苯酚-硫酸比色法测定毛竹叶多糖的研究

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苯酚-硫酸法测定破布叶叶的多糖

云南等地．布叶的叶用于清热解毒，积．破消食主治
感冒、消化不良、胀、腹黄疸、蜈蚣咬伤、胀、疸、腹黄
小儿盗汗、茶饮去食积等－破布叶的药用最早见作ｚ．
Ａｂｓｒｃ：ｈａｔｒｆｅｔｇｔｅｄｔｒｎｔｎｏｏｙａｃａｉｅｃｎｅｔｉａｉｕａｅｃｏｏｒｎｉｗｔｈ — ｔａｔＴｅｆｃｏｓａｆｃｉｈｅｅｍｉａｉｆｐｌｓｃｈｒｏｔｎｎＰｎｃｌｔｉｒｃｓｅｙｇｉｉｐｅｎｏｄｈ
ｎｌｓｌｒｃａｉｔｏｅｅｏｔｚｄＲｅｕｔｈｗｅａｎｅｅｃｎｉｏｓｏｅｅｔｎｗａｅｅｇｈ４５ｎｐｅｏ — ｕｆｉｃｄｍｅｈｄｗｒｐｉｅ．ｓｌｓｏｄｔｔｄｒｔｏｄｔｎｆｔｃｉｖｌｎｔ８ｍ，ｈ — ｕｍｉｓｈｕｈｉｄｏ
差（Ｄ．６ｎ：６．ＲＳ）１％（１）关键词：布叶；破多糖；苯酚一硫酸法
中图分类号：２．Ｒ９７２
文献标识码：Ａ
文章编号：６４４４（０００ — ４００１７ — ９２２１）４００ — ３
ＳｕｙｏｈｎｌＳｌｕｉｉｅｈｄｆｒＤｅｅｍｉａｉｎｏｔｄｎＰｅｏ－ｕｆｒｃＡｃｄＭｔｏｏｔｒｎｔｆｏＰ０ｙａｃａｉｅＣｏｔｎａｅｏｉｒｃｓｐｎｃｌｔｌｓｃｈｒｄｎｅｔｎＬｅｖｆｉＭｃｏｏａｉｕａａＬ．

改良的苯酚硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究

改良的苯酚硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究一、本文概述多糖和寡糖作为生命体系中的重要组成部分，广泛存在于各类生物体内，具有多种生物学功能，如能量储存、细胞识别、信号传导等。

因此，准确测定多糖和寡糖的含量对于理解其生物学作用以及评估其在食品、医药等领域的应用价值具有重要意义。

传统的苯酚硫酸法是一种常用的多糖和寡糖含量测定方法，但由于其存在的一些局限性，如灵敏度低、抗干扰能力差等，使得该方法在实际应用中受到一定的限制。

因此，本文旨在研究改良的苯酚硫酸法，以提高其测定多糖和寡糖含量的准确性和稳定性，为多糖和寡糖的研究和应用提供更为可靠的分析方法。

本文首先将对传统的苯酚硫酸法进行详细的介绍和分析，阐述其原理、操作步骤以及存在的问题。

在此基础上，本文将详细介绍改良的苯酚硫酸法的具体实施方案，包括试剂的选择、反应条件的优化、干扰物质的排除等方面。

随后，本文将通过一系列的实验验证改良后的方法的可行性和准确性，包括标准曲线的绘制、精密度和稳定性的考察、实际样品的测定等。

本文将对改良的苯酚硫酸法的应用前景进行展望，探讨其在多糖和寡糖研究以及相关领域的应用价值。

通过本文的研究，期望能够为多糖和寡糖含量的准确测定提供一种更为可靠的分析方法，为相关领域的研究和应用提供有益的参考。

二、材料与方法本实验所使用的主要试剂包括苯酚、硫酸、多糖标准品（如葡萄糖、果糖等）以及待测的多糖和寡糖样品。

所有试剂均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。

实验所需设备包括电子天平、水浴锅、分光光度计、离心机等。

苯酚硫酸法是一种基于多糖和寡糖在浓硫酸作用下与苯酚发生显色反应的原理来测定其含量的方法。

在酸性条件下，多糖和寡糖会被硫酸水解成单糖，随后与苯酚发生缩合反应，生成有色化合物，其颜色深浅与多糖和寡糖的含量成正比。

（1）标准曲线的绘制：准确称取适量多糖标准品，用蒸馏水配制成不同浓度的标准溶液。

分别取各浓度标准溶液与苯酚硫酸试剂混合，于沸水浴中加热一定时间后冷却，用分光光度计测定各溶液在特定波长下的吸光度。

竹叶多糖提取、分离及检测技术研究

摘要竹子是禾本科，竹亚科多年生常绿植物，在我国具有悠久的食用和药用历史。

为了加强对竹叶的综合利用，本研究以毛竹为研究对象，对竹叶多糖的提取、纯化、检测及活性进行研究，通过单因素试验和正交试验考察了温度、时间、固液比、提取次数对多糖提取率的影响，同时对水提取、超声波提取和微波提取三种提取方法进行了比较，利用葡聚糖凝胶和纤维素柱层析分离技术对多糖进行纯化，并运用薄层色谱和气相色谱考察了其单糖组成，采用高通量药物筛选模型对多糖的抗肿瘤活性进行了探讨，试验结果如下：１建立了苯酚．硫酸法测定竹叶多糖含量的方法。

在波长为４９０ｎｍ，以无水葡萄糖为对照品，２０～１００ｕｇ／ｍｌ范围内，浓度和吸光度呈良好的线性关系，回归方程为Ｙ＝７．２７５ｘ＋Ｏ．０００４，相关系数Ｒ２为０．９９８９．２优化了竹叶多糖提取工艺参数，首次将超声波和微波技术应用到竹叶多糖的提取工艺，得到其最佳提取条件，水提最佳浸提参数为：温度８０℃，时间９０ｍ证，固液比１：２５，浸提３次，多糖得率为Ｏ．６６１％；超声波提取最佳浸提参数为：温度７０℃，时间２０ｍｉｎ，固液比１：２０，浸提３次，多糖得率为０．７０８％；微波提取最佳浸提参数为：微波功率５００ｗ，固液比ｌ：１５，时间２蚵ｎ，浸提３次，多糖得率为Ｏ．６５５％。

３竹叶粗多糖经ｓｅｖａｇ法脱蛋白，ＤＥＡＥ一纤维素柱层析，以浓度为０、Ｏ．０５Ｍ、０．１Ｍ、０．３Ｍ、Ｏ．５Ｍ的Ｎａｃｌ溶液梯度洗脱，得到四个竹叶多糖（Ｂ锄ｂ００ｐｏｌｙｓａｃｃｈ撕ｄｅ，ＢＰｓ）；ＢＰＳｌ、ＢＰｓ２、ＢＰｓ３、ＢＰｓ４，其得率分别为４６．４５％、４．３１％、１．６２％、Ｏ．５３％；ＢＰｓｌ再经ＤＥＡＥ一纤维素、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ～７５凝胶柱层析得到ＢＰｓｌｌ：用ｓｅｐｈａｄｅｘＧ～１００柱层析鉴定了它们的纯度，用ＨＰＴＬｃ和Ｇｃ测定了它们的单糖组成为：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＿２，９１：９．２７：４．４２：６‘３８：２５．５９：９．４４。

苯酚-硫酸比色法测定多糖含量

苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸法是常用的多糖含量测定方法之一。

该方法基于多糖在硫酸的作用下，与苯酚产生颜色反应的原理，利用光度计测定反应产物的吸收值，从而计算出多糖的含量。

步骤如下：
1. 取样品0.1g，在50ml锥形瓶中加入5ml去离子水，振荡
20min溶解。

2. 加入2ml 5%苯酚水溶液，振荡均匀。

3. 加入5ml浓硫酸，使用磁力搅拌器搅拌1-2min。

4. 将混合物放置在冷水中冷却10min。

5. 用紫外分光光度计在490nm处测定吸光度A，同时以含有相同试验液体积的去离子水为对照。

6. 计算样品中多糖含量。

该方法测定简便，精度高，适用于多糖含量较高的样品。

但此法不能区分多糖的种类及其组成，不能应用于含非多糖的样品中。

苯酚-硫酸分光光度法测定玉竹中多糖含量

维普资讯
彭秧锡，：等苯酚一硫酸分光光度法测定玉竹中多糖含量
２９
苯酚一硫酸分光光度法测定玉竹中多糖含量木
彭秧锡彭月明
４７０１００）（南人文科技学院化学系，湖娄底
摘要
采用苯酚一硫酸分光光度法测定湘玉竹中的多糖含量，测波长为４０ｎ方法的线性范围为０— ．２检９ｍ，０１
离心机：０一ｌ型，８山东省鄄城福利科研仪器
ｍｇｍＬ线性回归方程为Ａ＝．９６００３，关系数ｒ０９９。用该方法对湘玉竹样品测定，／．０３７ｍ＋．３相８＝．９４并进行加标回
收试验．收率为１４２％一１６９％，对标准偏差为１４回０．０．相．４％（５。ｎ＝）关键词玉竹多糖测定分光光度法
苯酚溶液：％。称取５０ｇ苯酚置于１０ｍ５．０Ｌ
湖南出产的玉竹（湘玉竹）为出名，我国出口创最是
汇的主要中药材品种之一＿。玉竹可药食两用，３Ｊ它
作为一种优于参芪的滋阴、防燥、降温、暑的营养祛
玉竹，名铃铛菜、别尾参、管子、草根，地甜是百合科黄精属多年生草本植物，因该植物形态似竹光莹如玉，名玉竹 ¨ ，根茎可入药，滋养强壮故其为剂；其幼苗和根状茎亦可食用，营养丰富，而尤以

苯酚_硫酸比色法测定多糖含量

随着对生物药物、天然药物和保健食品研究的深入，多糖的研究进展很快。

目前多糖含量的测定方法尚无统一标准，广泛应用的是苯酚－硫酸比色法。

该法具有简单、快速、无需多糖纯品和贵重仪器等优点，且对水溶性样品和非水溶性样品均可测定。

１苯酚－硫酸比色法原理苯酚－硫酸比色法测定多糖含量是由Ｄｕｂｏｉｓ等［１，２］提出的。

其原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长４９０ｎｍ处和一定浓度范围内，其吸光度Ａ值与糖浓度Ｃ呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。

２实验方法２．１标准溶液的配制精密称取１０５℃下干燥至恒重的葡萄糖约１００．０ｍｇ，置１００ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，配得葡萄糖标准溶液。

２．２供试品贮备液的配制将样品进行适当处理（如真空干燥、回流提取等，根据各品种不同而有差异），取适量，按一定比例稀释，配制供试品贮备液。

２．３苯酚溶液的配制称取苯酚１００ｇ，加铝片０．１ｇ和碳酸氢钠０．０５ｇ，常压蒸馏，收集（１８０±２）℃馏分。

精密称取该馏分约１０．０ｇ置于２００ｍＬ量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀后转置于棕色试剂瓶中，即得苯酚溶液，将其置于冰箱中备用。

２．４　测定条件选择２．４．１　反应温度选择　精密吸取供试品贮备液、葡萄糖标准液各１．０ｍＬ于１００ｍＬ量瓶中，用水稀释至刻度，分别作为供试品溶液和对照品溶液。

分别吸取供试品溶液１．０ｍＬ于两个具塞试管中，各加苯酚液１．０ｍＬ，并分别迅速滴加浓硫酸５．０ｍＬ。

一份于水浴中煮沸１５ｍｉｎ，另一份于４０℃水浴中恒温３０ｍｉｎ。

另取两份对照品溶液１．０ｍＬ同上操作。

取出，冷却至室温，１５ｍｉｎ后于４９０ｎｍ处测其Ａ值，选取Ａ较高的作为实验温度。

２．４．２苯酚及硫酸用量选择　分别吸取供试品液和对照品液１．０ｍＬ５份，各加入苯酚液０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ，加水至２．０ｍＬ，再各滴加浓硫酸５．０ｍＬ，４０℃恒温３０ｍｉｎ后，测其Ａ值，从苯酚液加入量达到某一值开始，Ａ值基本保持不变，说明苯酚液量达到该值以上时，反应都能完成。

苯酚-硫酸法快速测定多糖方法的优化

1.2.3 单因素试验设计以100μg/mL 葡萄糖标准溶液200μL 为研究对象，酶标仪检测波长为490nm 时的OD 值作为评价指标，分别考察苯酚用量(100、200、300、400、500μL)、浓硫酸用量(600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500μL)、反应温度(30、40、50、60、70、80、90、100℃)、反应时间(5、10、15、20、25、30、40、50、60min)等因素对OD 490nm 值的影响[6]。

1.2.4 正交优化试验在1.2.3单因素试验结果的基础上，选择苯酚用量(A)、浓硫酸用量(B)和反应温度(C)3个因素为自变量，以OD 490nm 值为评价指标，进行L9(33)正交试验，试验因素及水平见表1。

表1 正交试验因素水平表2200700803300800901.2.5 标准曲线制作以蒸馏水为空白，分别精密吸取浓度为0、20、40、60、80、100μg/mL 的葡萄糖标准品溶液各200μL 加入2mL 具塞塑料离心管中，在每支离心管中加入5%苯酚溶液200μL 、浓硫酸700μL 后，迅速摇匀，80℃水浴10min 后，冷水浴5min 终止反应，精密吸取各反应液加入96孔酶标板，每个样品加3个孔，每孔200μL ，采用酶标仪在490nm 波长下测定OD 值，以葡萄糖浓度为横坐标，OD 490nm 值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.6 酶标仪测定多糖的可行性分析精密吸取浓度为40、60、80、100μg/mL 的葡萄糖标准品溶液各200μL 加入2mL 具塞塑料离心管中，按照1.2.5的操作方法加入苯酚、浓硫酸反应后，酶标仪测定OD 490nm 值，并根据标准曲线计算多糖含量。

2 结果与分析2.1 酶标仪检测波长的确定采用苯酚-硫酸法对葡萄糖标准品进行测定，于紫外可见分光光度计上，在400～600 nm 波长范围内进行扫描，结果如图1所示，葡萄糖标准品在490nm 处有最大吸收峰，故可选择490nm 作为酶标仪检测波长。

苯酚_硫酸法测定多糖含量显色方式的优选

2005年1月第12卷第1期中国中医药信息杂志 ·45··制剂与工艺·苯酚-硫酸法测定多糖含量显色方式的优选罗毅1,潘细贵1,刘刚1,李运飞2(1.武汉大学人民医院药学部,湖北武汉 430060；2.武汉大学药学院,湖北武汉 430060)摘要：目的优选在以葡萄糖为对照时,苯酚-硫酸法测定多糖含量的显色方式。

方法采用正交试验法。

结果对正交试验结果进行直观分析和方差分析,优选显色方式为：取待测溶液2.0 mL,加入5%苯酚液1.0 mL,混匀,迅速滴加浓硫酸7.5 mL,摇匀,室温放置15 min,然后置冷水中冷却30 min,在490 nm波长处测定。

结论优选的显色方式操作更简便、易行。

关键词：苯酚-硫酸法；多糖；显色方式中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1005-5304(2005)01-0045-02Optimization of the Way of Coloration in the Process of Determining Polysaccharide Content by Phenol-Sulfuric Acid Method LUO Yi, PAN Xi-gui, LIU Gang, et al(Department of Pharmacy, the People's Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060,China)Abstract：Objective To optimize the way of coloration in the process of determining polysaccharide content by phenol-sulfuric acid method, using only glucose as the standard. Method By orthogonal test.Results After synthesizing the results of direct analysis and variance analysis, the optimum way of coloration was obtained as follows: 1.0 mL 5% phenol solution was added to 2.0 mLtesting solution and mixed. Then 7.5 mL concentrated sulfuric acid was added quickly drop by drop.After set at ambience for 15 min and cooled following in cold water for 30 min, the solution was detected at wavelength of 490 nm. Conclusion The optimum way of coloration can be easily controlled and operated.Key words：phenol-sulfuric acid method；polysaccharide；the way of coloration多糖是许多中药所含的一类高分子化合物,多具有增强免疫力、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等生理活性,其含量常作为评价一些中药材及中药制剂质量的指标[1-3]。

竹叶多糖的提取分离、抗氧化性及竹叶调味茶饮料工艺研究

陕西师范大学硕士学位论文竹叶多糖的提取分离、抗氧化性及竹叶调味茶饮料工艺研究姓名：赵丽莉申请学位级别：硕士专业：农产品加工及贮藏工程指导教师：田呈瑞20070501竹叶多糖的提取分离、抗氧化性及竹叶调味茶饮料工艺研究赵丽莉摘要：竹子是禾本科竹亚科多年生常绿植物，是当今世界最具有利用价值的植物之一。

竹叶在我国有着悠久的食用和药用历史，其性淡、微涩、寒、味甘，具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗爱滋病和抑制肿瘤等功效，且无毒无害，可作为绿色食品进行开发。

但目前对竹叶的利用还很有限，竹叶大部分还是以一种加工废弃物处理，未能得到充分的利用。

竹叶多糖是是一种具有多种生理功能和开发价值的植物活性多糖，在竹叶中的含量极其丰富，对人体具有独特的保健功效。

但目前对竹叶的研究也主要集中在竹叶黄酮及其生物活性和药理方面的研究，而对于竹叶多糖等方面的研究还不够深入。

本试验主要研究了竹叶多糖的提取分离工艺和抗氧化性，并开发出竹叶调味茶饮料，丰富竹叶在食品领域研究的理论基础，加速竹叶在食品上的应用，使我国的竹子资源得到有效的开发利用，从而创造出它应有的社会效益和经济效益。

通过研究，得出结论如下：１热水提取竹叶多糖最佳条件是：料液比１：３０，提取温度８０℃，时间１．５ｈ，浸提次数为２次，竹叶多糖提取率可达到３．９５％。

２超声提取竹叶多糖最佳条件为：超声处理时间１５ｒａｉｎ，超声波功率３００Ｗ，料液比１：１５，竹叶多糖提取率可达到４．２２％。

３微波提取竹叶多糖最佳条件为：料液比１：３０，微波功率６００Ｗ，微波处理时间６ｒａｉｎ，竹叶多糖提取率可达到４．１４％。

４竹叶多糖最佳沉淀方法：以乙醇为沉淀剂，提取液体积浓缩至原料重的２．５倍，添加４倍体积的９５％乙醇，竹叶多糖沉淀率可达到７１％。

５竹叶多糖最佳脱除蛋白方法：采用蛋白酶＋Ｓｅｖｅｇ法对竹叶多糖脱蛋白，用木瓜蛋白酶降解后，再用Ｓｅｖｅｇ法脱除两次，蛋白脱除率可达到７４．３％。

毛竹叶多糖构成及生物活性研究的开题报告

毛竹叶多糖构成及生物活性研究的开题报告一、研究背景毛竹是我国的一种重要竹类，被广泛应用于建筑、制造纸张等方面。

除此之外，毛竹还是一种重要中草药，拥有抗菌、抗肿瘤、降血压等多种生物活性。

而毛竹叶中则含有大量的多糖，这些多糖具有重要的生物学功能，对人体健康有着重要的作用。

二、研究目的本研究旨在分离提取毛竹叶中的多糖，并对其构成进行分析，探究其生物活性及潜在的生物应用价值，为毛竹叶的开发利用提供理论支持。

三、研究内容1. 毛竹叶多糖的提取和纯化：选择合适的提取和纯化方法，获得高纯度的毛竹叶多糖。

2. 毛竹叶多糖的化学结构分析：利用化学和物理方法对毛竹叶多糖的化学组成、分子量、构成及空间结构进行分析。

3. 毛竹叶多糖的生物活性研究：通过对多糖的生物活性进行评价，探究其抗菌、抗氧化、抗癌、降血压等方面的生物活性。

四、研究意义本研究有助于揭示毛竹叶多糖的组成和结构特点以及其潜在的生物应用价值。

通过深入了解毛竹叶多糖的生物活性，有望为该竹类资源的开发和利用提供一定的科学依据。

此外，本研究也为开发高附加值的毛竹叶制剂提供了理论支持。

五、研究方法1. 毛竹叶多糖的提取和纯化：采用超声波辅助提取、酸碱水解等方法提取多糖；利用凝胶过滤、离子交换层析等手段对提取的多糖进行纯化。

2. 毛竹叶多糖的化学结构分析：采用色谱技术、核磁共振等手段对多糖的化学组成和分子量进行分析；通过质谱等手段对多糖的空间结构进行分析。

3. 毛竹叶多糖的生物活性研究：采用体外实验和动物实验相结合的方式，对多糖的生物活性进行评价。

六、预期结果本研究预计可以成功分离提取毛竹叶中的多糖，并对其化学结构进行详细分析，探究其潜在的生物活性。

此外，由于毛竹叶多糖的生物活性在抗菌、抗肿瘤等方面表现出了广泛的应用价值，因此预计本研究可能对毛竹叶资源的开发利用提供有力的支持。

七、研究时间安排本研究预计将于2021年9月开展，至2022年12月完成。

八、研究经费预算本研究的经费预算为50万元，其中包括实验费用、设备购置费用、人员工资等。

竹叶多糖提取实验报告

一、实验目的1. 学习和掌握竹叶多糖的提取、分离和纯化方法。

2. 探究不同提取工艺对竹叶多糖提取率的影响。

3. 了解竹叶多糖的理化性质及生物活性。

二、实验原理竹叶多糖是一种天然高分子化合物，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、降血糖等。

本实验采用水提法提取竹叶多糖，通过加热、搅拌等手段使多糖从竹叶中溶解出来，再通过离心、沉淀等步骤进行分离和纯化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 毛竹叶：取自当地竹林，新鲜、干燥。

- 无水乙醇、苯酚、硫酸、NaOH等化学试剂。

- 葡聚糖凝胶、纤维素柱等分离纯化材料。

2. 实验仪器：- 电子天平、电热恒温水浴锅、高速离心机、超声波清洗器、电热恒温干燥箱、紫外可见分光光度计等。

四、实验方法1. 竹叶多糖提取：（1）将干燥的毛竹叶粉碎成粉末，过筛，备用。

（2）称取一定量的竹叶粉末，加入适量的蒸馏水，在80℃下加热提取90min。

（3）提取液冷却后，以3000r/min的速度离心10min，取上清液。

（4）将上清液加入无水乙醇，使多糖沉淀，沉淀物用蒸馏水洗涤3次。

（5）将沉淀物干燥，得到竹叶多糖粗品。

2. 竹叶多糖分离纯化：（1）将得到的竹叶多糖粗品用葡聚糖凝胶柱进行分离纯化。

（2）收集各洗脱组分，用苯酚-硫酸法测定各组分中多糖含量。

（3）将含量较高的组分进一步用纤维素柱进行分离纯化。

3. 竹叶多糖理化性质及生物活性测定：（1）采用薄层色谱法分析竹叶多糖的单糖组成。

（2）采用气相色谱法分析竹叶多糖的分子量分布。

（3）采用MTT法检测竹叶多糖的抗肿瘤活性。

（4）采用DPPH法检测竹叶多糖的抗氧化活性。

五、实验结果与分析1. 竹叶多糖提取率：本实验采用水提法提取竹叶多糖，提取率为5.2%。

2. 竹叶多糖分离纯化：通过葡聚糖凝胶柱和纤维素柱分离纯化，得到纯度较高的竹叶多糖。

3. 竹叶多糖理化性质及生物活性：（1）薄层色谱法分析结果显示，竹叶多糖主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖等单糖组成。

苯酚—硫酸比色法测定多糖含量

苯酚—硫酸比色法测定多糖含量
张青
【期刊名称】《食品信息与技术》
【年(卷),期】2004(000)011
【摘要】目前多糖含量的测定方法尚无统一标准，广泛应用的是苯酚一硫酸比色法。

该法具有简单、快速、无需多糖纯品和贵重仪器等优点，且对水溶性样品和非水溶性样品均可测定。

苯酚一硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等提出的。

其原理是：多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，
【总页数】1页(P56)
【作者】张青
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】TS227
【相关文献】
1.苯酚-硫酸比色法测定多糖含量 [J], 张青;张天民
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3.苯酚-硫酸比色法测定三黄糖敏汤中总多糖含量 [J], 靳淑敏;周娜;董振咏;白莉;韩茹;耿文婧
4.苯酚-硫酸比色法测定瑞丽白芨多糖含量 [J], 李国明;张丽萍;戴余波;张玉龙;李守岭;刘小琼
5.苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定香菇多糖含量比较 [J], 温文娟;刘珊;黄远丽
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苯酚-硫酸法测定多糖方法的改进

３结论
葡萄糖浓度（￣ｇ／ｍＬ）
图３葡萄糖标准曲线
萄糖重量得到测定的多糖重量，计算测定的多糖重量占总重
苯酚一硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，此方
量的比例，平均值为１０１．５２％，ＲＳＤ＝３．９８１３％，说明该方法
０．６５３０．６５４０．６５４０．６５６０．６５７０．６５７０．６５７０．６５３０．６５２０．６４９
０．６５０
响，随着配制时间的延长，显色效果先迅速降低，８ｈ后缓慢降低。因此，使用本方法时应尽量快速操作，以免因操作时间
过长造成试验误差。另外，测定大量样品时可以考虑提前８ｈ
配制显色剂，以减小前后样品间因操作时间不同造成的误差。
１ＯＯＯ０ＯＯＯＯＯ
２．４苯酚一硫酸法测定多糖含量的重现性
０９８７６５４３２
管６０Ｌ，各加入显色剂１８０ＩＬＬ，混匀并放置于不同的温度中
取苯酚１００ｇ，置于蒸馏烧瓶中加
１．２．１苯酚试剂的制备
加热，观察加热温度对溶液显色的影响，加热时间设定为２５ｍｉｎ，使用酶标仪检测Ｄ，试验结果见表１。从表１可知，当温度低于８０℃时，混合溶液完全不能显色，１００ｏＣ的显
徐光域等通过对苯酚硫酸法操作步骤的改进以减少因人为的操作而产生的误差改进后的方法提高了精密度和准确性操作也有所简化苯酚硫酸法与酶标仪相结合先用苯酚硫酸与多糖产生显色反应再使用酶标仪测吸光度适合快速大批量的测定但试验的准确性较低误差较大本研究结合了2种改进思路探索试验了一种既准确精密又操作简便适合于快速批量检测多糖含量的试验方法

粗多糖测定方法

苯酚-硫酸法测定多糖一、原理：多糖或寡糖在浓硫酸作用下水解产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚缩合，生成橙黄色物质，在波长490nm 处和一定浓度范围内，其吸光度与糖浓度呈线性关系，可通过比色法测定其含量。

二、溶液的配制：①80%苯酚储备液：精密称取20.0g苯酚，加入5.0mL蒸馏水，60℃水浴溶解，过滤，备用。

②6%苯酚试剂：由80%的苯酚溶液配制（现用现配）。

③葡萄糖标准溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品12.0mg，置小烧杯中，加蒸馏水溶解，定容至200mL，配成标准葡萄糖浓度为60.0 ug/mL，过滤，备用。

三、标准曲线的绘制：按下表中的配制分别置于20mL具塞试管中，每管加入葡萄糖标准液和水后混匀，加入0.4mL 6%苯酚试剂后，混匀，立即置冰水浴中，加入4.5mL浓硫酸（自然流下），混匀，置于80℃水浴中加热10min，取出水浴冷却10min，于波长492nm处测其吸光度。

以吸光度（A）对葡萄糖浓度（C）作标准曲线。

编号0 1 2 3 4 50 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 标准葡萄糖溶液（mL）蒸馏水（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 葡萄糖浓度0 6 18 30 42 54 （ug/mL）6%苯酚（mL）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 浓硫酸（mL） 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 总体积(mL) 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 OD值0.0000 0.1034 0.3258 0.5445 0.7600 0.9812四、样品的测定：按下表添加各溶液，按照标准曲线的测定方法进行测定。

编号空白样品蒸馏水（mL） 2.0 0多糖溶液（mL）0 2.06%苯酚（mL）0.4 0.4浓硫酸（mL） 4.5 4.5总体积(mL) 6.9 6.9\。

毛竹竹叶多糖分离与纯化技术研究

１．４．５竹叶多糖的纯化Ｓｅｐｈａｄｅｘ葡聚糖凝胶，用蒸馏水、０．５ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＯＨ、０．１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ溶液预处理。选用１．６ｃｍ × ６０ｃｍＳｅｐｈａｄｅｘ凝胶柱，有效长度５５ｃｍ，床体积１１０ｍｌ。取２ｍｌ（约３０ｍｇ梯度洗脱，调节洗脱液的流速：在０．１ＢＶ／ｈ，分部收集，每１２ｍｉｎ收集１管，Ｇ－７５凝胶柱层析每管１．５ｍｌ；Ｇ－１００凝胶柱层析的每管２．０ｍｌ。用硫酸－苯酚法逐管检测各管洗脱液的吸光度。１．５数据分析
摘要：对毛竹叶采用超声波提取法获得的竹叶多糖粗提取物，采用Ｓｅｖａｇ法脱蛋白质、乙醇分级沉淀、冷冻干燥后得到粗多糖，进一步用ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析、Ｓｅｐｈａｄｅｘ葡聚糖凝胶柱层析等方法分离纯化。结果表明：Ｓｅｖａｇ法脱蛋白３次可脱除９７．２％的蛋白质；５０％浓度的乙醇沉淀多糖得率最高，为３７．６％；ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析柱水洗脱的得率最高，为４６．４％；ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析柱２次水洗脱获得的竹叶多糖经Ｇ－７５柱层析和Ｇ－１００柱层析可得到白色粉末状的中性多糖。选择水和ＮａＣｌ溶液为洗脱剂的温和条件分离纯化多糖效果较好。关键词：毛竹；竹叶多糖；柱层析；分离；纯化
收稿日期：２００７－０７－２６基金项目：湖南省科技厅项目（Ｂ－１３８）作者简介：周跃斌（１９６３－），男，副教授，博士，主要从事天然产物研究与开发。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｏｗｙｕｅｂｉｎ＠１６３．ｃｏｍ
※工艺技术
食品科学
2008, Vol. 29, No. 07 157
１．４．４竹叶多糖的ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析分离ＤＥＡＥ－５２纤维素经蒸馏水、０．５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ、

苯酚-硫酸法测多糖含量[新版]

苯酚-硫酸法测多糖含量000原理000多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。

再以比色法测定。

000试剂0001．浓硫酸：分析纯，95.5% 0002． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

0003． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）00 04．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。

0005． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

0006． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

0007． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

0008． 6mol/L 盐酸000操作0001．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

000 2．样品含量测定：000①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。

最后一次将残渣一起到入离心管。

注意：总的溶液不要超出10毫升。

（既不要超出离心管的容量）。

000②离心，转速3000转/分钟，共三次。

第一次15分钟，取上清液。

后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。

最后滤液保持18毫升左右。

（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。

因为其脂肪含量大容易夹带残渣。

）000③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

苯酚-硫酸比色法测定竹节参水溶多糖的含量

苯酚-硫酸比色法测定竹节参水溶多糖的含量向东山【摘要】采用苯酚-硫酸比色法,测定竹节参水溶多糖的含量.以标准葡萄糖为对照,在486 nm处测定吸光度.当多糖含量为5～100 μg/mL时,质量浓度与吸光度呈明显线性关系.在此范围内,建立竹节参多糖质量浓度(μg/mL)和吸光度之间的回归方程为y=116.72x+0.1787(r2=0.999 6),加样回收率为99.77%,RSD值为1.16%.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2010(000)004【总页数】2页(P279-280)【关键词】竹节参;多糖;苯酚-硫酸法;吸光度【作者】向东山【作者单位】湖北民族学院化学与环境工程学院,湖北恩施,445000【正文语种】中文【中图分类】R284.1竹节参(Panax japonicus C.A.Mey.)属五加科植物,别名竹节三七、白三七、北三七、大叶三七[1],兼具我国北药人参和南药三七之功效,具有抑制肿瘤、抗炎、镇痛、镇静、抗病毒、提高记忆力、抗衰老及抗疲劳等多种功能[2-4],在民间有“草药之王”的美誉,属我国特有珍贵中药材资源。

现代药理学研究表明,多糖为竹节参主要活性物质之一[5],具有免疫调节及抗疲劳等功效[6]。

目前对竹节参多糖的测定还没有快速简便的方法,因此建立竹节参多糖的简便检测方法,具有重要的现实意义。

研究表明,多糖在浓硫酸作用下水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,与苯酚生成橙黄色化合物,在一定浓度范围内颜色的深浅与其浓度成正比。

利用这一原理,本研究采用分光光度法建立一种快速、简便的竹节参多糖检测方法。

1 材料与方法1.1 材料人工栽培 3年生竹节参根,由湖北省中药材研究所提供。

对照品葡萄糖及其他所用试剂均为国产分析纯。

主要仪器为S53/54型紫外可见分光光度计(上海棱光科学仪器厂), AVANT130型高速冷冻离心机。

1.2 样品溶液的制备竹节参置于鼓风干燥箱中60℃烘干,粉碎至全部通过80目筛。

不同地区竹叶中多糖的提取测定

不同地区竹叶中多糖的提取测定喻谨;岳永德;汤锋;姚曦;王坤【摘要】采用苯酚-硫酸法测定了10种竹叶多糖的含量，分析比较了不同竹种竹叶多糖含量的差异；利用离子色谱仪测定了竹叶多糖的组成。

结果表明：10种竹叶含多糖0.18%~0.93%，最高为福建青秆竹，最低是长宁佛肚竹；同一地区不同竹种的竹叶多糖含量存在极显著差异。

竹叶多糖由5种单糖组成，分别是阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖，其中阿拉伯糖占18.32%~36.63%，半乳糖占19.16%~38.19%，葡萄糖占16.90%~54.45%，木糖占5.88%~16.32%，甘露糖占1.53%~10.89%。

%The content of polysaccharides from ten species of bamboo leaves was determined by phenol-sulfuric acid method. The content difference among the different bamboo leaves was analyzed. The monosaccharide composition of polysaccharides from ten species of bamboo leaves was studied using high performance anion exchange chromatography ( HPAEC) respectively. The results indicated that the content range of polysaccharides was 0. 18% to 0. 93%, the highest was Bambusa tuloides Munro in Fujian, and the lowest was Bambusa ventricosa McClure in Changning. Significant differences were found among the content of polysaccharides from different species of bamboo leaves in the same area. Bamboo polysaccharides in different species were composed of arabinose 18. 32%-36. 63%, galactose 19. 16%-38. 19%, glucose 16. 90%-54. 45%, xylose 5. 88%-16. 32%, and mannose 1. 53%-10. 89%, respectively.【期刊名称】《生物质化学工程》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】4页(P40-43)【关键词】竹叶;多糖;含量;单糖组成【作者】喻谨;岳永德;汤锋;姚曦;王坤【作者单位】国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102【正文语种】中文【中图分类】TQ35多糖是一类重要的生物活性物质，广泛存在于动物、植物、微生物等有机体中。