LCQ_液质联用仪基本操作讲座

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WatersLCMS液质联用培训讲义

3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1
Product
Static m/z 195.1
Waters 四极杆质谱培训
定性实验调谐仪器
©2005 Waters Corporation
样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔（CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行多反应监控MRM实验准备
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
©2005 Waters Corporation
8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
峰进行准确质量测量 (如在全扫描方式)
• scan speed compensation扫描速度补偿: 当仪器进行
快速扫描时，对系统进行‘延时’补偿校正。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
7. 设定采集参数：
选择适当的校正质量范围，校正大范围的全质量从22校正到2000，其余的参数可以使用预设参数default即可，设定完后按OK键。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
Waters 四极杆质谱培训

高级物理化学实验讲义-液质联用

⾼级物理化学实验讲义-液质联⽤⾼级物理化学实验讲义实验项⽬名称：L C Q-F l e e t液质联⽤仪的原理、实验技术及应⽤姓名: 张诗群学号：130420123 指导教师：谢莉莉成绩评定：评阅教师：⽇期：2012 年6 ⽉17 ⽇⼀、实验⽬的1.掌握L C Q-F l e e t液质联⽤仪基本原理。

2.熟悉该仪器的各部分的功能，并能进⾏简单的进样操作及控制软件的使⽤。

3.初步使⽤该仪器的数据处理软件，对得到的较简单实验谱图进⾏正确的判断及归属。

⼆、实验原理1. 质谱简化流程：2. LCQ-fleet的结构⽰意图。

3. 质谱相关名词质荷⽐（m/z）：以原⼦质量单位表⽰的离⼦质量与其电荷数的⽐值。

基峰：在质谱图中，指定质荷⽐范围内强度最⼤的离⼦峰称作基峰。

总离⼦流谱图（TIC）：对质荷⽐（m/z）在⼀定范围内的离⼦电流总和进⾏连续检测与记录的谱图。

原⼦质量单位（u）：⽤来衡量原⼦或分⼦质量的单位，它被定义为碳12原⼦质量的1/12。

4.离⼦的产⽣离⼦源类型：1.Electrospray Ionization (ESI) 电喷雾电离- ⼤多数情况下是液态过程。

2.Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APCI）⼤⽓压下化学电离-⽓相过程。

3.Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APPI）⼤⽓压下光离⼦化-⽓相过程。

离⼦源作⽤：1.去溶剂2.真空过渡3.离⼦化4.去除⼲扰5. 电喷雾（ESI）电离过程6. ESI离⼦化特点：1. 软电离⽅式，⼀般得到分⼦离⼦峰，如M+H+，M+Na+，M-H+;2. 液态电离⽅式，流速耐受有限（＜250 ul/min）；3. 可在常温下进⾏，热不稳定化合物⾸选；4. 可产⽣多电荷离⼦；有利于⼤分⼦化合物（如蛋⽩和多肽）的分析；5. 适⽤于强极性化合物；6. 灵敏度⾼；7. ⼤⽓压化学离⼦化（APCI）电离过程8. ⼤⽓压化学离⼦化（APCI）电离过程通过电晕放电离⼦化⼤⽓压化学电离有三个过程：1. 在⾼压电极作⽤下，氮⽓载⽓和⽓化的液相⾊谱溶剂发⽣反应，产⽣预反应离⼦。

液质联用操作规程

1 •适用范围本设备配备ACQUITYJPLC液相色谱仪、TQSMS/MS质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。

2.职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。

2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。

2.3科室负责人负责监督检查规程的执行。

3 •操作程序日常操作步骤：准备UPLC―>设置样品表一-> 运行样品一-定量一-打印报告。

注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。

建立新方法和project的操作步骤：准备UPLC—建立新的project —用标准品调谐—编辑质谱方法—编辑UPLC方法一-设置样品表一-运行样品一-定量一-> 打印报告。

3.1开机：3.1.1彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。

打开计算机电源> 等待windows正常启动>电脑界面右下角网络图标红叉。

打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。

打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。

打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。

打开Masslynx软件，masslynx主界面——左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum-pump 同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed]%要在5分钟内升到80。

至少抽真空4个小时> 查看真空状态主界面mass console--~ 面左侧xevo tq ms detector力卩号展开---ms display > 碰撞室真空度>达至U 7.x e-5mbar。

3.1.2日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa,打开Masslynx软件，进入工作站。

液质联用操作规程完整

液质联用操作规程完整
一、安全
1、确保正确连接液质联仪表电源，避免接触潮湿、高温环境；
2、操作前，请将样品材料与仪表一起放置在室内温度稳定的实验室中，以避免因温湿度异常导致的测量结果不精确；
3、使用时请确保所有有接触仪表的手都清洁，不要碰触仪器面板上的按钮；
4、确保仪表工作室内正常，避免尘埃和液体渗入仪表内；
二、准备工作
1、检查仪表电源电压和电源线，确保电源正常，如满足电源正常，将仪表正确接入电源；
2、检查样品的电导率是否符合要求，如果不符合要求，请使用试剂校准仪表；
3、将可调电位器旋转至“进样”位置，确保样品流通，样品槽内有样品，并完全填满样品槽；
4、可以调节温度设置以满足实验要求；
三、操作
1、确认样品的电导率符合要求，点击“测量”按钮；
2、将仪表开机，等待样品流过可调电位器；
3、点击“设定”按钮，并调节温度设置以满足实验要求；
4、点击“测量”按钮，开始测量；
5、测量完成后，可以将测量结果记录在仪器上，供后续分析参考；
四、收尾工作
1、根据实验要求，调节可调电位器，将样品流出样品槽；。

液质联用操作规程完整

2.职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。

2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。

2.3科室负责人负责监督检查规程的执行。

3 •操作程序日常操作步骤：准备UPLC―>设置样品表一-> 运行样品一-定量一-打印报告。

注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。

3.1开机：3.1.1彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。

打开计算机电源> 等待windows正常启动>电脑界面右下角网络图标红叉。

打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。

打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。

打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。

至少抽真空4个小时> 查看真空状态主界面mass console--~ 面左侧xevo tq ms detector力卩号展开---ms display > 碰撞室真空度>达至U 7.x e-5mbar。

3.1.2日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa,打开Masslynx软件，进入工作站。

液质联用讲座.ppt

• LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。
• MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等开发串联质谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物，对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性，其检测水平可以达到pg级
用MS2质量分析器扫描指定母离子的子离子碎片，所得到的质谱图只能是由指定母离经碰撞产生。
子离子扫描，pruduct ion scan
• 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳性率。子离子扫描的作用是：
• 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别 m/z相同的母离子
• 扫描类型选择
• 全扫描(Full Scan) • 子离子扫描(Daughter Scan) • 母离子扫描(Parent Scan) • 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) • 选择离子监测(SIR) • 多反应监测(MRM)
全扫描
• 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道目前样品中的组分状态。
仪器用途
该系统是Waters-Micromass公司在2005年推出的一款最新高质量三重四极杆串联液质联用仪，它能广泛应用于医药、农药、生物化学、食品安全、环保、生命科学等领域，它是解决不易挥发、热不稳定、大分子量及宽极性范围等样品分析难题的强有力工具。通过高灵敏度的串联质谱系统，结合高效液相色谱的分离或直接进样可以详细地研究未知组分的结构。从分子水平上准确阐述样品的化学成分，也十分适合新产品、新配方的开发研制，同时可准确和深入地了解各种化合物的实质性差异，并实时定性、定量地描述样品中的复杂组分的产

三重四极杆液质联用仪基础知识和食品安全中的应用演示教学

)
ESI -1 (high polar)
Middle polar
High polar
质量分析器类型
• 四级杆质量分析器 (Quadrupole Mass Analyser)
• 离子阱质量分析器(Ion Trap Mass Analyser, IT)
• 飞行时间质量分析器(Time Of Flight Mass Analyser, TOF)
(steroids) ✓ APPI对化学结构中有共轭双键的化合物分析有利（Good for ions containing a
chromophore (APPI)
大气压下离子化适用范围
分子量
105
104
103
APPI
Non polar
APCI ( low middle polar)
ESI -2 (multi ion generation
constant
0
60 0
50 0
40 0
30 0
20 0
10 0
0
0
100
200
0
0
m/z 100
RF,DC Scan Line
300
400
0
RF 0
m/z
500
Sample3_03 #1408 RT: 14.70 AV: 1 NL: 3.33E7 F: + c Full ms [ 30.00-1000.00]
离子化方式
API（大气压离子化）
API
Soft
软电离
无或很少碎片信息
CI 离子化方式
EI 硬电离
碎片信息
电喷雾电离(ESI)基本原理
ESI 针

液质联用操作规程

1．适用范围本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、TQS MS/MS 质谱仪,适用于食品、药品中各种有机物(de)定性、定量分析,是一种具有高灵敏度(de)检测仪器,仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成.2. 职责操作人员按照本规程操作仪器,认真填写实验使用记录.保管人员负责对仪器进行定期维护和保养.科室负责人负责监督检查规程(de)执行.3．操作程序日常操作步骤：准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告.注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪,使其保持真空.建立新方法和project(de)操作步骤：准备UPLC —→建立新(de)project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告.开机：3.1.1 彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接 ,开氮气发生器、开氩气,小表<.打开计算机电源 > 等待windows正常启动 >电脑界面右下角网络图标红叉.打开UPLC自动进样器电源,等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号.打开UPLC泵电源,等约30s或者是有响声.打开质谱电源 ,等待5min,离子源透视镜里面亮.打开Masslynx软件,masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum---pump 同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed[%]要在5分钟内升到80.至少抽真空4个小时 > 查看真空状态主界面mass console---界面左侧xevo tq ms detector加号展开---ms display > 碰撞室真空度 >达到 e-5mbar .3.1.2 日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气,小表<,打开Masslynx软件,进入工作站.建立项目点击file下(de)project wizard ,出现对话框,单击yes 出现对话框 ,输入project ,location 为C:\MS DATA ,单击next ,选择create existing project as template,并以c:\masslynx\ 为模板,单击finish .点击OK.准备UPLC系统准备液相(de)一般流程：准备流动相> 准备样品> 灌注二元泵 > 灌注自动进样器 > 建立液相方法> 平衡液相3.3.1. 准备流动相用(de)膜过滤缓冲液,所有(de)缓冲液和超纯水都要新配制,超纯水和缓冲液使用不得超过二天,缓冲盐一定要是可挥发(de),而且浓度不要大于10mM.3.3.2.样品要求所有样品都要用流动相初始梯度比例(de)溶剂来溶解,并用(de)膜过滤. 3.3.3灌注二元泵在Masslynx 主界面,单击MS Console,进入UPLC交互显示界面, 点击左栏Acquity UPLC System> Control > Start Up System ,单击QSM,选择需要用到(de)流动相位置,如A 和B,选择seal wash,时间设为3分钟.单击SM,选择 Strong Wash 5 cycles , Sample syringe 20单击 Equilibrate to Method,将流速设为0 ,单击 Start 开始灌注. 时间大约为9min 左右.设定流速,平衡液相在Masslynx主界面,单击Inlet Method 图标 ,打开液相方法编辑窗口,单击status > ACQUITY Additional Status ,进入液相控制台,单击A 或B 或流速(de)位置,出现流速、比例设定对话框, 设定液相流速与比例,单击对勾,开始平衡液相,如果后面要做调谐,可设定流速min,有机相与水相(de)比例为50:50.准备质谱3.4.1. 计算化合物单同位素质量数Masslynx主界面> 单击Tools> Molecular Weight Calculator, 输入化合物(de)分子式（大写-注意Cl、Br等正确(de)输入方法） ,注意选单同位素Monoiso ,Ion Mode:离子化模式,+ve 正离子,-ve 负离子 ,单击Calculate.3.4.2 用Intellistart进行自动调谐在Masslynx 主界面单击MS Tune图标,打开调谐窗口, 单击 Ion Mode> ES+ 或 ES- ,单击 API Gas 图标打开氮气, 单击打开高压选择MS Mode 图标 ,设定液相流速min, 水：乙腈(de)比例为50:50.把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处(de)A（或B或C）号位(注:浓度在200ppb左右)单击Fluidics ,选择Reservoir为A ,Flow State 为LC 模式,点击Purge 图标.Purge 结束后,将Flow State 改为Combine 模式,设定Function 为MS1scan, Mass为计算出化合物(de)质量数,span 为5,点击进样 ,开始进样,直到离子(de)响应比较稳定.保存调谐文件：File > Save As至已建(de)项目下.在Masslynx主界面,选择Ms Console> Xevo TQ MS Detector选择Intellistart ,选择 Sample Tune and Develop Method ,ES+单击 Start 图标 ,出现Intellistart 自动调谐编辑窗口,选择Switch toAdvancedmode ,输入Compound name (化合物名称) ,Molecular Mass/Formula (分子量或分子式) Adduct A+（[ M+H] +, 选择 Load Existing Sample Tune ,在Sample Tune Name 方框后(de)“...”处调用开始保存(de)调谐文件,在Develop MRM Method 前(de)方框打钩,并在方框出输入MRM 方法(de)文件名 ,路径为已建(de)项目下.在Print Report 前方框打钩,Cone Voltage ,Collision Energy 处为默认值,Fluidics 下(de)Flow Path 选择Combined 模式,Sample Reservoir 和Sample Flow Rate 参数与Fuldics 下Combined 模式下(de)进样参数保持一致.单击右边(de)Start 开始自动调谐.调谐成功,会有绿勾出现 ,查看intellistart 报告3.4.3 查看intellistart 中自动生成(de)质谱方法：从MassLynx 主窗口,单击 MS Method,出现MS Method 编辑对话框 , 选择File > open, 选择Intellistart 中保存(de)质谱方法(de)文件,双击方法,如发现自动调谐生产(de)质谱方法中部分参数有误,则可以在Channels 窗口手动修改参数,填写 relentinon window 中(de)end时间 ,此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致,选择Auto Dwell,单击OK,点击File> Save As, 保存质谱方法文件.建立液相方法3.5.1编辑液相方法在液相方法编辑窗口,单击Inle t ,输入溶剂名称,run time 及梯度洗脱程序,梯度洗脱程序中最后阶段时间必须与run time 符合,单击OK, 选择File > Save As 保存方法 ,单击 Load Method ,平衡液相.3.5.2 建立样品列表在Masslynx 主窗口,选择 File > New 建立一个空白(de)表samplelist.输入文件名File Name ,样品信息 File Text ,双击 MS File ,选择质谱方法 ,双击Inlet File, 选择液相方法 ,在Bottle 中输入样品瓶(de)位置 ,在 Inject Volume 中输入进样体积,可右键> Add, 增加样品表(de)行数,保存样品表：File > Save As .数据采集和处理3.6.1.选中要采集(de)样品,单击Run > Start ,选择Acquire Sample Data only,,单击OK 开始进样并采集 .3.6.2在采集过程中,可查看色谱图,点击Chromatogram窗口 ,点击Real-timeUpdate icon . 如果不能见整个TIC图,单击 Default Range 图标.如果方法中包括多个通道,可通过Display > Mass 查看如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过Display > TIC 查看3.6.3处理多个Function(de)数据如果质谱方法中有多个Function,如有三个Function,如想看第二个Function,MS Scan (de)数据.3.6.3.1 在色谱图窗口,点击 Display > TIC,选中MS Scan ,选择 Add trace ,单击 OK.3.6.3.2如想查第二个Function, Daughter Scan 质谱图 ,在色谱图中,选择 Display > TIC, 选择 ScanWaveDS Add trace ,单击 OK.3.6.3.3. 选择 Process > Combine spectra. 分别用右键输入信号和本底噪音. 单击 OK. 得到 Daughter Scan(de)质谱图,单击 Process > Smooth… ,单击 OK.数据处理-外标定量法3.7.1在Masslynx 主页面单击Targetlynx/Edit method,出现定量方法编辑对话框,单击新建方法图标,新建一个定量方法.3.7.2单击Add new compound (添加新(de)化合物)图标,添加一个新(de)化合物.3.7.3单击菜单栏update,选中Quantitation Ion 和Compound Name（前面打勾）在Masslynx 主页面,打开中等偏下低浓度标准品(de)色谱图,Display/Mass chromatogram选出要定量(de)化合物(de)离子对,一般强度高(de)化合物用来做为定量离子,另一个离子对则作为确证离子,用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下,则compound name, Acquisition Function Number, Quantification Trace, Predicted Retention Time和Retention Time window 将自动输入到定量方法中.注意：在色谱图上拉(de)时候,要遵循两个原则,拉(de)位置要以色谱峰(de)峰尖左右对称,拉(de)宽度要超过峰(de)起点和终点.3.7.4单击工作曲线图标,在工作曲线设置页面,填入Concentration Units:浓度单位,例如ng/ml, ug/kg,ppb, ppm等.Concentration of Standard: Level –选择.Polynomial Type –选择 Linear. （可根据自己行业(de)规定）Calibration Origin_选择exclude(排除原点),include(包含原点),force(强制过原点)Weithting Function(权重)_1/x （根据自己行业规定）Propagate Calibration Parameters_如果所有(de)化合物均用相同(de)工作曲线(de)参数,选Yes3.7.5打开积分参数列表,选中Apex Track Enabled （打勾,YES）,Integration Window Extent 输入2,选中Propagate Integration Parameters (打勾),如果色谱峰并不是很对称(de)色谱图,可先在色谱图上先设定参数,积分,好积分参数满意之后,process/integrate…/copy ,在Targetlynx 方法中Edit/Past 就可将其粘贴到Targetlynx 方法中.建议用Apex Track 积分方法,Smooth 方法建议用smooth iteration 1,smooth width 2.重复上面(de)过程,把其他几个化合物(de)信息全部加入 ,保存方法：File/Save As, 保存到当前项目(de)MethDB 文件夹中,正确(de)samplelist 表格模板,除了前面进样时(de)选项之外,还要有sample type, ConA, 等选中要处理(de)样品,单击Process Samples,出现下图(de)对话框,确保选中,Integrate 、sample ,calibrate Standard, QuantifySample,选择刚才编辑(de)Targetlynx 方法,单击OK后,出现定量结果对话框.可根据自己(de)需要,用鼠标右键,Chang Column Order 来增加或减少Summary中(de)选项.关机程序3.8.1日常关机：3.8.1.1如果流动相中有缓冲盐必须先将缓冲盐换成水,灌注2分钟,流速设为min,80%水相,冲洗至少30分钟,换成80%有机相,冲洗至少20分钟,停流速,水相,冲洗至少30分钟,换成80%有机相,冲洗至少20分钟,停流速,柱温为室温.3.8.1.2关质谱：主界面mass tune或者电脑下面仪器图标----界面左侧偏上fluidics---flow state选择为waste、关氩气,mass tune界面或者电脑下面仪器图标工具栏第6个> 关高压mass tune界面右下角> 等待去溶剂气温度降低至100度以下mass tune界面或者电脑下面仪器图标左侧偏上.ES+source-----temperature---desolvation > 关氮气 ,点击氮气发生器开启开关.3.8.2彻底关机3.8.2.1 先完成日常关机3.8.2.2泄真空: tune page > vacuum > vent---yes > 等待涡轮分子泵转速降到10以下 ,masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面左侧偏上diagnostics---vacuum---source turbo speed[%]3.8.2.3退出软件,其他界面先退出,主界面最后退出3.8.2.4关质谱电源 > 关所有UPLC电源,计算机电源 ,仪器三个电源顺序无所谓,关氮气发生器,氩气.3.8.2.5 如果有UPS,关闭UPS电源,计算机电源.4 日常维护、保养及注意事项仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理.仪器室温度应相对稳定,一般应控制在20-25℃,保持恒温；相对湿度最好为50-70%,室内应备有温度计和湿度计,一般采用空调和吸湿机调节温度和湿度.气压过滤机械泵油 ,停止样品采集、停止流动相、关闭高压、关闭所有气流,关闭离子源内(de)真空隔离阀.用一字镙丝刀顺时针方向拧开机械泵上(de)Gas Ballast 阀四分之一圈,运行 30 分钟后再把 Gas Ballast 阀旋转到原来关闭(de)位置.对于 ESI源,至少每星期做一次,对于APCI源,每天做一次.开高压之前一定要先开氮气,关氮气之前一定要先关高压.ESI 离子化与溶剂密切相关,在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析,但对ESI离子化有抑制效应；三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强(de)[M+H]+峰,有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下(de)离子化,也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下(de)响应；要避免使用非挥发性(de)盐 (phosphate, borate, citrate, etc.)；表面活性剂、清洁剂和去污剂 (会抑制离子化)；以及无机酸 (sulphuric acid, phosphoric acid etc.)等.连接UPLC泵、色谱柱、注射泵以及ESI探头时,要将仪器置于standby状态..当改变分辨率(de)时候,仪器(de)质量数也会有轻微(de)偏移,所以在不同分辨率(de)条件下,应该做质量数校正.样品贮存在塑料离心管中,其中(de)添加剂很容易混入,尤其是被有机溶剂浸泡时间较长时,会产生干扰物信号.工作站计算机不要安装与仪器操作无关(de)软件,要经常清理计算机磁盘碎片,定期查杀病毒,定期备份实验数据.仪器应定期检查,并有专人管理,负责维护保养及清洁.实验完毕要清洗进样针、进样阀等,用过含酸(de)流动相后,色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗,延长仪器寿命.定期清洗样品锥孔：关闭隔断阀,取下样品锥孔,先用甲醇：水：甲酸（45：45：10）(de)溶液超声清洗10分钟,然后在分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟,待晾干后再安装到仪器上.当灵敏度下降时,需要清洗Source、二级锥孔和六级杆.定期（每星期）检查机械泵(de)油(de)状态,如果发现浑浊、缺油等状况,或者已经累积运行超过3000小时,要及时更换机械泵油.5 支持性文件Waters Xevo-TQS液质联用仪使用手册.。

(新)液质联用培训讲义

6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
Waters 四极杆质谱培训
定性实验调谐仪器
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3. 多反应监控MRM
MS1 Collision Cell Argon gas MS2
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Static m/z 609.1
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定性实验调谐仪器
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样品1．利血平标样1ppm, 根据全扫描获得最佳实验锥孔（CV），调谐特定碎片最佳实验碰撞能量（CE），进行多反应监控MRM实验准备 ESI + MRM :609 /195(CV=45,CE=55)
M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸易中性丢失46(甲酸)
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定性实验调谐仪器
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实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.

液质联用仪基本介绍和其应用技术专题培训课件

通常用R 表示，实验室内的TSQ Quantum 分别率为0.7。
2.质量范围mass range
四极质谱：
4000以内
离子阱质谱： ~ 6000
飞行时间质谱：无上限
四、液质联用技术
高效液相液质联用(HPLC/MS)是指高效液相液相色谱与质谱串联的技术。HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源(HPLC与MS 之间的连接装置)、质量分析器、真空系统和计算机数据处理系统组成。
利用这个特点，我们用液质联用的软电离方式可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器部分的真空。只有在足够高的真空下，离才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。
2.离子源
电离室原理与结构图
根据离子化方式的不同分类：
1.单聚焦质量分析器特点：具有质量色散作用
2.双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector). 3.四极杆质谱仪(Q).
特点：扫描速率快，结构简单，价格较低。 4.飞行时间质谱仪(TOF). 5.离子阱质谱仪（TRAP） 6.傅里叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS). 7.串列式多级质谱仪 (MS/MS) ：四极+TOF（Q-TOF）、三重四极杆（QqQ）、TOF+TOF
进样系统
离子源
质量分析器
检测器
1.气体扩散 2.直接进样 3.气相色谱 4.液相色谱
1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光
1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间4.四极杆
5.离子阱 6.串列式多级
1.真空系统
质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生不必要的离子-分子反应,所以质谱反应属于单分子分解反应。

FCQ Fleet 液质联用仪操作规程

Thermo Fisher LCQ Fleet型液相色谱-质谱联用仪操作规程一、开机与关机1. 开机前，先检查氮气和氦气的压力是否满足分析要求。

打开氦气钢瓶（纯度>99.995%）压力表总阀，调节分压表到0.15MPa。

打开氮气钢瓶（纯度>99.9%）压力表总阀，调节分压表到0.4~0.6MPa。

2. 打开FCQ Fleet 总电源开关，机械泵开始工作。

此时勿打开电子开关。

在此状态下抽真空，抽真空的时间按照下表：3. 抽完真空后，打开电子开关。

取下离子源，取下用于密封的APCI电晕针并保存好，再装上离子源。

4. 关机：关机顺序与开机顺序相反，无特殊情况或长假，质谱仪不关机。

二、日常开机（机械泵未关闭时）1. 开机前的准备工作1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好。

1.2 流动相：必须使用色谱纯的溶剂，若是选用进口的色谱纯试剂可以不经过微孔滤膜过滤，以免引入增塑剂等杂质。

水或缓冲盐溶液要用新鲜制备的超纯水，经0.45um微孔滤膜抽真空过滤。

夏天温度较高时，纯水或缓冲盐尽量每天更换，以免长菌。

1.3 流动相添加剂：不要使用无机酸、碱金属碱，它们会导致仪器腐蚀，推荐使用易挥发的有机酸和有机碱，如醋酸、甲酸、氨水等。

表面活性剂易产生离子抑制作用，因而清洗用于液质的样品瓶等不要用洗涤精等表面活性剂。

2. 开机2.1先打开氮气总阀，慢慢调节分压表到0.5MPa。

2.2依次打开FCQ Fleet 主机上的电子开关、高效液相色谱仪、自动进样器和计算机。

2.3仪器各部分开始自检。

黑色的自检窗口显示质谱自检状态，待仪器显示待机状态时，仪器才可以正常使用。

2.4打开计算机桌面上的“Instrument co nfiguration”软件，对仪器进行配置。

具体方法如下：选择LCQ Fleet MS选项，选择configure，选择MS Detector，点击OK；选择Dionex Chromatography MS Link，选择configure，点击OK；点击Done选项，仪器开始配置。

LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍

LC/MS 面临的挑战
LC/MS 接口必须使流动的液流达到 MS 可接受的压力 (10-5 - 10-6 torr) 同时以极小的谱带展宽尽可能多地输送样品到MS
进样方式比较
毛细管 GC, 1mL/min (气体) 微柱 LC, 10 µL/min
对真空泵的要求 *
(liters/sec)
~400 ~5,000
填充柱 LC, 1 mL/min
~50,000
*为了保持 3 x 10-6 torr (4 x 10-6 mbar)的真空
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接口
EI电离源的液质联用接口-热束接口(TB) 雾化, 去溶剂然后电离
ESI和APCI接口- Z Spray 雾化，去溶剂和电离同时完成
Scan ES+ 1.19e8
%
0
85.2 88.1 90.1 93.9 95.8 100.2102.0
80 85 90 95 100 105
110.2 114.0 110 115
121.2 123.9 120 125
133.0 137.0 130 135
138.9 143.0
140 145
149.3 m/z
六极杆离子桥
4,000
2,000
0 100
[M+H]+
150
200
250
300
m/z
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多种CID方式：一次进样得到全部质谱信息
C4H9-
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四极杆质量分析器
Resonant Ion Nonresonant Ion
Detector