酮酸
COOH
谷氨酸
测定转氨酶活力的方法很多，如分光光度法，纸 上层析法等。在本方法中，谷丙转氨酶作用于丙氨 酸和α－酮戊二酸后，生成的丙酮酸与 2,4 － 二硝 基苯肼作用生成丙酮酸2,4－ 二硝基苯腙。 本方法中用分光光度法，根据硝基苯腙的生成 量可以计算酶的活力。
表1.丙酮酸钠标准曲线的绘制
管号 0 试剂 丙酮酸钠标准液/ml 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 1 2 3 4 5
谷丙转氨酶底物/ml 磷酸缓冲溶液 (0.1M pH7.4) /ml
0.50 0.10
0.45 0.10
内外温 0.50 分钟
0.40 0.10
度 0.50
0.35 0.10
0.30 0.10
0.25 0.10
37℃水浴中保温， 平衡管 2，4-二硝基苯肼/ ml 0.50 保温20
0.50
0.50
0.ห้องสมุดไป่ตู้0
NaOH (0.4N)/ml
A520nm
5
静置30
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
0.35
0.10 0.10
0.10
0.10
各管混匀后
2,4一二硝基苯肼溶液
0.5
0.5
0.5
0.5
5
6
0.20 0.25
0.30 0.25 0.10 0.10
0.5 0.5
各管混匀后，置于37℃ 水浴中保温20min
0.4 mol/L NaOH溶液
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0 5.0
混匀，于10min后30min内在520nm处比色。以第1管调零，读取各管吸光度值。
实验
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
一. 实验目的
1.掌握金氏法测定血清谷丙转氨酶活性的原理 2.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义 3.熟悉实验操作及注意事项，进一步掌握标准曲线
的绘制以及酶活性单位的计算
二. 相关理论知识
酶（enzyme）？
由活细胞合成的能够催化特定化学反 应的蛋白质、RNA或其复合体，绝大 多数酶的化学本质是蛋白质。
五.实验结果
2.计算 2）血清谷丙转氨酶（ALT）活性的计算
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性时，酶活性单位定义：
一个活性单位是指在37℃，1mL血清与底物作用60min， 生成1μmoL丙酮酸。
将测定管吸光度值代入上述标准曲线，求出相应的丙酮酸含
量(μmol)；
根据丙酮酸含量计算1毫升血清中ALT活性单位数
ALT活性单位数=生成丙酮酸的量×10
★6、 样品为小牛血清，参考值：0~1个活性单位
五.实验结果
1.原始数据
金氏法测定血清谷丙转氨酶活性
试管编号 A
23456
测定管
测定人：
血清谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的通过本实验，了解血清谷丙转氨酶（SGPT）的测定原理、方法及临床意义，掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活性的操作技能。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间氨基转移的酶，主要存在于肝细胞内。
当肝细胞受到损害时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性，通过测定ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 试剂：丙氨酸标准品、α-酮戊二酸标准品、2，4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制（1）配制丙氨酸标准溶液：准确称取丙氨酸标准品，用磷酸盐缓冲液溶解并定容，配制成0.1mmol/L的丙氨酸标准溶液。
（2）取六支试管，分别加入0.1mmol/L丙氨酸标准溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，各加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（3）向各试管中加入2，4-二硝基苯肼0.2ml，混匀，37℃水浴30min。
（4）加入氢氧化钠溶液1.0ml，混匀，显色30min。
（5）用分光光度计在540nm波长处测定各试管吸光度，以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性测定（1）取血清样本0.1ml，加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（2）按标准曲线绘制方法，测定血清样本吸光度。
（3）根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：Y = 0.0678X - 0.0011，相关系数R²=0.9968。
2. 血清ALT活性测定测定血清样本吸光度为0.560，根据标准曲线计算血清ALT活性为0.9mmol/L。
实验五血清中谷丙转氨酶的测定
200 –
50.0 –
200
2000
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。 第五页
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管谷丙转氨酶活力：57U/L
U样=
A样 A标
× U标
样品管光密度值
样品管谷丙转氨酶活力（＝
×57
U/L）
标准管光密度值
第六页
温水浴锅
第四页
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂
试剂空白管 标准管 样品管
基质液(uL)
200
200
标准液(uL)
–
50.0
血清样品(uL)
–
–
蒸馏水(uL)
50.0
–
混合37℃水浴放置30min显色剂(uFra bibliotek)200
200
37℃水浴放置20min
稀释NaOH(uL)
2000
2000
参考值
谷丙转氨酶
血清参考值：0~ 50U/L
第七页
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
每次测定时都需用试剂空白溶液调零，不能用 蒸馏水代替
微量移液枪的正确使用
第八页
（1）丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT 丙酮酸+谷氨酸
（2）丙酮酸+2,4-二硝基苯肼
丙酮酸2,4-二硝基苯肼(黄色)
NaOH （3） 丙酮酸2,4-二硝基苯肼
（黄色）
苯腙硝醌化合物 （红棕色）
510nm
相对血清ALT活力
光吸收法测定
第三页
血清谷丙转氨酶
室温放置 30分钟， 分钟， 分钟
调零点。 测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。 值 ， 蒸馏水调零点
计 算
（ODA-ODB） ） （ODs-ODs＇） ＇） X = X （待测样品丙酮酸含量） 待测样品丙酮酸含量）
=
50ug/ml × 0.1 ml
（ODA-ODB） ）
×5 ODs-ODs＇） （ODs-ODs＇）
2、绘制标准曲线，（要求规范作图） 、绘制标准曲线，（要求规范作图） ，（要求规范作图 3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位 、通过方法一的 ，在标准曲线中，
注意事项
NaOH液时 液时， 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度 加入，并且边加边摇匀加快时则a 加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二 酸引起的发色增强。 酸引起的发色增强。 本实验中各试剂加量都需要准确， 本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件， 注意控制条件，保温时间要严格 本法测定SGTP正常值为40单位以下。 SGTP正常值为40单位以下 本法测定SGTP正常值为40单位以下。
SGPT单位 单位= 单位
（ODA-ODB） ） × （ODs-ODs＇）5 ＇）
0.1 × 2.5
=
（ODA-ODB） ） （ODs-ODs＇） ＇）
× 20
二、标准曲线法
配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液， 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液 作成标准曲线。具体做法如下表。标准丙酮酸 50μg/ml） （50μg/ml） 基质液ml 基质液ml 蒸馏水ml 蒸馏水ml 丙酮酸含量μg 丙酮酸含量μg 相当GPT GPT单位 相当GPT单位
1 0.05 0.5 0.45 2.5 10
血清谷丙转氨酶活性的测定
【方法学评价 】
2.准确性差：线性范围狭窄,尽管标本采用稀释 后测定,但偏差仍较大。
3.试剂稳定性差 4.操作简单
【临床意义】
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾 病致肝细胞受损伤时，ALT即大量释放入血 液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是 检查肝功能的重要指标之一。
1.ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中 毒性肝细胞坏死。
【操作步骤】
（2）校正曲线的制备
加入物(ml)
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
0.1
0.1
0.1
0.1Biblioteka 0.12.0mmol/L丙酮酸标准液 基质缓冲液
0
0.05 0.10 0.15 0.20
0.50 0.45 0.40 0.35 0.30
1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，37℃保温20min
0.4mol/L NaOH溶液
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
卡门单位
0
28
57
97
150
混匀，室温放置5min，在波长为505nm处比色，蒸馏水调“0”
取7支试管，按下表操作
卡门单位 加入物(ml)
血清 基质缓冲液
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
2
3
4
0.1 0.1 0.1 0.10 0.15 0.20 0.40 0.35 0.30 0.5 0.5 0.5
5.0 5.0 5.0
混匀，室温放置5min，在波长为505nm处比色，蒸馏水调“0”
技能实验报告(谷丙转氨酶)
国内研究课题
1、蜂王浆对肝损伤的保护作用 2、鹿茸对肝损伤的保护作用 3、琥珀酸钠对肝损伤的保护作用 4、夏枯草对肝损伤的保护作用
实验原理
转氨酶是人体代谢过程中必不可少的“催化剂”， 主要存在与肝细胞内。肝功检查中最基本，最重 要的指标就是转氨酶,通常包括血清谷丙转氨酶 （ALT）和谷草转氨酶（AST）两项。谷丙转氨 酶主要存在于肝细胞原浆的可溶部分,肝细胞发生 炎症病变,引起细胞肿胀,坏死或肝细胞膜通透性 增高等,均可使谷丙转氨酶释放于血液循环中,而 使血清谷丙转氨酶增高。谷草转氨酶主要存在于 肝细胞线粒体内,
实验数据
高剂量组 测定组 0.616 0.349 0.403 0.758 0.821 0.424 0.613 0.342
中剂量组
低剂量组
正常组
模版组
联苯双酯组
对照组 测定组 对照组 测定组 对照组 测定组 对照组 测定组 对照组 测定组 对照组 0.27 0.261 0.316 0.325 0.344 0.325 0.272 0.283 0.432 0.409 0.411 0.442 0.326 0.374 0.407 0.631 0.346 0.35 0.354 0.36 0.28 0.293 0.303 0.374 0.37 0.587 0.398 0.665 0.414 0.755 0.397 0.55 0.263 0.291 0.297 0.349 0.34 0.357 0.25 0.292 0.438 0.604 0.424 0.458 0.397 0.336 0.383 0.623 0.31 0.33 0.372 0.346 0.34 0.384 0.356 0.321 1.602 1.374 1.252 0.865 1.168 0.754 1.135 1.271 1.256 1.151 1.197 0.992 0.47 0.494 0.478 0.389 0.373 0.391 0.757 0.425 0.336 0.339 0.279 0.261 0.329 0.357 0.348 0.35
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谷丙转氨酶(ALT) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：
一检测系统信息
项目：ALT
仪器名称: 强生Vitros
仪器型号:V350
试剂及厂商：Ortho-Clinical Diagnostics公司
检测方法：速率法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做质控，
质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4CLIA’ 88 5.0%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度：
2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88 6.67%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围（Linearity range, AMR）
3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求：
高值标本可使用病人混合血清。
一般地样本的高值推荐在AMR上限的90％，低值推荐在AMR下限的10％，但这不是绝对的规则。
最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个，浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 方法：
a)以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，记录结果。
b)线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X，以通过稀释测定结果为Y，回归方法
学统计，得到a、b及r值。
c)结果判断：
①若b在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
② 若b 不在0.97-1.03范围内，a 较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小的分析范围其回归方程的a 和b 的判断符合要求，则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
计算每一稀释度测定均值和预期值的差值。
以预期值为横轴，差值为纵轴，制作线性差异图。
-100
-500
200
400
600
800
1000
1200
线性差异图
残
差
预期值
4 临床可报告范围（Clinical reportable range ,CRR）
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法：结合本实验室制定的ALT的可报告范围（CRR）及该项目的检测范围，从而确定该
项目的最大稀释倍数，予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论：
ALT临床可报告范围6-1000U/L，最大稀释倍数50倍，当结果>1000U/L时，用生理盐水或试剂级别的水进行稀释，结果乘以稀释倍数，若 50倍稀释结果仍超出报告>1000U/L。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。
7 参考区间（Reference intervals）:
7.1 目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 原理：收集20 例正常健康人血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
验证范围：13—69 U/L 女：9—52U/L 男：21—72 U/L
7.3 标本的要求
1)体检合格健康的筛选者
2)脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式：R= ≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论：
若本实验室所检测的20个标本其检测结果19个均在验证区间13—69 U/L 女：9—52U/L 男：21—72 U/L内，故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
谷丙转氨酶试剂盒在强生V350分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。
通过以上各项性能验证室验的结论，强生V350分析仪检测系统达到检测要求，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。