第三章生物药物的微生物限度检查NO

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药品微生物限度检查方法验证步骤及示教

药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。

细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。

特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。

2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。

（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。

（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。

6. 写出验证资料。

示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。

2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。

霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。

2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。

药品微生物检验及方法验证

药品微生物限度检查及方法验证从事药品微生物限度检查工作两年时间，从学做到承担工作到变得有点经验，经历了一个摸索、学习和积累的过程，回过头来做一个总结，把一些零散的经验和体会做一个梳理和归整，以供在此岗位工作的同仁参考。

第一部分：外围工作外围工作主要有器皿清洗、灭菌，培养基、试剂配制及灭菌，无菌室清洁消毒等。

器皿的清洗是每个实验室和每一个实验员必须要做的最起码的工作，工作要求简单，操作方便，把握一个原则：干净。

培养基、试剂配制后一般都要求调PH到7.20，因为高温灭菌之后PH值会下降0.2左右。

固体培养基在灭菌前要先加热煮沸，使琼脂均匀分散。

煮沸时要注意不要溢出容器，以免发生烫伤。

万一不小心溢出，可用一湿抹布盖住容器口，迅速将其从加热源上移开，不要在情急之下徒手去拿或者在容器侧面拿，那样容易被从容器口源源不断溢出的培养基烫伤。

液体物品灭菌后，不能立即打开放气阀放气，因为此时被灭菌物品的温度大于100℃，在压力等于常压时，液体会暴沸，造成液体喷出或容器炸裂，发生事故。

万级洁净度的无菌室应当每周进行一次消毒，消毒剂每月更换一次，防止长期使用同一种消毒剂而使微生物形成耐药性。

消毒范围包括墙壁，地面，天花板以及空气。

表面消毒可以用消毒剂擦拭，尤其注意门框边缘以及出风回风口，不能留有死角；空气消毒宜采用臭氧或者紫外灯。

可以使用专门的臭氧发生器产生臭氧进行消毒，也可以在每一个操作间包括净化台安装适宜功率的紫外灯，一方面紫外线可以对近距离的物体表面进行消毒，另一方面紫外线的作用也可以使空气中的氧气转换成臭氧，从而能够杀死空气中的微生物。

另外在每次做完实验之后，都应当对实验台面以及地面进行消毒处理。

第二部分：检验过程整个无菌室的检验操作过程应当有一个标准的操作规范，严格按照无菌操作的规定进行操作，包括进入无菌室的程序以及人员清洁消毒，都应当遵守标准来进行。

首先，进入无菌室应当严格按照洁净区（室）有关规定进行。

进入之前先进行洗手消毒，在一更换鞋，脱去外衣，进入二更，穿洁净工作服，注意穿戴洁净工作衣帽时必须做到衣服的任何部位不得拖地。

药品微生物限度检测技术PPT课件

检
喷雾剂供
查
试品
1.4.2供试品检查
非
无菌
① 平皿法
平皿法包括倾注法和涂布法
产
品微生物限度检查
除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀
培养和计数：除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～ 25℃培养5 天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，必要时可适当延长培养时间至7 天进行菌落
微
生
1.3.3计数方法适用性试验
物
限
度
检
查
非无
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
菌 1.3.1菌液制备及使用
产品
菌种
微
试验用菌株的传代次数不得超过5
生
代（从菌种保藏中心获得的干燥菌
物
限
种为第0代），并采用适宜的菌种
度
保藏技术进行保存，以保证试验菌
检查
株的生物学特性
检
查
非
② 薄膜过滤法
无
除另有规定外，按计数方法适用性试
菌
验确认的方法进行供试液制备。取相
产
当于1g、1ml 或10 cm²供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可
品
取适宜稀释级的供试液，照方法适用
微
性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，培养和计数：培养条件
生
菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基和计数方法同平皿计数
值报告菌数
非
③ MPN 法
无

微生物限度检查

微生物限度检查1. 简介微生物限度检查是一项重要的检验项目，用于评估食品、药品、化妆品和环境样品中微生物污染的程度，以确保产品的安全性和质量。

微生物污染可能导致食品腐败、药品失效或产生有害物质，对人体健康造成潜在风险。

本文将介绍微生物限度检查的目的、方法以及常见的微生物指标和其相关要求。

2. 目的微生物限度检查的主要目的是确定样品中存在的微生物数量和种类，以评估产品是否符合相关法规和标准的微生物要求。

通过检查微生物限度，可以判断产品是否受到过度污染，同时也可以用于监控生产过程和验证清洁措施的有效性。

3. 方法3.1 样品处理在进行微生物限度检查之前，需要对样品进行适当的处理。

处理的方式包括稀释、均质和过滤等。

样品处理的目的是消除潜在抑制因素，使微生物能够在培养基上生长。

3.2 培养基和培养条件微生物限度检查通常使用一系列特定的培养基，以促进特定微生物的生长和检测。

常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、沙门氏菌选择性琼脂等。

在选择培养基时，需要根据待测微生物的生长特性和养分要求进行合理选择。

培养条件包括温度、pH值和培养时间等，对于不同的微生物有着不同的要求。

在进行微生物限度检查时，应该根据标准操作程序严格控制培养条件，以确保检测结果的准确性和可比性。

3.3 统计学方法微生物限度检查的结果通常以菌落形成单位（CFU/g或CFU/mL）来表示。

为了获得可靠的结果，需要根据统计学方法进行合理的菌落计数。

常用的统计学方法包括扩展计数法、减少平均法和最概然数法等。

4. 常见的微生物指标和要求微生物限度检查通常包括总大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等指标。

下面是常见的微生物指标和其相关要求：4.1 总大肠菌群总大肠菌群是一类常见的肠道微生物，并不是所有菌群都具有病原性，但它们的检测可以反映样品是否受到了粪便或污水等污染。

常见的检测方法包括最概然数法和膈动法。

食品中总大肠菌群的限度一般为每克或每毫升不得检出。

生物药物分析第三章作业答案

单选题1、家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法中将一定剂量的供试品溶液注入家兔体内的方式是A.静脉注射B.动脉注射C.腹腔注射D.灌胃正确答案：A试题解析：家兔对热原的反应与人基本相似，因而本法系将一定剂量的供试品溶液，以静脉注射的方式注入家兔体内，在规定的时间内，对家兔体温升高情况进行观察，通过观察结果判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

所以答案为A。

2、用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，若再想供热原检查用，则至少应休息A.12小时B.24小时C.36小时D.48小时正确答案：D试题解析：用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用。

所以答案为D。

3、细菌霉内素检查法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由（）产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

A.革兰阳性菌B.革兰阴性菌C.金黄色葡萄球菌D.大肠埃希菌正确答案：B试题解析：本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

所以答案为B。

4、下列有关细菌内毒素检查法的叙述哪一项是错的A.每批鲎试剂的灵敏度须用细菌内毒素工作标准品复核B.凝胶法的原理是鲎试剂与内毒素产生凝集反应C.抗生素类药物因具有抗菌活性，不能用凝胶法检查细菌内毒素D.凝集反应的温度规定为37℃±1℃E.凝集反应的时间规定为60分钟±2分钟正确答案：C试题解析：抗生素类药物可以用凝胶法检查细菌内毒素。

所以答案为C。

5、细菌内毒素检查法又称为A.鲎试验法B.临床检查法C.生物效应法D.家兔热原试验法E.放射性检验法正确答案：A试题解析：细菌内毒素检查法又称为鲎试验法。

本法系通过鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

微生物限度检查法

2．开启无菌室紫外杀菌灯和空气净化装置，并使其工作不少于30分钟。
3．操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。再用0.1％苯扎溴铵溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿戴无菌衣、帽、口罩。
4．操作前先用乙醇棉球擦手，再用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌的手术镊或剪将供试品启封。（三）供试液的制备（1：10供试液）按供试品的理化特性与生物学特性采取适宜的方法制备供试液。不得改变污染微生物的数量和种类。
③合剂（系指含蜂蜜或王浆者）与滴眼剂可用供试品作为供试液。（滴眼剂不得检出霉菌和酵母菌）。含蜂蜜、王浆的制剂 2．固体、半固体或粘稠供试品称取供试品10g，置装有0.9％无菌氯化钠100ml的匀浆杯中，用匀浆仪（3000～5000r ／2－4min ），或其他适宜方法（振荡器或研钵研磨等方法分散混匀，作为供试液。在制备过程中，必要时可加适量聚山梨酯－80，并适当加温，但不应超过45℃。
取规定量的供试液，自然沉降5分钟，吸取上层液于（含1％对氨基苯甲酸1ml）100ml增菌液中，作增菌培养。本法适用于复方磺胺制剂，如复方磺胺嘧啶片、复方新诺明片等
以上两法适用于难溶于水的抗菌制剂。如磺胺类药
应用沉降法时，供试品应充分研细，并与稀释剂充分摇匀，使污染菌分散于液相中；沉降时间不宜超过5分钟，以防菌细胞下沉；取上清液时，避免吸入药渣。
本法适用于水溶性抑菌成分的中、西药品和滴眼剂等制剂的“灭活”处理。安放滤膜时，注意滤膜与滤器应密合，防止滤膜破损、漏液。本法所用滤膜孔径0.45um±0.02um。
④（钝化）中和法：凡含磺胺、汞、砷类或防腐剂的供试品，可用相应的试剂钝化活性因子，中和毒性后制成供试液。磺胺类药物中和法取规定量含磺胺类的供试品，于100ml增菌液中加入含1％对氨基苯甲酸约1～5ml（以前讲加入0.5ml）。本法用于含磺胺较少的制剂，如：三黄软膏、消炎眼药水、斑马眼药水等。应用本法可因供试品的不同，对氨基苯甲酸的用量可适当调整。含砷、汞等重金属药物中和法，取规定量的供试品，加入硫乙醇酸盐培养基100ml中，作增菌培养。

药品微生物限度检查方法介绍

接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中， 23～28 ℃培养 18~24小时，取此培养物1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5 ~10-7，使细菌数约为50~100cfu/ml。
14
菌液的制备（3 菌液的制备（3）
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28 ℃培养5～7天，加3~5ml0.9％无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液，取1 ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至104~10-6，使细菌数约为50~100cfu/ml。
27
供试液的制备（4 供试液的制备（4）
非水溶液性供试品软膏剂、乳膏剂、称供试品5g（5ml），加到含已灭菌溶化并45℃保温的乳化剂的烧杯中，用无菌玻棒搅拌混匀后，慢慢加入45℃左右的稀释剂85ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作供试液（1:20）。油剂取供试品10ml，加入无菌聚山梨酯—80 5 –8ml，摇匀，再加入稀释剂至100ml。
15
药品微生物限度检查方法介绍
16
2005年版微生物限度标准的应用
• 微生物限度检查法：检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。是判定药品受到微生物污染程度的重要指标，也是对生产企业的设备器具、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评价的综合依据之一。 • 药品的生产、贮存、销售过程中的检验，原料及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度检查均以本标准为依据。 • 检查项目：细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌的检查。
11
菌种
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌(Pseudomonas 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104] 生孢梭菌(Clostridium 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64941] 白色念珠菌(Candida albicans) [CMCC(F) 98001] 白色念珠菌(Candida 黑曲霉(Aspergillus 黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F) 98003] 大肠埃希菌(Escherichia 大肠埃希菌(Escherichia coli)) [CMCC(B) 44102] 枯草芽孢杆菌(Bacillus 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63501]

微生物限度检查与微生物总数检查

实验后处理
在实验结束后，应对实验室进行清洁消毒，避免对环境造成污染。同时，对使用过的培养基、试剂等进行无害化处理。
THANKS
感谢观看
的接种和培养。
制备过程中，需根据不同样品类型选择适当的处理方法，如破碎、研磨、超声波破碎等，以充分
释放微生物。
同时，需注意避免供试液中微生物的损伤和死亡，以保证后续实
验的准确性。
微生物接种与培养
微生物接种是将制备好的供试液转移到适当的培养基中，以促进微生物的生长和繁殖。
接种过程中，需注意无菌操作，避免交叉污染。同时，需根据不同微生物的特性选择适宜的培养基和培养条件。
微生物总数检查的重要性
食品安全
微生物总数是评估食品卫生质量的重要指标，可以反映食品在生产、加工、储存、运输等环节的
卫生状况。
药品安全
在药品生产过程中，微生物总数检查有助于确保药品不受微生物污染，保障患者的用药安全。
环境监测
对环境中的微生物进行计数，可以评估环境的卫生状况，预防疾病传播。
03
微生物限度检查的实验步骤
供试液制备
供试液制备是微生物限度检查的第一步，目的是将样品中的微生物充分释放出来，以便后续的接种和培养。
制备好的供试液应尽快进行后续的接种和培养，以免微生物死亡或繁殖。
制备过程中，需根据不同样品的性质选择适当的处理方法，如震荡、超声破碎、离心等，以充分释放微生物。
目的
确保产品在生产和处理过程中符合微生物限量标准，保证产品的安全性和有效性。
微生物限度检查的重要性
保障产品质量
通过微生物限度检查，可以及时发现并控制微生物污染，从而保证产品的质量和稳定性。
保障消费者权益

中国药典微生物限度检查法

中国药典微生物限度检查法
中国药典是中华人民共和国国家药品监督管理局编制的用于药品质量标准和规范的权威性文献。

其中，微生物限度检查是对药物产品中的微生物污染进行评估和控制的重要环节。

中国药典中的微生物限度检查法主要包括以下几个方面：
1.检测项目：微生物限度检查主要关注细菌、真菌和酵母菌
的存在与数量。

通常会检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉
菌和酵母菌等常见微生物。

2.样品准备：样品准备过程中，要根据具体要求制备适当稀
释的样品溶液。

根据不同产品的特点和要求，可能需要使
用适当的培养基进行预处理。

3.检测方法：中国药典中提供了一系列的微生物限度检测方
法，包括涂片法、水洗法、滤膜法等。

这些方法可以根据
不同的样品类型和特性选择适合的检测方法。

4.培养和观察：按照检测方法的要求，将样品接种在适当的
培养基上，进行培养并观察一定时间。

观察期间，需要注
意各种细菌、真菌和酵母菌的生长情况。

5.计数和判定：根据培养结果，进行微生物数量的计数，并
与规定的限度标准进行比较。

根据比较结果，判定样品是
否符合微生物限度标准。

通过微生物限度检查，可以评估药物产品中的微生物污染状况，并确保其在接受者使用时的安全性。

中国药典中的微生物限度
检查法为药品质量控制提供了重要的指导和标准。

药典药品微生物限度检查法

菌种

对试验菌种的要求同细菌、霉菌和酵母菌计数方法的验证。大肠埃希菌金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌生孢梭菌接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18～24小时。用 0.9% 无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 10 ～ 100cfu的菌悬液。
菌液制备
1．取经37℃培养18-24小时，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、
枯草芽孢杆菌肉汤培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5 ~10-9，为50~100个/ml，做活菌计数备用
2．取经25℃
培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物 1ml加9 ml生理盐水10倍稀释至10-5 ~10-7，为50~100个/ml，做活菌计数备用
二、内容：细菌、霉菌及酵母菌数测定（即：对5株阳性
对照实验菌株的回收率逐一进行验证）
三、菌种：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
[CMCC(B)63501]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )[CMCC(B) 26003]、大肠杆菌（Escherichia coli） [CMCC(F) 44102]、白色念珠菌(Candida a lbicans )[CMCC(F ) 98001]、黑曲霉菌(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]
培养基稀释法
当供试品五种菌中有一种菌的回收率未达到 70％时，首先考虑用培养基稀释法。取规定量的供试液至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含菌量减少，至不含抑菌作用。一般可以0.5ml/皿，0.2 ml/皿，0.1 ml/皿

生物药物的微生物限度检查(NO)

生物药物的微生物限度检查(no)
目录
• 引言 • 微生物限度检查的基本概念 • 生物药物的特点和风险 • 微生物限度检查的实验步骤 • 微生物限度检查结果的分析和解读 • 微生物限度检查的注意事项和要求 • 生物药物微生物限度检查的发展趋势和展望
01
引言
目的和背景
确保生物药物的安全性和有效性
微生物限度检查的目的是检测生物药物中微生物的种类、数量和污染程度，以确保药物的安全性和有效性。
性和可靠性。
实验过程中应定期对实验环境和仪器进行监测，确保符合微
生物限度检查的要求。
实验后的清洁和消毒
实验结束后，应对实验室进行彻底的清洁和消毒，确保无菌状态。
实验所用的仪器和器具应进行清洁和消毒，确保无菌状态。
实验人员应将个人防护装备脱下并进行清洁和消毒。
实验废弃物应按照相关规定进行处理，避免对环境和人员造成危害。
微生物限度检查结果的分析应基于统计学原理，对多次检查结果进行比较，分析微生物的分布和数量是否符合预期。
对于异常的检查结果，应进行深入分析，找出可能的原因，为生产过程的优化提供依据。
微生物限度检查结果的报告和记录
微生物限度检查结果的报告应清晰、准确，注明样品名称、批号、检验日期等信息，并按照药典规定和相关法规要求给出结论。
07
生物药物微生物限度检查的发展趋势和展望
生物药物微生物限度检查的发展趋势
自动化与智能化
多参数检测
随着技术的进步，生物药物微生物限度检查将更加自动化和智能化，减少人为误差，提高检测效率和准确性。
发展多参数检测技术，同时检测多种微生物和指标，提高检测的全面性和可靠性。
快速检测技术
开发和应用更快速的检测技术，缩短检测周期，满足生物药物生产快速放行的需求。

药品微生物限度检查方法验证步骤及示教

药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。

细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。

特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。

2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。

（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。

6. 写出验证资料。

2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。

药物制剂微生物检验

三．供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。
三、控制菌检查－检查流程
供试品
增菌培养
分离培养
纯培养
报告结果生化反应试验染色镜检
三、控制菌检查－检查流程
1.增菌培养目的
使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
三、控制菌检查－检查流程
2.分离培养目的
经增殖培养后,被检菌大量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。
分
菌 18-24h 离 24-72h
培 30-35℃ 纯 30-35℃
养
化
有浑浊带
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验记录单
最终结果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
★金黄色葡萄球菌检查流程图
01
卵黄氯化钠琼脂
★大肠埃希菌
俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属，革兰阴性杆菌，兼性厌氧菌，能发酵多种糖产酸产气。
01 控制菌检查－大肠埃希菌检查
02
大肠埃希菌检查意义
大肠埃希菌为条件致病菌，当人体免疫力低下或是侵入肠外组织、器官，可引起肠外感染，乃至败血症。也可随人和动物的粪便排出体外，污染环境，一旦食品、药品、水等物品中检出该菌，说明已受粪便污染，可能存在其他肠道致病菌和寄生虫卵，人们饮用或服用它们则可能引起消化道传染病。
三、控制菌检查－铜绿假单胞菌检查
胆盐乳糖培养基
十六烷三甲基溴化铵琼脂
灰白色、扁平、
配培养基和稀释液
供试液的制备
增
分
菌 18~24h 离 18~24h
培 30-35℃ 纯 30-35℃

药物制剂的微生物检测非灭菌制剂的微生物限度检查

30
第三节药物制剂的微生物检测
（二）控制菌的的检查
4.金黄色葡萄球菌的检验
是最常见的化脓性球菌之一，80%以上的化脓性疾病由本菌引起。
广泛分布于自然界，也存在于人的皮肤表面及某些腔道中。常可污染药品及食品，在制药过程中可被混入药品内，在条件
31
合适时引起疾病。药典规定，凡外用药和眼科制剂不得检出金黄色葡萄球菌。
其代谢产物也可制成药物吗？
3
3
第一节微生物发酵制药
一、微生物发酵的概念及分类
1.概念
用微生物生命活动产生的酶对各种原料进行酶加工以获得所需产品的过程。
它已成为一门工程学科，其利用的细胞一般都经过人工改造，然后再通过控制培养条件使其最大限度地生产目的产物。
2.分类需氧发酵
4
深层发酵
纯种发酵
33
第三节药物制剂的微生物检测
（二）控制菌的的检查
5.破伤风梭菌的检验
（1）增菌培养（2）分离培养（3）染色镜检（4）毒力试验
34
破伤风梭菌芽孢染色
34
第三节药物制剂的微生物检测
（三）活螨的检验
螨本身带有各种病原菌，除了直接危害人体健康外，还能传播一些疾病，如引起皮炎、过敏性哮喘，消化道、泌尿道和呼吸道疾病。
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第三节药物制剂的微生物检测
一、灭菌制剂的无菌检验（一）无菌检验的基本原则
在无菌操作情况下将被检测的药品，按其剂型的不同分别取一定量加入适合各类微生物生长的不同培养基（需氧菌、厌氧菌及真菌培养基）中，在各自适宜的条件下进行培养。
在规定时间内观察有无微生物生长，以判断药品是否达
到无菌要求。
阳性对照：按《中国药典》规定选用标准菌株作对照菌

(完整版)生物药物分析重点完整版

第一章绪论1.生物药物分析：是生物工程制药专业设置的一门专业课，是应用微生物学、分子生物学、免疫学、生物化学、有机化学、数学、分析化学、生化工程等学科的理论及其技术成就，检测和研究各种生物药物质量的一门综合性学科。

2.药典：是国家对药物质量标准及其检测方法所做的技术规定，是药物生产、监控、供应、使用及管理部门共同遵循的法令。

3.我国的第一部药典1953年出版，从1963年版开始，中国药典分一、二部，药典内容一般包括凡例、正文、附录、索引四部分，生物药物收载在第三部分。

4. 美国药典—USP英国药典—BP日本药局方—JP英国副药典或英国准药典—BPC国际药典—Ph.Int5.基因工程药物的质量控制规则（暂时未找到）6.生物药物质量的科学管理：（5个）《良好药物实验研究规范》—GLP《良好药品生产规范》—GMP《良好药品供应规范》—GSP《良好药品临床试验规范》—GCP分析工作的质量管理—AQC第二章生物药物的杂质检查1.药物的杂质：（定义）指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。

2.药物中存在的杂质其来源主要有两个：（1）是由生产过程中引入；（2）是贮存过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化而产生。

3.杂质限量：（定义）指药物中所含杂质的最大容许量，它通常不要求准确测定其含量，只要在杂质含量在一定限度内。

4.杂质限量检查法的特点：只需通过与对照液比较即可判断药物中所含杂质量是否符合限量规定，不需测定杂质的准确含量。

5.一般杂质的检查方法在药典附录中加以规定。

一般杂质检查项目有氯化物、硫酸盐、水分、酸、碱、硫化物、硒、氟、氰化物、铁盐、重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、干燥失重、炽浊残渣、溶液颜色与澄清度以及有机溶剂残留量等。

氯化物检查法：Cl- ┼Ag+──→AgCl↓原理：药物中微量的氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊程度比较，判定供试品中氯化物是否符合限量规定。