第07章--氨基酸、多肽、蛋白质和酶类药品检验

第7章 章
氨基酸、多肽、 氨基酸、多肽、蛋白质和 酶类药品检验
氨基酸类药物含量测定常用的方法 1.酸碱滴定法 酸碱滴定法
示例1： 示例 ：谷氨酸的 含量测定 示例2： 示例 ：赖氨酸片 中赖氨酸的测定
2.非水溶液滴定法 非水溶液滴定法
示例： 示例：酪氨酸的 含量测定
3.定氮法 定氮法
示例： 示例：天门酰氨 片的含量测定
HPLC（高效液相色谱）
柱的类型： 柱的类型： 固定相： 固定相：
检测器类型： 检测器类型： 流动相： 流动相：
氨基酸自动分析仪
一种专门用来分析氨基酸的自 动化的液相色谱仪。 动化的液相色谱仪。
原理： 原理：蛋白质经盐酸水解 成为游离氨基酸， 成为游离氨基酸，经氨基 酸分析仪的离子交换柱分 离，与茚三酮溶液产生颜 色反应， 色反应，再通过分光光度 计比色测定氨基酸含量。 计比色测定氨基酸含量。 一份水解液可同时测定天 精氨酸等16 冬，苏，丝，精氨酸等 种氨基酸。 种氨基酸。
多肽类药品检测
1.酸碱滴定法 酸碱滴定法 2.紫外分光光度法 紫外分光光度法 3.效价测定法（略） 效价测定法（ 效价测定法 示例一： 示例一：抑肽酶效价的测定 示例二： 示例二：杆菌肽效价的测定
蛋白质类药品的检验 定氮法 电泳法（重点介绍） 电泳法（重点介绍） 生物检定法
电泳： 电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电 荷的电极移动的现象。 荷的电极移动的现象。 醋酸纤维素薄膜电泳：以醋酸纤维薄膜为支持物。 醋酸纤维素薄膜电泳：以醋酸纤维薄膜为支持物。 它是纤维素的醋酸酯， 它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而 制成。它溶于丙酮等有机溶液中， 制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一 细密的微孔薄膜，厚度以 为宜。 细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。 为宜 特点：操作简单、灵敏度高，样品用量少。 特点：操作简单、灵敏度高，样品用量少。电泳时 间短，一般电泳 即可， 间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色， 即可 加上染色，脱色， 整个电泳完成仅需90min左右。 左右。 整个电泳完成仅需 左右
2.钡盐中钡的测定 钡盐中钡的测定 在 HAc-NaAc 缓 冲 溶 液 中 ， CrO42— 能将Ba 沉淀为BaCrO4。沉淀经过滤、洗 沉淀经过滤、 能将 2+沉淀为 涤 后 ， 用 稀 HCl 溶 解 ， 加 入 过 量 KI ， Cr2O72—将I—氧化为 2，析出的 2，以淀粉为 氧化为I 析出的I 指示剂用Na 标准溶液滴定。 指示剂用 2S2O3 标准溶液滴定 。 反应式 如下： 如下： Ba2++ CrO42—＝BaCrO4 ↓(黄) 黄 2BaCrO4+4H+＝2 Ba2++H2Cr2O7+H2O Cr2O72—+6I—+14H+＝3I2+2Cr3++7H2O I2+2S2O32—＝2I—+S4O62—
3.在间接碘量法中， 当析出碘的反应完成后 ， 应 在间接碘量法中，当析出碘的反应完成后， 在间接碘量法中 立即用Na 进行滴定(避免 的挥发和I 避免I 立即用 2S2O3 进行滴定 避免 2 的挥发和 — 被空气氧 化)。 。 （二）应用实例 1.铜矿石中铜的测定 铜矿石中铜的测定 矿石经HCl、HNO3、溴水和尿素处理成溶液后、 溴水和尿素处理成溶液后、 矿石经 、 掩蔽试样中的Fe 使其形成稳定的FeF63用 NH4HF2掩蔽试样中的 3+， 使其形成稳定的 络合物， 并调节溶液的pH为 络合物 ， 并调节溶液的 为 3.5—4.0， 加入 与 Cu2+ ， 加入KI与 反应，析出的I 标准溶液滴定， 反应，析出的 2，用Na2S2O3标准溶液滴定，以淀粉为 指示剂，反应式如下： 指示剂，反应式如下： 2Cu2++4I—＝2CuI↓+I2 I2十2S2O32—＝2I—+S4O62— 本法可测定矿石中0.5%以上的铜。 以上的铜。 本法可测定矿石中 以上的铜
剩余碘量法
在供试品中先加入一定量、过量的碘滴定液， 在供试品中先加入一定量、过量的碘滴定液， 与测定组分反应完全后， 待I2与测定组分反应完全后，再用硫代硫酸 钠滴定液滴定剩余的碘， 钠滴定液滴定剩余的碘，根据与药物作用的 碘的量来计算药物含量的方法。 碘的量来计算药物含量的方法。
2、滴定碘法(间接碘量法 、滴定碘法 间接碘量法 间接碘量法) 电位比E 高的氧化性物质， 电位比 ӨI2/I—高的氧化性物质 ， 可在一定的条件 下，用碘离子来还原，产生相当量的碘，然后用 标准溶液来滴定析出的I Na2S2O3 标准溶液来滴定析出的 2 ， 这种方法叫做间 接碘量法或称为滴定碘法。 例如K 接碘量法或称为滴定碘法 。 例如 2Cr2O7 在酸性镕液 中与过量的KI作用 析出的I 作用， 中与过量的 作用 ， 析出的 2 用 Na2S2O3 标准溶液滴 定。 Cr2O72-+6I-+14H+＝2Cr3++3I2+7H2O I2+2S2O32—＝2I-+S4O62— 利用这一方法可以测定很多氧化性物质,如 利用这一方法可以测定很多氧化性物质 如 ClO3- 、 ClO- 、 CrO42- 、 IO3- 、 BrO3- 、 SbO43- 、 MnO4- 、 MnO2 、AsO43-、NO3-、NO2-、Cu2+、H2O2等等，以 等等， 及能与CrO42-生成沉淀的阳离子 ， 如 Pb2+、 Ba2+等 ， 生成沉淀的阳离子， 及能与 所以滴定碘法的应用范围相当广泛。 所以滴定碘法的应用范围相当广泛。
赖氨酸片中赖氨酸的测定中
1)为什么要用 为什么要用NaOH调节 为7.0？ 调节pH为 ？ 为什么要用 调节 2）加入甲醛溶液的作用？ ）加入甲醛溶液的作用？ 3）是直接滴定还是其他的滴定方式？ ）是直接滴定还是其他的滴定方式？
非水溶液滴定法
非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行滴定的方法。 非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行滴定的方法。 主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、 主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸 盐或有机酸盐，以及有机酸碱金属盐类药物的含量。 盐或有机酸盐，以及有机酸碱金属盐类药物的含量。 也用于测定某些有机弱酸的含量。 也用于测定某些有机弱酸的含量。 非水溶剂的种类 (1) 酸性溶剂 有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强其相对碱 最常用的酸性溶剂为冰醋酸。 度，最常用的酸性溶剂为冰醋酸。 (2) 碱性溶剂 有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强其相对酸 最常用的碱性溶剂为二甲基甲酰胺。 度，最常用的碱性溶剂为二甲基甲酰胺。
碘量法的主要误差来源， 一是I 易挥发， 二是I 碘量法的主要误差来源 ， 一是 2 易挥发 ， 二是 易被空气中的氧所氧化。 易被空气中的氧所氧化。 为防止I 挥发，应采取以下措施： 为防止 2挥发，应采取以下措施： 1. 加入过量 ，KI与I2形成 3—，以增大 2的溶解 加入过量KI， 与 形成I 以增大I 降低I 的挥发性，提高淀粉指示剂的灵敏度。 度，降低 2的挥发性，提高淀粉指示剂的灵敏度。 此外， 加入过量的KI， 此外 ， 加入过量的 KI ， 可以加快反应的速度和 提高反应的完全程度。 提高反应的完全程度。 2.反应时溶液的温度不能高，一般在室温下进行。 反应时溶液的温度不能高， 反应时溶液的温度不能高 一般在室温下进行。 因升高温度增大I 的挥发性， 因升高温度增大 2的挥发性 ， 降低淀粉指示剂的灵敏 保存Na 溶液时， 室温升高， 加速Na 度 。 保存 2S2O3 溶液时 ， 室温升高 ， 加速 2S2O3 的分解。 的分解。 3.析出碘的反应最好在带塞的碘量瓶中进行，滴 析出碘的反应最好在带塞的碘量瓶中进行， 析出碘的反应最好在带塞的碘量瓶中进行 定切勿剧烈摇动。 定切勿剧烈摇动。
为防止I 被空气中的氧所氧化， 应采取以下措施： 为防止 - 被空气中的氧所氧化 ， 应采取以下措施 ： 1.避光 光线能催化 —被空气氧化。 避光 光线能催化I 被空气氧化。 2.溶液 值的影响 S2O32—与I2之间的反应必须 溶液pH值的影响 溶液 在中性或弱酸性溶液中进行。 因为在碱性溶液中， 在中性或弱酸性溶液中进行 。 因为在碱性溶液中 ， I2 将会发生下述副反应： 与S2O32—将会发生下述副反应： S2O32—+4I2+10 OH—＝2SO42—+8I—十5H2O 而且， 在碱性溶液中还会发生歧化反应： 而且，I2在碱性溶液中还会发生歧化反应： 3 I2+6OH—＝IO3—+5I—+3H2O 如果在强酸性溶液中， 溶液会发生分解： 如果在强酸性溶液中，Na2S2O3溶液会发生分解： S2O32—+2H+＝SO2+S↓+ H2O 同时， 在酸性溶液中也容易被空气中的O 氧化： 同时，I—在酸性溶液中也容易被空气中的 2氧化： 4I—+4H++O2=2I2+2H2O
示例一： 示例一：三氨 示பைடு நூலகம்一： 示例一：盐酸 基酸注射液-341 基酸注射液 半胱氨酸水合物 示例二： 示例二：六氨 的测定 基酸注射液400 基酸注射液 示例一： 胱氨 示例一：L-胱氨 酸的测定 6.氨基酸自动分析 氨基酸自动分析
仪
碘量法
原理：半胱氨酸分子中含有－ ， 原理：半胱氨酸分子中含有－SH， 在酸性 条件下，与过量的碘作用， 条件下，与过量的碘作用，剩余的碘用硫代 硫酸钠溶液滴定。由硫代硫酸钠溶液所消耗 硫酸钠溶液滴定。 的量，间接求出硫化物的含量。 的量，间接求出硫化物的含量。 注意：滴定条件，指示剂，碘滴定液， 注意：滴定条件，指示剂，碘滴定液， Na2S2O3 标液配制
碘量法常用淀粉作指示剂 ， 碘量法常用 淀粉作指示剂， 淀粉与碘作 淀粉作指示剂 用形成蓝色络合物，灵敏度很高，即使在 5×10—6 mol/L溶液中亦能看出。 溶液中亦能看出。 × 溶液中亦能看出 淀粉指示剂应在近终点时加入，因为当 淀粉指示剂应在近终点时加入， 溶液中有大量碘存在时， 溶液中有大量碘存在时 ， 碘可被吸附在淀粉 表面，影响终点的正确判断。 表面，影响终点的正确判断。 碘滴定液(0.1mol/L) 碘滴定液 I2=253.81 12.69g→1000ml 配制】 取碘13.0g,加碘化钾 加碘化钾36g与水 与水50ml 【配制】 取碘 加碘化钾 与水 溶解后，加盐酸3滴与水适量使成 滴与水适量使成1000ml， 溶解后，加盐酸 滴与水适量使成 ， 摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。