药敏试验简介ppt课件
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药敏试验
判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养 菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该 药的MBC。
试 材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方 法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其 余各试管中加入0.5mL； （3）向第1支试管中加0.1mL药液 取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂 平板 向1-14试管中各加0.5mL菌液 培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖 步 骤 （1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基 （4）涂菌液 （5）放置牛津杯 （6）加菌液 （7）盖陶瓦盖 （8）培养 （9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试 材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、 培养箱
方 法
（1）制备药敏片 （2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤 （3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片 （5）培养:37℃ 24小时 （6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm
《解读药敏报告》课件
药敏报告的重要性
指导临床用药
药敏报告为临床医生提供了致病微生物对各种抗菌药物的敏感性和耐药性信息，有助于医生选择 合适的药物。
提高治疗效果
通过药敏报告，医生可以选择对致病微生物敏感的抗菌药物，提高治疗效果，缩短病程。
控制耐药性的产生
药敏报告有助于医生及时发现和防止耐药性的产生，保护抗菌药物的有效性。
患者情况
一位65岁男性，因尿路感染住院 治疗。
病原体
耐万古霉素肠球菌。
药敏报告
显示该菌对多种抗生素耐药。
治疗过程
采用替加环素治疗，同时根据药 敏报告调整剂量和疗程。
THANKS
告并合理选用敏感药物。
加强与实验室的沟通合作
03
临床医生和实验室之间应加强沟通合作，及时反馈和解决药敏
试验中出现的问题。
05
实际案例分享
案例一：耐药菌感染治疗失败
01
患者情况
一位70岁女性，因
肺部感染住院治疗
02
。
耐药菌株
肺炎克雷伯菌，对 多种抗生素耐药。
04
结果
患者死亡，诊断为
03
多重耐药菌株感染
02
药敏报告解读步骤
确定病菌种类
01
确定病菌种类是解读药敏报告的第一步，因为 不同病菌对药物的敏感性不同。
02
通过查看报告中的细菌名称或编号，可以确定 感染的病菌类型。
03
了解病菌种类有助于医生选择合适的药物进行 治疗。
判断是否耐药
耐药性是指病菌对某些药物产 生抵抗力，导致药物无法有效 杀死或抑制病菌的生长。
04
药敏报告的局限性及未来展 望
药敏报告的局限性
01
培养基的局限性
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
药敏试验简介ppt课件
– 使用CLSI 方法记录 – 采用其他方法时使用CLSI做参照方
法进行比对
ppt课件
33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
ppt课件
19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
30
CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
31
CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
ppt课件
9
测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
法进行比对
ppt课件
33
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
M7 表格
附录
•抗生素的测试与报告
MIC法
•S I R 折点 •质控
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点
– 见后面的幻灯：
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19
常量稀释法
•药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
• 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
• 德国DIN标准 …pp…t课件..
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CLSI药敏解释标准
• CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南
ppt课件
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CLSI 药敏文件
• M100-S22 常见菌 (2012)** • M11-A7 厌氧菌 (2007) • M39-A3 积累抗菌谱(2009) • M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放
• 培养时间：18小时
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测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
药敏试验报告的解读PPT课件
48
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
10
11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
15
16
17
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（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
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与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
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细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
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11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
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抗菌药物敏感性试验(药敏试验)PPT课件
治疗对基本药物过敏的患者
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
细菌药敏试验概述
3
药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
MIC 5倍以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器 将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不 能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板 内缘应大于15mm。
6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后 阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小 时。
7.用游标卡尺或直尺量取 抑菌环直径，根据CLSI标 准，报告细菌对该抗生素
敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
MIC接近血、体液中药物的浓度，治
疗反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重
大结果的判定错误
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径)
MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
第四章
抗菌药物敏感试验
黄露萍
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无
抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏
感性试验（Antimicrobial Susceptibility
Test），简称药敏试验（AST）。
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果；
药敏试验PPT资料PPT课件
在感染初期或症状明显时 采集样本，以提高检出率。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
药敏试验PPT资料
肠杆菌科 一级 二级 南 头孢肤肟，头霉 替卡/克 噻肟，曲松，环丙 亚胺培南，替卡，哌拉 氨曲南，头孢他啶 卡那，奈替，妥布 四环素，氯霉素 妥布，磺胺 头孢曲松 氯霉素，奈替 环丙，亚胺培南， 氨苄 唑林，庆大 阿米卡星 氨苄/舒，阿莫/克 绿脓和非肠杆菌科 头孢他啶 庆大，替卡，哌拉 阿米卡星 吡肟，哌酮，氨曲
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
药敏试验方法简介ppt
在动物医学中，药敏试验可以帮助兽医选择合适 的抗菌药物对动物进行治疗，提高动物的治愈率 和生存率。
02
药敏试验基本原理
药敏试验的基本原理
药敏试验定义
药敏试验是测定细菌对药物敏感性的实验方法，通过药敏试验可以指导临床 合理使用抗生素，及时有效的控制感染。
药敏试验原理
药敏试验的原理是药物对细菌生长的抑制作用，通过在体外培养细菌，并观 察细菌生长情况来判断细菌对药物的敏感性。
抗生素稀释
为了检测抗生素对不同浓度下细菌的效果，需要对抗生素进行稀释处理。
稀释方法：连续稀释法、棋盘法等。
稀释步骤：计算抗生素的初始浓度→将抗生素溶液按比例稀释至所需浓度→将不同浓度的抗生素溶液分 装到不同的试管或培养皿中。
培养及结果观察
1
将接种细菌的培养基和含有不同浓度抗生素的 培养基一同放入培养箱中，按照不同的时间点 进行培养和观察。
药敏试验方法简介ppt
目 录
• 药敏试验概述 • 药敏试验基本原理 • 药敏试验操作流程 • 药敏试验结果解读 • 药敏试验注意事项及改进建议 • 研究展望
01
药敏试验概述
定义与目的
定义
药敏试验是测定细菌对抗生素药物敏感性的实验方法，通过 药敏试验可以了解致病菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床 合理选择抗生素提供依据。
加强新型药物筛选
加强基于药敏试验方法的抗菌新药物筛选工作，提高抗菌药物的研发和应用水平。
THANKS
感谢观看
理等。
常见问题及处理
试验结果异常
如果得到的结果与预期差距较大，需要检查每一步操作，寻找可能的原因。
试剂失效
对于试剂的保存和使用需要注意有效期和质量，如发现试剂失效需及时更换。
02
药敏试验基本原理
药敏试验的基本原理
药敏试验定义
药敏试验是测定细菌对药物敏感性的实验方法，通过药敏试验可以指导临床 合理使用抗生素，及时有效的控制感染。
药敏试验原理
药敏试验的原理是药物对细菌生长的抑制作用，通过在体外培养细菌，并观 察细菌生长情况来判断细菌对药物的敏感性。
抗生素稀释
为了检测抗生素对不同浓度下细菌的效果，需要对抗生素进行稀释处理。
稀释方法：连续稀释法、棋盘法等。
稀释步骤：计算抗生素的初始浓度→将抗生素溶液按比例稀释至所需浓度→将不同浓度的抗生素溶液分 装到不同的试管或培养皿中。
培养及结果观察
1
将接种细菌的培养基和含有不同浓度抗生素的 培养基一同放入培养箱中，按照不同的时间点 进行培养和观察。
药敏试验方法简介ppt
目 录
• 药敏试验概述 • 药敏试验基本原理 • 药敏试验操作流程 • 药敏试验结果解读 • 药敏试验注意事项及改进建议 • 研究展望
01
药敏试验概述
定义与目的
定义
药敏试验是测定细菌对抗生素药物敏感性的实验方法，通过 药敏试验可以了解致病菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床 合理选择抗生素提供依据。
加强新型药物筛选
加强基于药敏试验方法的抗菌新药物筛选工作，提高抗菌药物的研发和应用水平。
THANKS
感谢观看
理等。
常见问题及处理
试验结果异常
如果得到的结果与预期差距较大，需要检查每一步操作，寻找可能的原因。
试剂失效
对于试剂的保存和使用需要注意有效期和质量，如发现试剂失效需及时更换。
药敏试验科普
02
常规经验治疗 效果不佳或又 较高失败风险 时
03
对感染菌的耐 药性无法估计 时
04
需要了解微生 物耐药性变迁 时
二、药敏试验怎么做
纸片扩散法
原理：
一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在 涂 布 一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散 到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低。
合用药；或可选择泰利霉素等。 • 高浓度氨基糖苷类（S）：可用青霉素、氨苄青霉素或万古霉素与氨基糖苷类联合用药。 • 高浓度氨基糖苷类（R）：表示青霉素、氨苄青霉素或万古霉素与氨基糖苷类联合用药无效。
常见致病菌的药敏结果
肠杆菌科
药敏结果：一代头孢菌素类（S），氨基糖苷类（S）；一代（二代）头孢（R），氨基糖苷类（R），三代头孢（S）；三代 头孢（R），头孢西丁（S）；三代头孢（R），头孢西丁（R），亚胺培南（S）
当低到一定程度（MIC最低抑菌浓度以下）时药物无法抑制细菌生长，从而形成界限分明 的抑菌环
通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分布关系，经过回归处理可以求出细菌对某种 抗生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。
药敏试验怎么做
稀释法
常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
微量法：微量肉汤稀释法
参考方法常量法：将标准接种物加入含对倍稀释抗生素的MH肉汤管中，过夜培养。MIC即是能 抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一管所表示的浓度值。
缺点： 成本太高，常规试验 很难应用；局限性， 主要用于苛养菌和厌 氧菌
E-Test
三、药敏试验结果怎么看
敏感（S）
表示由该菌引起的感染可以用 常规剂量的该抗菌药物治疗， 禁忌症除外。
A B
药敏试验简介
• 药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是 定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳 或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性 无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁 时
药敏试验方法学
• 纸片扩散法 • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法
• E-test法
药敏试验方法学指南
– 使用CLSI 方法记录 – 采用其他方法时使用CLSI做参照方
法进行比对
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点 •质控
M7 表格 MIC法
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点 •质控
附录
CLSI M100-S22 更新信息
– 普通细菌放CO2时由于 碳酸的影响，药物活性
– 抗生素拮抗剂含量（用29212
受到影响，形成假敏感
监控）
或假耐药
– 钙镁离子含量、锌离子含量
– 苛养菌放普通环境生长
（用27853氨基糖苷类和亚胺
不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 菌悬液
• 培养时间
– 粘液性铜绿需48小时
– 浓度高抑菌环缩小
• 测量方法
• 按CLSI规定，由FDA根据抗生素在临床实 践中表现出来的安全性、有效性、和医学 经济学原则将抗生素分为A,B,C三组。报告 时按照A→B→C的次序进行报告。
关于抗生素分组
▪ A组药物是首选药物，属于最经济有效，最安 全的抗生素类别
▪ B组是在A组药物无效时，或者感染不单纯需 要扩展微生物覆盖范围时选用的药物，耐药性 一般较A组CFU/ml）：
药敏试验方法学
• 纸片扩散法 • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法
• E-test法
药敏试验方法学指南
– 使用CLSI 方法记录 – 采用其他方法时使用CLSI做参照方
法进行比对
CLSI M100 “表格” 内容
更新信息
M100
词汇表 I & II & III
M2 表格 扩散法
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点 •质控
M7 表格 MIC法
•抗生素的测试与报告 •S I R 折点 •质控
附录
CLSI M100-S22 更新信息
– 普通细菌放CO2时由于 碳酸的影响，药物活性
– 抗生素拮抗剂含量（用29212
受到影响，形成假敏感
监控）
或假耐药
– 钙镁离子含量、锌离子含量
– 苛养菌放普通环境生长
（用27853氨基糖苷类和亚胺
不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 菌悬液
• 培养时间
– 粘液性铜绿需48小时
– 浓度高抑菌环缩小
• 测量方法
• 按CLSI规定，由FDA根据抗生素在临床实 践中表现出来的安全性、有效性、和医学 经济学原则将抗生素分为A,B,C三组。报告 时按照A→B→C的次序进行报告。
关于抗生素分组
▪ A组药物是首选药物，属于最经济有效，最安 全的抗生素类别
▪ B组是在A组药物无效时，或者感染不单纯需 要扩展微生物覆盖范围时选用的药物，耐药性 一般较A组CFU/ml）：
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– 见后面的幻灯：
p药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
– 普通营养要求细菌使用水解酪蛋白琼脂（MHA） 平板
– 肺链使用含5%绵羊血的含血MHA
– 嗜血杆菌使用HTM培养基
– 淋球菌使用含1%生长因子（不含L-半胱氨酸） 补充剂的GC培养基
• 平皿大小：最小90mm，通常使用150mm平板
• 琼脂厚度4±1mm
• 菌液浓度0.5 McF（约1.5×108CFU/ml）
ppt课件
8
• 涂布方法：无菌棉签浸透菌液后稍微挤干， 棉签与平板呈30°左右的倾角密集左右来 回涂布，完成一遍后旋转120°后再涂，如 此三次，最后绕边缘一次
• 纸片之间最佳间距30mm，不得低于25mm
• 培养温度；35℃；重叠时不超过3个碟子
• 气体环境：普通细菌大气环境；嗜血杆菌、 淋球菌、肺链置CO2环境
104 cfu/ml
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
药敏试验简介
卢先雷
ppt课件
1
本节课程需要掌握的内容
• 什么是药敏试验，什么时候需要做药敏试 验——即药敏试验的临床指征是什么？
• 药敏试验方法学——怎么做 • 药敏试验结果的正确判读与解释——怎么
观察 • 药敏结果的正确报告 • 药敏试验的室内质量控制
ppt课件
2
药敏试验的概念与适应征
• 通过模拟体内环境条件，测试分离自病人 体内感染部位的病原菌对常用抗生素的敏 感性，即抗生素对目标细菌的抑制能力， 从而预测抗生素治疗效果的一种体外试验 方法。
– 普通细菌放CO2时由于 碳酸的影响，药物活性
– 抗生素拮抗剂含量（用29212
受到影响，形成假敏感
监控）
或假耐药
– 钙镁离子含量、锌离子含量
– 苛养菌放普通环境生长
（用27853氨基糖苷类和亚胺
不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 菌悬液
• 培养时间
– 粘液性铜绿需48小时
– 浓度高抑菌环缩小
• 测量方法
– M27-A2 Fungal MIC(2002)
– M44-A Funga Disk Diffusion(2004)
– M45-A Infrequently Isolated/Fastidious Bacteria (2006)
* M2, M7 updated every 3 yearpspt课件
– 普通营养要求细菌使用补充阳离子MH肉汤
– 肺链使用含2%冻融马血的MH肉汤
– 嗜血杆菌使用HTM肉汤
– 厌氧菌和微需氧菌使用布氏肉汤
– 淋病奈瑟菌推荐强化GC作琼脂稀释法
• 菌液浓度（5×104CFU/ml）：
– 初始菌液0.5 McF（约1.5×108CFU/ml）盐水
稀释200倍，加入0.1ml菌液到含有0.1ml 双倍
环内生长现象
铜绿假单胞菌 耐药亚群
大肠药敏，被肠球菌污染
ppt课件
14
特殊处理方法
• 当受测抑菌环与 旁边的融合时， 选择完整部分测 量
• 当受测抑菌环部 分变形时，选择 正常部分测量
ppt课件
15
扩散法药敏影响因素
• 培养基
• 细菌纯度
– pH值7.2-7.4
• 气体环境
– 营养程度（肠球菌能生长） – 厚度
4
药敏试验方法学指南
• 美国CLSI
– M2-A10 Disk Diffusion (2009)*
– M7-A8 MIC (2009)*
– M11-A7 Anaerobes (2007)
– M24-A Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic Actinomycetes
• 药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是
定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳
或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性
无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁
时
ppt课件
3
药敏试验方法学
• 纸片扩散法 • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法
• E-test法
ppt课件
浓缩的MH肉汤的微孔板中（或预先用标准浓
度的MH肉汤稀释后pp再t课件加到微孔中）
18
• 接种后应充分混匀，但不能有气泡产生
• 静置培养
• 培养温度；35℃
• 气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置 大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌 置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2
• 培养时间：18小时
• 结果读取：
5
• 其他标准：
– 法国CASFM标准；
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
– 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
– 德国DIN标准 ……..
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6
纸片扩散法
• 原理
– 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定 浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散到 纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠 近纸片的浓度越高，反之越低；
– 浓度低则扩大
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稀释法（MIC法）
• MIC法：分为常量法和微量法
➢常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
➢微量法：微量肉汤稀释法
简化双浓度折点法 ATB药敏
简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
ppt课件
17
试验方法与条件
• CLSI推荐培养基：
• 培养时间：18小时
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9
测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
− 肠球菌
万古霉素
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10
• 反射光
– 测量其他细菌与药 物时
ppt课件
11
• 变形杆菌
• 忽略环内的迁徙 生长
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12
• 测量肉眼可见的 明显抑菌区
• 忽略环边缘的微 弱生长
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13
– 当低到一定程度（MIC以下）时药物无法抑制 细菌的生长，从而形成界限分明的抑菌环
– 通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分 布关系，经过回归处理可以求出细菌对某种抗 生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。由 此可知，MIC与抑菌pp环t课件大小之间存在负相关，。7
试验方法与条件
• CLSI推荐培养基：
p药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
– 普通营养要求细菌使用水解酪蛋白琼脂（MHA） 平板
– 肺链使用含5%绵羊血的含血MHA
– 嗜血杆菌使用HTM培养基
– 淋球菌使用含1%生长因子（不含L-半胱氨酸） 补充剂的GC培养基
• 平皿大小：最小90mm，通常使用150mm平板
• 琼脂厚度4±1mm
• 菌液浓度0.5 McF（约1.5×108CFU/ml）
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8
• 涂布方法：无菌棉签浸透菌液后稍微挤干， 棉签与平板呈30°左右的倾角密集左右来 回涂布，完成一遍后旋转120°后再涂，如 此三次，最后绕边缘一次
• 纸片之间最佳间距30mm，不得低于25mm
• 培养温度；35℃；重叠时不超过3个碟子
• 气体环境：普通细菌大气环境；嗜血杆菌、 淋球菌、肺链置CO2环境
104 cfu/ml
mg/ml 4
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0.5 0.25 0.12
药敏试验简介
卢先雷
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1
本节课程需要掌握的内容
• 什么是药敏试验，什么时候需要做药敏试 验——即药敏试验的临床指征是什么？
• 药敏试验方法学——怎么做 • 药敏试验结果的正确判读与解释——怎么
观察 • 药敏结果的正确报告 • 药敏试验的室内质量控制
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2
药敏试验的概念与适应征
• 通过模拟体内环境条件，测试分离自病人 体内感染部位的病原菌对常用抗生素的敏 感性，即抗生素对目标细菌的抑制能力， 从而预测抗生素治疗效果的一种体外试验 方法。
– 普通细菌放CO2时由于 碳酸的影响，药物活性
– 抗生素拮抗剂含量（用29212
受到影响，形成假敏感
监控）
或假耐药
– 钙镁离子含量、锌离子含量
– 苛养菌放普通环境生长
（用27853氨基糖苷类和亚胺
不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 菌悬液
• 培养时间
– 粘液性铜绿需48小时
– 浓度高抑菌环缩小
• 测量方法
– M27-A2 Fungal MIC(2002)
– M44-A Funga Disk Diffusion(2004)
– M45-A Infrequently Isolated/Fastidious Bacteria (2006)
* M2, M7 updated every 3 yearpspt课件
– 普通营养要求细菌使用补充阳离子MH肉汤
– 肺链使用含2%冻融马血的MH肉汤
– 嗜血杆菌使用HTM肉汤
– 厌氧菌和微需氧菌使用布氏肉汤
– 淋病奈瑟菌推荐强化GC作琼脂稀释法
• 菌液浓度（5×104CFU/ml）：
– 初始菌液0.5 McF（约1.5×108CFU/ml）盐水
稀释200倍，加入0.1ml菌液到含有0.1ml 双倍
环内生长现象
铜绿假单胞菌 耐药亚群
大肠药敏，被肠球菌污染
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特殊处理方法
• 当受测抑菌环与 旁边的融合时， 选择完整部分测 量
• 当受测抑菌环部 分变形时，选择 正常部分测量
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扩散法药敏影响因素
• 培养基
• 细菌纯度
– pH值7.2-7.4
• 气体环境
– 营养程度（肠球菌能生长） – 厚度
4
药敏试验方法学指南
• 美国CLSI
– M2-A10 Disk Diffusion (2009)*
– M7-A8 MIC (2009)*
– M11-A7 Anaerobes (2007)
– M24-A Mycobacteria, Nocardiae, and Other Aerobic Actinomycetes
• 药敏试验适应征：分离菌是感染菌而不是
定植菌或污染菌；常规经验治疗效果不佳
或有较高失败风险时；对感染菌的耐药性
无法估计时；需要了解微生物耐药性变迁
时
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药敏试验方法学
• 纸片扩散法 • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法
• E-test法
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浓缩的MH肉汤的微孔板中（或预先用标准浓
度的MH肉汤稀释后pp再t课件加到微孔中）
18
• 接种后应充分混匀，但不能有气泡产生
• 静置培养
• 培养温度；35℃
• 气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置 大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌 置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2
• 培养时间：18小时
• 结果读取：
5
• 其他标准：
– 法国CASFM标准；
梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准
– 英国BSAC标准；
欧洲应用比较广泛的标准
– 德国DIN标准 ……..
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纸片扩散法
• 原理
– 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定 浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散到 纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠 近纸片的浓度越高，反之越低；
– 浓度低则扩大
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稀释法（MIC法）
• MIC法：分为常量法和微量法
➢常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
➢微量法：微量肉汤稀释法
简化双浓度折点法 ATB药敏
简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
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试验方法与条件
• CLSI推荐培养基：
• 培养时间：18小时
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测量方法
• 透射光
− 葡萄球菌
利奈唑胺 苯唑西林 万古霉素
− 肠球菌
万古霉素
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• 反射光
– 测量其他细菌与药 物时
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• 变形杆菌
• 忽略环内的迁徙 生长
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12
• 测量肉眼可见的 明显抑菌区
• 忽略环边缘的微 弱生长
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13
– 当低到一定程度（MIC以下）时药物无法抑制 细菌的生长，从而形成界限分明的抑菌环
– 通过抑菌环大小与MIC值高低之间的统计学分 布关系，经过回归处理可以求出细菌对某种抗 生素的MIC折点范围对应的抑菌环大小值。由 此可知，MIC与抑菌pp环t课件大小之间存在负相关，。7
试验方法与条件
• CLSI推荐培养基：